料與安慰劑飲料比較，BB-1膠囊與安慰 劑膠囊比較，使得每個參數(shù)有兩個比較。有6個主要功效終點（血漿中的特異性IgG、IgGl 和IgG3以及唾液中的特異性IgA、IgG和IgM)，和比較數(shù)加起來達到12個用于主要功效評 價。
[0197] 在Holm-Bonferroni法中，首先在不調(diào)整的條件下進行所有12種比較，并且將 P-值從最小至最大進行排序。最小的P-值與經(jīng)調(diào)整的顯著性水平比較，經(jīng)調(diào)整的顯著性 水平等于〇4=5%/12(〇/比較數(shù)目）=0.004。如果最小的？-值大于<14，則得出結(jié) 論，所有比較是不顯著的。如果最小的P-值小于aad]，則相應(yīng)比較的結(jié)論是在5%的水平 上是統(tǒng)計學(xué)顯著的。在下一步驟，使用如上所述的相同方法將第二小的P-值與aad]= 5% /11比較。繼續(xù)此過程直至發(fā)現(xiàn)大于aad]的p-值，并且剩余的比較被認(rèn)為是不顯著的。
[0198] 對于次要目的終點的統(tǒng)計學(xué)分析不對多重檢驗進行調(diào)整。
[0199] 功效分析
[0200] 主要目的的分析
[0201] 統(tǒng)計學(xué)分析的主要功效變量是從基線的變化，即，第42天和第0天評估之間的差 異。使用單變量方差分析來鑒定研究效應(yīng)。
[0202] 在基線內(nèi)，第42天內(nèi)和對于平均倍數(shù)增加（MFI)還進行組間的統(tǒng)計學(xué)分析。MFI 定義為（第42天-第0天）/第0天。
[0203] 另外，從基線至第42天至少2倍的特異性抗體增加被認(rèn)為是實質(zhì)性的，并且定義 為差值（第42天-第0天）^2x第0天（Stephanova等2002, Kurstak 1985)，并且計 算疫苗特異性抗體實質(zhì)性增加的每組中受試者的數(shù)目。
[0204] 僅相同產(chǎn)品內(nèi)的各組進行比較，即，干酪乳桿菌43 Γ'飲料VS.安慰劑飲料，以及 BB-丨21"膠囊vs.安慰劑膠囊。
[0205] 所有AN0VA模型包含治療、性別、年齡和基線的項目，例外是對于基線內(nèi)的分析， 其中模型包含治療、性別和年齡的項目。由于BMI在組間具有顯著性差異，因此使用BMI作 為AN0VA模型中的附加協(xié)變量進行事后分析。
[0206] 計算幾何平均數(shù)評價并且描述性地報告。通過取對數(shù)值的算術(shù)平均數(shù)的逆對數(shù)來 計算幾何平均數(shù)。
[0207] 次要目的的分析
[0208] 這些分析遵循與對主要目的所概述的相同方法學(xué)策略。
[0209] 數(shù)據(jù)和描述統(tǒng)計學(xué)的概述
[0210] 使用均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差（SD)、中位數(shù)、95 %置信區(qū)間（CI)、5 %和95%-分位數(shù)以及最小 值和最大值總結(jié)治療組的連續(xù)變量如人口統(tǒng)計學(xué)和基線變量以及免疫球蛋白值。對于按類 別的變量如性別和其抗體值達到實質(zhì)性增加的受試者的比例依賴于每個治療組內(nèi)的計數(shù) 和頻次。
[0211] 分布假設(shè)驗證
[0212] 對于連續(xù)結(jié)果量度，焦點集中于確定數(shù)據(jù)的正態(tài)性（高斯分布）。這使用Wilk和 Shapiro (1965)技術(shù)以及QQ圖來評估。
[0213] 對于一些參數(shù)，不遵守正態(tài)分布假設(shè)。在這些情況下，也進行非參數(shù)法，即， Mann-Whitney檢驗作為替代分析。這些替代分析的所有結(jié)果與來自參數(shù)分析的結(jié)果一致。
[0214] 隨機化方案的驗證
[0215] 這些分析的目標(biāo)是為了確定就"已知的"預(yù)測協(xié)變量如年齡、性別和基線免疫球蛋 白值而言在研究組間是否存在顯著性差異（不平衡）。這些分析依賴于AN0VA或非參數(shù)檢 驗以評價相關(guān)組（即，干酪乳桿菌431?飲料vs.安慰劑飲料和BB42?膠囊vs.安慰劑膠 囊）內(nèi)的平均值的相等性。
[0216] 分析的數(shù)據(jù)組
[0217] 總體來說，211名受試者的數(shù)據(jù)包含在ITT分析組內(nèi)，并且196名受試者的數(shù)據(jù)包 含在PP分析組內(nèi)。
[0218] 在此僅報告來自ITT分析的結(jié)果。
[0219] 人口統(tǒng)計學(xué)和其他基線特征
[0220] 在表中，顯示了 ITT分析組中受試者的人口統(tǒng)計學(xué)和基線特征?？偲骄⊿D)年齡 為33.2歲（13. 1歲），且范圍為從19至60歲?？傮w來說，女性多于男性：118名（55.9%) 女性，和93名（44. 1% )男性。
[0221 ] 表5頂PRESS-研究（ITT分析組）的受試者的人口統(tǒng)計學(xué)和基線特征
[0222]

[0224] *p〈0. 05與安慰劑飲料組相比較的差異，采用Kruskal-Wallis檢驗分析
[0225] 功效結(jié)果
[0226] 主要目的
[0227] 血漿中的疫苗特異性IgG、IgGl和IgG3
[0228] 在對從基線的變化的主要分析中證明對于所有三種參數(shù)在益生菌和安慰劑組之 間均存在顯著性差異。當(dāng)比較第42天和基線之間的差異時，組中的疫苗特異性抗 體值與安慰劑組相比，從基線至第42天顯著增加更多（對于所有參數(shù)p〈0. 001)。同樣，干 酪乳桿菌431#組中的特異性抗體值與相應(yīng)的安慰劑組相比增加顯著更多（對于1姊，p = 0· 010,且對于 IgGl 和 IgG3, ρ〈0· 001)。
[0229] 另外的分析顯示疫苗特異性IgG、IgGl和IgG3的基線值在所有研究組之間時相似 的。第42天值的橫截面分析顯示對于BB-12?姐相比于安慰劑組和干酪乳桿菌431φ組相 比于安慰劑組所有參數(shù)均具有顯著較高的值（對于所有三個參數(shù)，Ρ〈〇. 001)(圖1、圖2和 圖3)。
[0230] 流感疫苗-特異性IgG、IgGl和IgG3的值也評價平均倍數(shù)增加（MFI)。對于 組相比于安慰劑組的IgG觀察到MFI的顯著組間差異（p = 0. 016)，對于BB-12? 組相比于安慰劑組以及干酪乳桿菌431 組相比于安慰劑組的IgGl和IgG3的顯著組間差 異（對于所有，Ρ〈〇·〇〇1)(表6)。
[0231 ] 表6研究組的流感疫苗-特異性血漿IgG、IgGl和IgG3的平均倍數(shù)增加
[0232]
[0233] *:對于采用AN0VA分析的MFI組間差異，使用性別、年齡和基線作為協(xié)變量來源： 附錄 16. 1. 9 表 3. 1，3. 2, 3. 3, 8. 1，8. 2 和 8. 3
[0234] 疫苗特異性IgG、IgGl和IgG3的至少2倍的平均倍數(shù)增加被定義為實質(zhì)性增加， 并且對每組計算達到實質(zhì)性增加的受試者的比例。與相關(guān)的安慰劑組相比，在每個益生菌 組中具有特異性抗體值實質(zhì)性增加的受試者的數(shù)目均相當(dāng)大（表7)。
[0235] 表7研究組的具有IgG、IgGl和IgG3值實質(zhì)性增加的受試者的數(shù)目
[0236]
[0237] 唾液中的疫苗特異性IgG、IgA和IgM
[0238] 對于疫苗特異性唾液IgG、IgA或IgM，對從基線的變化的組間差異的主要分析顯 示無顯著性差異。然而，對于IgA，在BB-. 12κ膠囊組和相應(yīng)的安慰劑組之間顯示有趨于顯 著性差異的趨勢（經(jīng)調(diào)整的Ρ = 〇. 084)。
[0239] IgG和IgA的基線值在組間是相似的，而與安慰劑組相比，在基線處在ΒΒ-丨2_'組 中IgM值稍高（ρ = 0. 007)(圖4、圖5和圖6)。
[0240] 第42天值的橫截面分析顯示與安慰劑組相比，在:BB-12K組中IgA值較高（P = 0. 014)且與安慰劑組相比，在干酪乳桿菌43 P組中IgA值較高（P = 〇. 047)(圖4、圖5和 圖6)。同樣，平均倍數(shù)增加的分析表明與相關(guān)的安慰劑組相比，在每個益生菌組中疫苗特異 性IgA的MFI均較高（表8)。
[0241] 在第42天時和在MFI方面組間均未觀察到IgM或IgG的顯著性差異（圖4和圖 6) 〇
[0242] 表8研究組的流感疫苗-特異性唾液IgA、IgG和IgM的平均倍數(shù)增加
[0243]
[0244] *:對于采用AN0VA分析的MFI組間差異，使用性別、年齡和基線作為協(xié)變量。
【主權(quán)項】
1. 保藏號為ATCC55544的益生細(xì)菌菌株副干酪乳桿菌副干酪亞種（Lactobacillus paracaseissp.paracasei)(千路乳桿菌43Γ?)在用于制備與流感疫苗聯(lián)合的用于增加 疫苗特異的IgG的免疫加強組合物中的用途。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述組合物在疫苗接種前施用至少2周。3. 根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中疫苗特異性的IgGl增加。4. 根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中疫苗特異性的IgG3增加。5. 根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中流感疫苗中的病毒是正粘病毒。6. 根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中所述正粘病毒為A型流感病毒。7. 根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中所述正粘病毒為B型流感病毒。8. 根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中所述正粘病毒為C型流感病毒。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述益生細(xì)菌菌株與其他種的其他乳酸菌聯(lián)合使 用。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述益生細(xì)菌菌株與酸奶發(fā)酵物聯(lián)合使用。11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中所述酸奶發(fā)酵物是保加利亞乳桿菌 (Lactobacillusbulgaricus)或嗜熱鏈球菌（Streptococcusthermophilus) 〇12. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述組合物在6周期間施用。13. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述組合物是乳制飲料或膠囊。
【專利摘要】一種免疫佐劑。本發(fā)明因此涉及一種用于通過共同施用益生菌諸如干酪乳桿菌431或BB-12與流感疫苗來加強疫苗的效率的方法。本發(fā)明還涉及用于這種治療中的組合物。
【IPC分類】A61K39/145, A61K35/747, A61P31/16, A61K39/39, A23C9/137
【公開號】CN105288616
【申請?zhí)枴緾N201510845386
【發(fā)明人】多爾特·埃絲科森
【申請人】科.漢森有限公司
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2011年10月14日
【公告號】CN103220921A, CN103220921B, EP2627198A1, EP2627198B1, US20130195917, WO2012049301A1