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一種構(gòu)建植物中pre?miRNA3`RACE?seq文庫的方法與流程

文檔序號(hào):12416782閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種構(gòu)建植物中pre-miRNA 3’RACE-seq文庫的方法,包括如下:

(1)、植物總RNA的提?。?/p>

(2)、RNA的準(zhǔn)備:

利用SDS-PAGE對(duì)所提取的植物總RNA進(jìn)行分離,對(duì)50bp-400bp之間的RNA進(jìn)行切膠回收;

其特征在于,

(3)、連接:

回收好的RNA的長度集中在50bp-400bp,通過連接酶在RNA的3’末端連接一種特殊的DNA接頭,其序列如序列表SEQ ID No.1所示;

(4)、反轉(zhuǎn)錄:

利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒,對(duì)已經(jīng)加好接頭的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,反轉(zhuǎn)錄成cDNA;

(5)、巢式PCR反應(yīng):

利用5’端的特殊引物,以步驟(4)的反轉(zhuǎn)錄cDNA為模板,進(jìn)行第一輪PCR;PCR產(chǎn)物跑PAGE膠回收后,再利用第二輪引物進(jìn)行第二輪PCR,PCR產(chǎn)物回收后送去測(cè)序。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種構(gòu)建植物中pre-miRNA 3’RACE-seq文庫的方法,其特征在于,步驟(5)第一輪PCR,上引物如序列表SEQ ID No.2-SEQ ID No.79所示,下引物如序列表SEQ ID No.80所示;

第二輪PCR,上引物如序列表SEQ ID No.81所示,下引物如序列表SEQ ID No.82所示。

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