藏紅花在緩解果蠅腸道炎癥損傷中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藏紅花提取物在緩解果蠅腸道炎癥損傷方面的應(yīng)用，涉及果蠅天然免疫技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]與哺乳動(dòng)物腸道相比，果蠅的腸道結(jié)構(gòu)及細(xì)胞組成相對(duì)簡(jiǎn)單，而且調(diào)節(jié)腸道功能的相關(guān)信號(hào)途徑都與哺乳動(dòng)物相似。果蠅通過(guò)腸道干細(xì)胞通過(guò)增殖與分化來(lái)補(bǔ)充凋亡細(xì)胞以維持自身腸道的完整性和內(nèi)穩(wěn)態(tài)。在果繩中，一個(gè)腸道干細(xì)胞(Intestinal stemcell, ISC)進(jìn)行不對(duì)稱分裂通?？僧a(chǎn)生兩個(gè)細(xì)胞，其中一個(gè)細(xì)胞保持干細(xì)胞特性，另一個(gè)為短暫不分裂的成腸細(xì)胞(Enteroblast’EB)。正常情況下，腸粘膜屏障中的正常菌群與宿主之間具有一定的平衡。不良的外界環(huán)境，感染等條件下均會(huì)引起腸道內(nèi)穩(wěn)態(tài)失調(diào)，進(jìn)而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生全身或局部炎癥反應(yīng)。病原體通過(guò)腸道進(jìn)入機(jī)體后，誘導(dǎo)腸道表皮細(xì)胞激活一系列免疫應(yīng)答反應(yīng)，最終通過(guò)產(chǎn)生抗菌肽和活性氧將病原體殺死。由于果蠅只有天然免疫系統(tǒng)，因而果蠅腸道已成為研究天然免疫的重要模型。利用模式生物果蠅研究腸道免疫，可以為揭示人類腸道相關(guān)疾病的發(fā)生機(jī)制提供重要理論依據(jù)。
[0003]藏紅花(Crocus sativus L.)是鸞尾科番紅花屬球根類草本植物，原產(chǎn)自希臘、西班牙和伊朗等國(guó)，在我國(guó)被列為珍稀名貴中藥材。藏紅花具有很強(qiáng)的活血化瘀的功效，一直被用于臨床。最新研究發(fā)現(xiàn)藏紅花具有良好的抗癌活性，而且?guī)缀鯚o(wú)毒副作用。然而，目前尚無(wú)對(duì)藏紅花提取物用于緩解腸道炎癥損傷的相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于揭示出藏紅花提取物可應(yīng)用于緩解腸道炎癥損傷。
[0005]上述目的是通過(guò)以下方案予以實(shí)現(xiàn)的:
[0006]首先給果蠅喂食有毒試劑(SDS和DSS)來(lái)建立果蠅腸道炎癥損傷模型，將藏紅花提取物進(jìn)行果蠅生存率、腸道上皮死亡細(xì)胞數(shù)量、腸道形態(tài)學(xué)觀察等實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)藏紅花提取物具有較好的抗炎活性，可用于制備抗炎藥物，尤其是治療腸道炎癥的藥物。
【附圖說(shuō)明】
[0007]圖1為藏紅花提取物對(duì)SDS和DSS處理后果蠅生存率的影響；
[0008]圖2為高效液相色譜法檢測(cè)藏紅花水提物中有效成分含量；
[0009]圖3為藏紅花提取物對(duì)SDS處理后果蠅腸道細(xì)胞染色結(jié)果的影響；
[0010]圖4為藏紅花提取物對(duì)SDS處理后果蠅腸道形態(tài)的影響；
【具體實(shí)施方式】
[0011]下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明:
[0012]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:野生型Wms品系黑腹果繩(Drosophila melanogaster)為實(shí)驗(yàn)室保存，esgGal4 UAS-GFP由北京大學(xué)襲榮文教授提供。果蠅培養(yǎng)溫度為25°C，相對(duì)濕度60%。
[0013]果蠅培養(yǎng)基的配制:對(duì)照組培養(yǎng)基配方為玉米粉14.2g、瓊脂1.lg、酵母粉3.3g、大豆粉1.9g、白糖17g、丙酸0.94mL、去離子水200mL。實(shí)驗(yàn)組中加入與對(duì)照組去離子水等體積的藏紅花提取液，實(shí)驗(yàn)組中藏紅花提取物的濃度為I %。
[0014]本實(shí)施例涉及的各實(shí)驗(yàn)試劑均為市售分析純:SDS和DSS等。
[0015]實(shí)施例1藏紅花水提取液的制備
[0016]稱取藏紅花粉末2g，加入300mL去離子水隔夜浸泡12h，中火熬制3h，過(guò)濾，濾渣后加入200mL去離子水用同樣的方法提取I次，合并2次濾液濃縮至50mL，即得到質(zhì)量濃度為40mg/mL(4% )的中草藥水提取液。4°C密封儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br>[0017]實(shí)施例2高效液相色譜法檢測(cè)藏紅花水提取物中有效成分含量
[0018]以藏紅花主要成分一西紅花苷I為標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品(圖1A)和藏紅花水提取物進(jìn)行高效液相色譜(圖1B)檢測(cè)。經(jīng)檢測(cè)藏紅花水提取物中西紅花苷I的含量為0.181%。
[0019]實(shí)施例3藏紅花提取物對(duì)SDS和DSS處理后果蠅生存率的影響
[0020]以普通培養(yǎng)基中培養(yǎng)的果蠅作為對(duì)照組，藏紅花培養(yǎng)基中培養(yǎng)的果蠅作為實(shí)驗(yàn)組。分別隨機(jī)收集對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組羽化了 3?5天的果蠅，每組中雌雄果蠅各15只。各組果蠅饑餓處理2h后轉(zhuǎn)移到放有5層濾紙的果蠅管中，向?yàn)V紙中分別加入5%蔗糖溶液包含0.6% SDS,4% DSS等致炎因子使濾紙充分潤(rùn)濕，每24h更換一次濾紙并記錄果蠅死亡數(shù)。
[0021]結(jié)果顯示:SDS處理果蠅6天后，對(duì)照組生存率降到3.3%，而喂食藏紅花的實(shí)驗(yàn)組生存率為35.6% (*#P〈0.001)，與對(duì)照組相比提高了 32.3% (圖2A)。另外，DSS處理果蠅7天后，對(duì)照組的生存率僅為13.3%，而喂食藏紅花的實(shí)驗(yàn)組生存率分別為67.8%(***P〈0.001)，比對(duì)照組提高了 54.5% (圖2B)。上述結(jié)果說(shuō)明，藏紅花提取物可緩解SDS和DSS誘導(dǎo)的腸道炎癥損傷，顯著地提高了果蠅的生存率。
[0022]實(shí)施例4藏紅花提取物對(duì)SDS處理后果蠅腸道細(xì)胞免疫染色結(jié)果的影響
[0023]隨機(jī)收集對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組羽化3?4天的雌果蠅喂食含5%蔗糖的SDS(0.6% )溶液96h，顯微鏡下提取10?15條果蠅腸道于PBS中，7-AAD室溫染色30min，多聚甲醛固定lOmin，DAPI染色lOmin，甘油封片后焚光顯微鏡下觀察并拍照。
[0024]結(jié)果顯示:對(duì)照組的腸道上皮細(xì)胞均出現(xiàn)大量死亡，而喂食藏紅花的實(shí)驗(yàn)組中腸道上皮細(xì)胞的死亡數(shù)量明顯減少，結(jié)果見(jiàn)圖3。
[0025]實(shí)施例5藏紅花對(duì)SDS處理后果蠅腸道形態(tài)的影響
[0026]收集羽化了 3?4天的雌果蠅，SDS處理后，顯微鏡下提取10?15條果蠅腸道于PBS中，自然光下觀察腸道形態(tài)變化。
[0027]結(jié)果顯示:SDS處理的對(duì)照組由于腸道上皮細(xì)胞大量死亡，長(zhǎng)度明顯縮短，而且在中后腸位置出現(xiàn)了明顯的黑色素瘤。當(dāng)喂食藏紅花時(shí)，與對(duì)照組相比腸道長(zhǎng)度明顯增加，而且沒(méi)有出現(xiàn)黑色素瘤，結(jié)果見(jiàn)圖4。
[0028]綜上所述，通過(guò)對(duì)果蠅生存率、腸道細(xì)胞染色及腸道形態(tài)的分析，我們認(rèn)為藏紅花提取物可緩解果蠅腸道炎癥損傷。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.藏紅花提取物在緩解果蠅腸道炎癥損傷中的應(yīng)用，其特征在于: 藏紅花水提物能提高果蠅喂食SDS或DSS后的生存率，同時(shí)緩解SDS引起的腸上皮細(xì)胞的凋亡及腸道黑色素瘤的產(chǎn)生。
【專利摘要】本發(fā)明是藏紅花提取物在緩解果蠅腸道炎癥損傷中的應(yīng)用。采用水提法得到藏紅花提取物，對(duì)藏紅花提取物進(jìn)行果蠅腸道炎癥損傷模型修復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明藏紅花提取物具有較好的抗炎作用，可用于制備抗炎藥物,尤其是抗腸道炎癥損傷的藥物。
【IPC分類】A61P29/00, A61P1/00, A61K36/88
【公開(kāi)號(hào)】CN105106476
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510623731
【發(fā)明人】金麗華, 于世超, 柳宗琳
【申請(qǐng)人】東北林業(yè)大學(xué), 金麗華, 于世超
【公開(kāi)日】2015年12月2日
【申請(qǐng)日】2015年9月28日