穩(wěn)定的油產(chǎn)品及其制備方法和提高乳酸桿菌菌株存活的方法
【專利說明】穩(wěn)定的油產(chǎn)品及其制備方法和提高乳酸桿菌菌株存活的方法
[0001 ] 本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2005年5月30日，原始中國(guó)申請(qǐng)?zhí)枮?00580011615.3，分案申請(qǐng)?zhí)枮?01110228888.0、發(fā)明名稱和本發(fā)明相同的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0002]發(fā)明背景。
發(fā)明領(lǐng)域
[0003]本發(fā)明涉及選擇和利用乳酸菌以改進(jìn)用于哺育嬰兒的母乳。
[0004]相關(guān)技術(shù)的說明
過敏性疾病的衛(wèi)生學(xué)認(rèn)為，在工業(yè)化世界中的環(huán)境變化將導(dǎo)致在幼年與微生物的接觸減少從而導(dǎo)致在生長(zhǎng)表皮出現(xiàn)過敏性疾病，例如特應(yīng)性濕疹、過敏性鼻膜炎、和哮喘。一個(gè)這樣的環(huán)境變化被認(rèn)為是由于衛(wèi)生條件、生活標(biāo)準(zhǔn)、飲食習(xí)慣等的改善而導(dǎo)致食入的各種天然微生物種類的變化。這導(dǎo)致我們自然腸菌群組成的變化(《過敏與臨床免疫期刊》，2001; 108: 516-520)并且也改變了哺乳母親的母乳成分。這樣的變化與普遍的各種類型的過敏反應(yīng)相關(guān)聯(lián)。還有報(bào)道說，大家庭中較后出生的嬰兒比其那些出生早的兄弟姐妹(家中的第一個(gè))患上過敏反應(yīng)的危險(xiǎn)性要小。這也暗示著母親的母乳隨著懷孕的次數(shù)而“改進(jìn)”。
[0005]人乳中包含在免疫系統(tǒng)很重要的各種成分，例如巨噬細(xì)胞、免疫球蛋白、或抗生素蛋白，其被認(rèn)為能使母乳哺育的后代的胃腸道和呼吸道避免感染和發(fā)炎。此外，其它潛在的免疫調(diào)節(jié)因子的存在(例如，寡糖復(fù)合物、生長(zhǎng)因子、酶、激素、或細(xì)胞因子)已經(jīng)被討論過。人乳中這些有益的特性加上高營(yíng)養(yǎng)獲得性和低抗原濃度是目前兒科專家認(rèn)為母乳是嬰兒最好的食物的生理學(xué)基礎(chǔ)，尤其對(duì)那些具有過敏反應(yīng)史的家庭。
[0006]因此，已經(jīng)知道母乳包含一系列能夠?qū)雰旱倪^敏反應(yīng)發(fā)展造成潛在影響的細(xì)胞因子和趨化因子。此前已有報(bào)道說調(diào)節(jié)過敏性反應(yīng)的成分，例如細(xì)胞因子、趨化因子、和粘附分子，被隱藏在哺乳期的各個(gè)階段乳液中(S Rudloff等，過敏反應(yīng)1999，54，206_211)。細(xì)胞因子或趨化因子對(duì)于母乳哺育的嬰兒可能是有益的也可能是不利的。
[0007]還已經(jīng)知道，由動(dòng)物乳汁傳遞的細(xì)胞因子具有通過后代GI通道仍存活的能力。例如，假定斷奶之前的存活是由于通過母乳傳遞的TGF-beta-Ι的結(jié)果，那么在斷奶之后純合TGF-beta-Ι-敲除小鼠死于普遍的炎癥疾病(Kulkarni AB等，Am J Pathology 1993 ;143，3-9) JGF-beta以各種方式通過腸并保持活性。IL-10也可以這樣的方式保持活性，從而由母乳傳遞來的IL-10到達(dá)GI通道，并能潛在地產(chǎn)生有益的抗炎效果。
[0008]而且，HawkesJS 等(Lipids 2001 Oct 36: 1179-81)報(bào)道說，長(zhǎng)鏈多聚不飽和脂肪酸與包括細(xì)胞因子生產(chǎn)在內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)的各方面相關(guān)。這一研究的目的是為了調(diào)查母親飲食補(bǔ)充富含二十二碳六烯酸(DHA)的金槍魚油的效果，其在一定濃度下在母乳中可以轉(zhuǎn)變成生長(zhǎng)因子beta I (TGF-beta-Ι)和TGF_beta_2。在這項(xiàng)隨機(jī)的飲食干預(yù)試驗(yàn)中，嬰兒的母親日常補(bǔ)充2000 mg油，其包含空白對(duì)照劑(placebo) (η = 40)，或300 mg DHA (η=40)，或者600 mg DHA (η = 40)。在母乳和淋巴液中DHA的升高與飲食中DHA成正比。在乳液DHA狀態(tài)、TGF-beta-Ι水平、以及TGF-beta-2水平之間彼此無關(guān)聯(lián)。
[0009]IL-10是一種已被廣泛討論和接受的抗炎癥細(xì)胞因子。這暗示著其在嬰兒的GI通道中具有抗炎癥效果。這對(duì)于母乳哺育的嬰兒是有好處的，通常認(rèn)為母乳在某種程度上幫助嬰兒抗炎，嬰兒在生命早期不應(yīng)該對(duì)腸道中的病原體/感染過度反應(yīng)。而且，動(dòng)物數(shù)據(jù)指出在乳液中IL-10可能有利于后代。一個(gè)澳大利亞研究小組觀察了一個(gè)動(dòng)物模型，其中觀察了對(duì)蜱的過敏反應(yīng)。對(duì)于蜱的皮膚刺痛檢測(cè)(SPT)陰性的動(dòng)物具有IL-1O和IL-4產(chǎn)物，具有IL-10減弱了的IgE (過敏性應(yīng)答)而動(dòng)物沒有出現(xiàn)過敏反應(yīng)。在過敏性SPT +ve (組氨酸)動(dòng)物中，只產(chǎn)生了IL-4而沒有IL-10產(chǎn)物。因此IgE沒有被降低而過敏反應(yīng)發(fā)生了。因此IL-10減弱IgE作用引發(fā)的過敏反應(yīng)并且可以防止過敏反應(yīng)發(fā)生。
[0010]TGF-beta-2 (轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子)也是一種被廣泛討論的生長(zhǎng)因子/細(xì)胞因子。其來源包括例如血小板，其產(chǎn)生毫克數(shù)量的TGF-beta/千克。該因子及其同源物(見以下)也能從其它組織(微克TGF/kg)中分離出來并且在脾臟和骨組織中占優(yōu)勢(shì)。人乳中也包含該因子并且其合成也是通過例如巨噬細(xì)胞(TGF-beta-Ι)、淋巴細(xì)胞(TGF-beta-Ι)、內(nèi)皮細(xì)胞(TGF-beta-Ι)、角質(zhì)形成細(xì)胞(TGF-beta-2)、粒層細(xì)胞(TGF-beta-2)、軟骨(TGF-beta-Ι)、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞(TGF-beta-2)、白血病細(xì)胞(TGF- beta-Ι )。
[0011]依賴于細(xì)胞類型和條件，TGF-beta的分泌可以由一系列不同的刺激因子誘導(dǎo)包括類固醇、視黃醛衍生物、EGF (表皮生長(zhǎng)因子)、NGF、淋巴細(xì)胞活化劑、維生素D3、和ILI。TGF-beta的合成可以被EGF、FGF (成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子)、地塞米松、鈣、視黃醛衍生物和卵泡刺激激素抑制。TGF-beta還影響其自身基因的表達(dá)而這可能在傷口愈合中是重要的。TGF-beta 存在至少五種同源物，已知為 TGF_be ta_l、TGF-beta-2、TGF_beta_3、TGF_beta_4、TGF-beta-5，而與TGF-alpha無關(guān)。這些同源物的氨基酸顯示出70 — 80%的同源性。TGF-beta-Ι是普遍形式并且?guī)缀鯚o處不在，而其他同源物只在更加局限的光譜的細(xì)胞和組織中表達(dá)。從不同種類中分離出來的同源物在進(jìn)化上很接近并且具有98%的相同序列。成年人、豬、猿猴和牛的TGF-beta-Ι是相同的而與鼠的TGF-beta-Ι在一個(gè)氨基酸位置上有所不同。人和雞的TGF-beta-Ι也是相同的。
[0012]還有報(bào)道稱轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子beta (TGF-beta)家族的成員是多效細(xì)胞因子，在組織形態(tài)建成和生長(zhǎng)中扮演關(guān)鍵角色(Ingman WV, B1essays 2002 Oct 24: 904-14) oTGF-beta-l、TGF-beta_2和TGF-beta-3在哺乳動(dòng)物生殖組織中含量豐富，其中發(fā)育和循環(huán)重建持續(xù)至出生后和成人期。TGF- beta的潛在角色在性腺和第二性器官發(fā)育、精子發(fā)生和卵巢功能、懷孕的免疫調(diào)節(jié)、胚胎移植和胎盤發(fā)育中被確認(rèn)。
[0013]Rautava 等在 Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrit1n 38:378-388，April 2004中認(rèn)為TGF-beta-2和IL-10表現(xiàn)出了在IL-10生產(chǎn)中與TGF-beta-2的協(xié)同作用。
[0014]乳腺炎是乳房的一種炎癥，其通常以觸痛和紅斑及某些時(shí)候發(fā)熱為特征，并且與TGF-beta-2相關(guān)。在乳腺炎期間，乳腺泡細(xì)胞的緊密連接被打開，該過程伴隨著鈉、炎癥細(xì)胞、以及炎癥和免疫調(diào)節(jié)劑在母乳中的升高。乳腺炎通常是單側(cè)的，并且在母乳哺育的最初幾周最常出現(xiàn)。在工業(yè)化國(guó)家，乳腺炎通常被認(rèn)為是一種低發(fā)病率的問題，受影響的婦女通常由助產(chǎn)士或護(hù)士治療。而經(jīng)過對(duì)美國(guó)、芬蘭和澳大利亞哺乳婦女大規(guī)模長(zhǎng)時(shí)間的調(diào)查發(fā)現(xiàn)乳腺炎比以前認(rèn)為的要更加普遍(Semba R., Annals of the New York Academy ofSciences.November 2000; 918:156-62)，認(rèn)為大約有20- 33%的婦女可能發(fā)展為臨床上明顯的乳腺炎。而哺乳婦女中亞臨床乳腺炎的數(shù)量甚至就更多。
[0015]而且最近發(fā)現(xiàn)乳腺炎與母乳中更高的人免疫缺陷病毒(HIV)量以及更高的母嬰傳播HIV風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)(Semba, R.D., N.Kumwenda, T.E.Taha,等 1999.Mastitis andimmunological factors in breast milk of human Immunodeficiency virus-1nfectedwomen.J.Hum.Lact.15 (4):301-306)。
[0016]母乳中的TGF-beta-2大部分是上皮起源的，即使它由許多其它細(xì)胞合成，包括B-細(xì)胞和T-細(xì)胞。因此TGF-beta-2水平的提高可能是亞臨床乳腺發(fā)炎的一種調(diào)節(jié)劑或一種結(jié)果。在母乳中鈉和鉀的比率(Na/K比)據(jù)說是一種公知的感染和亞臨床乳腺發(fā)炎的預(yù)測(cè)因子。
[0017]而且，Kall1maki等在 J Allergy Clin Tmmunol.1999 Dec; 104 (6): 1251-7中認(rèn)為初乳中的TGF-beta可以防止在整個(gè)母乳哺育期間過敏性疾病的發(fā)生并提高人體中特異IgA的產(chǎn)量。
[0018]而且，人體和其他哺乳動(dòng)物體的各種不同部分被許多不同種類的細(xì)菌所居住，包括很多不同種類的乳酸桿菌。這樣的細(xì)菌很多時(shí)候與它們的宿主共生，給與宿主各種有益的作用，目前已知是不同的并且取決于實(shí)際的菌株。例如，不同的乳酸菌菌株，即，羅伊乳酸桿菌SD2112，具有特異的抗原，或位于其表面，或通過細(xì)菌釋放于母親的胃腸道中。例如，在Valeur等，AEM, 70, 1176-1181(2004 )的數(shù)據(jù)中