特異性抗天花病毒感染模型毒株的生物活性制劑及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于抗病毒藥物領(lǐng)域，設(shè)及一種特異性抗天花病毒感染模型毒株的生物活 性制劑及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 痘病毒是一個(gè)既可感染人類，可感染動(dòng)物的龐大家族，常引起感染者局部或全身 化脈性皮膚損害，并可導(dǎo)致傳染性疾病暴發(fā)。尤其值得注意的是天花病毒，繁殖速度快，而 且可通過(guò)空氣傳播，傳播速度極快，攜帶病毒的患者因其唾液中含有最大量的天花病毒，在 感染后1周內(nèi)最具傳染性，直到病人結(jié)瘤剝離后，天花病毒還可通過(guò)病人傳染，曾導(dǎo)致人類 歷史上多次全球性的疫情暴發(fā)。在惡性感染情況下，天花病毒在組織層或皮膚深層造成嚴(yán) 重的擴(kuò)散性破壞，患者體內(nèi)血液大量流入皮膚、喉魄、肺、腸或子宮，導(dǎo)致無(wú)法控制的毒血癥 或大出血，運(yùn)樣的患者不會(huì)出現(xiàn)典型的丘疹或水瘤狀突起，而只是平常的紅色或紫色斑痕、 疲點(diǎn)或麻疹樣的紅斑，一情況下，患者在出現(xiàn)癥狀后10至14天內(nèi)死亡，病死率高達(dá)25-30%。
[0003] 隨著天花滅絕和預(yù)防疫苗在世界范圍內(nèi)的停止接種，人群中對(duì)天花等痘病毒的易 感人群所占比例日漸擴(kuò)大，人類面臨天花等痘病毒的生物恐怖威脅和潛在的生物戰(zhàn)威脅日 益嚴(yán)重，及時(shí)開(kāi)展抗天花病毒藥物的研制和資源儲(chǔ)備，對(duì)于世界各國(guó)都具有十分重要的戰(zhàn) 略意義，因此，抗天花等痘類病毒藥物的研究一直是國(guó)際社會(huì)的關(guān)注熱點(diǎn)。
[0004] 由于天花病毒的極度危險(xiǎn)性，國(guó)際社會(huì)制定了非常嚴(yán)格的措施和公約，極大的限 制了人類W天花病毒本身為對(duì)象的科學(xué)研究。目前，國(guó)際社會(huì)普遍認(rèn)可的替代天花病毒感 染的模型系統(tǒng)，主要為痘苗病毒、猴痘病毒和鼠痘病毒感染模型系統(tǒng)，利用此類天花病毒感 染模型系統(tǒng)，一些化合物已被證明對(duì)包括天花病毒在內(nèi)的多種痘病毒感染有抑制作用，包 括縮氨硫脈類藥、核巧和核巧類似物、干擾素和干擾素誘導(dǎo)物等。目前，研究最多的、對(duì)痘苗 病毒感染抑制效果較好的物質(zhì)，也主要是各種核巧類化合物及核巧類似物，其中包括:肌巧 一憐酸（IMP)脫氨酶抑制劑(如利己韋林），S-腺巧半脫氨酸(SAH)水解酶抑制劑(如腺巧類 似物A )、乳清巧一憐酸(OMP)脫簇酶抑制劑(如化挫巧喃菌素）、胞巧S憐酸(CTP)合成酶抑 制劑(如環(huán)戊締基胞喀晚(Ce-切d))、無(wú)環(huán)核巧碳憐酸鹽化合物，如西多福韋（Cidofovir)， 但由于此類抗痘病毒化合物生物利用效率低、毒副作用大等原因，嚴(yán)重的限制了其全面的 推廣和應(yīng)用。因此，新一代安全高效的抗天花等痘類病毒感染藥物的研究一直是國(guó)際社會(huì) 的關(guān)注熱點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種特異性抗天花病毒感染模型毒株的生物活性制劑及應(yīng) 用。
[0006] 本發(fā)明所提供的應(yīng)用具體為生物活性制劑CH2009在如下（1)或(2)中的應(yīng)用：
[0007] (1)制備用于抑制痘病毒感染的產(chǎn)品；
[000引（2)用于抑制痘病毒感染；
[0009] 所述生物活性制劑C肥009具體可按照包括如下步驟(al)-(a6)的方法制備獲得：
[0010] (al)取離體的新西蘭大白兔的炎癥皮膚，放入到所取炎癥皮膚自身重量3-4倍(如 3.5倍）的體積百分含量為2%的苯酪水溶液中，通入氮?dú)?如3min)，密封后2-6°C(如4°C)放 置60-80h(如72h)，離屯、（如3000巧m離屯、IOmin)，取上清液，過(guò)濾，得到溶液K褐色）；
[0011] (曰2)向所述溶液I中通入氮?dú)?如3min)，用IM鹽酸將所述溶液I的抑調(diào)至5.0±0.2 (如5.0)，水浴煮沸25-35min(如30min)，降溫至28 ± 2°C (如28°C )，離屯、（如3000巧m離屯、 IOmin)，取上清液，過(guò)濾，得到溶液II;
[0012](曰3)向所述溶液II中通入氮?dú)猓ㄈ?min)，用IM氨氧化鋼將所述溶液II的pH調(diào)至 9.2 ± 0.2 (如9.2)，水浴煮沸25-35min(如30min)，降溫至28 ± 2°C (如28°C )，過(guò)濾，得到溶液 III;
[OOU] (a4)向所述溶液III中通入氮?dú)猓ㄈ?min)，用IM鹽酸將所述溶液III的抑調(diào)至4.5 ±0.2(如4.5)，向所述溶液HI中通入氮?dú)?如3min)，加入活性炭，于30± 2°C (如30°C)條件 下持續(xù)攬拌2-化(如地），停止攬拌后，靜置25-35min(如30min)，抽棄上層清液，氮?dú)猸h(huán)境下 過(guò)濾余下物質(zhì)，然后用生理鹽水(P冊(cè).0)浸泡和清洗所述活性炭，氮?dú)猸h(huán)境下過(guò)濾，棄去濾 液，收集和膽存所述活性炭于容器內(nèi)，加入生理鹽水(P冊(cè).0 )，用IM氨氧化鋼將溶液抑調(diào)至 11.0 ±0.2(如11.0)，連續(xù)攬拌2-化（如4h)，氮?dú)猸h(huán)境下過(guò)濾，棄去濾液，并用生理鹽水 (P冊(cè).0)沖洗所述活性炭，得到溶液IV;
[0014] (a5)用IM鹽酸將所述溶液IV的pH調(diào)至6.0 ±0.2(如6.0)，通入氮?dú)夂螅ㄈ缤ㄈ氲獨(dú)?5min后），將所述溶液IV密封于容器內(nèi)，加熱至121±2°C (如12rC)，保持15-25min(如 20min)，然后冷卻至40°C W下，得到溶液V;
[0015] (a6)將所述溶液V抽入減壓蒸饋器，并將所述減壓蒸饋器內(nèi)的空氣換為氮?dú)猓?0± 2 °C (如60°C)條件下，減壓蒸饋，過(guò)濾，所得濾液即為所述生物活性制劑CH2009。
[0016] 在所述方法的步驟(al)中，所述新西蘭大白兔的炎癥皮膚為由于皮內(nèi)接種了痘病 毒而引起皮膚炎癥的新西蘭大白兔的皮膚。
[0017] 其中，所述痘病毒具體可為痘苗病毒。所述痘病毒（如痘苗病毒）的接種量為5 X IO6~6 X IO6TCIDs誨只成熟新西蘭大白兔(2.7-3.0千克）。所述皮內(nèi)接種為多點(diǎn)皮內(nèi)接種， 100-120個(gè)點(diǎn)/兔。在接種所述痘病毒(如痘苗病毒)后飼養(yǎng)所述新西蘭大白兔4-5天，將出痘 癥狀良好、顏色由紅潤(rùn)轉(zhuǎn)為紫紅、皮膚增厚和皮下有水腫的新西蘭大白兔，安樂(lè)處死，15min 內(nèi)完成采皮，用塑料袋包裝兔皮，立即存放在-80°C備用。
[0018] 在所述方法的步驟(al)中，所述過(guò)濾可為采用孔徑為2.5WI1的濾紙進(jìn)行過(guò)濾(常壓 過(guò)濾）。步驟(a2)中，所述過(guò)濾可為采用孔徑為2.5皿的濾紙進(jìn)行過(guò)濾(低壓過(guò)濾）。步驟(a3) 中，所述過(guò)濾可為先用孔徑為2.5皿的濾紙進(jìn)行過(guò)濾(低壓過(guò)濾），再用0.45WI1濾膜進(jìn)行過(guò)濾 (低壓過(guò)濾）。步驟(a4)中，前兩次所述過(guò)濾均可為采用孔徑為2.5WI1的濾紙進(jìn)行過(guò)濾(低壓 過(guò)濾）；第=次所述過(guò)濾可為采用0.45WI1濾膜進(jìn)行過(guò)濾(常壓過(guò)濾）。步驟(a6)中，所述過(guò)濾 可為先采用孔徑為2.扣m的濾紙進(jìn)行過(guò)濾（常壓過(guò)濾），再用0.化m濾膜進(jìn)行過(guò)濾（常壓過(guò) 濾)。
[0019] 在所述方法中，步驟(al)中的所述炎癥皮膚的重量、步驟(a4)中的所述活性炭的 重量、步驟(曰4)中第一次使用的所述生理鹽水的體積、步驟(a4)中第二次使用的所述生理 鹽水的體積，W及步驟（a6)中進(jìn)行所述減壓蒸饋后的液體體積的配比約為200g:40g: 400ml:40ml:5mlO
[0020] 在所述方法中，所述抑制痘病毒感染為如下(a)或(b):
[0021] (a)在與痘病毒同時(shí)作用于宿主或宿主細(xì)胞時(shí)，抑制所述痘病毒對(duì)所述宿主或所 述宿主細(xì)胞的感染；
[0022] (b)治療痘病毒感染。
[0023] 在所述方法的（1)或（2)中，所述痘病毒為能夠感染哺乳動(dòng)物的痘病毒;所述能夠 感染哺乳動(dòng)物的痘病毒具體可為天花病毒、痘苗病毒或鼠痘病毒。
[0024] 本發(fā)明還提供了一種用于抑制痘病毒感染的產(chǎn)品。
[0025] 本發(fā)明所提供的用于抑制痘病毒感染的產(chǎn)品，為按照包括如上步驟(al)-(a6)的 方法制備獲得的生物活性制劑C肥009。
[0026] 本發(fā)明利用痘苗病毒皮內(nèi)接種新西蘭大白兔，經(jīng)高溫高壓、溶劑抽提、酸堿處理、 吸附、洗脫和離屯、濃縮等步驟，從該大白兔的炎癥皮膚組織中，制備具有特異性抗痘病毒感 染的生物活性制劑CH2009。生物制劑CH2009為含多種氨基酸和核