苯磷硫胺用于治療核糖代謝相關(guān)疾病的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體設(shè)及苯憐硫胺的一種改善核糖代謝失調(diào)引起的相 關(guān)疾病，如糖尿病、老年癡呆、動脈粥樣硬化等疾病的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 自從1815年，法國化學(xué)家化evreulME發(fā)現(xiàn)糖尿病患者尿液的甜味是由葡萄糖所 致，歷時200年，糖尿病被認為是一組W慢性血葡萄糖（簡稱血糖）水平增高為特征的代謝 病群，即葡萄糖代謝失調(diào)是糖尿病發(fā)生發(fā)展的最主要原因[1]。由于葡萄糖對蛋白質(zhì)的非酶 促糖基化（glycation)，導(dǎo)致體內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)改變與功能喪失巧]。非酶促糖基化產(chǎn)生的糖 基化終末產(chǎn)物（advancedglycationendpro化cts，AGEs)具有較強的細胞毒性，在體內(nèi)蓄 積，使細胞代謝發(fā)生素亂甚至死亡，是糖尿病并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的主要原因巧]
[0003] 體內(nèi)核糖過度蓄積能否導(dǎo)致相關(guān)疾病，值得高度重視，其理由是：a. 2型糖尿病患 者尿核糖顯著高于正常對照，提示其血中的核糖水平也相對較高；b.核糖與葡萄糖一樣， 廣泛存在與機體內(nèi)的各個組織器官[4] ;c.核糖能夠迅速導(dǎo)致蛋白質(zhì)糖基化，生成AGES,相 比之下，葡萄糖則明顯較慢[5] ;d.相同條件下，蛋白質(zhì)核糖糖基化產(chǎn)物的細胞毒性遠較葡 萄糖的產(chǎn)物強[6, 7] ;e.核糖容易透過血腦屏障巧]，引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)蛋白質(zhì)糖基化和 AGES的累積巧].
[0004] 老年癡呆也可W稱為3型糖尿病，血糖升高是癡呆的危險因素之一，尤其是糖尿 人體內(nèi)的糖化血紅蛋白升高后危害更大。研究發(fā)現(xiàn)，按照每千克體重腹腔注射2g核糖到小 鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)小鼠血清蛋白和腦內(nèi)蛋白質(zhì)的糖基化水平提高了，并且提高了腦內(nèi)Tau蛋白 憐酸化水平，腦內(nèi)的海馬區(qū)的星型膠質(zhì)細胞激活，小鼠的空間記憶能力出現(xiàn)損傷。而用相同 濃度的葡萄糖則沒有檢測到AGES的明顯蓄積[10]。所W，運不僅提示我們，AGES在腦內(nèi)積 累導(dǎo)致認知功能損傷，并且相比較葡萄糖，核糖誘導(dǎo)蛋白質(zhì)產(chǎn)生AGES的能力更強，生成的 產(chǎn)物毒性更大。

【發(fā)明內(nèi)容】
陽0化]本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)苯憐硫胺可W通過促進參與憐酸戊糖途徑中的轉(zhuǎn)酬醇酶活 性，達到降低核糖的目的。從而改善核糖代謝失調(diào)引起的相關(guān)疾病，如糖尿病、老年癡呆、動 脈粥樣硬化等。
[0006] 具體地，本發(fā)明設(shè)及W下各項：
[0007] 1.苯憐硫胺用于制備降低體內(nèi)核糖水平的藥物的用途。
[0008] 2.苯憐硫胺用于制備減少內(nèi)源核糖蓄積后毒性的藥物的用途。
[0009] 3.苯憐硫胺用于制備降低體內(nèi)糖化血紅蛋白水平的藥物的用途。
[0010] 4.根據(jù)1-3任一項所述的用途，所述降低體內(nèi)核糖水平、減少內(nèi)源核糖蓄積后毒 性，W及低體內(nèi)糖化血紅蛋白水平，通過促進憐酸戊糖途徑中的轉(zhuǎn)酬醇酶活性來實現(xiàn)。
[0011] 5.苯憐硫胺用于制備通過促進參與憐酸戊糖途徑中的轉(zhuǎn)酬醇酶活性，治療核糖代 謝失調(diào)引起的相關(guān)疾病的藥物的用途。
[0012] 6.苯憐硫胺用于制備通過降低體內(nèi)核糖水平，治療核糖代謝失調(diào)引起的相關(guān)疾病 的藥物的用途。
[001引 7.根據(jù)5或6所述的用途，所述核糖代謝失調(diào)引起的相關(guān)疾病包括糖尿病、老年癡 呆、動脈粥樣硬化。
【附圖說明】
[0014]圖1 :大鼠體重（A)、血糖水平度)、血清中膜島素水平（C)、血清中膜島素C膚水平 值)、膜島素抗體水平巧)、膜高血糖素水平（巧。
[001引圖2 :ZDF大鼠誘導(dǎo)前與誘導(dǎo)后尿核糖（A)、尿葡萄糖做水平變化，說明2型糖尿 病中核糖與葡萄糖濃度都會顯著升高（P<0. 001) ;(C)苯憐硫胺灌胃四個月中核糖水平變 化，2型糖尿病組尿核糖水平始終高于對照組，苯憐硫胺灌胃4周后，灌胃組尿核糖水平要 顯著低于2型糖尿病組，與對照組無顯著差異；灌胃8周后，停止灌胃苯憐硫胺，尿核糖水平 顯著升高，與2型糖尿病組無顯著差異；說明苯憐硫胺能顯著降低尿核糖水平，是維持尿核 糖水平正常的關(guān)鍵因素。
[0016] 圖3 :灌胃四個月后，苯憐硫胺灌胃組導(dǎo)致血清核糖水平（A)與糖化血紅蛋白水平 度）都顯著低于2型糖尿病組大鼠，說明苯憐硫胺灌胃不僅顯著降低核糖水平，也降低了糖 化血紅蛋白水平。
[0017] 圖4 :灌胃四個月后，苯憐硫胺灌胃組的肝臟（A)、腎臟做和血清似中糖基化終 末產(chǎn)物（AGES)顯著低于2型糖尿病組。
[001引圖5 :灌胃四個月后，苯憐硫胺灌胃組的轉(zhuǎn)酬醇酶（TK)的mRNA水平（C、C')與蛋 白質(zhì)表達水平（A、B)顯著高于2型糖尿病組。
【具體實施方式】
[0019]動物：
[0020] 2型糖尿病鼠ZDF大鼠瘦型對照組府/+)，模型組府/化)，購自北京維通利華公 司。均飼養(yǎng)于無病原體的專用IVC鼠籠中，提供SPF級鼠飼料和無菌飲用水；所有動物實驗 均依照美國國立衛(wèi)生研究院（NIH)頒布的實驗動物飼養(yǎng)與使用守則，并經(jīng)中國科學(xué)院生物 物理研究所生物學(xué)研究道德委員會的批準（SYXK2013-33)。 陽02U 試劑：
[0022] 1%簇甲基纖維素鋼（美國sigma公司），苯憐硫胺（中國西安瑞林生物科 技有限公司），苯憐硫胺溶液濃度為75mg/ml，溶于1%簇甲基纖維素鋼中。高脂飼料F*u;rina#5008 (北京維通利華公司），anti-AGEs抗體購自TransGenic公司（日本）； anti-G6PD抗體購自Invitrogen公司（美國）；Anti-TK,Anti-P-actin抗體購自Sigma公 司（美國）。大鼠糖化血紅蛋白Alc(GHbAlc)酶聯(lián)免疫試劑盒燈SZ品牌，中國上海）。血 清中膜島素，膜島素C膚，膜島素抗體，膜高血糖素濃度檢測試劑購自北方生物技術(shù)研究所 (中國北京）。 柳2引 儀器：
[0024] LC-20A高效液相色譜儀UV-HPLC(日本島津公司）。Rotor-GeneQ實時巧光定量 PCR分析儀（德國QIAGEN公司）。小型垂直電泳儀（美國伯樂公司）。DFM-96型多管放射 免疫計數(shù)器（中國眾誠機電技術(shù)公司）。 陽〇2引實驗步驟：
[0026] 1.購買8周ZDF大鼠瘦型對照組府/+)7只，ZDF大鼠模型組府/fa) 21只，用高 脂飼料化rina#5008飼養(yǎng)所有ZDF大鼠4周，誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生糖尿病，隨后隨機分成3組，每 組7只。包括2型糖尿病組（也稱為糖尿病組），灌胃苯憐硫胺組（也稱為灌胃組）和恢 復(fù)組。ZDF大鼠對照組（也稱為對照組）為瘦型大鼠，是不發(fā)生2型糖尿病的健康對照組， 2型糖尿病組為肥胖大鼠并發(fā)發(fā)生2型糖尿病，同時灌胃1%簇甲基纖維素鋼（苯憐硫胺的 溶劑）?；謴?fù)組為灌胃苯憐硫胺兩個月后，繼續(xù)灌胃1%簇甲基纖維素鋼兩個月。
[0027] 2.用大鼠代謝籠DXL-D(江蘇蘇杭科技器材有限公司，中國），收集高脂飼料誘導(dǎo) 前、誘導(dǎo)后的大鼠尿液，灌胃后每隔兩周收集尿液一次。收集的尿液馬上用高效液相色譜 0PLC)檢測核糖濃度。
[0028] 3.開始灌胃苯憐硫胺溶液四個月后，用10%水合氯醒麻醉大鼠，摘眼球取血，離 屯、后取血清，用于檢測血清中葡萄糖、膜島素、膜島素C膚、膜島素抗體與膜高血糖素等指 標。然后用生理鹽水進行灌流，清除組織中的血液。灌流30分鐘后，在冰上取動物的肝臟、 腎臟、大腦皮層、海馬組織，置于液氮速凍后放于-80°C保存。
[0029] 4. 0. 1克組織加1mlRIPA裂解液（北京碧云天生物科技公司，中國），按照1:100 加入蛋白酶抑制劑（上海生工生物工程有限公司，中國），用研磨器勻漿，離屯、后取上清。加 入上樣緩沖液，沸水浴lOmin，上樣于10%SDS-PAGE進行電泳分離（濃縮膠：100V