專利名稱：一種新型免疫佐劑及快速免疫方案的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種新型免疫佐劑及免疫方案，提供了ー種應(yīng)用于單克隆抗體制備的水溶性佐劑及應(yīng)用這種佐劑進(jìn)行快速免疫的方法。該方法利用組合佐劑和新穎的的動(dòng)物免疫方案，可以快速引起小鼠免疫應(yīng)答反應(yīng)，這個(gè)免疫周期28天即可完成。
背景技術(shù)：
抗原、免疫佐劑與動(dòng)物免疫
抗原是能夠刺激動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的外源性物質(zhì)。免疫佐劑，本身不具抗原性，但同抗原一起刺激機(jī)體后，能增強(qiáng)免疫效果。免疫佐劑的生物學(xué)作用包括:(I)改變抗原的物理性狀，減緩抗原物質(zhì)的釋放，延長抗原的作用時(shí)間；(2)増加抗原表面積，利于巨噬細(xì)胞的吞噬；(3)能夠刺激巨噬細(xì)胞對(duì)抗原的處理；(4)促進(jìn)淋巴細(xì)胞間的連接，增強(qiáng)輔助性T淋巴細(xì)胞的作用；(5)可刺激致敏淋巴細(xì)胞的分裂和漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體；(6)可提高機(jī)體初次和再次免疫應(yīng)答的抗體滴度。用抗原對(duì)動(dòng)物(通常是小鼠)進(jìn)行免疫是單克隆抗體制備過程的第一歩，也是至關(guān)重要的一歩。動(dòng)物對(duì)抗原免疫應(yīng)答反應(yīng)是否良好，能否產(chǎn)生滴度高，特異性好的抗體直接決定了后期篩選單克隆雜交瘤細(xì)胞株的難度和所獲抗體的有效性。而免疫佐劑和免疫方案是動(dòng)物能否產(chǎn)生良好免疫應(yīng)答反應(yīng)的重要因素。免疫佐劑按其水溶性可分為水溶性佐劑和油性佐劑:油性佐劑，如常用的弗氏佐劑、植物油等，在免疫之前需經(jīng)過乳化形成油包水的狀態(tài)才能進(jìn)行免疫；水溶性佐劑，不需要繁瑣的乳化過程，直接與抗原混合后注射動(dòng)物即可。免疫 方法
弗氏佐劑是目前最常用的動(dòng)物免疫佐劑，已有多種品牌的商品供應(yīng)，其主要成分為石蠟油和羊毛脂等油脂類。免疫過程中弗氏佐劑與抗原水溶液等體積混合后通過乳化制備成油包水的狀態(tài)，在注射入機(jī)體后將抗原持續(xù)緩慢釋放，刺激機(jī)體免疫應(yīng)答的發(fā)生。應(yīng)用弗氏佐劑的傳統(tǒng)免疫方案通常需要通過初次免疫及加強(qiáng)免疫，共計(jì)55天的時(shí)間才能獲得充分免疫應(yīng)答。在此過程中免疫原需要較長時(shí)間才能被動(dòng)物體內(nèi)的免疫系統(tǒng)捕獲、加工、提呈，刺激特定的淋巴細(xì)胞分類增殖，產(chǎn)生抗體。當(dāng)免疫原的穩(wěn)定性較差時(shí)(如某些易降解蛋白、人工合成抗原和一些經(jīng)載體偶聯(lián)的小分子半抗原等)，易受到體內(nèi)pH、酶、金屬離子等因素的影響而被降解，失去其抗原性，造成最終免疫效果不佳。ー個(gè)良好的免疫方案可縮短上述免疫應(yīng)答過程，使穩(wěn)定性低的蛋白和小分子物質(zhì)被分解的可能性降低，人工抗原受機(jī)體影響減少，進(jìn)而產(chǎn)生特異性抗體的機(jī)會(huì)増加。本發(fā)明所涉及的免疫方案，應(yīng)用了常規(guī)的弗氏完全佐劑(油性佐劑)和一種新穎的水溶性佐劑(以下簡稱Quick-Ab佐劑)。其基本原理是:應(yīng)用弗氏完全佐劑進(jìn)行初次免疫后，再用Quick-Ab佐劑在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行多次免疫刺激，增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答效果，加快漿細(xì)胞生產(chǎn)抗體能力，獲得更高滴度、更高親合力的抗體。整個(gè)免疫周期僅為28天，免疫周期與傳統(tǒng)免疫周期相比整整縮短一半的時(shí)間
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是以弗氏完全佐劑乳化后的抗原注射到動(dòng)物體內(nèi)引起初次免疫應(yīng)答后，再將QuickAb水溶性佐劑和抗原直接注射到動(dòng)物脾臟，通過在短時(shí)間內(nèi)連續(xù)多次刺激動(dòng)物免疫系統(tǒng)，更快獲得高效價(jià)、高親和カ的抗體。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。與弗氏完全佐劑相配合，使用Quick-Ab新型免疫佐劑，以新的免疫程序?qū)?dòng)物實(shí)施免疫，免疫動(dòng)物能快速產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。具體步驟如下:
1.初次免疫:將一定劑量的抗原(蛋白、偶聯(lián)載體的小分子)與弗氏完全佐劑按體積比I: I混合(250微升/只)，抗原體積不足部分用50mM的PBS代替，經(jīng)過乳化，常規(guī)背部多點(diǎn)皮下注射免疫動(dòng)物；
2.加強(qiáng)免疫:按初次免疫一半的抗原量與Quick-Ab佐劑體積比1:1混合，將混合物經(jīng)皮穿刺直接注入脾臟進(jìn)行免疫；分別在初次免疫后的第14天、第17天、第21天免疫3次；
3.抗血清檢測 第28天動(dòng)物采血檢測效價(jià)。


附圖1地高辛結(jié)構(gòu)式
附圖2 LPS結(jié)構(gòu)示意圖
表I抗地高辛小鼠血清效價(jià)檢測結(jié)果。本發(fā)明方法與傳統(tǒng)方法比較，血清中抗地高辛抗體的效價(jià)足足提高了 30倍。
權(quán)利要求
1.ー種利用新型免疫佐劑(Quick-Ab)及利用該佐劑縮短單克隆抗體制備周期的快速免疫方案。
2.其免疫周期為小于或等于28天。
3.包括實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)的具體方法:抗原與弗氏完全佐劑混合，經(jīng)過乳化，初次免疫動(dòng)物；抗原與Quick-Ab佐劑混合，加強(qiáng)免疫三次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中可作為抗原的物質(zhì)包括但不限于蛋白、偶聯(lián)載體的小分子。
5.按權(quán)利要求1的方法，其中初次免疫動(dòng)物的方法包括但不限于背部皮下多點(diǎn)免疫。
6.按權(quán)利要求1的方法，其中抗原與Quick-Ab佐劑混合體積比為包括但不限于1:1。
7.按權(quán)利要求1的方法，其中與Quick-Ab佐劑混合的抗原量為包括但不限于初次免疫的抗原量的二分之一。
8.按權(quán)利要求1的方法，其中再次免疫方法包括但不限于脾臟直接免疫。
9.按權(quán)利要求1的方法，其中再次免疫次數(shù)包括但不限于3次。
10.按權(quán)利要求1的方法，其中再次免疫的時(shí)間點(diǎn)分別為包括但不限于初次免疫的第14天、第17天、第21天。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型免疫佐劑及利用該佐劑在單抗制備中快速免疫動(dòng)物的方法，提供了一種應(yīng)用于動(dòng)物免疫的水溶性佐劑及相應(yīng)的快速免疫方案，利用組合佐劑和相應(yīng)的動(dòng)物免疫方案，可以快速引起動(dòng)物免疫應(yīng)答反應(yīng)，免疫周期28天即可完成，較傳統(tǒng)免疫周期縮短二分之一。
文檔編號(hào)A61K39/39GK103110941SQ20121037909
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2012年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月9日
發(fā)明者奇日邁勵(lì)圖, 高建恩, 王春香 申請(qǐng)人:江蘇康為世紀(jì)生物科技有限公司