一種延胡索塊莖提取物及其醫(yī)藥用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及中藥領域，具體設及一種延胡索塊莖提取物、含有該提取物的藥物制 劑及醫(yī)藥用途。
【背景技術】
[0002] 延胡索為磐粟科植物延胡索Co巧dalis yanhusuo W.T.Wang的干燥塊莖，是一味 古老的止痛良藥，又稱玄胡、元胡，為著名的浙八味之一，主產(chǎn)浙江省東陽、磐安一帶。延胡 索具有顯著的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和催眠作用，對冠屯、病、屯、律失常、胃潰瘍等多種疾病有較好的臨 床效果。正因為延胡索效果顯著，臨床應用廣泛，在《中國藥典》2010年版中，接近30%的復 方制劑中使用了延胡索。
[0003] 延胡索主要成分為生物堿，主要為叔胺、季胺類生物堿。叔胺類生物堿在原藥材中 的量約為0.65%，季錠類生物堿(如延胡索甲素、乙素)約為0.3%。到目前為止，從延胡索中 分離得到的生物堿類成分約有30種。從延胡索的塊莖中共提出生物堿10余種，其中經(jīng)鑒定 的有紫堇堿（〔0巧(1曰1；[]16)、(11-四氨掌葉防己堿（(11-161：抑117(11'〇9曰11]1曰1：；[]16)、原阿片堿 (Protopine) a-四氨黃連堿、dl-四氨黃連堿a-四氨非洲防己堿、紫堇鱗莖堿 (Corybu化ine)、0-高白屈菜堿（0-Homoche-lidonine)、黃連堿（Coptisine)、去氨紫堇堿 (De-hy化OCOirdaline)，還有紫堇達明堿（Corydalmine即紫堇鱗莖堿）、去氨紫堇達明堿 等。除生物堿外，延胡索中尚含有大量淀粉，少量黏液質(zhì)、樹脂、揮發(fā)油，另含無機微量元素。 還含有多糖、徑鏈霉素(reticulin)、豆醬醇、谷醬醇、油酸、亞油酸、亞麻酸、延胡索酸、10-二十九碳醇等。延胡索中的生物堿具有很強的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、降壓和抗屯、律失常作用。目前，很 多新的研究表明，延胡索還具有其他廣泛的生理活性，如抗屯、肌缺血、抗實驗性胃潰瘍、抗 腫瘤、抗氧化、保肝等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種延胡索提取物，該提取物的制備方法和液相分析方 法，含有該提取物的藥物制劑及利用該提取物制備治療膠質(zhì)瘤的藥物的用途。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術方案得W實現(xiàn)的：
[0006] -種延胡索塊莖提取物，該提取物由W下方法制備：
[0007] (a)將干燥的延胡索塊莖粉碎；（b)用75%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無 醇味得到濃縮液；（C)對步驟(b)濃縮液依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分 別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（d)正下醇萃取物用大孔樹脂富 集，先用25 %乙醇沖洗8個柱體積除去多糖，再用60 %乙醇洗脫10個柱體積，收集60 %乙醇 洗
[000引脫液，減壓濃縮，噴霧干燥。
[0009] 進一步地，步驟(d)中所述大孔樹脂為AB-8型大孔樹脂。
[0010] 為了能夠通過建立HPlX指紋圖譜的方法控制不同產(chǎn)地、批次藥材制備的延胡索提 取物批間差異，所述提取物的液相分析方法為：
[0011]色譜柱:Agilent ZORBAX SB C18柱(4.6mmX250mm，5皿）；
[001 ^ 流動化A為乙臘，B為0.1 %憐酸水溶液；
[0013] 梯度洗脫程序:0.01 ~15min，A 25%~35%;15~25min，A 35%~50%;
[0014] 25~32min，A 50%;32~35min，A 50%~25%;35~40min，A 25%
[0015] 流動相流速:1 .OmL ? min-i;
[0016] 檢測波長:255nm;
[0017] 柱溫：30。。
[001引進樣量：10化。
[0019] 藥物制劑，含有治療有效量的所述延胡索塊莖提取物和藥學上可接受的載體。
[0020] 所述的延胡索塊莖提取物在制備保護肝臟的藥物中的應用。
[0021] 所述的藥物制劑在制備保護肝臟的藥物中的應用。
[0022] 本發(fā)明提取物用作藥物時，可W直接使用，或者W藥物制劑的形式使用。
[0023] 所述藥物制劑含有治療有效量的本發(fā)明延胡索塊莖提取物，其余為藥物學上可接 受的、對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0024] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物制劑W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明提取物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0025] 本發(fā)明的優(yōu)點：本發(fā)明通過對延胡索藥材進行提取、除雜、富集處理，能得到促進 膠質(zhì)瘤細胞調(diào)亡的提取物;本發(fā)明提供的液相分析方法可W用于建立該提取物的指紋圖 譜，用于控制不同產(chǎn)地、批次藥材制備的提取物的批間差異。
【附圖說明】
[0026] 圖1為延胡索提取物HPLC液相圖譜。
【具體實施方式】
[0027] 下面結合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可W對 本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的實質(zhì)和范圍。
[00%]實施例1:延胡索塊莖提取物制備
[0029] 將8kg干燥的延胡索塊莖粉碎，用75 %乙醇熱回流提取(2化X 3次），合并提取液， 濃縮至無醇味得到濃縮液(6L);對濃縮液依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和 水飽和的正下醇(化X3次)萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物 285g，正下醇萃取物用化蒸饋水溶解后用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積1.化)富集，先用25 % 乙醇沖洗8個柱體積（1化），再用60%乙醇洗脫10個柱體積（1化），收集60%洗脫液，減壓濃 縮，噴霧干燥得延胡索塊莖提取物浸膏粉155g。
[0030] 實施例2:液相色譜分析
[0031] 供試品溶液配制：取實施例1方法制得的提取物浸膏粉5mg至50mL棟色容量瓶中， 加30mL 25%乙臘水溶液超聲溶解，冷卻至室溫后，繼續(xù)加25%乙臘水溶液定容。
[0032] 分析方法：
[0033] 高效液相色譜儀:Agilent 1100,二元累；
[0034] 色譜柱:Agilent ZORBAX SB C18柱(4.6mmX250mm，5皿）；
[0035] 流動相:A為乙臘，B為0.1 %憐酸水溶液；
[0036] 梯度洗脫程序:0.01 ~15min，A 25%~35%;15~25min，A 35%~50%;
[0037] 25~32min，A 50%;32~35min，A 50%~25%;35~40min，A 25%
[003引流動相流速：1. OmL ? min-i;
[0039] 檢測波長:255nm;
[0040] 柱溫:30°C;
[0041 ] 進樣量：10化。
[0042] 對用10批不同產(chǎn)地、批次延胡索制備的提取物進行分析，建立指紋圖譜進行匹配， 結果1~11號峰在10批樣品色譜圖中均出現(xiàn)。因此標定11個峰為共有指紋峰，據(jù)此建立該提 取物的HPlX指紋圖譜，結果見圖1。
[0043] 實施例3:延胡索塊莖提取物藥理試驗
[0044] 一、實驗材料
[0045] U251膠質(zhì)瘤細胞株;延胡索塊莖提取物按實施例1方法制備，使用時用DMSO稀釋成 所需濃度。人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251購自武漢博±德生物工程有限公司。DMBl高糖培養(yǎng)液、標 準胎牛血清(Fea化1 Bovine SerumJBS)、膜蛋白酶溶液(T巧psin)和細胞增殖及細胞毒性 檢測試劑盒(Cel 1 Counting Kit-8,CCK-8)購自武漢博±德生物工程有限公司。細胞調(diào)亡 與壞死檢測試劑盒(含化echst 33342染色液、艦化丙晚PI染色液、細胞染色