)，用生理鹽水配制成1.6mg/mL備用；注射用重組人粒細(xì)胞巨隧 細(xì)胞刺激因子(riiGM-CSF)(國(guó)藥準(zhǔn)字S10980037，廈口特寶生物工程股份有限公司），用生理 鹽水配制成0.35yg/mL備用。
[0027] 3、給藥方案：
[0028] 正常對(duì)照組:腹腔注射生理鹽水0.5血;第二天開始每天注射生理鹽水0.4mL-次， 連續(xù)注射5天；
[00巧]MTX組:腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0. SmL第二天開始每天注射生理鹽水0.4mL 一次，連續(xù)注射5天；
[0030] riiGM-CSF組:腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL第二天開始每天皮下注射注射 0.35iig/mLrhGM-CSF 注射液 0.4mL-次，連續(xù) 5天；
[0031] 烏司他下高劑量組:腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL第二天開始每天尾靜脈 注射5萬單位/mL烏司他下注射液0.4mL-次，連續(xù)5天；
[0032] 烏司他下中劑量組:腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL第二天開始每天尾靜脈 注射2.5萬單位/mL烏司他下注射液0.4mL-次，連續(xù)5天；
[0033] 烏司他下低劑量組:腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL第二天開始每天尾靜脈 注射1.25萬單位/mL烏司他下注射液0.4mL-次，連續(xù)5天。
[0034] 4、實(shí)驗(yàn)方法：烏司他下組和rhGM-CSF組于小鼠第一次注射烏司他下或rhGM-CSF24h后開始處死小鼠，正常對(duì)照組于小鼠注射生理鹽水2地后開始處死小鼠，MTX組于小 鼠注射MTX注射液后開始處死小鼠；每天斷頸處死2只小鼠，第10天后將全部小鼠處死，仔細(xì) 解剖取下舌、口腔頰部及唇部粘膜，用10%福爾馬林固定備檢。
[0035] 5、觀察方法及口腔粘膜損傷判定標(biāo)準(zhǔn)
[0036] 5.1肉眼觀察
[0037] 口腔粘膜潰瘍出現(xiàn)的時(shí)間、范圍、顏色。
[003引 5.2光學(xué)顯微鏡
[0039] 取下小鼠口腔粘膜組織后，在濾紙上鋪平，借助放大鏡取典型病變處組織，10%福 爾馬林固定，石蠟包埋，5~化切片，皿染色，觀察粘膜上皮炎性細(xì)胞的多少、有無變性、壞 死、潰瘍形成W及成纖維細(xì)胞、新生血管等肉芽組織的增生。
[0040] 5.3光學(xué)顯微鏡下口腔粘膜損傷程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)
[0041] 0分：口腔粘膜無炎細(xì)胞、壞死、潰瘍等病變；
[0042] 1分：口腔粘膜有少數(shù)炎細(xì)胞，無壞死及潰瘍；
[0043] 2分：口腔粘膜有較多炎細(xì)胞，無壞死及潰瘍；
[0044] 3分：口腔粘膜上皮固有層有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，部分有壞死，但無潰瘍，浸潤(rùn)的炎細(xì) 胞W中性粒細(xì)胞為主，也有淋己細(xì)胞、漿細(xì)胞及單核細(xì)胞，中性粒細(xì)胞胞漿內(nèi)顆粒豐富；
[0045] 4分：口腔粘膜潰瘍已形成，有壞死組織，其周圍有成纖維細(xì)胞、新生毛細(xì)血管等。
[0046] 6、病變率、積分率的定義
[0047] 口腔粘膜損傷病變率=(口腔粘膜炎癥+潰瘍）只數(shù)/取材只數(shù)*100%
[004引 口腔粘膜損傷積分率=口腔粘膜損傷積分/(取材只數(shù)*4)*100%
[0049] 7、試驗(yàn)結(jié)果:見表1。
[0050] 表1烏司他下對(duì)MTX致小鼠口腔粘膜損傷的作用
[0化2]由表1可知，rhGM-CSF組和烏司他下組小鼠的口腔粘膜損傷的病變率和積分率均 較MTX組降低，且烏司他下組的效果優(yōu)于riiGM-CSF組;烏司他下組口腔粘膜潰瘍病變例數(shù)較 MTX組大大降低，說明本發(fā)明提供的烏司他下對(duì)化療引起的口腔粘膜損傷具有顯著的防治 作用。
[0053]試驗(yàn)例二、烏司他下對(duì)急性放射性粘膜炎的防治作用試驗(yàn)
[0化4] 1、試驗(yàn)對(duì)象:SPF級(jí)SD大鼠，由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中屯、提供，雄性，體重250~280g， 常規(guī)飼養(yǎng)2周，挑選體重增長(zhǎng)正常、體質(zhì)良好者進(jìn)入實(shí)驗(yàn)，共80只大鼠。
[0055] 2、試驗(yàn)材料：實(shí)施例4制備的烏司他下注射液，用生理鹽水配制成5萬單位/mL備 用;醋酸地塞米松注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字冊(cè)1020514,成都天臺(tái)山制藥有限公司），用生理鹽水配 置成50yg/mL備用。
[0化6] 3、試驗(yàn)方法：
[0057]隨機(jī)挑選其中20只大鼠設(shè)為正常對(duì)照組，其余60只大鼠腹腔注射戊己比妥鋼 40mg/kg，逐只麻醉后仰邸固定在照射板上，完全暴露胸部，使用6MV直線加速器照射，照射 野W胸部正中線為中屯、，上界至咽喉水平，下屆至胃底，照射條件為：照射源與大鼠皮膚的 距離SSD為98.5畑1，照射深度1.5畑1，照射野2畑1*5畑1，照射劑量為35Gy。60只大鼠造模照射后 次日隨機(jī)分為3組，每組20只，分別為模型對(duì)照組，陽性對(duì)照組和烏司他下組。正常對(duì)照組和 模型對(duì)照組每日每只尾靜脈注射生理鹽水0.2mL，陽性對(duì)照組每只每日尾靜脈注射醋酸地 塞米松注射液0.2mL，烏司他下組每只每日尾靜脈注射烏司他下注射液0.2mL，連續(xù)給藥2 周。末次給藥2地后，各組大鼠分別稱重、采血，測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)值和丙二醒(MDA) 值，最后腹腔注射戊己比妥鋼麻醉后將其處死，取出食道和脾臟，食道用10%的福爾馬林固 定1周后，石蠟包埋、切片，肥染色，做病理觀察，脾臟稱重，計(jì)算脾指數(shù)。
[0化引 4、試驗(yàn)結(jié)果:見表2。
[0059]表2烏司他下對(duì)急性放射性粘膜炎的作用
[0061 ] 注:與正常對(duì)照組相比/?<〇.〇5/&?<〇.〇1;與模型對(duì)照組相比，吁<〇.〇5，*吁< 0.0 l;與陽性對(duì)照組相比，咕<0.05。
[0062]由表2可知，與模型對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組和烏司他下組大鼠的體重均明顯提高 (P<0.01)，而烏司他下組大鼠體重的提高與陽性對(duì)照組相比具有顯著性差異(P<0.05); 陽性對(duì)照組和烏司他下組均可顯著提高大鼠的脾指數(shù)和改善大鼠的MDA水平(P<0.05，P< 0.01)，且烏司他下組的效果要顯著優(yōu)于陽性對(duì)照組(P<〇.05)，說明烏司他下具有提高免 疫力和抗脂質(zhì)過氧化作用；病理觀察顯示，烏司他下組食道粘膜損傷程度與模型對(duì)照組和 陽性對(duì)照組的食道粘膜損傷程度相比，明顯減輕；W上結(jié)果均說明本發(fā)明提供的烏司他下 對(duì)放療引起的粘膜損傷具有顯著的治療效果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 烏司他丁在制備防治放/化療引起的粘膜損傷藥物中的用途。2. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥物是由烏司他丁和醫(yī)學(xué)上可接受的 藥用輔料組成的藥物組合物。3. 如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述的藥物組合物為凍干粉針劑或注射液。4. 如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述凍干粉針劑的藥用輔料選自甘露醇、山 梨醇、乳糖、右旋糖酐、甘氨酸、水解明膠、氯化鈉和葡萄糖中的一種或多種。5. 如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述注射液的藥用輔料選自注射用水、甘露 醇、氯化鈉、醋酸鈉、醋酸和葡萄糖中的一種或多種。
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及烏司他丁在制備防治放/化療引起的粘膜損傷藥物中的用途。本發(fā)明提供的烏司他丁在制備防治放/化療引起的粘膜損傷藥物中的用途，經(jīng)試驗(yàn)證明烏司他丁對(duì)化療常用藥物MTX引起的口腔粘膜損傷及放療引起的急性放射性粘膜炎均具有顯著的防治效果。
【IPC分類】A61P1/02, A61P43/00, A61K38/17
【公開號(hào)】CN105597084
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610102646
【發(fā)明人】宋建東, 葉曉春, 孫明暉, 侯維靜, 趙菁
【申請(qǐng)人】廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司
【公開日】2016年5月25日
【申請(qǐng)日】2016年2月24日