)?？傊?，增加的攻擊 水平降低鳥的表現(xiàn)。在攻擊期間，喂食Y的患有壞死性腸炎的鳥具有等同于喂食VM的那些 的增加。在CPP+A!^L攻擊期間，喂食基于粘±的制品改善表現(xiàn)。
[0117]表9和10-數(shù)據(jù)表，CQR 表9.在沒有和有黃曲霉毒素的情況下來自產(chǎn)氣芙膜梭菌病原體（CP巧的漸增的攻擊 和意圖減輕該攻擊影響的五種制品的主要影響
1培養(yǎng)材料來自密蘇里大學(密蘇里，哥倫比亞）獸醫(yī)學院獸醫(yī)診斷實驗室。
[0118] 2CPP鳥通過如下攻擊：放在臟的稱草（litter)(其從經(jīng)歷近期產(chǎn)氣芙膜梭菌攻擊 的肉雞獲得)上，隨后在第10天給予它們10X劑量的球蟲目菌苗W模擬引起壞死性腸炎的 條件。
[0119] 3B=LVM粘± ;Y=B+有機酸+植物提取物；C=B+酵母制品；VM=維吉霉素。
[0120] 表10.被喂食在有和沒有黃曲霉毒素的情況下的來自產(chǎn)氣芙膜梭菌病原體（CP巧 的漸增的攻擊（CP巧和意圖減少該攻擊影響的5種制品的肉雞的處理影響的相互作用
1培養(yǎng)材料來自密蘇里大學(密蘇里，哥倫比亞）獸醫(yī)學院獸醫(yī)診斷實驗室。
[0121] 2CPP鳥通過如下攻擊：放在臟的稱草(其從經(jīng)歷近期產(chǎn)氣芙膜梭菌攻擊的肉雞獲 得）上，隨后在第10天給予它們10X劑量的球蟲目菌苗W模擬引起壞死性腸炎的條件。
[012引3B=LVM粘± ;Y=B+有機酸+植物提取物；C=B+酵母制品；VM=維吉霉素。
[0123] 4虛線=沒有檢測到的黃曲霉毒素Bi。
[0124] 實施例3 :壞死性腸炎和黃曲霉毒素在幼肉雞中對生長表現(xiàn)、傷損得分和死亡率 的影響和緩解它們的制品 將Co化500小雞（2, 640只，雄性）用于確定疾病攻擊的影響和減輕運些影響的制品。 使用了S種攻擊水平：1)未攻擊；2)壞死性腸炎（CP巧攻擊；和3)CPP+1ppm黃曲霉毒素 Bi。測試用W緩解疾病攻擊的制品是：1)無制品（NP)尚基于專有粘±的制品度）誠第二 種基于專有粘±的制品燈）；4)第S種基于專有粘±的制品（C);和5)維吉霉素（VM)。在 24天的研究中，將22只小雞（等同于第7天20只）/圈分配至具有8個重復（實驗單位 =圈）的15種處理（3X5因子排列）。將顯著差異設定于P<0. 05。在第0天、第10天和 第24天測出重量用于飼料攝入、增加和飼料：增加的計算。鳥隨意消費飼料和水。在本研 究中看到對肥和AFL的組合的增加的負響應，因為FI(第0天-第10天）、增加（第10 天-第24天、第0天-第24天）和F:G(第10天-第24天）隨著攻擊水平從無攻擊到 CPP攻擊到CPP+A!^L攻擊而漸增變差（P<0. 05)。其它生長響應當應用CPP+AFL兩者時與未 攻擊或CPP攻擊相比較差（P<0. 05)。傷損得分在有或沒有A!^L的情況下在CPP攻擊的鳥 中較高任<〇.〇5)。喂食VM在未攻擊的鳥中改善表現(xiàn)任<0.05)。在CPP攻擊的鳥中，加入 B或Y與NP相比改善FI和增加，在攻擊期間，Y等同于喂食VM的那些任<0.05)。當用CPP 和AFL兩者攻擊時給予B的鳥具有最高的增加和飼料轉化率；喂食Y、CL3和VM與加入NP 相比具有較高的增加（P<〇. 05)?？傊瑵u增的攻擊水平降低鳥的表現(xiàn)。在攻擊期間喂食Y 的患有壞死性腸炎的鳥具有等同于喂食VM的那些的增加。在CPP+A化攻擊期間喂食基于 粘±的制品改善表現(xiàn)。
[0125] 實施例4 :在幼肉雞中壞死性腸炎、黃曲霉毒素和維吉霉素對生長表現(xiàn)、傷損得分 和死亡率的影響 將總共2, 112只雄性Co化500小雞用于確定在有或沒有壞死性腸炎或維吉霉素（VM) 的情況下漸增的黃曲霉毒素濃度（AFL;0、0. 75、1. 5ppm)對肉雞的影響。在23天的研究中， 將22只小雞（其等同于第7天的20只）/圈按隨機化完全區(qū)組設計分配至具有8個重復的 12種處理（3X2X2因子排列）；圈是實驗單位。將顯著差異設定于P<0. 05。在第0天、第 16天和第23天測出重量用于飼料攝入、增加和飼料：增加的計算。鳥隨意消耗飼料和水。 黃曲霉毒素減少增加和飼料攝入并導致較差的飼料：增加、死亡率和傷損得分（P<〇. 05)。 使用產(chǎn)氣芙膜梭菌污染的稱草和在第10天給予的10X劑量的球蟲病疫苗誘導壞死性腸炎 (CP巧增加傷損得分和減少飼料攝入和增加（P<0. 05)。加入VM至飲食改善獲得、飼料攝入 和飼料轉化率，并降低死亡率（P<〇. 05)。然而，有相互作用（P<0. 05)，因為在第二時期中用 CPP攻擊鳥并喂食0.75ppmA!^L具有對增加的負協(xié)同效應，而即使當鳥被喂食1.5ppmAFL 時看不到附加效應。在1. 5ppmAFL下，喂食VM的無CPP攻擊的鳥與沒有喂食VM的那些 鳥相比具有更高的增加，其等同于在有或沒有VM的情況下攻擊的鳥的增加。在整個喂食時 期中看到類似相互作用（P<〇. 05)，盡管VM總體上在0.75ppm下幫助CPP攻擊的鳥。維吉 霉素改善飼料轉化率，在1.5ppm下具有最大改善。黃曲霉毒素在未攻擊的鳥中而非在攻 擊的鳥中增加傷損得分。VM在攻擊的鳥中而非未攻擊的鳥中增加傷損得分（P<0. 05)。黃 曲霉毒素和壞死性腸炎降低肉雞表現(xiàn)并相互作用W減少重量增加；VM在0. 75ppmA化下 而非1. 5ppmAFL下在攻擊的鳥中幫助改善增加。
[012引實施例5 :在肉雞鳥（broilerbird)中Amlan制品對壞死性腸炎的影響的影響 本實施例的目的在于評估Amlan制品在壞死性腸炎（肥）疾病模型中在用巨型艾美 球蟲和產(chǎn)氣芙膜梭菌共感染的肉雞中對肥臨床征兆、免疫病理學和細胞因子響應的影響。 肥疾病模型被用于此試驗（ParkSS,Lillehoj服等人Immunopathologyand巧tokine responsesinbroilerchickenscoinfectedwithEimeriamaximaandClostridium perfringenswiththeuseofananimalmodelofnecroticenteritis(在使用壞死 性腸炎的動物模型的情況下用巨型艾美球蟲和產(chǎn)氣芙膜梭菌共感染的肉雞中的免疫病理 學和細胞因子響應）.AvianDiseases2008; 52:14 - 22;JangSI,Lillehoj服等人 VaccinationwithClostridiumperfringensrecombinantproteinsincombination withMontanide?ISA71VGadjuvantincreaseprotectionagainstexperimental necroticenteritisincommercialbroilerchickens(用產(chǎn)氣芙膜梭菌的重組蛋白與 Montanide?ISA71VG佐劑組合的疫苗接種在商用肉雞中增加抗實驗性壞死性腸炎的保 護）.Vaccine2012; 30:5401-5406)。
[0127]材料和方法.Amlan制品是100%粘±制品度)、用有機酸和植物提取物滲合的粘± 制品燈)、粘±和酵母制品的滲合物似、粘上、酵母制品和谷氨酸一鋼的滲合物做和抗生 素維吉霉素（VM)。雞是在Longeneckers解卵所（Eliz油ethtown,PA)解化，通過郵政卡車 運輸并在起始解卵器裝置中安置的一天齡的肉雞鳥（Ross/Ross)。將鳥供養(yǎng)在無艾美球蟲 屬的裝置中的解卵器圈里并轉移到在隔離的位置中的大的懸掛籠(其中將它們感染和供養(yǎng) 直至用于活體攻擊感染研究的實驗期結束）里。關于運輸、測量體重、感染和收集血液和脾 臟的所有方法遵照確立的用于動物實驗的指南。
[0128] 在1-18天齡期間，給所有鳥喂食非含藥的商用17%粗制蛋白的基礎口糧。將飼料 分別與制品B、Y、C、D和VM混合。在18天齡時，將所述飼料用含24%粗制蛋白起始飼料的 商用非含藥的飼料代替。
[0129] 按照確立的方法維持和繁殖艾美球蟲種類的蟲株。將巨型艾美球蟲（41A)通過漂 浮在5%次氯酸鋼上而清潔，用PBS洗涂3次，并且使用血細胞計數(shù)器通過臺吩蘭計算成活 力。卵囊數(shù)量僅基于形成抱子的卵囊。在第14天時，使用接種針用10, 000個巨型艾美球 蟲食道接種雞。
[0130]在艾美球蟲屬感染后四天，使用接種針各自用lXl〇9CFU產(chǎn)氣芙膜梭菌食道接種 肥組的鳥。
[0131] 在剛要用巨型艾美球蟲（EM)攻擊之前、在用產(chǎn)氣芙膜梭菌攻擊之后第0天和第2 天稱重鳥W計算重量增加。
[0132] 為確定傷損得分，將鳥巧只鳥/組）在產(chǎn)氣芙膜梭菌（CP)感染后兩天處死。將 大約20cm腸段(其在憩室前延伸10cm和在在憩室后延伸10cm)獲得和縱向切開。傷損 得分由3個獨立的觀察者按傷損的嚴重性的升序從0到4評估。
[0133] 在CP感染后0、2、7和14天的各天中，對全部12只鳥（5/組）取樣血清用于抗體 滴度（單獨地收集）。對于血清，從單獨的鳥獲得血液樣品（3ml/鳥），允許在4°C下凝塊 過夜，并收集血清。
[0134] 使用確立的化ISA對血清樣品測試抗梭菌屬的抗體。簡而言之，將微量滴定板用 2(K)ng/孔的重組梭菌屬抗原包被過夜，用PBS-0. 05%Tween洗涂并用PBS-1%BSA封閉。 將血清稀釋物加入，在連續(xù)的溫和搖動下解育，洗涂，結合的Ab用過氧化物酶綴合的兔抗 雞IgG(sigma)和過氧化物酶特異性的底物檢測。光密度（OD)使用微板讀數(shù)器度io-Rad， Richmond,CA)在 450nm下確定。
[0135] 使用確立的化ISA對血清樣品測試針對a-毒素或化巧的抗原。簡單而言之，將 微量滴定板用0. 5嗦/孔針對a-毒素或化巧毒素的mAb包被過夜，用PBS-0. 05%Tween 洗涂，并用PBS-1%BSA封閉。將雞血清稀釋物加入，在連續(xù)的溫和搖動下解育，洗涂，結合 的Ab用過氧化物酶綴合的兔抗a-毒素或化巧毒素和過氧化物酶特異性底物檢測。光密 度（0D)使用微板讀數(shù)器度io-Rad,Richmond,CA)在450nm下確定。
[0136] 對于統(tǒng)計分析，所有值被表示為平均值±SEM。通過鄧肯多程檢驗法（Duncan's MultipleRangetest)遵循AN0VA使用用于Windows的SPSS15. 0(SPSSInc. ,Qiicago, IL)在組之間比較體重增加和傷損得分的平均值。平均值之間的差異在p< 0.05時被認為 顯著。
[0137] 表11.實驗設計
*將雞在解化后第15天時用1. 0X10 4個卵囊/鳥的巨型艾美球蟲（EM)和在第19天 時用1.0X109CFU/鳥的產(chǎn)氣芙膜梭菌（CP)經(jīng)口感染。
[0138] 使用220只肉雞鳥（20/組）并將其安置在具有2個解化器化tersime/裝置的解 化器圈中。肥育雞裝置是80懸掛籠裝置，其中所述鳥在18天齡時轉移。
[0139] 雞在第0天到達并在同一天移動至化tersime裝置中。在第18天時將所述雞移 動到大籠。將鳥在第14天時用10, 000個巨型艾美球蟲的形成抱子的卵囊感染并在第18 天時用1X109CFU的產(chǎn)氣芙膜梭菌感染。在第14天、第18天、第20天、第25天、第32天 時收集血液。在第20天對傷損評分。在第14天、第20天和第25天時確定體重（參見，例 如圖1)。
[0140] 如在圖2中所示，雞喂食0. 25%的D和0. 5%的D補充的飲食并用巨型艾美球蟲和 產(chǎn)氣芙膜梭菌共感染，與給予未補充的飲食的感染的動物相比表現(xiàn)出增加的體重。
[0141] 如在圖3中所示，被喂食0. 25%的D補充的飲食并用巨型艾美球蟲和產(chǎn)氣芙膜梭 菌共感染的雞，與給予未補充的飲食的感染的動物（對照肥組）相比表現(xiàn)出增加的體重。[014引如在圖4中所示，用D化25%)、D(0. 5%)和Y(0. 5%)組喂食的鳥與對照肥組相 比表現(xiàn)出顯著減少的損傷得分。
[0143] 如在圖5A中所示，抗a-毒素的血清抗體水平（在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后7天）在 D(0. 25%)組中與感染的肥對照組相比顯著較高。然而，在其它飲食組和感染的肥對照組 之間在抗體水平中沒有顯著差異。
[0144] 如在圖5B中所示，在喂食D化25%)和D化5%)補充的飲食的鳥中，抗a-毒素 的血清抗體響應（在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后14天）與肥對照組相比表現(xiàn)出值得注意的增加。
[0145] 如在圖6A中所示，在用D(0. 25%)喂食的鳥中，抗化巧毒素的血清抗體（在產(chǎn)氣 芙膜梭菌感染后7天）與肥對照組相比表現(xiàn)出增加。
[0146] 如在圖6B中所示，在用D(0. 25%)喂食的鳥中，抗化巧毒素的血清抗體水平（在 產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后14天）與肥對照組相比表現(xiàn)出值得注意的增加。
[0147] 如在圖7A中所示，血清a-毒素水平在感染的用D化25%)和B(0. 5%)的組中 與未補充的和感染的肥對照相比顯著較低。
[0148] 如在圖7B中所示，血清化巧-毒素水平在感染的用D(0.化%，0. 5%)和B(0. 25〇/〇， 0.5%)的組中與未補充的和感染的肥對照相比是較低的。然而，組之間沒有顯著差異。
[0149] 概述此實施例而言，雞從解化起用普通飲食或用Amlan制品（C、Y、B、D，并與抗生 素VM比較）補充的飲食喂食，并且在實驗組和肥對照組之間比較抗肥的免疫力。喂食 D-補充的飲食并用巨型艾美球蟲和產(chǎn)氣芙膜梭菌共感染的雞表現(xiàn)出顯著增加的體重增加、 減少的傷損得分、對a-毒素或化巧毒素的血清抗體水平的提高和降低的血清a-毒素水 平。
[0150] 實施例6 :用于在肉雞中控制由產(chǎn)氣芙膜梭菌引起