青娥丸抗抑郁抗焦慮的新用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及青娥丸的新用途，特別是涉及青娥丸用于治療或緩解抑郁癥和焦慮癥 的新用途。 技術(shù)背景
[0002] 抑郁癥是以持續(xù)情緒低落和認(rèn)知功能障礙為主要臨床特征，包括焦躁情緒、快感 缺失、睡眠障礙、負(fù)罪感和反復(fù)自殺念頭等。全球的抑郁癥患者已達(dá)3. 4億人。目前抑郁 癥在中國(guó)發(fā)病率大約為4%。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，抑郁癥已成為世界第四大疾患，預(yù)計(jì)到 2020年，可能成為僅次于冠心病的第二大疾病。抑郁癥不僅給患者帶來(lái)精神上的損失，也給 患者造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。抑郁癥在中國(guó)造成的總經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)達(dá)到622億元人民幣，美國(guó)每 年因抑郁癥造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)到437億美元。世界衛(wèi)生組織、世界銀行和哈佛大學(xué)的一項(xiàng) 聯(lián)合研究表明，抑郁癥已經(jīng)成為中國(guó)疾病負(fù)擔(dān)的第二大疾病。
[0003] 抑郁癥伴隨單胺類神經(jīng)遞質(zhì)、下丘腦-垂體-腎上腺（HPA)軸功能失調(diào)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng) 因子和炎癥反應(yīng)等生物學(xué)機(jī)制相關(guān)，很難以用單一的病因和發(fā)病機(jī)制來(lái)解釋。臨床上常用 抗抑郁藥物主要是：三環(huán)類抗抑郁藥（TCA)、單胺氧化酶抑制劑（MAOI)、選擇性5-羥色胺再 攝取抑制劑（SSRS)，普遍存在耐藥性、副作用大等弊端，因此尋找安全、高效、副作用小的抗 抑郁藥物尤其是天然抗抑郁藥物成為了該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
[0004] 《中國(guó)藥典》所載的青娥丸是以《太平惠民和劑局方》配方為基礎(chǔ)，藥材細(xì)粉，配以 煉蜜制成的大蜜丸或水蜜丸。具有補(bǔ)腎強(qiáng)腰，用于腎虛腰痛，起坐不利，膝軟乏力等癥。
[0005] 本發(fā)明涉及青娥丸在抗抑郁及抗焦慮方面的作用和功效，尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明涉及青娥丸在制備抗抑郁抗焦慮的組合物中的用途。
[0007] 青娥丸在制備抗抑郁抗焦慮的組合物中的用途，其特征在于：青娥方由杜仲（鹽 炒）480克，補(bǔ)骨脂（鹽炒）240克，核桃仁（炒）150克，大蒜120克組成。
[0008] 以上四味，將大蒜蒸熟，干燥，與鹽炒杜仲、鹽炒補(bǔ)骨脂粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，再將炒 核桃仁搗爛，與上述粉末摻研，過(guò)篩，混勻。每100g粉末用煉蜜20~30g加適量的水泛丸， 干燥，制成水蜜丸；或加煉蜜50~70g制成大蜜丸，即得。
[0009] 本發(fā)明提供了青娥丸抗抑郁及抗焦慮的技術(shù)方案，為開(kāi)拓青娥丸抗抑郁及抗焦慮 的新用途提供了依據(jù)。
[0010] 本發(fā)明中青娥丸可使嗅球切除抑郁模型小鼠行為學(xué)得到改善，并能增加腦中 5-HT，NE，Glu的含量，降低γ -GABA的含量，從而起到治療和改善抑郁及焦慮疾病的作用。
[0011] 有益效果
[0012] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果在于，通過(guò)生物學(xué)研究表明，青娥丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性抑郁小鼠 具有一定的保護(hù)作用，主要體現(xiàn)在對(duì)行為學(xué)評(píng)價(jià)的改善作用。青娥丸一方面能顯著增加嗅 球切除小鼠海馬去甲腎上腺素 ΝΕ，5-ΗΤ/5-ΗΙΑΑ的比值，提示青娥丸可通過(guò)抑制單胺氧化 酶的活性發(fā)揮抗抑郁及抗焦慮作用。另一方面青娥丸通過(guò)增加腦內(nèi)Glu含量，減少γ-GABA 的含量，發(fā)揮調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)遞質(zhì)Glu和γ -GABA代謝的作用，從而調(diào)控受體對(duì)兒茶 酚胺的反應(yīng)性，發(fā)揮抗抑郁及抗焦慮作用。因此青娥丸具有對(duì)抑郁的治療和緩解作用。提 示其具有開(kāi)發(fā)新的抗抑郁及抗焦慮藥物的前景。
【附圖說(shuō)明】
[0013] 附圖1青娥丸對(duì)嗅球切除模型小鼠抗抑郁作用操作流程圖
【具體實(shí)施方式】
[0014] 以下通過(guò)實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例僅用于例證的 目的，決不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0015] 實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明青娥丸致大鼠嗅球損毀模型的改善作用
[0016] ( -）實(shí)驗(yàn)藥物和儀器
[0017] 藥物：青娥丸，批號(hào)20120509,上海雷允上制藥有限公司生產(chǎn)。鹽酸氟西?。ㄓ址Q 百憂解），批號(hào)2076Α，法國(guó)Fatheon France生產(chǎn)。文拉法辛，批號(hào)1308025，Pfizer Iretand Pharmaceuticals 生產(chǎn)。異氟燒，r-氨基丁酸（GABA)，谷氨酸（Glu)，5-輕色胺（5-HT)5_HT， 腎上腺素（Epi)，多巴胺（DA) DA，去甲腎上腺素（NE) NE，5-羥基吲哚乙酸（5-HIAA)，3,4-二 羥基芐胺（內(nèi)標(biāo)）以上幾種均為Sigma公司產(chǎn)品。儀器："鼠博士"動(dòng)物行為學(xué)分析：高架十 字迷宮（RD1108-EPM-M)，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)分析系統(tǒng)型號(hào)（RD1119-FST-M)，懸尾實(shí)驗(yàn)分析系統(tǒng) 型號(hào)（RD1118-TST-M)，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)分析系統(tǒng)（RD1112-0FT-M)。麻醉機(jī)：（SN MSSN 5374. UK)， 電動(dòng)骨鉆（BJ1102SA0)，"鼠博士"動(dòng)物行為學(xué)視頻分析系統(tǒng)（R.D)
[0018] (二）實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
[0019] 動(dòng)物分組及給藥
[0020] 1雙側(cè)嗅球切除模型（OB)的抑郁模型的建立
[0021] C57BL/6J雄性小鼠，SPF級(jí)，四周周齡，由上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。所 有的動(dòng)物年齡和體重相當(dāng)?shù)?，?shí)驗(yàn)動(dòng)物的初始體重為25 - 30g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)在一個(gè)裝有墊 料塑料盒內(nèi)（45cmX 25cmX 20cm)，保持室溫20 ± 2 °C，濕度40 - 60 %，保持12小時(shí)光照和 12小時(shí)熄燈循環(huán)，光照時(shí)間從7:00-19:00。水和食物可以自由獲得。實(shí)驗(yàn)操作程序完全按 照上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心動(dòng)物福利委員會(huì)的相關(guān)指導(dǎo)方案進(jìn)行。
[0022] 雙側(cè)嗅球切除手術(shù)
[0023] C57BL/6J 小鼠用 7. 5 % (w/v)水合氯醛腹腔注射（375mg/kg i. P. :Merck， Germany)或用異氟燒吸入麻醉（0.5% in lml/min 02)，操作過(guò)程遵照文獻(xiàn)報(bào)道.簡(jiǎn)單的 說(shuō)，用剃毛刀剔去頭部毛發(fā)后，沿徑向中線切口，從前囪前Icm至后Icm正中線處，暴露顱 骨。用鉆頭在距離前囪前8mm，正中線兩側(cè)各Imm分別開(kāi)一骨窗，直徑約1.5mm。將電熱探 頭垂直插入顱內(nèi)約2s，損傷雙側(cè)嗅球。并用5mm吸頭插入骨窗內(nèi)，用水栗溫和吸出損毀的嗅 球，保證不損傷前額葉皮質(zhì)，鉆孔中塞入止血海綿以免出血。于創(chuàng)面撒上滅菌磺胺結(jié)晶以防 止感染，縫合皮膚。假手術(shù)組合嗅球切除手術(shù)過(guò)程完全相同，只是不損毀和吸出嗅球。所有 的動(dòng)物每天都給予監(jiān)護(hù)，并通過(guò)隨后的實(shí)驗(yàn)證實(shí)OB模型是成功的，如果OB動(dòng)物被證實(shí)嗅球 切除不完全或前額葉皮質(zhì)受到損傷的應(yīng)剔除。假手術(shù)動(dòng)物如果嗅球或前額葉皮質(zhì)受損的也 應(yīng)剔除。隨后實(shí)驗(yàn)程序附圖1所示。術(shù)后恢復(fù)14天，第十五天進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)（OFT)，然后連 續(xù)給藥28d。實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o藥后依次進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，強(qiáng)迫游泳，懸尾，高架十字迷宮。兩實(shí)驗(yàn)之 間間隔〈2d ;每只動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后清除糞便，用70%乙醇噴灑箱底并用潔凈紗布抹干，以免 前1只動(dòng)物的殘留氣味造成對(duì)本次實(shí)驗(yàn)的影響；全部實(shí)驗(yàn)結(jié)束后由不熟悉實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)人員進(jìn) 行數(shù)據(jù)提取錄入。
[0024] 2動(dòng)物分組和給藥
[0025] 造模成功的C57BL/6mice，60只，隨機(jī)分為6組：模型組（0B組，給予等體積蒸餾 水）；陽(yáng)性藥I組（Fluoxetine);陽(yáng)性藥I組（venlafaxine)，青娥丸I組（3. 6g/kg)、高劑 量組（5. 4g/kg)。假手術(shù)組10只（sham，給予等體積蒸餾水）；
[0026] 灌胃藥物的配制：C57BL小鼠劑量是人劑量的10倍。給藥時(shí)平均體重25g，按每公 斤體重20ml/kg/d，每天灌胃兩次，相當(dāng)于25g小鼠每次灌胃0. 25ml.青娥丸正常人劑量為 中劑量：9g*2 = 18g，高劑量9g*3 = 27g，人體重按50公斤體計(jì)算，中劑量相當(dāng)于：0. 36g/ kg/d，高劑量相當(dāng)于0· 54g/kg/d，
[0027] 通過(guò)折算，c57BL小鼠中劑量為3. 6g/kg/d，高劑量為5. 4g/kg/d
[0028] 中劑量配藥濃度應(yīng)為3. 6g/20ml :即濃度為0· 18g/ml.
[0029] 高劑量配藥濃度應(yīng)為5. 4g/20ml，稱取青娥丸粉末54g，定容至200ml，即濃度為 0.27g/ml〇
[0030] 灌胃方案：實(shí)驗(yàn)c57BL小鼠分組：
[0031] 假手術(shù)組，每日兩次，每次灌胃0. 25ml生理鹽水或0. 5% CMC-Na ;模型組，每日兩 次，每次灌胃〇. 25ml生理鹽水或0. 5% CMC-Na ;
[0032] 氟西叮組，每日兩次，每次灌胃給予0. 25ml藥液，相當(dāng)于10mg/kg/d ;
[0033] 文拉法辛組，每日兩次，每次灌胃給予0· 25ml藥液，相當(dāng)于10mg/kg/d ;
[0034] 青娥丸I組，每日兩次，每25g體重每次灌胃0.25ml濃度為0. 18g/ml，隨著體重的 增加，相應(yīng)的給藥體積隨體重而變化，相當(dāng)于3. 6g/kg/d ;
[0035] 青娥丸II組，每日兩次，每25g體重每次灌胃0.25ml濃度為0.27g/ml，隨著體重 的增加，相應(yīng)的給藥體積隨體重而變化。相當(dāng)于5. 4/kg/d。
[0036] 3實(shí)驗(yàn)方法
[0037] 3. 1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)（OFT)
[0038] 測(cè)試動(dòng)物在新奇開(kāi)場(chǎng)環(huán)境下的自發(fā)性活動(dòng)和探索行為，可用于評(píng)價(jià)其興趣大小程 度。實(shí)驗(yàn)前，小鼠在測(cè)試房間內(nèi)先適應(yīng)lh，房間內(nèi)保持安靜，光照柔和。曠場(chǎng)箱由4塊50cm 高的白色亞克力板圍成50cm*50cm大小的正方形，底板也為白色亞克力板，正上方有一攝 像頭連接計(jì)算機(jī)軌跡跟蹤系統(tǒng)。每只大鼠放置于曠場(chǎng)中央，記錄其3min行為活動(dòng)。通過(guò)計(jì) 算機(jī)軌跡跟蹤系統(tǒng)分析下列參數(shù)：行走總距離和站立次數(shù)（動(dòng)物兩前爪同時(shí)離地次數(shù)）。行 走總距離和站立次數(shù)降低表明動(dòng)物在新奇環(huán)境下興趣度下降。每測(cè)試1只動(dòng)物后用酒精清 潔曠場(chǎng)箱底板
[0039] 3. 2 強(qiáng)迫游泳（FST)
[0040] 小鼠進(jìn)行強(qiáng)迫游泳刺激：實(shí)驗(yàn)時(shí)迫使小鼠在一局限的空間游泳，它們首先拼命泳 動(dòng)試圖逃跑，隨后處于一種漂浮的不動(dòng)狀態(tài)，僅露出鼻孔維持呼吸，四肢偶爾劃動(dòng)以保持身 體不至于沉下去，這種狀態(tài)被稱為不動(dòng)狀態(tài)，實(shí)際是動(dòng)物放棄逃脫的希望。每次刺激從大鼠 入水到離開(kāi)泳池，時(shí)間為IOmin (適應(yīng)6分鐘，取樣測(cè)定4分鐘）。
[0041] 3. 3 懸尾（TST)
[0042] 懸尾（TST)是一種經(jīng)典而又能快速評(píng)價(jià)抗抑郁藥物的方法。其原理是利用小鼠懸 尾后企圖逃脫但又無(wú)法逃脫，從而放棄掙扎，進(jìn)入特有的抑郁不動(dòng)狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中記錄動(dòng) 物不動(dòng)時(shí)間來(lái)反映抑郁狀態(tài)，抗抑郁藥物、興奮藥物能明顯地縮