草苔蟲總內酯抗老年癡呆活性及其應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及醫(yī)藥技術領域，具體設及草苔蟲總內醋的抗老年癡呆活性及其在醫(yī)藥 領域中的應用。
【背景技術】
[0002] 海洋苔薛動物俗稱苔薛蟲、海席子、假珊瑚及苔蟲，屬真體腔動物，是海洋底棲動 物的重要組成之一。其種類很多，大約有4000多種，最常見的是總合草苔蟲?？偤喜萏οx Bugula neritina Linnaeus在世界水域分布廣泛，我國沿海從勸海到南海的西沙群島的多 鹽水域都有。該群體呈紅褐色或紫褐色，呈草叢狀，高40~150mm，每支有個蟲兩列，交互排 列。其群體常附著在海帶、石花菜、貝類W及船底、碼頭、航標等水下設施上，影響海洋養(yǎng)殖 和國防、海洋交通，是海洋主要污損生物之一。直到1968年，美國亞利桑那州立大學化ttit 研究小組對海洋無脊椎動物和脊椎動物的廣泛研究中，首次發(fā)現(xiàn)了總合草苔蟲的抗癌活 性。經過十多年的努力，1982年化ttit研究小組成功地從采集于加利福尼亞海域的總合草 苔蟲中分離得到第一個具有抗癌活性的單體bryostatin 1，并用X衍射法確定了它的結構， 是大環(huán)內醋類化合物。從此，該小組一直致力于總合草苔蟲中具有抗癌活性大環(huán)內醋成分 的研究。目前為止，已從中得到20個活性單體，即b巧0S化tin 1~2(KLin冊，Yi YH，Li WL, Yao XS'Wu HM.Chinese J.Marine Drugs 1998,65,l;Pettit GR.Fortschritte der Chemie Organischer Naturstoffe, 1991,57,153) cBryostatin 1 和bryostatin 4經美國 國立癌癥研究所(NCI)的生物鑒定，已投入臨床試驗。此類化合物具有毒性低、活性強的特 點。它作用于蛋白激酶C(PKC)的新穎的作用機制，激發(fā)了研究者對其作用機制的廣泛深入 的研究。鑒于草苔蟲有限的天然資源和草苔蟲內醋的微少含量，人們對其天然資源進行的 廣泛的調查。
[0003] 老年癡呆癥(主要為阿爾茨海默病)是一種進行性發(fā)展的致死性神經退行性疾病， 臨床表現(xiàn)為認知和記憶功能不斷惡化，日常生活能力進行性減退，并有各種神經精神癥狀 和行為障礙。運種病在任何年齡都能出現(xiàn)，但是通常在60-70之間出現(xiàn)。當被診斷出患有該 病時，大約還能存活3.3年。患病率研究顯示，60歲人群的患病率為1 %，年齡每增加5歲，患 病率增加2倍。目前我國正加速進入老齡化社會，據(jù)有關專家預測，到2020年我國60歲W上 人口將達到4億，老年癡呆癥病人將有1000萬人W上。最新報道，上海目前的老年癡呆癥患 者就已有12萬人。
[0004] 老年癡呆癥是一組病因未明的原發(fā)性退行性腦變性疾病，多起病于老年期，潛隱 起病，病程緩慢且不可逆，臨床上W智能損害為主。病理改變主要為皮質彌漫性萎縮，溝回 增寬，腦室擴大，神經元大量減少，并可見老年斑(SP)，神經原纖維結(NFT)等病變，膽堿乙 酷化酶及乙酷膽堿含量顯著減少。老年癡呆癥發(fā)病病因目前還不十分清楚，而且有多種亞 型，而發(fā)生病理變化的器官除大腦外還可能有其他器官。目前公認的發(fā)病機制主要有兩種： 1.由于淀粉樣前蛋白的異常導致蛋白成分漏出細胞膜，導致神經元纖維纏結和細胞死亡， 基因位于21號染色體。AD患者腦部乙酷膽堿明顯缺乏，乙酷膽堿醋酶和膽堿一酷轉移酶活 性降低，特別是海馬和顛葉皮質部位。2.與載脂蛋白E(AP0-E4)的基因有關。
[0005] 由于老年癡呆癥目前確切病因尚未得到充分闡明，治療方法主要是通過藥物作用 于不同的神經遞質系統(tǒng)，增強中樞神經系統(tǒng)的高級活動，減輕疾病過程中出現(xiàn)的各種癥狀， 延緩癡呆的進一步發(fā)展。臨床上常用的治療主要通過抑制乙酷膽堿醋酶來提高患者體內乙 酷膽堿含量，改善老年癡呆癥的臨床癥狀。目前臨床使用的治療藥物多為乙酷膽堿醋酶抑 審IJ劑(如他克林、多奈贓齊、卡己拉汀、力爛他敏、石杉堿甲），NMDA受體括抗劑(美金剛)和抗 氧化劑(司來吉蘭、維生素 E、稱黑素、銀杏提取物)等W認知功能障礙的藥物治療較多，但臨 床療效均不夠確切、口服吸收差、不易透過血腦屏障、特異性不強、或毒副作用大、特別是治 標不治本等缺點。研究開發(fā)新型高效的抗老年癡呆的新藥是目前醫(yī)藥保健中迫切需要解決 的課題。但目前在運一研究領域與國外同類研究還有較大差距。從天然產物中尋找發(fā)現(xiàn)抗 老年癡呆的化學成分是天然藥物研究中的一個新的熱點和發(fā)展方向。特別是海洋天然產 物，由于具有特殊的化學結構和生理活性，從中發(fā)現(xiàn)抗老年癡呆的化學成分將具有更廣闊 的前景。
[0006] 有關草苔蟲總內醋的抗老年癡呆活性，國內外尚未見有過報導。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供草苔蟲總內醋及其制備方法;本發(fā)明的另一目的在于提供 草苔蟲總內醋的新的醫(yī)藥用途。
[0008] 本發(fā)明的第一方面，提供了一種草苔蟲總內醋，所述的草苔蟲總內醋W總合草苔 蟲為原料，經常規(guī)方法提取純化，得到草苔蟲總內醋。
[0009] 本發(fā)明所述的草苔蟲總內醋，經高效液相層析分析，主要含有草苔蟲內醋5、10、18 和4等10多種內醋成分，其中W草苔蟲內醋4的含量最高。Bryostatin 4占草苔蟲總內醋 60%W上(質量百分比）。
[0010] 較優(yōu)的，總合草苔蟲采集自我國南方海域。
[001。 本發(fā)明的第二方面，提供一種草苔蟲總內醋的制備方法。
[0012] -種草苔蟲總內醋的制備方法，其特征在于，所述的草苔蟲總內醋的制備方法如 下：
[0013] 新鮮采集的總合草苔蟲Bugula neritina Linnaeus,用95%乙醇室溫浸提，將乙 醇提取液，減壓回收乙醇，得浸膏；
[0014] 浸膏用90%甲醇懸浮分散，用正己燒萃取，棄去正己燒萃取物;含水甲醇層再加水 成80 %甲醇水溶液，用αη4萃取，得αη4萃取物；
[0015] 0^4萃取物經200~300目硅膠柱層析得活性組分;再經過S邱hadex LH-20凝膠柱 層析，WC出Cl2: MeOH( 1:1)洗脫，流速60mL/h，得到活性組分A和活性組分B;
[0016] 對活性組分A和活性組分B分別進行兩次凝膠柱層析，第一次W化xane:CH2Cl2: MeOH(4:5:1)洗脫，第二次WHexane: C出CI2:MeOH( 10:10 :1)洗脫，分別得到活性組分C和活 性組分D;
[0017] 活性組分C和活性組分D進行0DS快速柱層析，W50%、80%Me0H梯度洗脫，得草苔 蟲總內醋。
[0018] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述的草苔蟲總內醋的制備方法，具體如下：
[0019] 新鮮采集的總合草苔蟲Bugula neritina Linnaeus原料，用95%乙醇室溫浸提一 周，共提取4遍，合并乙醇提取液，減壓回收乙醇，得浸膏。浸膏用90%甲醇懸浮分散，用正己 燒萃取5次，得正己燒萃取物，經體外抗癌活性篩選無活性，棄去。含水甲醇層再加水使成 80 %甲醇水溶液，用αη4萃取5次，得αη4萃取物，為活性部位。該活性部位經快速硅膠柱層 析（200~300目）得活性組分。再經過Se地adex LH-20凝膠柱層析，WC此Cl2:Me0H(l: 1)洗 脫，流速60mL/h，得到兩個活性組分A和B。對運兩個活性組分分別進行兩次凝膠柱層析，依 次 WHexane-CH2Cl2-Me0H(4:5:1)和Hexane : CH2CI2:MeOH( 10 :10:1)洗脫，分別得到純度更 高、活性更強的兩個組分C和DX、D兩組分仍含有較多的綠色素，故將兩者合并，進行0DS快 速柱層析，W50%、80%MeOH梯度洗脫，得淺黃色總草苔蟲內醋(BRYS)。
[0020] 所述的95%乙醇用量為原料的20-30倍(重量比）。
[0021] 所述的正己燒萃取5次，每次用量4-化。
[0022] 所述的αη4萃取5次，每次用量1-化。
[0023] 本發(fā)明的第Ξ方面，提供上述的草苔蟲總內醋的新的醫(yī)藥用途。
[0024] 本發(fā)明提供了草苔蟲總內醋在制備預防或治療老年癡呆藥物或保健品中的應用。
[0025] 本發(fā)明所述的草苔蟲總內醋在制備預防或治療老年癡呆藥物或保健品中的應用 中，所述的藥物或保健品中：草苔蟲總內醋作為唯一活性成份，或包含草苔蟲總內醋的組合 物。
[0026] 所述藥物或保健品中，草苔蟲總內醋的含量為0.1-99wt%，優(yōu)選含量為0.5-90wt%。
[0027] 所述藥物中，草苔蟲總內醋、包含草苔蟲總內醋的藥物組合物可W和藥劑學上的 常規(guī)藥用輔料制成藥物制劑。
[0028] 所述的藥物制劑可W是片劑、顆粒劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸、注射劑、粉 針劑，或氣霧劑等。
[0029] 本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，草苔蟲總內醋具備抗老年癡呆生物活性：
[0030] 雄性ICR小鼠隨機分為9組，每組小鼠6只。設對照組，BOTS藥物設:0.0025mg/kg， 0.005mg/kg，0.01mg/kg組，抗衰老實驗陽性藥物(維生素 E)。服和維生素 E注射給藥，共60 天。末次給藥Ih后，全部小鼠做水迷宮實驗，持續(xù)一周，記錄小鼠找到平臺的時間。在小鼠水 迷宮實驗中，草苔蟲總內醋(BRYS)與模型組相比，中濃度組和高濃度組能顯著縮短游泳時 間。一周后，按照試劑盒說明書處理樣品，檢測腦勻漿乙酷膽堿醋酶活力，乙酷膽堿轉移酶 含量和血清SOD活力，丙二醒含量，谷脫甘膚過氧化物酶活力，乙酷膽堿含量，谷脫甘膚含 量。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件處理，數(shù)據(jù)進行t檢驗。實驗結果顯示，草苔蟲總內醋有明 顯的抗老年癡呆活性。此外，草苔蟲總內醋對體質量和臟器指數(shù)均無明顯的影響，表明毒性 較低。
[0031] W上實驗結果表明，草苔蟲總內醋具有顯著的抗老年癡呆活性和較低的毒性，可 用于開發(fā)抗老年癡呆的藥品。
[0032] 由于，在本發(fā)明的草苔蟲總內醋中，W草苔蟲內醋4的含量最高，B巧ostatin 4占 草苔蟲總內醋60% W上。因此，本發(fā)明也提供了化yostatin 4在制備預防或治療老年癡呆 藥物或保健品中的應用。
[0033] 本發(fā)明尋找到了安全有效的抗老年癡呆的藥品。
【具體實施方式】
[0034] 下面結合【具體實施方式】，進一步闡釋本發(fā)明。下述實施例中所使用的實驗方法如 無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料和試劑等，如無特殊說明，均可從商 業(yè)途徑得到。運些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0035] 實施例1.草苔蟲總內醋的提取純化
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