實施例3本發(fā)明多孔性白及膠的制備
[0060] (1)白及膠的提?。?br>[0061] 取白及生藥材，粉碎、過篩，白及粉中按料液比1:巧日入95%v/v乙醇，60°C回流提 取2次，每次化，濾過，再按料液比1:5加入石油酸，60~90°C回流提取1次，每次化進行脫 月旨，濾過，揮干，加50倍量水，70°C，提取2次，每次化，過濾，合并濾液，濃縮，即得粗白及膠；
[0062] (2)白及膠的純化：
[0063] a.取粗白及膠用Sevage法脫蛋白，濃縮，加入95%v/v乙醇，慢加快攬，至沉淀不再 增加，4°C冷藏12h，過濾，沉淀物用無水乙醇、丙酬、乙酸洗涂，揮干，即得精制白及膠；
[0064] b.取精制白及膠加水復溶，分次加入乙醇使醇體積濃度分別達到40%、60%、 80 %，邊加邊攬，每次所得醇沉液于4°C放置4h，300化/min離屯、分離，收集沉淀，干燥，得不 同分子量段的白及膠；
[0065] (3)白及膠的干燥:取步驟b的白及膠，加水復溶，制備成濃度為30mg/mL的白及膠 溶液，將白及膠溶液置于-60°C預凍化（急凍），預凍結(jié)束后立即放入凍干機中進行真空凍 干，冷凍干燥真空度為30化，冷凍干燥化。
[0066] W下通過具體實驗證明本發(fā)明的有益效果。
[0067] 實驗例1白及膠的提取工藝篩選
[0068] (1)白及多糖相對分子質(zhì)量的測定方法
[0069] 采用高效凝膠滲透色譜法化PGPC)對白及多糖進行相對分子質(zhì)量測定。色譜柱： TSK-gel G4000PWXL(7.8mmX 300mm)，流動相：純水，柱溫30°C，流速:0.5mL/min，進樣量20 化，示差折光檢測器。先將葡聚糖系列對照品按相對分子質(zhì)量(5、50、150、410?)曰及61(3)由 小到大依次進樣，樣品進樣，測定保留時間WlgMw(分子質(zhì)量對數(shù))對tR(保留時間）繪制標 準曲線，得線性回歸方程，計算測定結(jié)果，測得白及多糖平均分子量為320邸a~560邸曰。
[0070] (2)白及膠多糖含量的測定
[0071] 供試品溶液的制備：
[0072] 將脫醋后的白及粉末Ig,置于100mL錐形瓶中，加入一定量的水，在一定溫度下攬 拌提取一定時間，提取液ISOOr/min離屯、IOmin，取上清液Iml，稀釋100倍，制備得到白及多 糖供試品溶液。
[0073] 對照品溶液的制備：
[0074] 精密稱取105°C干燥至恒重的無水葡萄糖10.55mg，置IOmL容量瓶中，加水溶解稀 釋至刻度，搖勻，再精密量取ImL置于IOmL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得，每ImL含無 水葡萄糖105.化邑。
[00巧]5 %苯酪試劑的配置：
[0076] 稱取重蒸后的苯酪5.2359g，置100mL量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，即得。
[0077] 檢測波長的選擇：
[0078] 取對照品溶液Iml置于具塞試管中，冰水浴中加入5%苯酪-硫酸試劑1ml，沸水浴 IOmin，冷卻至室溫，于波長400~600nm范圍內(nèi)掃描，490nm處有最大吸收，故選490nm為檢測 波長，見圖1。
[0079] 標準曲線的制作：
[0080] 采用硫酸-苯酪法進行測定，精密量取對照品溶液0 . OmL、0.6mL、0 . SmL、ImL、 1.2血、1.4mL、1.6mL、1.8mL分別置具塞試管中，稀釋至2ml，分別加5%苯酪溶液ImL，混勻， 迅速加入硫酸5mL，搖勻，冷水浴IOmin冷卻后，W第一份為空白，在490nm的波長處測定吸收 度(酶標儀），W吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，y = 34.133X-0.0636(R2 = 0.9991)，表明葡萄糖在63.3iig~189.化g范圍內(nèi)與吸光度有良好的線性關(guān)系，見圖2。
[0081] 白及膠多糖含量的測定：
[0082] 取多糖樣品溶液于Iml溶于IOml試管中，加水至2.OmL,先后加1.0mL5%苯酪和濃 硫酸5.0血，搖勻，置沸水中水浴IOmin，取出冰浴IOmin后放置至室溫，在490nm處測吸光度， 測定并計算白及多糖質(zhì)量百分含量為55%~65%。
[0083] (3)白及膠孔隙率的測定方法
[0084] 孔隙率指散粒狀材料表觀體積中材料內(nèi)部的孔隙占總體積的比例。
[0085] 因本品在冷水中溶解極為緩慢，故采用浸泡介質(zhì)法測定孔隙率。首先利用游標卡 尺測量樣品的半徑r和高度h(由此可算出試樣的總體積），稱出干燥試樣在空氣中的重量 mi，然后浸入蒸饋水中使其飽和填滿孔隙。試樣浸泡一定時間內(nèi)充分飽和后，將試樣去除， 輕輕擦去試樣表面的介質(zhì)，再用電子砰稱出試樣此時在空氣中的總質(zhì)量m2,由下公式計算 孔隙率，孔隙率為75~98 %。
[0087] (4)提取工藝單因素考查
[0088] 本試驗采用熱水攬拌提取的方法，考查溫度(40、50、60、70、80°〇，攬拌時間（30、 60、90、120、150min)及料液比（1:20、1:30、1:40、1:50、l:60g/ml)對白及多糖提取率的影響 進行研究。
[0089] a.料液比對多糖提取率的影響：
[0090] 準確稱取1.Og脫脂后的白及干粉于100mL的錐形瓶中，固定提取時間為化，提取溫 度為60°C，分別按料液比（1: 20、1:30、1:40、1:50、1:60g/ml)加入不同體積的蒸饋水，1試3 份，考查料液比對白及多糖得率的影響，結(jié)果見圖3。
[0091] 由圖可知，溶劑用量增大，白及多糖的提取率越高，運是因為溶劑的量增加可W提 高白及粉與水溶液間的多糖濃度差，有利于多糖向水提液中擴散，從而提高多糖的提取率， 但是，當料液比達到一定后，提取率增幅較小，繼續(xù)增加溶劑會使提取過程更加繁瑣，不易 濃縮。因此，最佳料液比選擇1:50 (g/ml)。
[0092] b.提取溫度對多糖提取率的影響：
[0093] 準確稱取1 .Og脫脂后的白及干粉于100mL的錐形瓶中，固定提取時間為化，按料液 比為1:40g/ml加入蒸饋水，分別在溫度為40、50、60、70、80、90°C下提取，1試3份，考查溫度 對白及多糖得率的影響，結(jié)果見圖4。
[0094] 由圖可知，隨著溫度的升高，白及多糖的提取率增加，當溫度從50°C增加到70°C 時，多糖提取率增加幅度最大;溫度高于80°C時，提取率增幅趨緩。運是由于溫度的升高，分 子運動加劇，多糖從白及葉細胞中的溶出速率增加;但是溫度過高，使得溶劑揮發(fā)加快，影 響多糖的提取，且長時間高溫浸提可能會影響多糖活性。因此，最佳提取溫度選擇70°C。
[0095] C.提取時間對多糖提取率的影響：
[0096] 準確稱取1.Og脫脂后的白及干粉于100mL的錐形瓶中，固定提取溫度為80°C，料液 比為1:40g/ml加入蒸饋水，分別在時間為化、1.5h、化、2.5h、化下提取，1試3份，考查時間對 白及多糖得率的影響，結(jié)果見圖5。
[0097] 由圖可知，隨著浸提時間的延長，多糖的提取率逐漸增大。當提取時間由提取1.化 增加到化，提取率大幅度提高;但當浸提時間大于2.化時，提取率增加幅度較小，運是由于 白及藥粉中的可溶性多糖擴散到水溶液中的速度與二者中的多糖濃度差成正比，當水提液 中多糖的濃度與白及細胞中濃度趨于平衡時，多糖的溶出較少。因此，最佳提取時間選擇 2h〇
[0098] 實驗例2精制白及膠的常溫揮干、真空減壓干燥W及冷凍干燥比較
[0099] 1精制白及膠的常溫揮干、真空減壓干燥W及冷凍干燥的制備工藝、成膜性能及物 理性能比較如下表1。
[0100] 表1精制白及膠的常溫揮干、真空減壓干燥W及冷凍干燥比較
[0102] 2精制白及膠的常溫揮干、真空減壓干燥W及冷凍干燥樣品，見圖6、圖7。
[0103] 實驗例3多孔性白及膠的性能測定
[0104] 1多孔性結(jié)構(gòu)
[0105] 本發(fā)明采用冷凍干燥的方法制備多孔性白及膠，考查4mg/mL、8mg/mL、10mg/mL、 15mg/血、20mg/mL、25mg/mL、30mg/血不同濃度白及膠溶液冷凍干燥后呈現(xiàn)出不同的疏松結(jié) 構(gòu)，見圖8。
[0106] 圖中顯示:經(jīng)過冷凍干燥的樣品均呈現(xiàn)疏松多孔形狀，但隨著濃度的不同，A到B毛 絮狀結(jié)構(gòu)明顯增多;B到C絮狀結(jié)構(gòu)變?yōu)閹罱Y(jié)構(gòu);C到D帶狀結(jié)構(gòu)變?yōu)槠瑺罱Y(jié)構(gòu);D到E片狀結(jié) 構(gòu)增多，幾乎形成薄膜;E到F片狀結(jié)構(gòu)增多連接成薄膜且出現(xiàn)明顯的網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)，且網(wǎng)孔較 大;巧化薄膜增厚，且網(wǎng)孔變多變小。
[0107] 結(jié)果表明，本發(fā)明制備的多孔性白及膠均具有定向的微管結(jié)構(gòu)，孔隙上下連通，孔 的大小不同，形狀多類似菱形或扁圓，寬度在50皿~100皿之間，長度在100皿~600皿之 間，通過增加白及多糖膠溶液的濃度可W使微管排列規(guī)則，同時微管的密度也隨之增加，孔 隙率可高達98%，但濃度達到一定后，微管密度減小，出現(xiàn)板狀結(jié)構(gòu)，孔隙率降低，孔徑減 小，材料的吸水性隨著孔徑的減小而降低。
[010引2硬度和疏松度性能測定
[0109] 通過美國FTC公司的TMS-Pro專業(yè)級物性分析儀測定精制白及膠，白及多糖及其不 同濃度凍干樣品的各種理化性能進行測定。樣品濃度梯度分別為lmg/mL、4mg/mL、8mg/mL、 1 Omg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL，同時將不同濃度的樣品置于同樣大小的培 養(yǎng)皿中，通過冷凍干燥，形成凍干樣品，厚度約5mm。
[0110] 結(jié)果顯示，隨著多糖濃度的增大，凍干的疏