S緩沖溶液中，混合攪拌均勻后，配制成A溶液，其中，每毫升A溶液中含有20mg的透明質(zhì)酸，取50mL的A溶液，在攪拌條件下緩慢加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽4g、N-羥基琥珀酰亞胺6g，反應(yīng)30min，用PBS緩沖溶液調(diào)節(jié)pH值到7，然后再加入乙二胺5mL，反應(yīng)6h后用去離子水透析處理，得到產(chǎn)物E。
[0070](2)將二乙三胺五乙酸溶于PIPES緩沖溶液中，混合攪拌均勻后，配制成B溶液，其中，每毫升B溶液中含有20mg的二乙三胺五乙酸，取50mL的B溶液，在攪拌的條件下緩慢加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽4g、N-羥基琥珀酰亞胺6g，反應(yīng)30min，用PBS緩沖溶液調(diào)節(jié)pH值到7，然后再加入產(chǎn)物E，反應(yīng)48h后用去離子水透析處理，得到產(chǎn)物F。
[0071](3)將亞鐵氰化鉀溶于水中，混合攪拌均勻后，配制成C溶液，其中，每毫升C溶液中含有10mg的亞鐵氰化鉀；
[0072](4)將硝酸釓溶于水中，混合攪拌均勻后，配制成D溶液，其中，每毫升D溶液中含有1011^的硝酸令匕;
[0073](5)將C溶液磁力攪拌均勻，然后再逐滴加入D溶液，磁力攪拌反應(yīng)20min，離心分離得到產(chǎn)物G，將產(chǎn)物G溶于水中，形成產(chǎn)物G的溶液;其中，硝酸釓與亞鐵氰化鉀的質(zhì)量比1:1 ；
[0074](6)將產(chǎn)物F加入到產(chǎn)物G的溶液中，混合攪拌均勻，反應(yīng)6h后用去離子水透析處理，得到表面帶有透明質(zhì)酸的淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒;其中，產(chǎn)物G與產(chǎn)物F的質(zhì)量比為1: 1。
[0075]實施例6
[0076]本實施例提供了一種淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒的制備方法，包括以下步驟:
[0077](1)將分子量為1萬的透明質(zhì)酸溶于PBS緩沖溶液中，混合攪拌均勻后，配制成A溶液，其中，每毫升A溶液中含有l(wèi)mg的透明質(zhì)酸，取50mL的A溶液，在攪拌條件下緩慢加入Ι-Ο-二甲氨基丙基 )-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 200mg、N-羥基琥珀酰亞胺 300mg，反應(yīng) 15min， 用PBS緩沖溶液調(diào)節(jié)pH值到7，然后再加入環(huán)乙二胺3mL，反應(yīng)24h后用去離子水透析處理，得到產(chǎn)物E。
[0078](2)將二乙三胺五乙酸溶于PIPES緩沖溶液中，混合攪拌均勻后，配制成B溶液，其中，每毫升B溶液中含有l(wèi)mg的二乙三胺五乙酸，取50mL的B溶液，在攪拌的條件下緩慢加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽200mg、N-羥基琥珀酰亞胺300mg，反應(yīng)15min，用roS緩沖溶液調(diào)節(jié)pH值到7，然后再加入產(chǎn)物E，反應(yīng)24h后用去離子水透析處理，得到產(chǎn)物F。
[0079](3)將亞鐵氰化鉀溶于水中，混合攪拌均勻后，配制成C溶液，其中，每毫升C溶液中含有l(wèi)mg的亞鐵氰化鉀；
[0080](4)將硝酸釓溶于水中，混合攪拌均勻后，配制成D溶液，其中，每毫升D溶液中含有l(wèi)mg的硝酸IL;
[0081 ] (5)將C溶液磁力攪拌均勻，然后再逐滴加入D溶液，磁力攪拌反應(yīng)30min，離心分離得到產(chǎn)物G，將產(chǎn)物G溶于水中，形成產(chǎn)物G的溶液;其中，硝酸釓與亞鐵氰化鉀的質(zhì)量比1:
0.5；
[0082](6)將產(chǎn)物F加入到產(chǎn)物G的溶液中，混合攪拌均勻，反應(yīng)12h后用去離子水透析處理，得到表面帶有透明質(zhì)酸的淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒;其中，產(chǎn)物G與產(chǎn)物F的質(zhì)量比為1: 1。
[0083]實施例7淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒掃描電鏡實驗
[0084]采用實施例1制備得到的淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒，對其進行掃描電鏡實驗，采用的掃描電鏡為Nova NanoSEM，掃描電鏡參數(shù)為:mag 50000；det TLD；ffD 5.2mm；HVlOkV;實驗結(jié)果如圖1所示。
[0085]實驗結(jié)果表明:該透明質(zhì)酸包裹的淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒粒徑范圍為40-100nm，表面具有有機層，說明透明質(zhì)酸的有效包裹，粒徑范圍非常適合腫瘤成像的粒徑范圍(腫瘤成像的納米粒徑范圍20-200nm)o
[0086]綜上所述，本發(fā)明的表面帶有透明質(zhì)酸的淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒表面包裹透明質(zhì)酸，不僅具有保護類普魯士藍不受生理環(huán)境影響，而且具有淋巴靶向作用；在生理條件下非常穩(wěn)定，能夠提高生物相容性和造影信號穩(wěn)定性;合成反應(yīng)在室溫下進行，節(jié)能環(huán)保，操作簡單易行;可以作為光吸收物質(zhì)，光吸收效率較高，光穩(wěn)定較好;其內(nèi)核類普魯士藍納米顆粒是利用釓取代三價鐵的位置，具有更多的未配對電子，磁共振信號更強;其表面包裹物為透明質(zhì)酸，透明質(zhì)酸為人體組織成分之一，生物相容性非常好。
【主權(quán)項】
1.一種淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將透明質(zhì)酸溶于緩沖溶液中，混合攪拌均勻后，配制成A溶液，其中，每毫升A溶液中含有l(wèi)-20mg的透明質(zhì)酸，再在攪拌條件下緩慢加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺，反應(yīng)5-30min，用PBS緩沖溶液調(diào)節(jié)pH值到7，然后再加入二胺類連接劑，反應(yīng)6-48h后用去離子水透析處理，得到產(chǎn)物E;其中，透明質(zhì)酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和二胺類連接劑的質(zhì)量比為1:(1-10): (2-20):(1-100)； (2)將二乙三胺五乙酸溶于緩沖溶液中，混合攪拌均勻后，配制成B溶液，其中，每毫升B溶液中含有l(wèi)_20mg的二乙三胺五乙酸，再在攪拌的條件下緩慢加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺，反應(yīng)5-30min，用roS緩沖溶液調(diào)節(jié)pH值到7，然后再加入產(chǎn)物E，反應(yīng)6-48h后用去離子水透析處理，得到產(chǎn)物F;其中，二乙三胺五乙酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和產(chǎn)物E的質(zhì)量比為1: (Ι-ΙΟ)"〗-〗。):)。.〗-!); (3)將六氰絡(luò)鐵酸鹽溶于溶劑中，混合攪拌均勻后，配制成C溶液，其中，每毫升C溶液中含有l(wèi)-20mg的六氰絡(luò)鐵酸鹽； (4)將釓鹽溶于溶劑中，混合攪拌均勻后，配制成D溶液，其中，每毫升D溶液中含有1-20mg 的 IL 鹽； (5)將C溶液磁力攪拌均勻，然后再逐滴加入D溶液，磁力攪拌反應(yīng)20-120min，離心分離得到產(chǎn)物G，將產(chǎn)物G溶于水中，形成產(chǎn)物G的溶液;其中，釓鹽與六氰絡(luò)鐵酸鹽的質(zhì)量比1:0.2-1； (6)將產(chǎn)物F加入到產(chǎn)物G的溶液中，混合攪拌均勻，反應(yīng)4-24h后用去離子水透析處理，得到表面帶有透明質(zhì)酸的淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒;其中，產(chǎn)物G與產(chǎn)物F的質(zhì)量比為1:0.2-2ο2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述透明質(zhì)酸的分子量為6千-7萬。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述緩沖溶液為MES緩沖溶液、PBS緩沖溶液、Tr i s緩沖溶液、HEPES緩沖溶液、TES緩沖溶液、MOPS緩沖溶液和PIPES緩沖溶液中的一種。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述二胺類連接劑為脂肪族二胺或飽和環(huán)二胺。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于:所述脂肪族二胺為乙二胺、1，3-丙二胺和2，2-二甲基-1，3-丙二胺中的一種。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于:所述飽和環(huán)二胺為環(huán)己二胺。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述六氰絡(luò)鐵酸鹽為亞鐵氰化鉀、亞鐵氰化鈉和亞鐵氰化銨中的一種。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述溶劑為水、乙醇和乙二醇中的一種。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述釓鹽為氯化釓、硝酸釓和硫酸釓中的一種。10.—種權(quán)利要求1-9任意一項所述的制備方法制備得到的表面帶有透明質(zhì)酸的淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒及其制備方法。該方法通過在二乙三胺五乙酸上交聯(lián)上透明質(zhì)酸并螯合在釓離子上，形成穩(wěn)定的表面帶有透明質(zhì)酸的具有淋巴靶向的類普魯士藍納米顆粒。該納米顆粒表面包裹透明質(zhì)酸，不僅具有保護類普魯士藍不受生理環(huán)境影響，而且具有淋巴靶向作用；在生理條件下非常穩(wěn)定，提高了生物相容性和造影信號穩(wěn)定性；合成反應(yīng)在室溫下進行，節(jié)能環(huán)保，操作簡單易行；可以作為光吸收物質(zhì)，光吸收效率較高，光穩(wěn)定較好；其內(nèi)核類普魯士藍納米顆粒是利用釓取代三價鐵的位置，具有更多的未配對電子，磁共振信號更強；其表面包裹物為透明質(zhì)酸，透明質(zhì)酸為人體組織成分之一，生物相容性非常好。
【IPC分類】A61K49/12, A61K49/18, B82Y15/00, A61K49/22, B82Y5/00
【公開號】CN105477648
【申請?zhí)枴緾N201510981682
【發(fā)明人】張華娟, 宋亮
【申請人】中國科學(xué)院深圳先進技術(shù)研究院
【公開日】2016年4月13日
【申請日】2015年12月24日