-乙?；D(zhuǎn)移酶抗體的制作方法
【專利說明】用作抗癌藥物化合物的亞精胺/精胺N1-乙釀基轉(zhuǎn)移酶抗 體 【背景技術(shù)】 技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及亞精胺/精胺N1-乙?；D(zhuǎn)移酶（SSAT)抗體作為抗癌藥物化合物及 在抗癌治療中的用途。
[0002] 相關(guān)摶術(shù)說明
[0003] 美國專利號6, 811，967,于2004年11月4日授予Sitar等人，其全部公開內(nèi)容通 過引用合并于此。該專利公開了一種使用SSAT底物，通過檢測乙酰化形式的SSAT底物來 測定酶SSAT活性的方法。本發(fā)明還公開了 SSAT活性和病理狀況的相關(guān)性。
[0004] SSAT是一種在多胺代謝中重要的酶。多胺，包括亞精胺和精胺，是細胞存活必 需的，并且，SSAT是分解代射途徑中的限速酶，SSAT將亞精胺和精胺轉(zhuǎn)化成乙酰多胺以 維持細胞內(nèi)多胺穩(wěn)態(tài)。有報道稱，在某些癌細胞系中檢測到SSAT mRNA的高表達。比 如，參見Chen等人.第二亞精胺/精胺N1-乙?；D(zhuǎn)移酶的基因組鑒定和生物化學(xué)特 性描述（Genomic identification and biochemical characterization of a second spermidine/spermine N^acetyltransferase).生物化學(xué)雜志（Biochemical Journal). (2003)，373卷，661-667,其全部公開內(nèi)容通過引用合并于此。
[0005] 還有報道稱，SSAT的表達和酶活性可能在化療或使用亞精胺類似物治療后升高。 體外細胞系研究進一步將SSAT表達及酶活性與候選新藥的細胞毒性水平正相關(guān)。一些抗 增殖試劑和多胺類似物已相應(yīng)地被開發(fā)，通過SSAT誘導(dǎo)來阻止癌細胞增殖。比如，參見 Wallace, H.M.等人·多胺代謝前景（A perspective of polyamine metabolism).生物化 學(xué)雜志（Biochemical Journal). (2003)，376卷，1-14,其全部公開內(nèi)容通過引用合并于此。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的一個目標(biāo)是提供改進的抗癌試劑和抗癌治療。
[0007] 某些癌細胞具有細胞內(nèi)亞精胺/精胺N1-乙?；D(zhuǎn)移酶SSAT以乙酰化多胺，從而 平衡細胞內(nèi)pH并分泌到細胞外。然而，某些水平的細胞內(nèi)多胺可能是細胞毒性的。癌細胞 有更高水平的細胞內(nèi)多胺。這些細胞內(nèi)多胺的保留可能導(dǎo)致癌細胞死亡。相應(yīng)地，提供一 種抗癌藥物化合物，該抗癌藥物化合物包括亞精胺/精胺N1-乙酰基轉(zhuǎn)移酶抗體。還提供 了一種抗癌治療的方法，該方法利用SSAT抗體來抑制SSAT對多胺的乙酰化，從而導(dǎo)致癌細 胞死亡。該抗體可以是單克隆或多克隆抗體。 【附圖說明】
[0008] 通過以下給出的【具體實施方式】的描述，僅以實施例的方式，并參照附圖，本發(fā)明將 更容易理解，其中：
[0009] 圖1顯示了在U2-0S、HeLa、Malme-3M、PC-3和HEK293人腫瘤細胞系中，通過 RT-qPCR測定的相對SSAT表達水平，以及通過N-乙酰亞精胺的形成測定的代謝活性；
[0010] 圖2也顯示了在U2-0S、HeLa、Malme-3M、PC-3和HEK293人腫瘤細胞系中，通過 RT-qPCR測定的相對SSAT表達水平，以及通過N-乙酰亞精胺的形成測定的代謝活性；
[0011] 圖3顯示了人腫瘤細胞系，1]2-05、他1^、]\&111116-31、？(：-3和冊1(293 在與22 4]\1到 550 μ Μ亞精胺孵育期間的融合相對百分率；
[0012] 圖4顯示了針對肺上皮細胞癌細胞系Α549, SSAT多克隆抗體的細胞毒性，并以亞 精胺作為多胺陽性對照；
[0013] 圖5顯示了針對前列腺腺癌細胞系LNCaP，SSAT多克隆抗體的細胞毒性，并以亞精 胺作為多胺陽性對照；
[0014] 圖6顯示了針對乳腺上皮細胞癌細胞系T-47D，SSAT多克隆抗體的細胞毒性，并以 亞精胺作為多胺陽性對照；
[0015] 圖7顯示了針對骨肉瘤細胞系U2-0S，SSAT多克隆抗體的細胞毒性，并以亞精胺作 為多胺陽性對照；
[0016] 圖8顯示了針對肺上皮細胞癌細胞系A(chǔ)549, SSAT單克隆抗體和多胺陽性對照亞精 胺的細胞毒性；
[0017] 圖9顯示了針對前列腺腺癌細胞系LNCaP，SSAT單克隆抗體和多胺陽性對照亞精 胺的細胞毒性；
[0018] 圖10顯示了針對乳腺上皮細胞癌細胞系T-47D，SSAT單克隆抗體和多胺陽性對照 亞精胺的細胞毒性；
[0019] 圖11顯示了針對骨肉瘤細胞系U2-0S，SSAT單克隆抗體和多胺陽性對照亞精胺的 細胞毒性；
[0020] 圖12顯示了人細胞系中SSAT多克隆抗體的細胞毒性和SSAT表達水平的總結(jié)；
[0021] 圖13顯示了人細胞系中SSAT單克隆抗體的細胞毒性和SSAT表達水平的總結(jié)；
[0022] 圖14顯示了單克隆和多克隆SSAT抗體對不同腫瘤細胞系的毒性結(jié)果；
[0023] 圖15顯示了在A549、LNCaP和T-47D細胞系中，SSAT表達相對于SSAT抗體的抗 腫瘤效力（IC5。）的相關(guān)性。
[0024] 圖16顯示了使用GAPDH或hPRTl管家基因作為內(nèi)標(biāo)，人癌細胞系相對于A549的 SSAT表達水平；及
[0025] 圖17也顯示了使用GAPDH或hPRTl管家基因作為內(nèi)標(biāo)，人癌細胞系相對于A549 的SSAT表達水平。 【具體實施方式】
[0026] 本發(fā)明公開了一種使用亞精胺/精胺N1-乙酰基轉(zhuǎn)移酶（SSAT)抗體作為抗癌藥 物化合物的方法。
[0027] 通過反轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應(yīng)實驗（RT-qPCR實驗），對人腫瘤細胞系，HEK-293、 Malme-3M、HeLa、PC-3和U2-0S細胞系中的相對SSAT表達水平進行檢測，并且，如圖1和2 所示，觀察到Malme-3M具有最高的相對SSAT表達，當(dāng)用GAPDH歸一化時，比對照HEK-293 細胞系的相對SSAT表達高11倍，并且，當(dāng)用HPRTl歸一化時，高58倍。PC-3具有第二高的 表達水平，相對于HEK-293,當(dāng)分別用GAPHD和HPRTl歸一化時，有大約3倍和7倍的SSAT 表達差異。HeLa和U2-0S都具有比HEK-293更低的SSAT表達水平。還將SSAT表達水平與 N-乙?；饎偼榘反x物形成進行對比，且其結(jié)果表明SSAT表達和N-乙?；x活性間 有因果關(guān)系。
[0028] 現(xiàn)參考圖3,當(dāng)人腫瘤細胞系在22 μ Μ到550 μ Μ亞精胺存在下孵育時，在SSAT非 表達細胞系（U2-0S和HeLa)中觀察到最高的相對細胞活性，表達為融合百分率，及最低的 SSAT N-乙?；钚?。與此相反，在SSAT過表達細胞系（Malme-M3和PC-3)中觀察到最低 的細胞活性。這個數(shù)據(jù)表明，人腫瘤細胞系中顯著高的亞精胺的細胞毒性是通過SSAT過表 達腫瘤細胞中的SSAT的基于代謝的機制介導(dǎo)的。
[0029] 材料
[0030] 抗體
[0031] 評估以下抗體針對人腫瘤細胞系的細胞毒性。
[0032] 名稱； SSAT抗體 克隆類型/抗原表位 兔多克隆的，C-端殘基，N-端殘基 純度： 肽親和純化 供應(yīng)商： _Ncmis: .Biological s., .IX.C
[0033] 名稱: SSAT抗體 克隆類型/抗原表位 鼠單克隆的 批次/批號： A003 到期日： 2013年9月14日 純度： 肽親和純化 供應(yīng)商： OriGene Technologies Inc.
[0034] 陽丨生對照
[0035] 在本研究中，使用SSAT的多胺底物亞精胺作為陽性對照測試藥物。
[0036] 名稱 亞精胺 BRI 參H RFS-1085 純度： 99.8% 批次/批號： 1441607