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穩(wěn)定的油產(chǎn)品及其制備方法和提高乳酸桿菌菌株存活的方法_2

文檔序號:9696766閱讀:來源:國知局
顯示食入的羅伊乳酸桿菌SD2112可以影響健康人回腸中CD4+ T-伴侶細(xì)胞的水平。這樣的觀察也在哺乳動物種類和禽類中完成,其顯示這可能是腸菌群和宿主之間的一個功能信號系統(tǒng)。通過所謂的腸-乳腺聯(lián)系,來自活性菌株的抗原被保持活性運輸?shù)搅馨蛥^(qū)域,即派爾淋巴集結(jié)(Peyer ’ s patches),在GI通道的上皮之下。在上皮抗原-特異性的B-cells從GI通道經(jīng)過循環(huán)而移動身體內(nèi)其它粘膜包括唾液和乳腺的之后,上皮抗原-特異性的B-cells隨后被激活。這些細(xì)胞上特異分子的表達(dá)被認(rèn)為引導(dǎo)它們粘附在這些組織上。一旦在乳腺中,這些免疫細(xì)胞隨后就引發(fā)其它過程從而確定局部所產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平。通過腸-乳腺聯(lián)系的這種類型的信號被證明促進(jìn)母乳中IgA的分泌并且還非??赡軕?yīng)用于細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
[0019]較早的時候有人建議(Laiho等,Pediatric Research 53:642-647,2003)所觀察到的母乳中營養(yǎng)和炎癥因子之間的關(guān)系顯示通過對母親的飲食進(jìn)行干涉有可能影響母乳的免疫學(xué)特性。同一研究小組注意到患有過敏性疾病的母親與沒有患病的母親相比,乳液中的TGF-beta-2濃度較低。在他們手中檢測了 IL-10,只是在低水平并且頻率自然,在患病和不患病的母親乳液中沒有不同。這說明對過敏性疾病的抵抗主要是通過誘導(dǎo)TGF-beta-2和IL-10的口服耐受量,而且尤其是母乳中TGF_beta_2可能在過敏性疾病的防治中扮演關(guān)鍵角色。然而,Weiner H.在 Microbes and Infect1n, Volume 3,Issue11,September 2001, pages 947-954中報道說,由于通過口服抗原所產(chǎn)生的調(diào)節(jié)T細(xì)胞是在一種特異性抗原中被觸發(fā)的,但是在一種非特異性抗原中會被抑制,當(dāng)它們在靶器官中遇到食入的自身抗原時會調(diào)節(jié)旁路抑制。因此,粘膜耐受量可以被用于治療在自然狀態(tài)因不具有自身免疫而產(chǎn)生的發(fā)炎。
[0020]不同的乳酸桿菌種類,包括羅伊乳酸桿菌,已被用于所謂生物制劑的形成,意味著將存活的和有益的微生物提供給一種動物,包括人。羅伊乳酸桿菌是動物胃腸道中最常見的居民之一,通常發(fā)現(xiàn)在腸中,偶爾見于包括人的生殖道、母乳和健康動物口腔中。已知它具有抗菌活性。例如,參見美國專利Nos.5,439,678, 5,458,875, 5,534,253, 5,837,238,和5,849,289。當(dāng)羅伊乳酸桿菌細(xì)胞在甘油存在的情況下生活在厭氧條件時,它們所產(chǎn)生的抗生素物質(zhì)被稱為羅伊素(B-羥基-丙醛)。
[0021]較早已有報道說乳酸菌被用于防止和治療各種類型的過敏反應(yīng)例如可參見如下專利或?qū)@暾垼琒tadler等人的EP 1239032公開了新的重組菌株,Clancy等的WOOl/37865公開了通過乳酸桿菌降低IgE的量。
[0022]因此,本發(fā)明的目的之一是提供經(jīng)過選擇的乳酸菌和其成分,用于改進(jìn)哺育嬰兒的母乳,和進(jìn)行這種選擇的方法。更具體地說,本發(fā)明的目的是提高在母乳中抗炎癥細(xì)胞因子IL-10的水平以減少哺育嬰兒發(fā)生過敏反應(yīng)的危險性,同時減少母乳中TGF-beta-2的量以減少哺乳的母親發(fā)生乳腺炎的危險性。
[0023]本發(fā)明的一個目的是在母乳哺育之前或期間通過給予母親經(jīng)選擇的、特異的乳酸菌株來彌補(bǔ)微生物菌群的不良變化。
[0024]本發(fā)明的另一目的是采用這里所描述的或類似的方法來選擇區(qū)分受測菌株在相關(guān)細(xì)胞類型上的特異細(xì)胞因子影響,并且用這樣的特定乳酸菌株作為母親的飲食成分,以刺激IL-10在母乳中的產(chǎn)量提高,同時由于降低TGF-beta-2水平,指示在母乳乳腺和其他組織亞臨床發(fā)炎水平的降低,因而減少了發(fā)生乳腺炎的危險性。乳腺炎和亞臨床乳腺炎被認(rèn)為妨礙母乳哺育而不利于嬰兒,而通過本發(fā)明的方法提供所選擇的乳酸桿菌可以改進(jìn)母親的健康并使她們能哺育更長時間。
[0025]本發(fā)明的又一目的是提供包含所述菌株、突變體、代謝體或其成分的產(chǎn)品,包括制劑,用于給動物包括人的服用。
[0026]其它目的和優(yōu)點將通過以下說明和權(quán)利要求而更加清楚。
[0027]發(fā)明概述
本發(fā)明包括乳酸桿菌,及其成分,其特性經(jīng)過選擇以改進(jìn)用于哺育嬰兒的母乳,更精確的說是提高抗炎癥細(xì)胞因子IL-10在母乳中的水平從而減少所哺育嬰兒發(fā)生過敏反應(yīng)的危險性,同時降低誘因并因此降低TGF-beta-2在母乳中的量,這意味著降低了哺乳的母親發(fā)生乳腺炎的危險性,從而提高了哺乳能力和為幼兒提供最佳保護(hù)和最佳生長。這里,本發(fā)明還包括選擇這樣的乳酸桿菌菌株的方法。本發(fā)明還包括一種在調(diào)配油產(chǎn)品中保存活的乳酸桿菌,作為活性成分平均分送的新方法。
[0028]本發(fā)明的其它目的和優(yōu)點將通過以下說明內(nèi)容和權(quán)利要求而更加清楚。
[0029]附圖簡要說明
圖1是可用于制造本發(fā)明的產(chǎn)品的制造工藝流程圖。
[0030]發(fā)明詳細(xì)說明和優(yōu)選實施例
本發(fā)明提供了一種產(chǎn)品用于改進(jìn)哺育嬰兒的母乳,更準(zhǔn)確地說,提供了一種產(chǎn)品以提高抗炎癥細(xì)胞因子IL-10在母乳中的水平,并且降低被哺育嬰兒發(fā)生過敏反應(yīng)的危險性,同時減少觸發(fā)細(xì)胞信號物質(zhì)(TGF)產(chǎn)生的原因因子也就是TGF-beta-2在乳液中的量,從而降低哺乳的母親發(fā)生乳腺炎的危險性。與本發(fā)明相關(guān)的TGF-beta-2的降低被認(rèn)為是一種消耗所選擇的乳酸菌產(chǎn)生的抗炎效果,意味著在最近日常攝入細(xì)菌的乳酸菌組中亞臨床乳腺炎降低。這里本發(fā)明所選擇的菌株的一個例子是羅伊乳酸桿菌SD2112 (ATCC 55730)。
[0031]在臨床試驗中,在導(dǎo)致本發(fā)明的研究中,在分析中僅僅有三種因子與母親初乳中IL-1O的水平相關(guān):a)采用或不采用所選擇的乳酸菌治療;b)母親以前所生的孩子的數(shù)量;以及c)以前懷孕的次數(shù)。因此,母親懷孕次數(shù)或嬰兒數(shù)量越多,她的初乳中IL- 10就越多。在分娩以前給予懷孕母親4周的特異選擇的乳酸菌也能提高初乳中IL- 10的水平而不要求以前懷過孕。
[0032]已知在某種情況下提高IL-10的系統(tǒng)表達(dá)還可防止I型糖尿病,因此根據(jù)本發(fā)明所選擇的菌株也可用于該目的。
[0033]這里所用的選擇方法中,用于誘導(dǎo)母乳中IL-10,并顯示TGF-beta-2降低的最佳菌株,是采用一個已建立的鼠模型和傳統(tǒng)分析方法來選擇的。其它類似在乳液中檢測細(xì)胞因子產(chǎn)物的方法也可采用。其細(xì)節(jié)將通過例子而被更清楚的理解。本發(fā)明的產(chǎn)品優(yōu)選包含所選擇菌株的存活細(xì)胞;但是,如果這樣細(xì)胞的分離的代謝體或部分對菌株存活細(xì)胞的活性是可靠的,本發(fā)明的產(chǎn)品可以包括這樣的代謝體或部分于存活細(xì)胞之外或替代它。本發(fā)明的產(chǎn)品可以是婦女使用的任何產(chǎn)品,例如油滴產(chǎn)品、食品、片劑、膠囊、粉囊、以及類似物。特別適用于本發(fā)明的產(chǎn)品包括一種油滴(如實施例3),其有助于維持活性成份穩(wěn)定較長時間。乳酸桿菌細(xì)胞可以被用于油的成分中以提高細(xì)菌的穩(wěn)定性,見于例子Gehrman等的U.S.專利4518696。但是在目前乳酸菌在油和脂肪中存在的形式中我們沒有發(fā)現(xiàn)包含如這里例子所提到的重要步驟,即在成形前通過真空的方式干燥油以提高細(xì)菌培養(yǎng)基的穩(wěn)定性。
[0034]本發(fā)明產(chǎn)品中為達(dá)到效果所需要的所選擇乳酸桿菌細(xì)胞的濃度取決于食物的類型和被攝取的食物量(或在口腔中使用一種非食物咀嚼治療產(chǎn)品的時間),但是產(chǎn)品的日常攝入量通常優(yōu)選等于大約15-1O8 CFU (菌落形成單位)或更多。數(shù)量達(dá)到大約1010-1011 CFU是可能的,并且能被用于提高效果而不會影響產(chǎn)品的感官特性(其味道或氣味)。當(dāng)產(chǎn)品是一種酸乳或其他乳酸發(fā)酵產(chǎn)品時,生產(chǎn)產(chǎn)品的乳酸發(fā)酵菌株優(yōu)選是標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基(例如,在酸乳中s.thermophilus和L.bulgaricus)。重要的是根據(jù)本發(fā)明所選擇的菌株具有預(yù)期的細(xì)胞因子效應(yīng),與產(chǎn)品中所用的任何標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基相容,因而所采用的每個菌株重要特性是不被其他其它菌株的使用所影響。這能通過本領(lǐng)域已知的篩選檢測而確定。用于本發(fā)明的菌株可以在產(chǎn)品發(fā)酵之前或之后加入,水平大約為酸乳形式每天16-1O8CFU或如上討論的更多。
[0035]優(yōu)選地,本發(fā)明產(chǎn)品不包括其它抗細(xì)菌成分,至少沒有抑制或殺傷所選擇的乳酸桿菌菌株、或代謝體或其成分的物質(zhì)、或影響其活性的物質(zhì)。
[0036]乳酸桿菌菌株或代謝體或其成分,可以以本領(lǐng)域公知的方式加入混合到原料中以配制特定類型的產(chǎn)品。在采用細(xì)胞并且如果制備所選擇的食物或本發(fā)明的其它產(chǎn)品時,需要一個加熱步驟,乳酸桿菌菌株應(yīng)該在加熱之后被加入。一旦所選擇的乳酸桿菌細(xì)胞位于產(chǎn)品中,優(yōu)選的是不要將產(chǎn)品加熱至60-70 °C或以上至一個較長時間。
[0037]本發(fā)明的特征將結(jié)合以下例子得到更清楚的理解,其不是對本發(fā)明的限制。
[0038]實施例1:選擇菌株的方法
根據(jù)本發(fā)明所采用的乳酸桿菌菌株的選擇方法可以通過以下步驟進(jìn)行:
評價用于選擇菌株的乳酸桿菌細(xì)胞在人乳液中刺激的IL-10的產(chǎn)量和TGF-beta-2的減少量
這是選擇方法的一個例子;本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對該方法作出一定變換和替代,而不脫離本發(fā)明的范圍。
[0039]材料和方法
動物:51只無菌的BALB/c小鼠(雄性和雌性)從Wisconsin University, USA購買。小鼠被裝入無菌塑料薄膜運載箱中。15只小鼠被轉(zhuǎn)移入3個隔離箱中(隔離箱# 2,3,和4)。兩籠每個包含2雄和4雌的被放置在隔離箱#1 (繁殖)中。
[0040]動物處理
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