可溶 CD14(sCD14)、全部IgA、分泌型 IgA (slgA)，以及鈉和鉀。
[0055]TGF-beta-1、TGF-beta-2和CD14 (可溶CD14)的水平采用商業(yè)化的ELISA試劑盒(R&D Systems , Abingdon, UK)根據(jù)制造商推薦的方法進行分析。TGF-beta-1和TGF-beta-2的分析在酸處理潛在的TGF-beta前體之后進行，如較早所述(Bottcher 2000)。IL-10和TNF-α的水平采用商業(yè)化的ELISA試劑盒(CLB PeliPair reagent set,Amsterdam, the Netherlands)根據(jù)制造商推薦的方法進行測定。檢測低限對于TGF-beta-Ι 和TGF-beta-2為62.5 pg/mL，對于CD14為250 pg/mL，對于IL-10為2.3 pg/mL，對于TNF-aS7.8 pg/mL。
[0056]IgA和IgA的總量采用較早所述的ELISA (Bottcher 2002)檢測。檢測低限是31.2 ng/mL對于這兩種檢測。鈉和鉀的水平在Link6ping University Hospital的臨床化學系根據(jù)標準路線進行檢測(離子選擇電極)。血清中對應于吸入的過敏原的IgE水平采用 UniCap ? Pharmacia CAP System?Phadiatop ? (Pharmacia Diagnostics, Uppsala,Sweden)進行分析。
_7] 統(tǒng)計分析
計算研究小組的大小是假定羅伊乳酸桿菌小組與空白對照劑小組相比80%的比率足以顯示臨床真實差異。計算的基礎是假定臨床出現(xiàn)過敏反應或濕疹的發(fā)生率在空白對照劑小組中為40%而在實驗小組中可減少一半。能算出每組所需要的對象為91個而半途而廢的頻率估計為25%。通過外面的公司完成了隨機列表并以4為字區(qū)大小對每個中心分層抽樣。需要登記的對象總數(shù)是基于以上的計算，包括預期的半途而廢率和字區(qū)大小，結(jié)果為每組116名婦女和他們的后代。
[0058]倫理學考慮
根據(jù)Helsinki法典對人的醫(yī)學研究的規(guī)定，參加者收到一個書面信息并且簽字表示同意。在油中的羅伊乳酸桿菌SD2112受測菌株被認為是充分討論過的并且對于幼兒和成人都是安全的食物，因此不會弓I發(fā)倫理問題。
[0059]帶有不同檢測的研究程序也可見一個小問題，即這個危險人群有很大比例將會發(fā)生過敏反應并且通過過敏反應篩選程序。該研究是由University Hospital of Linkoping
的倫理審查委員會同意的。
[0060]
在研究中，當懷孕婦女在分娩前常規(guī)口服羅伊乳酸桿菌菌株SD2112，四星期時我們檢查了對母乳的效果。
[0061 ]母親分布兩組相比是相似的。當母親日常攝入研究的產(chǎn)品時的星期數(shù)量在兩組之間沒有不同，至于在一個月內(nèi)全部母乳哺育。兩組之間的不連續(xù)，大到一個月之多，主要是由于對嬰兒保護的治療安排(排除標準之一)。可見兩組之間沒有差異。
[0062]在羅伊乳酸桿菌受測菌株小組中細胞因子在母乳中的分布由于抗炎癥因子IL-10在初乳中的水平提高而變化(平均值6.61 pg/mL [范圍1.15 -150])，超過了空白對照劑小組中的母親(4.78 pg/mL [1.15 -150] )；p = 0.046。同時看到了了6?^^^&-2的水平在羅伊乳酸桿菌SD2112小組中降低。在羅伊乳酸桿菌小組中TGF-beta-2的水平(平均值674 pg/mL [102.5 -2800]比上 965 pg/mL [211.7 -2800])明顯低于空白對照劑小組;P = 0.020。而其他參數(shù)的水平在兩組中是類似的。
[0063]分娩后4周獲得的母乳和不連續(xù)日常攝入生物產(chǎn)品的，與空白對照劑小組相比沒有差異。
[0064]實施例3制備含有所選擇菌株的產(chǎn)品
在這個例子中，制造了一種被稱為〃羅伊油滴"的產(chǎn)品。該產(chǎn)品是在油的基礎上包含了具有良好穩(wěn)定性和存活性的羅伊乳酸桿菌SD2112。產(chǎn)品生產(chǎn)過程中獨特的工藝是一個干燥步驟，其用于去除油中的大部分水分。本發(fā)明這里所用的油是一種純的食用植物油，優(yōu)選向日葵油。雖然一種油，例如一種純的向日葵油不期望包含水，但是通過將其置于真空中而干燥油的工藝步驟有一種意想不到的效果，即顯著提高了乳酸桿菌在成品中的穩(wěn)定性。因此，本發(fā)明所用的油應該是盡可能去除水。雖然以前已經(jīng)知道這樣的培養(yǎng)基的穩(wěn)定性與成品中水的活性密切相關，但是不知道的是在真空下干燥油用于使乳酸桿菌穩(wěn)定化。
[0065]制造工藝的說明
優(yōu)選的制造工藝流程圖如圖1所示。一個這樣的可行工藝的細節(jié)可如下用于本發(fā)明。
[0066]原料混合
1、在一個Bolz 混合器/耀(Alfred BOLZ Apparatebau GmbH, ffangen imAllgau,Germany)混合中鏈三酸甘油酯(例如，Akomed R, (Karlshamns AB, Karshamn Sweden)和帶有二氧化娃的向日葵油(例如，Akosun, Karlshamns)，以及氣相二氧化娃[Cab-o_silM5P, M5P,卡博特(Cabot)]。
[0067]2、均質(zhì)化。一臺 Sine 栗和分散器(Sine Pump, Arvada, Colorado)被連接至Bolz混合器而混合物被均質(zhì)化。
[0068]3、真空干燥。混合物在10 mBar真空下在Bolz罐中干燥12小時。
[0069]4、加入羅伊乳酸桿菌。大約20 kg干燥過的油混合物被轉(zhuǎn)移至一個50升的不銹鋼容器中。加入羅伊乳酸桿菌粉末(優(yōu)選凍干的，所用羅伊乳酸桿菌的數(shù)量變化取決于相放在油中的量，但一個例子是加入0.2 kg具有111CFU /g的培養(yǎng)物)。緩慢混合直至同質(zhì)。
[0070]5、混合。羅伊乳酸桿菌的預混合返回Bolz混合器中進行。
[0071]6、排出。懸浮液排出到一個200升的不銹鋼容器中，以氮覆蓋。懸浮液維持在容器中直至灌入瓶子。
[0072]雖然這里介紹了一定的代表性實施例，但是本領域技術人員可以作出改變而不脫離本發(fā)明的精神或范圍。
[0073]羅伊乳酸桿菌菌株(簡稱羅伊乳桿菌菌株)SD2112，保藏號為ATCC 55730，于1995年12月07日保藏在ATCC，ATCC的地址為美國馬里蘭州20852羅克維爾市。
【主權(quán)項】
1.一種生產(chǎn)穩(wěn)定的口服含油細菌制劑的方法，包括a)在適于除去所述油中的水的條件下真空干燥可食用植物油;b)提供干燥的乳酸菌菌株細胞;c)將真空干燥的油和干燥的細胞混合;和d)生產(chǎn)穩(wěn)定的口服制劑，其中在將干燥細胞和油混合之前油已經(jīng)真空干燥。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法生產(chǎn)的穩(wěn)定的口服含油細菌制劑，其中穩(wěn)定的乳酸菌細胞在真空干燥的油中展現(xiàn)出增加的存活。3.權(quán)利要求2的穩(wěn)定的口服細菌制劑，其中可食用植物油是向日葵油。4.權(quán)利要求2的穩(wěn)定的口服細菌制劑，其中可食用植物油包含向日葵油，且該制劑還包含中鏈三酸甘油酯。5.權(quán)利要求2的穩(wěn)定的口服細菌制劑，其中可食用的植物油包含中鏈三酸甘油酯。6.權(quán)利要求2的穩(wěn)定的口服細菌制劑，其中乳酸菌菌株通過下述方法選擇:a)將所選的乳酸菌菌株細胞給予測試小鼠；b)從測試小鼠分離和培養(yǎng)脾臟細胞;c)從測試小鼠收集的脾臟細胞定量IL-1O和TGF-13-2的濃度;和d)選擇在所述測試小鼠的脾臟細胞中增加IL-10濃度同時降低TGF-0-2濃度的乳酸菌菌株。7.權(quán)利要求2的穩(wěn)定的細菌制劑，其中干燥的細胞是冷凍干燥的。8.用于給予婦女和改善婦女乳汁的一種口服制劑，包括權(quán)利要求2的穩(wěn)定的含油細菌制劑。9.一種能夠提高干燥的微生物培養(yǎng)物存活的油產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品通過一個油真空干燥步驟而制備。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的油產(chǎn)品及其制備方法和提高乳酸桿菌菌株存活的方法，所述油產(chǎn)品包括在可食用植物油中的凍干的乳酸桿菌菌株，其中，所述可食用植物油在添加到所述乳酸桿菌菌株之前經(jīng)真空干燥制得。該油產(chǎn)品能夠提高母乳中抗炎癥細胞因子IL-10的水平并降低被哺育嬰兒發(fā)生過敏反應的危險性，同時降低母乳中誘因并因此降低TGF-beta-2的水平，從而降低哺乳的母親發(fā)生乳腺炎的危險性。ATCC 5573019951207
【IPC分類】A61P15/14, A61K45/00, C12Q1/02, A23L33/135, G01N33/68, A61K35/747, A61K35/74, A61K47/44
【公開號】CN105456299
【申請?zhí)枴緾N201510808239
【發(fā)明人】本特.比約克斯滕, 布.莫爾斯泰姆, 伊麗莎白.舍貝里
【申請人】生命大地女神有限公司
【公開日】2016年4月6日
【申請日】2005年5月30日
【公告號】CA2560472A1, CA2560472C, CA2709865A1, CA2709865C, CN1942197A, CN1942197B, CN102334561A, EP1758604A2, EP1994936A1, US7955834, US8114397, US20050271641, US20100129336, WO2005117532A2, WO2005117532A3