油菜花粉水溶性提取物及其制備方法與應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥保健品和食品領域，尤其涉及一種油菜花粉水溶性提取物及 其制備方法與應用，所述水溶性提取物可用作制備調節(jié)免疫力、降血脂、抗衰老的藥物或保 健品或食品的原料。
【背景技術】
[0002] 油菜（Brassica camPestris L.)為十字花科蕓苔屬植物。油菜花粉是由蜜蜂采 集油菜的花粉，并加入蜜蜂的唾液等腺體分泌物以及蜂蜜混合組成。該花粉除了含有蛋白 質、活性多肽、氨基酸、維生素、黃酮、植物留體、脂肪酸及其衍生物、多酚類（黃酮類）、含氮 類等代謝產物成分外，還含有多糖等活性成分，具有增強人體免疫功能、抗氧化、延緩衰老、 改善消化道功能、抗疲勞、調節(jié)血脂、抑制前列腺增生等作用，是一種天然營養(yǎng)保健食品。 [0003]由于以上所述油菜花粉的特性，使得油菜花在醫(yī)藥保健品和食品領域存在廣泛需 求。我國油菜花種植廣泛，油菜花粉資源豐富，目前針對油菜花粉的提取方法多是通過先 將花粉破壁、再采用水提取或、堿提取或酶解提取獲得產物。以上方法中，1)水洗或堿洗之 后的上清液往往丟棄，造成資源的巨大浪費；2)上述提取法所采用的酸堿環(huán)境或高溫加熱 步驟，對提取物中多種有效成分活性有所影響，例如會破環(huán)多糖成分的立體結構和活性，從 而降低油菜花粉水溶性提取物在調節(jié)免疫、降血脂、抗衰老等方面的有效作用；3)上述提 取方法均需要對油菜花粉進行破壁處理后再提取，步驟較為復雜、操作難度較高，成本也較 尚。

【發(fā)明內容】

[0004] 為解決以上現(xiàn)有技術存在的問題，本發(fā)明主要提供一種油菜花粉水溶性提取物及 其制備方法與應用，該制備方法直接針對未破壁的油菜花粉通過常溫水洗進行提取，制得 的水溶性提取物富含利于人體吸收的活性成分，能夠滿足調節(jié)免疫、降血脂以及抗衰老藥 物、保健品以及食品開發(fā)方面的需求。
[0005] 本發(fā)明的第一個目的是提供一種油菜花粉水溶性提取物的制備方法，包括如下步 驟：
[0006] 1)直接將油菜花粉（Brassica camPestris L. Pollen)與適量的水混合，常溫攪 拌，制得混合物水溶液；
[0007] 2)將所得混合物水溶液進行抽濾或離心，分別得濾液或上清液和沉淀物；
[0008] 3)將所得濾液或上清液進行濃縮，得濃縮液；
[0009] 4)將所述濃縮液干燥，得油菜花粉提取物；
[0010] 其中，優(yōu)選地，步驟1)所述的油菜花粉與蒸餾水以1:1~1:15(w/w)的比例混合， 所述攪拌的時間為2~6小時，更優(yōu)選地，攪拌時間為4小時。
[0011] 其中，優(yōu)選地，步驟2)所述的抽濾為真空抽濾。
[0012] 其中，優(yōu)選地，步驟2)所述的離心為3000~6000r/min離心10_30min，更優(yōu)選地， 所述離心為6000r/min離心10min。
[0013] 其中，優(yōu)選地，步驟3)所述的濃縮為減壓濃縮。
[0014] 其中，優(yōu)選地，步驟4)所述的干燥為鼓風干燥、板式真空干燥、帶式真空干燥、微 波真空干燥等干燥方法。
[0015] 此外，對于本發(fā)明上述步驟2)所述的沉淀物（也即油菜花粉藥渣），可以采用超臨 界提取法（例如專利申請公開號CN103893236A所述的提取方法）制得油菜花粉脂溶性提 取物，用于前列腺治療等研究。
[0016] 通過上述方法，將目前油菜花粉提取技術中廢棄的上清液或濾液進行有效的回收 利用，提高了油菜花粉提取方法的利用率，避免了資源浪費；同時采用室溫條件下水浸提， 最大限度地保持了油菜花粉提取物中多糖等水溶性有效成分的活性，使其能夠更有效地發(fā) 揮調節(jié)免疫力、抗血脂、抗衰老等作用。
[0017] 本發(fā)明的第二個目的是提供一種根據(jù)上述方法制得的油菜花粉水溶性提取物。該 水溶性提取物主要含有多糖類物質，該多糖類物質的單糖組成為甘露糖、半乳糖醛酸、葡 萄糖醛酸、阿拉伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖及鼠李糖等糖類成分及其它水溶性成分。經苯 酚-硫酸法測定該水溶性提取物，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)其總多糖含量高達70%~80%。
[0018] 本發(fā)明的第三個目的是提供一種油菜花粉水溶性提取物藥物制劑，其以油菜花粉 水溶性提取物為原料，加入藥學上可接受的藥用輔料賦形劑，制成臨床上可接受的任一種 劑型的制劑，包括但不限于膠囊、顆粒劑、片劑、膏劑或丸劑等。
[0019] 本發(fā)明的第四個目的是提供一種油菜花粉水溶性提取物保健食品，其以油菜花粉 水溶性提取物為原料或添加劑，加上適宜的食用輔料，制成軟糖、糖漿、飲料等具有保健功 能的食品。
[0020] 本發(fā)明的第五個目的是提供所述的油菜花粉水溶性提取物在制備調節(jié)免疫、降血 月旨、抗衰老的藥物、保健品或食品中的應用。
[0021] 本發(fā)明采用直接對未破壁的油菜花粉在室溫下進行水浸提，抽濾獲得濾液或離心 上清液，制得油菜花粉水溶性提取物。與現(xiàn)有技術相比，1)本發(fā)明將目前油菜花粉提取技術 中廢棄的上清液或濾液進行有效的回收利用，避免了資源浪費；2)本發(fā)明方法采用飲用水 在室溫下進行浸提，最大限度保持了提取物活性成分的效力，可以用于制備多種藥品、保健 品或食品，具有調節(jié)免疫力、降血脂、抗衰老等功效；3)本發(fā)明方法減少了現(xiàn)有提取法中的 破壁步驟，簡化了操作步驟，降低了成本，適合工業(yè)化生產。以上所述的優(yōu)勢使得本發(fā)明方 法具有實際的社會和經濟效益。
【附圖說明】
[0022] 圖1為實施例5中苯酚硫酸法多糖檢測的葡萄糖標準曲線。
【具體實施方式】
[0023] 以下結合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。下 述實施例涉及的方法如無特別說明，均為常規(guī)方法，材料如無特別說明，均商業(yè)市售可獲 得。
[0024] 本發(fā)明所述方法對未破壁的油菜花粉在室溫下進行水浸提，制得油菜花粉水溶性 提取物，用該水溶性提取物制備的制劑和保健品具有調節(jié)免疫力、降血脂、抗衰老等功效。 以下實施例給出具體相關做法。
[0025] 油菜花粉水溶性提取物的制備
[0026] 實施例1
[0027] 取油菜花粉（市售可獲得）以I: I (w/w)的比例與飲用水混合，常溫攪拌2h，真空 抽濾，取濾液，減壓濃縮，鼓風干燥，即得油菜花粉水溶性提取物。抽濾所得沉淀物可采用 CO2超臨界提取法制備脂溶性提取物。
[0028] 實施例2
[0029] 取油菜花粉（市售可獲得）以l:6(w/w)的比例與飲用水混合，常溫攪拌4h， 3000r/m離心30min，收集上清液，減壓濃縮進行回收，板式真空干燥，即得油菜花粉水溶性 提取物。抽濾沉淀物用于脂溶性提取物的制備。
[0030] 實施例3
[0031] 取油菜花粉（市售可獲得）以1:8 (w/w)的比例與水混合，常溫攪拌4h，6000r/m離 心lOmin，收集上清液，減壓濃縮進行回收，帶式真空干燥，即得油菜花粉水溶性提取物。抽 濾沉淀物用于脂溶性提取物的制備。
[0032] 實施例4
[0033] 取油菜花粉（市售可獲得）以1:15 (w/w)的比例與水混合，常溫攪拌6h，6000r/m 離心10min，收集上清液，減壓濃縮進行回收，微波真空干燥，即得油菜花粉水溶性提取物。 抽濾沉淀物用于脂溶性提取物的制備。
[0034] 油菜花粉水溶性提取物的總多糖的含量檢測
[0035] 實施例5
[0036] 1.苯酚-硫酸法多糖檢測的實驗原理
[0037] 可溶性糖在濃硫酸作用下，可以生成糠醛或羥甲基糠醛，其可與苯酚縮合生成橙 紅色化合物，在一定范圍內其顏色深淺與可溶性糖的含量成線性關系，并且在485nm左右 波長處具有最大吸收峰，故可用比色法測定其含量。
[0038] 2.顯色劑的配制
[0039] 苯酚先在60°C水浴鍋中加熱溶解，溶解后，精確吸取6g，置于IOOmL容量瓶中，用 蒸餾水溶解并定容至刻度，得6%的苯酚溶液。
[0040] 3.對照品溶液的配制
[0041] 精確稱取葡萄糖對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110833-201205)20mg， 置IOOmL容量瓶中，用蒸餾水溶解并定容至刻度，即得0. 2mg/mL葡萄糖標準溶液。
[0042] 4.標準曲線的繪制
[0043] 精確量取上述配置的葡萄糖標準液0. 2mL、0. 4mL、0. 6mL、0. 8mL、l. OmL、l. 2mL置 于IOmL容量瓶中，分別加蒸餾水至2mL搖勻，再加入lmL6 %的苯酚溶液搖勻，加入5mL濃硫 酸并搖勻。靜止顯色20分鐘。同樣的方法取2mL蒸餾水，作為空白對照。在490nm波長條 件下測定吸光度，用所得數(shù)據(jù)繪制標準曲線。以葡萄糖的含量為橫坐標，吸光值為縱坐標， 繪制的標準工作曲線如圖1所示。由圖1可知：在實驗范圍內，葡萄糖的含量與其吸光值成 正比，得回歸方程：y = 0. 0143X+0. 0209, R2= 0. 9976。
[0044] 5.多糖含量的測定
[0045] 油菜蜂花粉水溶性提取物經干燥后，精確稱取樣品20mg，置IOOmL容量瓶中，加少 量蒸餾水溶解，定容至刻度，得濃度為〇. 2mg/mL的樣品溶液。精確吸取樣品溶液0. 6mL、 0. 8mL、1.0 mL置于IOmL容量瓶中，按標準曲線的制作方法進行相同操作，每個濃度平行測 量3次。根據(jù)標準曲線和吸光度的測量結果計算樣品中多糖的含量（如表1所示）。
[0046] 表1多糖含量測定結果
[0048] 由表1可知樣品中多糖的含量為：72. 47%，由此可知水提醇沉物中主要含有多糖 類物質。
[0049] 油菜花粉水溶性提取物顆粒劑的制備
[0050] 實施例6
[0051] 取按照實施例1-4的技術方案制備的油菜花粉水溶性提取物500g，粉碎過120目 篩，加入400g可溶性淀粉和100g微粉硅膠，混合均勻，噴適量95% (體積比）乙醇，混合， 制粒，干燥，整粒即得。
[0052] 油菜花粉水溶性提取物硬膠囊的制備
[0053] 實施例7
[0054] 取按照實施例1-4的技術方案制備的油菜花粉水溶性提取物適量，粉碎過120目 篩，稱取60g細粉，加入30g可溶性淀粉和IOg微粉硅膠，混勻，噴適量95 % (體積比）乙 醇，混合，制粒，干燥，整粒，灌裝至0號膠囊，即得硬膠囊。
[0055] 油菜花粉水溶性提取物保健飲料的制備
[0056] 實施例8
[0057] 取按照實施例1-4的技術方案制備的油菜花粉水溶性提取物500g，加入120g木 糖醇及適量的檸檬