黑蒜提取物及其在防治舌癌中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種黑蒜提取物及其在防治舌癌中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]按嚴(yán)格的解剖學(xué)定義，舌癌(carcinomaof tongue)應(yīng)分為舌體癌(舌前2/3)與舌根癌(舌后1/3)兩類。長期吸煙、飲酒、嚼檳榔或戴著不合適的義齒等都會使口腔黏膜反復(fù)損傷、充血、增生，口腔黏膜細(xì)胞的反復(fù)損傷、增生，使細(xì)胞核的代謝逐漸增加，整個細(xì)胞增殖周期中的Gl期細(xì)胞不斷進(jìn)入S期(DNA合成期)，促使S期細(xì)胞數(shù)增加。經(jīng)過幾年、幾十年(口腔組織損傷達(dá)到數(shù)百萬次，甚至更多)，最終出現(xiàn)DNA含量異常增高，產(chǎn)生染色體異常、細(xì)胞多核，反復(fù)口腔組織損傷還使細(xì)胞質(zhì)的成分丟失或嚴(yán)重抑制細(xì)胞質(zhì)的生長，細(xì)胞質(zhì)無法生長成熟，引起細(xì)胞幼稚，產(chǎn)生癌癥。在分子水平上，這些損傷使組織細(xì)胞內(nèi)DNA上的基因反復(fù)斷裂、重組(重新組合之意)，導(dǎo)致基因突變，形成口腔癌癥。
[0003]黑蒜是新鮮的生大蒜通過控制溫度和濕度，經(jīng)發(fā)酵得到的大蒜深加工產(chǎn)品。與新鮮的生大蒜相比，黑蒜在感官、氣味和營養(yǎng)價值等方面都有明顯的優(yōu)勢，黑蒜中的蛋白質(zhì)、氨基酸和多酚類物質(zhì)等成分的含量顯著提高。黑蒜具有抗氧化、美容養(yǎng)顏和調(diào)節(jié)血糖等作用，受到越來越多消費(fèi)者的喜愛，具有廣闊的市場前景。
[0004]中國專利申請201310390623.X公開了黑蒜提取物在調(diào)節(jié)動物腸道菌群中的用途，黑蒜提取物通過黑蒜去皮，把衣膜去盡，破碎，棒汁和過濾得到。
[0005]目前并沒有相關(guān)將黑蒜提取物用于防治舌癌的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種黑蒜提取物，所述黑蒜提取物由以下步驟制備而成:
1)取黑蒜切片，加入所述黑蒜3?6倍重量的水，于85?115°C提取2?4h，過濾，收集第一濾液，保留濾渣；
2)向所述濾渣中加入所述黑蒜I?2倍重量的水，加入所述黑蒜0.003?0.05倍重量的復(fù)合植物水解酶，酶解，然后加入所述黑蒜卜3倍重量的60?85%的乙醇溶液，加熱回流提取3?6h，過濾取濾液，減壓濃縮，去除乙醇后得到第二濾液；
3)合并所述第一濾液和所述第二濾液，混勻后即得黑蒜提取物。
[0007]優(yōu)選地，所述步驟2)中酶解的溫度為36?45°C，時間為I?3h。
[0008]優(yōu)選地，所述步驟2)中酶解的溫度為36°C，時間為lh。
[0009]本發(fā)明還提供了所述黑蒜提取物的制備方法，其包括以下步驟:
1)取黑蒜切片，加入所述黑蒜3?6倍重量的水，于85?115°C提取2?4h，過濾，收集第一濾液，保留濾渣；
2)向所述濾渣中加入所述黑蒜I?2倍重量的水，加入所述黑蒜0.003?0.05倍重量的復(fù)合植物水解酶，酶解，然后加入所述黑蒜卜3倍重量的60?85%的乙醇溶液，加熱回流提取3?6h，過濾取濾液，減壓濃縮，去除乙醇后得到第二濾液；
3)合并所述第一濾液和所述第二濾液，混勻后即得黑蒜提取物。
[0010]優(yōu)選地，所述步驟2)中酶解的溫度為36?45°C，時間為I?3h。
[0011]優(yōu)選地，所述步驟2)中酶解的溫度為36°C，時間為lh。
[0012]本發(fā)明還公開了黑蒜提取物在制備防治舌癌的食品、保健品或藥品中的用途。
[0013]優(yōu)選地，所述黑蒜提取物可與藥學(xué)上可接受的藥物載體或輔料按常規(guī)方法制成臨床常用制劑，所述制劑的劑型，包括口服劑、注射劑以及含漱劑。
[0014]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明提供了一種黑蒜提取物，通過對黑蒜濾渣進(jìn)行復(fù)合植物水解酶酶解和乙醇提取，大大增加了黑蒜提取液物中大蒜素、大蒜新素等活性成分的含量，可溶性固形物含量大大增加。其對舌癌Tca-8113細(xì)胞系具有抑制其生長、降低細(xì)胞活力、改變細(xì)胞形態(tài)的作用;本發(fā)明提供的黑蒜提取物制備方法簡單，適于產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。
【附圖說明】
[0015]圖1為不同濃度的黑蒜提取物處理舌癌Tca-8113細(xì)胞系12、24h后的細(xì)胞生長受限圖；
圖2為不同濃度的黑蒜提取物處理舌癌Tca-8113細(xì)胞系12、24h后的細(xì)胞形態(tài)改變圖； 圖3為不同濃度的黑蒜提取物處理舌癌Tca-8113細(xì)胞系12、24h后的細(xì)胞活力改變圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0017]實(shí)施例1黑蒜提取物的制備
取黑蒜切片，加入所述黑蒜3倍重量的水，于85°C提取2h，過濾，收集第一濾液，保留濾渣；向所述濾渣中加入所述黑蒜I倍重量的水，加入所述黑蒜0.003倍重量的復(fù)合植物水解酶，在36°C下酶解lh，然后加入所述黑蒜I倍重量的65%的乙醇溶液，加熱回流提取3h，過濾取濾液，減壓濃縮，去除乙醇后得到第二濾液;合并所述第一濾液和所述第二濾液，混勻后即得黑蒜提取物。黑蒜提取液的可溶性固形物含量為19.8%。
[0018]實(shí)施例2黑蒜提取物的制備
取黑蒜切片，加入所述黑蒜5倍重量的水，于100°C提取3h，過濾，收集第一濾液，保留濾渣；向所述濾渣中加入所述黑蒜2倍重量的水，加入所述黑蒜0.004倍重量的復(fù)合植物水解酶，在40°C下酶解2h，然后加入所述黑蒜2倍重量的75%的乙醇溶液，加熱回流提取4h，過濾取濾液，減壓濃縮，去除乙醇后得到第二濾液;合并所述第一濾液和所述第二濾液，混勻后即得黑蒜提取物。黑蒜提取液的可溶性固形物含量為19.2%。
[0019]實(shí)施例3黑蒜提取物的制備
取黑蒜切片，加入所述黑蒜6倍重量的水，于115°C提取4h，過濾，收集第一濾液，保留濾渣；向所述濾渣中加入所述黑蒜2倍重量的水，加入所述黑蒜0.05倍重量的復(fù)合植物水解酶，在45°C下酶解3h，然后加入所述黑蒜3倍重量的85%的乙醇溶液，加熱回流提取6h，過濾取濾液，減壓濃縮，去除乙醇后得到第二濾液;合并所述第一濾液和所述第二濾液，混勻后即得黑蒜提取物。黑蒜提取液的可溶性固形物含量為18.7%。
[0020]對比例I黑蒜提取物的制備
取黑蒜切片，加入所述黑蒜3倍重量的水，于85°C提取2h，過濾，收集第一濾液，保留濾渣；向所述濾渣中加入所述黑蒜I倍重量的65%的乙醇溶液，加熱回流提取3h，過濾取濾液，減壓濃縮，去除乙醇后得到第二濾液;合并所述第一濾液和所述第二濾液，混勻后即得黑蒜提取物。黑蒜提取液的可溶性固形物含量為15.2%。
[0021]試驗(yàn)例本發(fā)明黑蒜提取物對舌癌Tca-8113細(xì)胞系抑制活性的研究
1、細(xì)胞系和試驗(yàn)藥物:細(xì)胞系為舌癌Tca-8113細(xì)胞系，來自中山大學(xué)腫瘤防治中心華南腫瘤學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;試驗(yàn)藥物實(shí)施例1-3所得黑蒜提取物;MTS試劑購自美國Promega公司。
[0022]2、黑蒜提取物處理
將實(shí)施例1-3黑蒜提取物，2000rmp X 1min離心15min，收集上清液于50ml離心管中，然后用Mi Ilex-HV0.45μπι過濾器過濾，收集過濾液，4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0023]3、細(xì)胞處理
待細(xì)胞生長至融合度達(dá)80%-90%時，用胰酶消化細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液;細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，以5000-600個/1 OOml /孔接種96孔板;用細(xì)胞培養(yǎng)液以I /80、I /60、I /40、I /20、I /10的體積比稀釋黑蒜提取物，混合均勻，次日待孔板中細(xì)胞生長融合度大50%-60%時用上述稀釋的黑蒜提取物更換細(xì)胞培養(yǎng)液，具體步驟為:先吸出孔板中的培養(yǎng)液，以10ml/孔加入各稀釋的黑蒜提取物，每個濃度設(shè)置4個復(fù)孔，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；以正常培養(yǎng)基作為對照組;分別于加藥后12、24和36h給各濃度黑蒜提取物的細(xì)胞拍照；加藥處理后36h，吸凈各孔板中的培養(yǎng)液，加入新鮮培養(yǎng)液，以10μ1/孔加入MTS溶液，培養(yǎng)l_2h后測量孔板每孔的OD值，然后進(jìn)行圖片處理和數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)。
[0024]如圖1，不同濃度的黑蒜提取物處理舌癌Tca-8113細(xì)胞系12、24h后，細(xì)胞生長明顯受限，其中，黑蒜提取物稀釋1/10處理舌癌Tca-8113細(xì)胞系36h后，其對細(xì)胞生長抑制率達(dá)至Ij 26.36%。
[0025]如圖2，不同濃度的黑蒜提取物處理舌癌Tca-8113細(xì)胞系12、24h后，細(xì)胞形態(tài)有改變。
[0026]如圖3，與舌癌Tca-8113細(xì)胞系在正常培養(yǎng)基中培養(yǎng)相比，經(jīng)黑蒜提取物培養(yǎng)36h后的舌癌Tca-8113細(xì)胞系活力有降低，其中以黑蒜提取物稀釋I/10處理舌癌Tca_8113細(xì)胞系36h后細(xì)胞活力最低。
[0027]綜上所述，本發(fā)明黑蒜提取物對舌癌Tca-8113細(xì)胞系具有抑制其生長、降低細(xì)胞活力、改變細(xì)胞形態(tài)的作用，可用于防治舌癌。
[0028]以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說明。對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.黑蒜提取物，其特征在于，所述黑蒜提取物由以下步驟制備而成: 1)取黑蒜切片，加入所述黑蒜3?6倍重量的水，于85?115°C提取2?4h，過濾，收集第一濾液，保留濾渣； 2)向所述濾渣中加入所述黑蒜I?2倍重量的水，加入所述黑蒜0.003-0.05倍重量的復(fù)合植物水解酶，酶解，然后加入所述黑蒜I?3倍重量的60?85%的乙醇溶液，加熱回流提取3?6h，過濾取濾液，減壓濃縮，去除乙醇后得到第二濾液； 3)合并所述第一濾液和所述第二濾液，混勻后即得黑蒜提取物。2.如權(quán)利要求1所述的黑蒜提取物，其特征在于:所述步驟2)中酶解的溫度為36?45°C，時間為I?3h。3.如權(quán)利要求2所述的黑蒜提取物，其特征在于:所述步驟2)中酶解的溫度為36V，時間為lh。4.如權(quán)利要求1-3任一所述的黑蒜提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)取黑蒜切片，加入所述黑蒜3?6倍重量的水，于85?115°C提取2?4h，過濾，收集第一濾液，保留濾渣； 2)向所述濾渣中加入所述黑蒜I?2倍重量的水，加入所述黑蒜0.003-0.05倍重量的復(fù)合植物水解酶，酶解，然后加入所述黑蒜I?3倍重量的60?85%的乙醇溶液，加熱回流提取3?6h，過濾取濾液，減壓濃縮，去除乙醇后得到第二濾液； 3)合并所述第一濾液和所述第二濾液，混勻后即得黑蒜提取物。5.如權(quán)利要求4所述的黑蒜提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中酶解的溫度為36?45°C，時間為I?3h。6.如權(quán)利要求5所述的黑蒜提取物的制備方法，其特征在于:所述步驟2)中酶解的溫度為36°C，時間為lh。7.如權(quán)利要求1-6任一所述的黑蒜提取物在制備防治舌癌的食品、保健品或藥品中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種黑蒜提取物，其由以下步驟制備而成：取黑蒜切片，加入所述黑蒜3~6倍重量的水，于85~115℃提取2~4h，過濾，收集第一濾液，保留濾渣；向所述濾渣中加入所述黑蒜1~2倍重量的水，加入所述黑蒜0.003~0.05倍重量的復(fù)合植物水解酶，酶解，然后加入所述黑蒜1~3倍重量的60~85%的乙醇溶液，加熱回流提取3~6h，過濾取濾液，減壓濃縮，去除乙醇后得到第二濾液；合并所述第一濾液和所述第二濾液，混勻后即得黑蒜提取物。本發(fā)明黑蒜提取物對舌癌Tca-8113細(xì)胞系的生長具有抑制作用，可用于防治舌癌。
【IPC分類】A61P35/00, A23L33/105, A61K36/8962
【公開號】CN105596673
【申請?zhí)枴緾N201610056702
【發(fā)明人】樊曙明
【申請人】廣東益生康生物科技有限公司
【公開日】2016年5月25日
【申請日】2016年1月28日