粘土制品及其用圖
【專利說(shuō)明】粘±制品及其用途
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)和通過(guò)引用并入 本申請(qǐng)要求分別提交于2012年10月2日和2013年3月15日的分別題名 為"CLAY-CONTAININGCOMPOSITIONTHATALLEVIATESEFFECTSOFBACTERIAL EXOTOXIN-ASSOCIATEDDISEASE(緩解細(xì)菌外毒素相關(guān)疾病的影響的含粘±的組合）"和 "CLAY,AYEASTPRODUCTANDGLUTAMATEBLEND邸PRODUCTANDUSEST肥RE0F(粘±， 酵母制品和谷氨酸鹽滲合的制品及其用途）"的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)系列號(hào)61/708, 763和 61/792, 382的權(quán)益和優(yōu)先權(quán)。
[0002] 上述申請(qǐng)和其中或在其審查期間引用的所有文件（"申請(qǐng)引用的文件"）和在申請(qǐng) 引用的文件中引用或參考的所有文件，和本文中引用或參考的所有文件r本文中引用的文 件"），和在本文引用的文件中引用或參考的所有文件，與本文中或在通過(guò)引用并入本文的 任何文件中提及的任何制品的任何制造商的說(shuō)明書(shū)、描述、產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)和產(chǎn)品表單一起特 此通過(guò)引用并入本文，并可W應(yīng)用于本發(fā)明的實(shí)踐中。更具體而言，所有參考的文件通過(guò)引 用而并入的程度如同各個(gè)單獨(dú)的文件被具體地和單獨(dú)地指出通過(guò)引用并入。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本申請(qǐng)?jiān)O(shè)及粘±、酵母制品和任選谷氨酸鹽的混合物及其用途，特別是用于減輕 腸疾病的影響的用途。
[0004] 發(fā)明背景 梭菌屬（Clostridium)是細(xì)菌屬，其分泌在家禽、動(dòng)物和人中引起疾病的毒素。厭氧的 細(xì)菌病原體對(duì)于農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)是嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。梭菌家族的細(xì)菌代表特定的負(fù)擔(dān)，因?yàn)檫\(yùn)些 細(xì)菌在家禽和其它經(jīng)濟(jì)上有價(jià)值的家養(yǎng)動(dòng)物中引起嚴(yán)重的疾病。用W控制運(yùn)些生物體的先 前的努力依賴于衛(wèi)生措施和在動(dòng)物飲食中抗生素的給予。
[0005] 壞死性腸炎（肥）是在現(xiàn)代肉雞群中最常見(jiàn)的和經(jīng)濟(jì)上毀滅性細(xì)菌疾病。它是由 產(chǎn)氣芙膜梭菌（c/o別扣? 化easO引起的傳染性疾病，所述產(chǎn)氣芙膜梭菌是革蘭氏 陽(yáng)性、厭氧細(xì)菌，其可存在于±壤、垃圾、灰塵中，并在健康鳥(niǎo)類的腸中處于低水平。產(chǎn)氣芙 膜梭菌僅在它從不產(chǎn)生毒素的類型轉(zhuǎn)化為產(chǎn)生毒素的類型時(shí)引起肥。
[0006] 存在五種類型的產(chǎn)氣芙膜梭菌（A、B、C、D和巧，其產(chǎn)生多種毒素（a、P、e、I 和CP巧。a-毒素一-一種酶（憐脂酶C)被相信是肥的發(fā)生的關(guān)鍵。然而，最近的研究 已表明不產(chǎn)生a-毒素的隔離群（isolate)仍可引起疾病。此外，稱為化巧的新毒素最近 在引起疾病的產(chǎn)氣芙膜梭菌隔離群中被鑒定出。感染的鳥(niǎo)的腸是脆弱的并因由毒素引起的 肉眼損害和氣體腫脹。在NE的急性形式下，鳥(niǎo)常常在表現(xiàn)出臨床征兆之前死亡。然而，在 其亞臨床形式下，該疾病對(duì)于生產(chǎn)者而言更加是經(jīng)濟(jì)上的損害。該疾病的通常觀察到的癥 狀隨著鳥(niǎo)的年齡而變化。
[0007] 在本領(lǐng)域中仍存在對(duì)保護(hù)集中飼養(yǎng)的家養(yǎng)動(dòng)物(其包括禽類，例如雞）免于梭菌種 類的感染的安全、經(jīng)濟(jì)和有效的方法的需要。引起疾病的梭菌屬引起人受苦和在家畜中的 經(jīng)濟(jì)損失兩者。用W干預(yù)運(yùn)些疾病的成本有效的方式會(huì)有助于疾病管理系統(tǒng)。
[0008] 在此申請(qǐng)中對(duì)任何文件的引用或識(shí)別并非承認(rèn)運(yùn)類文件可用作本發(fā)明的現(xiàn)有技 術(shù)。
[000引發(fā)明概述 本發(fā)明設(shè)及抗毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、對(duì)粘膜細(xì)胞提供能量的組分或其組合，其對(duì)于減羥基 于梭菌屬或球蟲(chóng)目（coccidia)的疾病或其它腸疾病的影響或就一般改善胃腸健康或功能 而言可W是有用的。
[0010] 申請(qǐng)人已經(jīng)在體外表明某些粘±可吸附來(lái)自艱難梭菌（別ri扣y曲扣//iciie) 和產(chǎn)氣芙膜梭菌的毒素。申請(qǐng)人已經(jīng)在體外表明某些粘±或粘±制劑可緩解雞中的壞死性 腸炎(與產(chǎn)氣芙膜梭菌相關(guān)的疾病)。申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)粘±或粘±制劑可在體外結(jié)合梭菌屬的毒 素并且粘±或粘±制劑可緩解由產(chǎn)氣芙膜梭菌引起的疾病，和可能的其它梭菌屬引起的疾 病。
[0011] 申請(qǐng)人也發(fā)現(xiàn)粘±可吸附由艱難梭菌和產(chǎn)氣芙膜梭菌產(chǎn)生的外毒素。當(dāng)使用包括 產(chǎn)氣芙膜梭菌和球蟲(chóng)目（巨型艾美球蟲(chóng)（仿皿xi皿)）的攻擊模型時(shí)，發(fā)現(xiàn)滲合物(其 為粘±、酵母制品和一種形式的功能氨基酸的組合）幫助減輕肉雞中壞死性腸炎的影響。
[0012] 本發(fā)明設(shè)及抗毒素、免疫調(diào)節(jié)劑和對(duì)粘膜細(xì)胞提供能量的組分或其組合。有利地， 抗毒素可W是粘±，免疫調(diào)節(jié)劑可W是酵母制品和對(duì)細(xì)胞提供能量的組分可W是功能氨基 酸(例如谷氨酸鹽)。在特別有利的實(shí)施方案中，粘±可^是巧蒙脫±粘±，酵母制品可W 是季也蒙畢赤酵母（巧cAia巧/酵母制品和功能氨基酸可W是谷氨酸一鋼 ("MSG")。在另一有利實(shí)施方案中，混合物可包括約50-90% (w/w)的抗毒素、約10-50% (w/w)的免疫調(diào)節(jié)劑巧可為酵母制品）和約0.01-15% (w/w)的谷氨酸鹽。
[0013] 在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物或混合物可W是約80% (w/w)粘±、約10% (w/ W)的酵母制品和約10% (w/w)的谷氨酸鹽，或60% (>/\￥)粘±、約35% (w/w)的酵母制品和 約5% (w/w)-約10% (w/w)的谷氨酸鹽。
[0014] 本發(fā)明也包含本文公開(kāi)的用作飲食補(bǔ)充劑的組合物和/或混合物。在一個(gè)實(shí)施 方案中，補(bǔ)充劑可W是飼料的約0. 05% (w/w)-約0. 35%(w/w)、飼料的約0. 15% (w/w)-約 0. 25% (w/w)或飼料的約 0. 25% (w/w)。
[0015] 因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是不在本發(fā)明中包含任何先前已知的制品，制作該制品 的方法或使用該制品的方法W便申請(qǐng)人保留權(quán)利并特此公開(kāi)對(duì)任何先前已知制品、方法或 方法的放棄。另外注意：本發(fā)明不意圖在本發(fā)明的范圍內(nèi)包含不滿足USPT0 (35U.S.C. §112,第一段）或EP0巧PC的第83條）的書(shū)面描述和能夠?qū)嵤┮蟮娜魏沃破贰⒅谱髟?制品的方法或使用該制品的方法W便申請(qǐng)人保留權(quán)利和特此公開(kāi)對(duì)任何先前描述的制品、 制作該制品的方法或使用該制品的方法的放棄。
[001引注意：在此公開(kāi)中特別是在權(quán)利要求和/或段落中，諸如"包括"、"含有"等術(shù)語(yǔ)可 具有美國(guó)專利法中歸屬于其的含義；例如，它們可意指"包含"等并且諸如"基本上由……組 成"等術(shù)語(yǔ)具有在美國(guó)專利法中歸屬于其的含義，例如，它們?cè)试S沒(méi)有明確記載的要素，但 排除在現(xiàn)有技術(shù)中存在的或影響本發(fā)明的基礎(chǔ)或新穎特性的要素。
[0017] 運(yùn)些和其它實(shí)施方案由W下詳細(xì)描述公開(kāi)，或因W下詳細(xì)描述而顯而易見(jiàn)并包括 于W下詳細(xì)描述中。
[0018] 附圖簡(jiǎn)述 w下詳述(其通過(guò)舉例的方式給出，并不意圖將本發(fā)明僅限定于描述的具體實(shí)施方案） 可在與附圖結(jié)合的情況下得到最好的理解。
[0019] 圖1描繪了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的示意性概要。
[0020] 圖2描述了在肉雞中體重增加的比較，所述肉雞用與抗生素維吉霉素（VM)比較的 美國(guó)Oil-Dri公司的Amlan國(guó)際品牌（"Amlan")制品例如100%粘±制品做；與有機(jī)酸 和植物提取物滲合的粘±制品燈）；粘±和酵母制品的滲合物（C);粘±、酵母制品和谷氨 酸一鋼的滲合物（D)喂食，并用產(chǎn)氣芙膜梭菌（CP)攻擊W誘導(dǎo)壞死性腸炎。從巨型艾美球 蟲(chóng)感染的那天至CP感染后2天確定體重。將鳥(niǎo)在解化后第14天用巨型艾美球蟲(chóng)的10, 000 個(gè)形成抱子的卵囊感染。在巨型艾美球蟲(chóng)感染4天后，將鳥(niǎo)（除了在對(duì)照處理中的那些）與 ixi〇9cfuCP-起解育。
[002。 圖3描述了在肉雞中體重增加的比較，所述肉雞用Amlan制品例如B、Y、C、D喂食， 并與抗生素VM比較。從CP感染的那天至CP感染后7天確定體重增加。將鳥(niǎo)在解化后第 14天用巨型艾美球蟲(chóng)的10, 000個(gè)形成抱子的卵囊感染。在巨型艾美球蟲(chóng)感染4天后，將鳥(niǎo) 與lXl09CFUCP-起解育。
[002引圖4描述了膳食Amlan制品對(duì)腸傷損得分的影響。
[0023] 圖5A描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后7天時(shí)的抗a-毒素抗原的血清抗體響應(yīng)。
[0024] 圖5B描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后14天時(shí)的抗a-毒素抗原的血清抗體響應(yīng)。
[0025] 圖6A描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后7天時(shí)的抗化巧毒素抗原的血清抗體響應(yīng)。
[0026] 圖6B描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后14天時(shí)的抗化巧毒素抗原的血清抗體響應(yīng) 圖7A描繪了帶有Amlan制品的飲食補(bǔ)充對(duì)于血清毒素的影響影響。在產(chǎn)氣芙膜梭菌 感染后2天時(shí)收集血清并用于通過(guò)化ISA測(cè)量a-毒素的水平。
[0027] 圖7B描繪了帶有Amlan制品的飲食補(bǔ)充對(duì)血清毒素的影響。在產(chǎn)氣芙膜梭菌感 染后2天時(shí)收集血清并用于通過(guò)化ISA測(cè)量化tB-毒素的水平。
[0028] 圖8A描繪在第二個(gè)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中第0天-第21天的飼料轉(zhuǎn)化率的比較。在此實(shí)驗(yàn) 中，對(duì)肉雞(除了在未攻擊中的那些（無(wú)肥））攻擊W誘導(dǎo)壞死性腸炎并喂食非制品（肥）；如 先前實(shí)驗(yàn)中的粘±、酵母制品和谷氨酸一鋼的滲合物值）；具有不同包含比例的粘±、酵母 制品和谷氨酸一鋼值8)和使用不同酵母制品的那兩種制劑值X和D8X)，將運(yùn)些制品與抗生 素維吉霉素（VM)比較。在此實(shí)驗(yàn)中，在第14天時(shí)肉雞用大約5, 000個(gè)巨型艾美球蟲(chóng)（球 蟲(chóng)目的一株）的卵囊經(jīng)口攻擊，在第19、20和21天時(shí)給予它們產(chǎn)氣芙膜梭菌1〇8C化/ml的 肉湯培養(yǎng)物（除了未攻擊的對(duì)照處理（無(wú)肥)），所述產(chǎn)氣芙膜梭菌分離自產(chǎn)生a和化tB 兩種毒素的壞死性腸炎的臨床病例。此實(shí)驗(yàn)持續(xù)28天。大體上，從第0天到第21天間喂食 不同Amlan制品的鳥(niǎo)的飼料轉(zhuǎn)化率是在處于NE或VM處理中的那些之間的中間值。然而， 喂食制品D8X的鳥(niǎo)并不遵循運(yùn)樣的模式，其具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上和數(shù)字上與在運(yùn)時(shí)間段內(nèi)處于肥 處理中的那些同樣差的飼料轉(zhuǎn)化率。
[0029] 圖8B描繪了第14天-第21天的飼料轉(zhuǎn)化率。在第14天-第21天時(shí)間段內(nèi)喂 食處理DX的攻擊的鳥(niǎo)的飼料轉(zhuǎn)化率與處于NE處理中的鳥(niǎo)（其被攻擊但未喂食制品）相比 顯著較佳并且統(tǒng)計(jì)上等同于加入VM的飲食。
[0030] 圖8C描繪了第0天-第28天的飼料轉(zhuǎn)化率。除了D8X之外的所有制品與沒(méi)用制 品的肥相比顯著較佳。制品D和DX是測(cè)試的制品中最佳的，類似于處于VM處理的鳥(niǎo)，并 且與沒(méi)有給予肥攻擊的鳥(niǎo)相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)差異。
[003。 圖9A描繪了第0天-第28天的重量增力日。增加由VM與不用任何制品的肥對(duì)照 相比改善。當(dāng)與VM相比時(shí)D8統(tǒng)計(jì)上等同并且數(shù)字上較佳。所有其它制品是在不用制品的 肥和VM之間的中間值。
[0032] 圖9B描繪了第14天-第28天的重量增加。增加在第14天-第28天遵循與第 0天-第28天類似的模式，除了D8數(shù)字上等同于VM。
[003引圖10描繪傷損得分。喂食D8和D8X的鳥(niǎo)的傷損得分與喂食VM的鳥(niǎo)的相比較低 并且與沒(méi)有用肥攻擊的那些鳥(niǎo)相比可不具有統(tǒng)計(jì)上差異。
[0034] 圖11描繪了肥死亡率。除了D之外的所有制品與不用制品的肥攻擊的鳥(niǎo)相比 降低死亡率并等同于喂食VM的那些。
[0035] 圖12A描繪了在第S個(gè)體內(nèi)研究中肉雞中體重增加的比較，所述體重增加從巨型 艾美球蟲(chóng)感染那天到產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后2天確定。將鳥(niǎo)在解化后第14天時(shí)用10, 000個(gè) 巨型艾美球蟲(chóng)的形成抱子的卵囊感染。在巨型艾美球蟲(chóng)感染4天后，將鳥(niǎo)用IX1〇9cFU產(chǎn) 氣芙膜梭菌接種。在此實(shí)驗(yàn)中，有未攻擊的對(duì)照（Cont)、被攻擊W誘導(dǎo)壞死性腸炎但未喂食 制品的組（肥）、W0. 35、0. 25、0. 15和0. 05%包含的制品D制劑值35、D25、D15和D05)，也 包含的是W不同比例組合成分的制品值S，DSF，D8D8巧和在飲食中接收20g/噸的維吉 霉素的最后一組（VM)。
[0036] 圖12B描繪了與處于不用制品的壞死性腸炎攻擊對(duì)照中的鳥(niǎo)相比在體重增加中 的百分比增加的比較。肥是被攻擊W誘導(dǎo)壞死性腸炎但不喂食制品的組；VM是在飲食中接 收20g/噸的維吉霉素的組。
[0037] 圖13A描繪了在肉雞中體重增加的比較。從產(chǎn)氣芙膜梭菌感染的那天開(kāi)始并在產(chǎn) 氣芙膜梭菌感染后7天時(shí)終止確定體重增加。
[0038] 圖13B描繪了與不用制品的壞死性腸炎攻擊對(duì)照相比在體重增加中的百分比增 加的比較。
[0039] 圖14描繪了制品對(duì)腸傷損得分的影響，得分是在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后第2天檢查 的5只鳥(niǎo)/組的平均數(shù)。
[0040] 圖15A描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后2天時(shí)抗a-毒素抗原的血清抗體響應(yīng)。
[0041] 圖15B描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后7天時(shí)抗a-毒素抗原的血清抗體響應(yīng)。
[0042] 圖16A描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后2天時(shí)抗化巧毒素抗原的血清抗體響應(yīng)。
[0043] 圖16B描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后7天時(shí)抗化巧毒素抗原的血清抗體響應(yīng)。
[0044] 圖17A描繪了飲食補(bǔ)充對(duì)血清a-毒素水平的影響。在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后第2 天時(shí)收集血清并用于通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定巧LISA)測(cè)量a-毒素的水平。
[0045] 圖17B描繪了飲食補(bǔ)充對(duì)血清化tB-毒素水平的影響。在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后第 2天時(shí)收集血清并用于通過(guò)化ISA測(cè)量化tB-毒素的水平。
[0046] 圖18A-B描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后2天時(shí)在空腸上皮內(nèi)的淋己細(xì)胞中的細(xì)胞 因子的產(chǎn)生。
[0047] 圖18C-D描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后2天時(shí)在鳥(niǎo)的空腸上皮內(nèi)的淋己細(xì)胞中細(xì) 胞因子的產(chǎn)生。
[004引圖19A-C描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后2天時(shí)在鳥(niǎo)的脾臟中細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
[0049] 圖19D-F描繪了在產(chǎn)氣芙膜梭菌感染后2天時(shí)在鳥(niǎo)的脾臟中細(xì)胞因子的