鹽酸氨溴索聯(lián)合氟康唑的抗真菌產(chǎn)品及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及鹽酸氨漠索聯(lián)合氣康挫的抗真菌產(chǎn)品及其應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，隨著獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)患者的增多W及廣譜抗菌藥物的廣泛 應(yīng)用，器官移植技術(shù)和導(dǎo)管技術(shù)等醫(yī)療技術(shù)的開展，侵襲性真菌感染的發(fā)病率和病死率逐 年上升，特別是曲霉屬和念珠菌屬引起的感染，患者的生存率分別不足30%和70%。念珠菌 感染對臨床的威脅雖然沒有曲霉菌感染所造成的威脅大，但由于運(yùn)類真菌容易出現(xiàn)藥物外 排增強(qiáng)與基因祀位改變(如ERG11)等，使得對挫類抗真菌藥物敏感的念珠菌不斷出現(xiàn)耐藥 性，運(yùn)給臨床抗真菌感染帶來極大的挑戰(zhàn)。數(shù)據(jù)表明，AIDS患者晚期感染真菌后，超過=分 之一耐藥，對挫類藥物耐藥率更是高達(dá)65 %。其中念珠菌尤其是白色念珠菌（Candida a化icans，CA)，是呼吸系統(tǒng)、血流感染、消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)真菌感染的常見分離菌。根據(jù)美 國院內(nèi)感染控制組織的資料顯示，CA是第4位引起院內(nèi)血流感染的病原微生物，是死亡率最 高的致病菌，死亡率可高達(dá)40% dCA血流感染的高死亡率也與其耐藥現(xiàn)象的不斷出現(xiàn)有關(guān)。 新藥研究與聯(lián)合用藥研究均是解決真菌耐藥的途徑。由于聯(lián)合用藥前期投入少、效果顯著， 受到國內(nèi)外研究者的廣泛關(guān)注。聯(lián)合用藥研究包括兩種抗真菌藥聯(lián)合及非抗真菌藥與抗真 菌藥聯(lián)合，由于目前臨床可用的抗真菌藥物品種有限，且大多價格昂貴、毒副作用明顯，使 得非抗真菌藥物與抗真菌藥物的聯(lián)合應(yīng)用研究備受關(guān)注。近年來挫類藥物，尤其是氣康挫， 的廣泛應(yīng)用雖然取得了良好的臨床效果，但隨之而來的耐藥株的出現(xiàn)使臨床治療變得棘 手，運(yùn)使得克服白色念珠菌對氣康挫的耐藥問題成為研究熱點(diǎn)。
[0003] 鹽酸氨漠索(Ambroxol hy化ochloride，ABH)是一種治療呼吸系統(tǒng)疾病的安全、有 效藥物，在常見呼吸道疾病的化疲、排疲治療中應(yīng)用廣泛。近年來有臨床用藥報道發(fā)現(xiàn)，鹽 酸氨漠索可與抗生素發(fā)揮協(xié)同抗細(xì)菌作用，可縮短呼吸系統(tǒng)感染的治療時間，降低并發(fā)癥 發(fā)生率和病死率，適用年齡寬廣，可廣泛用于各種急慢性肺部疾病、呼吸窘迫綜合征，具有 降低疲液黏度、改善患者排疲功能及肺功能的作用，療效確切，患者通常能很好耐受。目前， ABH在臨床上有與抗真菌藥物聯(lián)合應(yīng)用的機(jī)會(孫紅爽，包春城，馬紅芳，陳赫軍，種寶貴.1 例老年肺部細(xì)菌合并真菌感染患者的藥學(xué)監(jiān)護(hù)[J]. 2015,12(3) :182-185.),另外，臨床治 療中發(fā)現(xiàn)氨漠索注射液與抗菌藥物合用可使抗菌藥物在肺組織的分布濃度升高，增強(qiáng)抗菌 藥物的作用(王永莉，曹永寧.氨漠索注射液治療小兒支原體肺炎56例[J].中國藥業(yè)，2014， 23(19) :97-98.)。對于A冊和化C的聯(lián)用抗白色念珠菌的作用研究，目前尚無研究報道，具有 廣闊的研究前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是為了克服目前真菌耐藥問題，提供一種鹽酸氨漠索聯(lián)合氣康挫的 抗真菌產(chǎn)品及其應(yīng)用。
[0005] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0006] -種鹽酸氨漠索聯(lián)合氣康挫在制備抗真菌產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0007] 優(yōu)選:所述產(chǎn)品為藥物。
[000引優(yōu)選:所述真菌為白色念珠菌。
[0009] 優(yōu)選:所述鹽酸氨漠索與氣康挫聯(lián)合應(yīng)用時的有效濃度配比:氣康挫:鹽酸氨漠索 = 1:64。
[0010] 所述應(yīng)用時鹽酸氨漠索的最低抑菌濃度為:12祉g/mL。
[0011] 所述應(yīng)用時氣康挫的最低抑菌濃度為:2iig/mL。
[0012] -種抗真菌產(chǎn)品，W鹽酸氨漠索和氣康挫為主要活性成分。
[0013] 優(yōu)選:所述鹽酸氨漠索與氣康挫的有效濃度配比為氣康挫:鹽酸氨漠索= 1:64。
[0014] 所述鹽酸氨漠索的最低濃度為:12祉g/mL。
[0015] 所述氣康挫的最低濃度為:2iig/mL結(jié)果表明，大于12祉g/血的鹽酸氨漠索與大于2 yg/mL的氣康挫聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同抗耐藥白色念珠菌作用。
[0016] -種抗真菌的制劑，由鹽酸氨漠索和氣康挫W及藥學(xué)上可接受的輔料組成。在本 發(fā)明提供的制劑中，藥學(xué)上可接受的輔料為藥物制劑中的常規(guī)輔料，為本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn) 為可行的常規(guī)輔料均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)，本發(fā)明在此不做限定。
[0017] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，ABH在體外可與抗真菌藥物發(fā)揮聯(lián)合抗真菌作用，由此可見，兩者協(xié) 同抗真菌作用并不僅僅局限于ABH使抗菌藥物在肺組織的分布濃度升高運(yùn)一作用機(jī)制。
[0018] 本發(fā)明采用耐藥白色念珠菌細(xì)胞進(jìn)行研究，利用棋盤肉湯微量稀釋法，分別評價 不同聯(lián)合用藥組合的聯(lián)合抗真菌作用。具體內(nèi)容如下：
[0019] A:ABH與化C聯(lián)合抗耐藥CA作用:采用棋盤肉湯微量稀釋法測定聯(lián)合用藥時最低有 效濃度，WFICI法選擇最佳藥物組合濃度及評價藥物聯(lián)合用藥的作用。此外，為更直觀地表 現(xiàn)聯(lián)合用藥對耐藥CA作用的程度，將聯(lián)合藥敏測定數(shù)據(jù)用生長百分?jǐn)?shù)差值模型（AE)進(jìn)行 了進(jìn)一步分析。
[0020] B:ABH在臨床使用中用量大、安全、有效，如果能在抗真菌方面發(fā)揮作用，特別是對 耐藥真菌感染的治療，意義重大。本研究表明，ABH聯(lián)合應(yīng)用化C可產(chǎn)生協(xié)同抗耐藥CA作用， 可擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，具有良好的應(yīng)用前景。
[0021] 總之，本發(fā)明包含ABH與化C聯(lián)合應(yīng)用產(chǎn)生協(xié)同抗耐藥CA的作用。上述發(fā)現(xiàn)為臨床 聯(lián)合用藥作為治療耐藥真菌感染的方案提供了思路。
[0022] 鹽酸氨漠索除了單用具有抗白色念珠菌浮游細(xì)胞及生物膜的活性外，發(fā)明人在研 究中還偶然發(fā)現(xiàn)它能與氣康挫聯(lián)用產(chǎn)生明顯的協(xié)同抗真菌作用。ABH與化邱關(guān)合應(yīng)用在體外 具有協(xié)同抗耐藥CA作用，且效果明顯。低劑量的ABH可使FLC對耐藥CA的MIC值從512iig/mL W 上降至aig/mL。
[0023] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有W下優(yōu)點(diǎn)與效果：
[0024] 1.本發(fā)明表明，ABH與FLC聯(lián)合應(yīng)用時，可W增強(qiáng)FLC對耐藥CA的抗菌活性，可W產(chǎn) 生協(xié)同抗真菌作用，并能夠逆轉(zhuǎn)耐藥CA對S挫類抗真菌藥物的耐藥性，為新藥的開發(fā)及老 藥新用提供了研究方向。對化C耐藥的CA,聯(lián)合用藥可使其最低抑菌濃度明顯降低，12祉g/ mL的ABH與化g/mL的化C合用可W殺滅80% W上的真菌，濃度再增大，效果更強(qiáng)。
[0025] 2.ABH在臨床上應(yīng)用量大、安全，其對化討亢真菌的增效作用，可擴(kuò)大其應(yīng)用范圍， 并且降低化C的最低有效抑菌濃度，降低抗真菌藥物的用藥量，從而降低藥物的不良反應(yīng)的 發(fā)生，克服臨床上真菌耐藥問題。
[0026] 3.真菌耐藥機(jī)制及其復(fù)雜，尚有許多機(jī)制仍不是很清楚，如能將ABH對氣康挫的抗 真菌增敏機(jī)制研究透徹，必定能為克服真菌耐藥問題提供新的思路。
【附圖說明】
[0027] 圖1.鹽酸氨漠索與氣康挫聯(lián)用對抗耐藥白色念珠菌CAlO作用結(jié)果；
[00%]圖2.鹽酸氨漠索與氣康挫聯(lián)用對抗耐藥白色念珠菌CA16作用結(jié)果；
[0029] 其中：X軸代表氣康挫的濃度，Y軸代表鹽酸氨漠索的濃度，Z軸代表的是各個藥物 組合下的AE值，高于或低于平面（AE = O)的值分別表示協(xié)同或括抗作用，平面周圍的值表 示無關(guān)作用，圖右側(cè)的色彩編碼條中，越靠近上端說明協(xié)同作用越強(qiáng)。
【具體實施方式】
[0030] 下面結(jié)合附圖與實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0031 ]實施例鹽酸氨漠索與氣康挫聯(lián)合抗真菌作用測定 [003^ 1.材料
[0033] 1.1藥品與試劑
[0034] 氣康挫(Fluconazole，F(xiàn)LC)，大連美侖生物技術(shù)有限公司；
[00巧]鹽酸氨漠索(Ambroxol hy化ochlo;ride，ABH)，大連美侖生物技術(shù)有限公司；
[0036] 科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基，鄭州博賽生物工程有限公司；
[0037] TTC-沙保羅培養(yǎng)基，青島高科技園海博生物技術(shù)有限公司；
[0038] 酵母膏，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；
[0039] 蛋白腺，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；
[0040] 葡萄糖，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；
[0041] 瓊脂粉，北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；
[0042] PB誦溝酸鹽緩沖劑，北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；
[0043] 氨氧化鋼，國營山東單縣有機(jī)化工廠，批號940420;
[0044] 憐酸二氨鐘，上海新寶精細(xì)化工廠，批號200602132。
[0045] RPMI 1640原料藥粉，美國GIBCO公司；
[0046] 3-(N-嗎嘟代)丙橫酸(MOPS),北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；
[0047] 甲糞釀(Menadione )，美國 Sigma 公司；
[004引XTT(二甲氧挫黃），南京旋光科技有限公司；
[0049]乳酸林格氏液(復(fù)方氯化鋼溶液），山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司；
[(K)加]丙酬，上海振興化工一廠，批號200209510;
[0051 ] XTT-甲糞釀溶液的配制：取XlT粉末0.0500g，溶解于IOOmL已高壓滅菌的林格氏液 配成0.5mg/mL的溶液，用0.22皿濾膜濾過滅;加入10化的lOmmol/L的甲糞釀丙酬溶液(取甲 糞釀0.0860g溶解于5mL丙酬），使其終濃度為1皿ol/L，搖勻，4°C避光保存。
[0052]藥物溶液:氣康挫用無菌蒸饋水溶解，配成2560iig/mL的儲備液，過濾分裝;鹽酸氨 漠索用無菌蒸饋水溶解，配成5120yg/mL的儲備液，過濾分裝。所有藥液于-20°C冰箱保存， 備用。
[0053] PBS緩沖液：稱取12gPBS憐酸鹽緩沖劑至IL容量瓶，加入蒸饋水?dāng)埌枋蛊渫耆?解，再加蒸溜水至