專利名稱：醋酸潑尼松龍的生產方法
技術領域：
本發(fā)明屬于微生物制藥及醫(yī)藥工程領域，具體涉及一種以簡單節(jié)桿菌 為菌種、醋酸氫化可的松為底物并采用微生物轉化方法生產醋酸潑尼松龍 的方法。
背景技術：
醋酸潑尼松龍的結構式如下圖所示，其化學名為1le，17a，21-三羥 基孕甾-1， 4-二烯-3， 20-二酮-21-醋酸酯。醋酸潑尼松龍是一種腎上腺皮質 激素，能對抗細菌內毒素對機體的剌激反應，以減輕細胞損傷，充分保護 機體，適用于類風濕關節(jié)炎、風濕熱、紅斑狼瘡、硬皮病、皮肌炎、急性 淋巴白血病等，且極易自消化道吸收，其本身以活性形式存在，無需經肝 臟轉化即發(fā)揮其生物效應。<formula>formula see original document page 3</formula>目前，國內外大多采用醋酸可的松經脫氫得到醋酸潑尼松，是經過3， 20位縮酮反應、ll位酮還原反應，分離、精制最后得到醋酸潑尼松龍。這 種生產工藝復雜，步驟繁瑣，同時生產過程中需要使用一些有毒試劑。因 此，研究和開發(fā)一種收率高、工藝簡單、經濟實用且盡量避免使用各種有 害試劑的生產方法，對用生物轉化法生產甾體藥物有著非常重要的意義。發(fā)明內容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的不足之處，提供一種收率高、工藝簡 單、經濟實用且能盡量避免使用各種有害試劑的醋酸潑尼松龍的生產方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的一種醋酸潑尼松龍的生產方法，生產方法的步驟如下(1).將簡單節(jié)桿菌作為生產菌種從斜面接一滿環(huán)至種子培養(yǎng)基中，在旋轉式搖床上160~200r/min轉速、溫度30 33。C條件下培養(yǎng)18 22小時，得 到適于接種的種子培養(yǎng)液； (2) .將種子培養(yǎng)液按3~6%體積比的接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在發(fā) 酵過程中控制搖床轉速160~200r/min， PH值保持在6. 7~7. 2，在30-33°C 溫度條件下培養(yǎng)18~24小時，得到菌體發(fā)酵液；(3) .將醋酸氫化可的松粉碎研細，粒度為14 16h無菌條件下投入到 菌體發(fā)酵液中，投料量為5 8g/L;再在菌體發(fā)酵液中加入親水性有機溶劑 3 5%體積比助溶；(4) .在轉化過程中控制搖床轉速為180~200r/min，保持pH6.7 7.0，在 30 35'C溫度條件下轉化40-60小時，轉化完成后，過濾，收集濾餅，即制 得醋酸潑尼松龍。而且，所述的簡單節(jié)桿菌是通過下述方法培養(yǎng)的培養(yǎng)基在120-122 。C下，濕熱滅菌15 25min;斜面培養(yǎng)基成分為葡萄糖和酵母膏，30~33°C 下恒溫培養(yǎng)1 2天，3 5'C保藏待用，保藏時間在15-25天。而且，所述的種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基成分均為葡萄糖、玉米漿、酵 母膏和磷酸二氫鉀，采用自來水配制，初始pH值為6.7-7.0。而且，所述的親水性有機溶劑為甲醇、乙醇、二甲基亞砜中的一種。本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是1. 本發(fā)明提供的醋酸潑尼松龍生產方法，只需一步C1>2位脫氫即可， 具有反應專一性好，操作簡單，成本低，且產物單一，易于分離純化，克 服現(xiàn)有步驟繁瑣、使用危險試劑、生產成本高、分離純化麻煩的缺點。2. 本發(fā)明所涉及的生產方法是以醋酸氫化可的松為原料替代醋酸可的 松，收率高，工藝簡單，經濟實用，能夠盡量避免使用各種有害試劑，對 用生物轉化法生產甾體藥物有著非常重要的意義。


圖1為本發(fā)明在菌體培養(yǎng)液中轉化的高效液相色譜圖。
具體實施方式
下面結合實施例，對本發(fā)明進一步說明；下述實施例是說明性的，不 是限定性的，不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護范圍。一、 生產菌株簡單節(jié)桿菌AS 1.94*:其斜面培養(yǎng)基(％):葡萄糖1， 酵母膏1，瓊脂條2， pH 7.0。二、 種子培養(yǎng)基(％):葡萄糖l，玉米漿1.2，酵母膏0.5，KH2P04 0.25， pH 6. 7 7.0。三、 發(fā)酵培養(yǎng)基(％):同種子培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基滅菌前加入一定量底 物作誘導物。本發(fā)明中采用的醋酸氫化可的松原料的分子結構式如式I所示，最終 所生產出的醋酸潑尼松龍的分子結構式如式II所示。
其轉化的化學反應式為:<formula>formula see original document page 5</formula>式i 式n下面通過具體實施實例進一步描述本發(fā)明。實施例1:一種醋酸潑尼松龍的生產方法，其生產方法的步驟為-(1) .將簡單節(jié)桿菌作為生產菌種從斜面接一滿環(huán)至30ml種子培養(yǎng)基中， 在旋轉式搖床上160r/min轉速、溫度30。C條件下培養(yǎng)22小時，得到適于 接種的種子培養(yǎng)液；(2) .將種子培養(yǎng)液按5%體積比的接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在發(fā)酵過 程中控制搖床轉速200r/min， pH值保持在6. 7，在32*€溫度條件下培養(yǎng)24 小時，得到菌體發(fā)酵液；(3) .將醋酸氫化可的松粉碎研細，粒度為14h無菌條件下投入到菌體 發(fā)酵液中，投料量為5g/L;再在菌體發(fā)酵液中加入親水性有機溶劑4%甲醇 助溶；(4) .在轉化過程中控制搖床轉速180r/min，保持PH7. 0，在33r溫度條 件下轉化48小時，轉化完成后，過濾，收集濾餅，即制得醋酸潑尼松龍。實施例2:(1) .將簡單節(jié)桿菌從斜面接一滿環(huán)至30ml種子培養(yǎng)基中，在旋轉式搖 床上180r/min轉速下，32。C培養(yǎng)18小時，即得適于接種的種子培養(yǎng)液；(2) .將生長良好的種子培養(yǎng)液按3%(v/v)的接種量接入到30ml發(fā)酵培 養(yǎng)基中；在發(fā)酵過程中控制搖床轉速190r/min， pH值保持在7.0， 3(TC培 養(yǎng)22小時，即得菌體發(fā)酵液；(3) .將醋酸氫化可的松粉碎研細，粒度為15P，無菌條件下投入到菌體 發(fā)酵液中，投料量為6g/L;再在菌體發(fā)酵液中加入親水性有機溶劑3%乙醇 助溶；(4) .在轉化過程中控制搖床轉速190r/min，保持pH6. 7，在35。C溫度條 件下轉化40小時，轉化完成后，過濾，收集濾餅，即制得醋酸潑尼松龍。實施例3:
(1) .將簡單節(jié)桿菌從斜面接一滿環(huán)至30ml種子培養(yǎng)基中，在旋轉式搖 床上170r/min轉速下，3rC培養(yǎng)20小時，即得適于接種的種子培養(yǎng)液；(2) .將生長良好的種子培養(yǎng)液按4%(v/v)的接種量接入到30ml發(fā)酵培 養(yǎng)基中；在發(fā)酵過程中控制搖床轉速180r/min， pH值保持在7.2， 33°。培 養(yǎng)18小時，即得菌體發(fā)酵液；(3) .將醋酸氫化可的松粉碎研細，粒度為16h無菌條件下投入到菌體 發(fā)酵液中，投料量為8g/L;再在菌體發(fā)酵液中加入親水性有機溶劑5%二甲 基亞砜助溶；(4) .在轉化過程中控制搖床轉速200r/min，保持pH6.8，在33'C溫度條 件下轉化60小時，轉化完成后，過濾，收集濾餅，即制得醋酸潑尼松龍。
權利要求
1.一種醋酸潑尼松龍的生產方法，其特征在于生產方法的步驟如下(1).將簡單節(jié)桿菌作為生產菌種從斜面接一滿環(huán)至種子培養(yǎng)基中，在旋轉式搖床上160～200r/min轉速、溫度30～33℃條件下培養(yǎng)18～22小時，得到適于接種的種子培養(yǎng)液；(2).將種子培養(yǎng)液按3～6％體積比的接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在發(fā)酵過程中控制搖床轉速160～200r/min，pH值保持在6.7～7.2，在30～33℃溫度條件下培養(yǎng)18～24小時，得到菌體發(fā)酵液；(3).將醋酸氫化可的松粉碎研細，粒度為14～16μ，無菌條件下投入到 菌體發(fā)酵液中，投料量為5～8g/L；再在菌體發(fā)酵液中加入親水性有機溶劑3～5％體積比助溶；(4).在轉化過程中控制搖床轉速為180～200r/min，保持pH6.7～7.0，在30～35℃溫度條件下轉化40～60小時，轉化完成后，過濾，收集濾餅，即制得醋酸潑尼松龍。
2. 根據(jù)權利要求1所述的醋酸潑尼松龍的生產方法，其特征在于所述 的簡單節(jié)桿菌是通過下述方法培養(yǎng)的培養(yǎng)基在120 122"C下，濕熱滅菌 15 25min;斜面培養(yǎng)基成分為葡萄糖和酵母膏，30 33'C下恒溫培養(yǎng)1~2 天，3-5'C保藏待用，保藏時間在15 25天。
3. 根據(jù)權利要求1所述的醋酸潑尼松龍的生產方法，其特征在于所述 的種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基成分均為葡萄糖、玉米漿、酵母膏和磷酸二氫 鉀，采用自來水配制，初始pH值為6.7 7.0。
4. 根據(jù)權利要求1所述的醋酸潑尼松龍的生產方法，其特征在于所述 的親水性有機溶劑為甲醇、乙醇、二甲基亞砜中的一種。
全文摘要
本發(fā)明屬于微生物制藥及醫(yī)藥工程領域，具體涉及以簡單節(jié)桿菌為菌種、醋酸氫化可的松為底物并采用微生物轉化的一種醋酸潑尼松龍的生產方法。本方法是用簡單節(jié)桿菌為菌種，經一級種子培養(yǎng)、二級發(fā)酵培養(yǎng)、在菌體發(fā)酵液中投入醋酸氫化可的松轉化生成醋酸潑尼松龍；需要說明的是在將菌體制成雙液相、破碎細胞、原生質體，其轉化率都很高，轉化完成后，過濾，收集濾餅，可制得醋酸潑尼松龍。本發(fā)明所涉及的生產方法是以醋酸氫化可的松為原料替代醋酸可的松，收率高，工藝簡單，經濟實用，能夠盡量避免使用各種有害試劑，對用生物轉化法生產甾體藥物有著非常重要的意義。
文檔編號C12P7/62GK101210259SQ20071006020
公開日2008年7月2日 申請日期2007年12月25日 優(yōu)先權日2007年12月25日
發(fā)明者別松濤, 藝 張, 杜連祥, 毛淑紅, 王建玲, 王春霞, 路福平 申請人:天津科技大學