病毒唑在制備治療急性淋巴細(xì)胞白血病的藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及病毒唑在制備治療急性淋巴細(xì)胞白血病的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL)是一種起源于淋巴細(xì)胞的B系或T系細(xì)胞在骨髓內(nèi)異 常增生的惡性腫瘤性疾病。異常增生的原始細(xì)胞可在骨髓聚集并抑制正常造血功能，同時 也可侵及骨髓外的組織，如腦膜、淋巴結(jié)、性腺、肝等。我國曾進(jìn)行過白血病發(fā)病情況調(diào)查， ALL發(fā)病率約為0.67/10萬。在油田、污染區(qū)發(fā)病率明顯高于全國發(fā)病率。ALL兒童期（0~ 9歲）為發(fā)病高峰，可占兒童白血病的70%以上。ALL在成人中占成人白血病的20%左右。 [0003] Ph染色體是由第9號和第22號染色體易位t(9 ;22) (q34 ;qll)，導(dǎo)致bcr-abl融 合基因的形成，編碼具有高酪氨酸激酶活性的BCR-ABL融合蛋白，通過激活下游多條生長 信號通路，使造血細(xì)胞不依賴于造血刺激因子而生長、增殖，并且抵抗凋亡，最終發(fā)生惡性 轉(zhuǎn)化而發(fā)生白血病。Ph +急性淋巴細(xì)胞白血病（Ph+ALL)見于2%~5%兒童和20%~30% 成人急性淋巴細(xì)胞白血病，年齡超過50歲者甚至高達(dá)50%。
[0004] BCR-ABL酪氨酸激酶抑制劑（TKI)是Ph+白血病治療的里程牌，伊馬替尼是首個獲 準(zhǔn)上市的選擇性BCR-ABL酪氨酸激酶抑制劑。TKI問世以前，Ph+ALL預(yù)后極差，盡管誘導(dǎo)化 療的完全緩解率CR達(dá)60 %~90 %，但CR持續(xù)時間僅為9~16個月，單純化療5年生存率 僅10 - 20 %。異基因造血干細(xì)胞移植是根治Ph+ALL的手段，但卻明顯受限于供體的獲得及 移植相關(guān)的高死亡率。雖然TKI顯著改善了 Ph+ALL的預(yù)后，TKI與化療聯(lián)合使初治Ph+ALL 的完全緩解率達(dá)90%以上，但緩解持續(xù)時間短，復(fù)發(fā)率很高。而在復(fù)發(fā)、難治的Ph+ALL，伊 馬替尼僅能使19%的患者獲得完全血液學(xué)緩解，療效持續(xù)時間2-3月，中位生存時間4. 9-9 個月。耐藥是伊馬替尼在Ph+ALL中療效不持久的最重要因素。第二代酪氨酸激酶抑制劑 達(dá)沙替尼、尼羅替尼等雖然可以在一定程度上克服伊馬替尼耐藥，迅速改善患者的血液學(xué)、 遺傳學(xué)指標(biāo)，完全緩解率達(dá)90%以上，但還是因為耐藥出現(xiàn)使得緩解期也很短暫。
[0005] 病毒唑，病毒唑又名利巴韋林、三氮唑核苷、尼斯可等，是廣譜強(qiáng)效的抗病毒藥物， 目前廣泛應(yīng)用于病毒性疾病的防治，未見將其用于治療急性淋巴細(xì)胞白血病的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供病毒唑在制備治療急性淋巴細(xì)胞白血病的藥物中的用途。
[0007] 本發(fā)明提供了病毒唑在制備治療急性淋巴細(xì)胞白血病的藥物中的用途。
[0008] 其中，所述藥物是以病毒唑為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制 劑。
[0009] 其中，所述制劑為口服制劑。
[0010] 其中，所述口服制劑是膠囊劑、片劑。
[0011] 其中，所述治療急性淋巴細(xì)胞白血病的藥物是治療Ph+急性淋巴細(xì)胞白血病的藥 物。
[0012] 本發(fā)明還提供了一種治療急性淋巴細(xì)胞白血病的藥物，它是以病毒唑為活性成 分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑。
[0013] 其中，所述制劑為口服制劑。
[0014] 其中，所述口服制劑是膠囊劑、片劑。
[0015] 本研究發(fā)現(xiàn)病毒唑能夠有效治療急性淋巴細(xì)胞白血病，特別是對Ph+急性淋巴細(xì) 胞白血病的療效確切，可以制備成為治療急性淋巴細(xì)胞白血病的藥物，為臨床治療急性淋 巴細(xì)胞白血病提供了一種新的選擇。
[0016] 下面通過【具體實施方式】對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但是并不是對本發(fā)明的限 制，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述 基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
【附圖說明】
[0017] 圖1病毒唑作用于Ph+淋巴細(xì)胞株的抗白血病作用的結(jié)果。A.不同濃度（30、60、 90、120 μΜ)的病毒唑分別作用于SUP-B15細(xì)胞持續(xù)24、48、72、96h，用MTT法檢測細(xì)胞增 殖，圖中顯不的是細(xì)胞的生存率。
[0018] 圖2病毒唑?qū)UP-B15細(xì)胞株的促凋亡作用的結(jié)果。A. 60 μ M病毒唑分別作用于 SUP-B15細(xì)胞24、48、72h，用流式分析annexinV-FITC和PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡率。PBS作 為陰性對照。
[0019] 圖3病毒唑可抑制SUP-B15細(xì)胞株的mT0R/eIF4E和MEK/ERK/Mnkl/eIF4E信號通 路表達(dá)結(jié)果。A. SUP-B15細(xì)胞被不同濃度（30、60、90μΜ)的病毒唑作用48h后，提取蛋白， western bolt檢測mT0R/eIF4E信號通路以及Mcl-I的表達(dá)。B.SUP-B15細(xì)胞被60 μΜ病 毒唑分別作用24、48、72h后，用western bolt檢測mT0R/eIF4E信號通路以及Mcl-I的表 達(dá)。
[0020] 圖4病毒唑單用可抑制SUP-B15細(xì)胞株eIF4F復(fù)合物的合成的結(jié)果。A. SUP-15 細(xì)胞被病毒唑（30 μ M)作用48h。用500 μ I RIPA裂解液裂解I X IO7個細(xì)胞，離心所得總 蛋白的一半上清液中加入7m-GTP_Sepharose beads (GE Healthcare)孵育l_2h，離心所得 beads中加入50ul SDS-PAG上樣緩沖液，煮沸7分鐘，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋 白，用一抗eIF4G、eIF4E和4E-BP1進(jìn)行免疫印跡。GAPDH作為內(nèi)參水平。
【具體實施方式】
[0021] 實驗例1本發(fā)明藥物治療急性淋巴細(xì)胞白血病的作用
[0022] 1.實驗材料
[0023] I. 1細(xì)胞株
[0024] SUP-B15人類Ph+急性淋巴細(xì)胞細(xì)胞株，表達(dá)P190BCR-ABL融合基因 （the American Type Culture Collection, CRL-1929)
[0025] 各類急性白血病及慢性粒細(xì)胞白血病原代細(xì)胞（Ph+ALL，PhALL，AML，CML):均來 自四川大學(xué)華西醫(yī)院血液科，采集外周血及骨髓標(biāo)本前得到書面同意并獲得醫(yī)院倫理委員 會的通過和批準(zhǔn)。收集分離方法：選取符合納入標(biāo)準(zhǔn)的急性白血病患者，于無菌條件下抽 取外周血或骨髓3-4ml于肝素抗凝的無菌試管中。取15ml無菌離心管，將所取外周血加入 等體積無菌PBS溶液中，按1:1比例稀釋。另取一只15ml無菌離心管，預(yù)先加入等體積人 淋巴細(xì)胞分離液，將稀釋后的外周血沿管壁緩慢加入淋巴細(xì)胞分離液試管內(nèi)，使二者形成 清晰界面，以2000RPM(每秒2000轉(zhuǎn)）離心25min。取出離心管，吸取中間層單個核細(xì)胞， 置于另一離心管中，PBS洗滌細(xì)胞2次，1000RPM離心5min，棄去上清，用10%胎牛血清的 RPMI-1640培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
[0026] 1. 2實驗藥物
[0027] 病毒唑（RIB) :sigma公司
[0028] 1. 3實驗試劑
[0029] 小牛血清、青鏈霉素 、RPMI 1640、MM培養(yǎng)基為hyclo公司產(chǎn)品；MTT為sigma 公司產(chǎn)品；十二烷基硫酸鈉（SDS)為Sigma公司產(chǎn)品，異丁醇、濃鹽酸為天津天大化學(xué)試 劑廠產(chǎn)品；BCA蛋白定量試劑盒為Thermo公司產(chǎn)品；RIPA buffer為碧云天公司產(chǎn)品；人 淋巴細(xì)胞分離液$。〇11液）為天津灝陽公司產(chǎn)品；一抗：？41(1'(5473)、？111'01?(52448)、 P-4EBP1 (T37/46)、p-eIF4E (S209)、p-cRaf (Ser338)、p-MEKl/2 (Ser217/221)，p-ERKl/2 (T hr202/Tyr204)、p-Mnkl (Thr 197/202)、p-Lyn(Tyr396)、Mcl-I、AKT、mT0R、4E-BPl、eIF4E、 MEK、Mnkl、Cyclin Dl (美國 Cell Signaling Technology 公司），GAPDH 和辣根過氧化物酶 標(biāo)記的二抗購自碧云天公司。
[0030] L 4實驗儀器
[0031] 超凈工作臺：蘇州凈化設(shè)備公司
[0032] CO2恒溫培養(yǎng)箱