專利名稱：銅綠假單胞菌生物被膜形成相關(guān)基因fimL及應(yīng)用的制作方法
銅綠假單胞菌生tlW^細(xì)錢因M鵬用
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物生,術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種銅綠假單胞菌生物豐 形成相關(guān)基
因，即鞭秘動(dòng)相錢因力附z。
背景默銅綠假單胞菌(Pseucfofflo朋saenygi/wsa)屬假單胞菌屬，革蘭氏陰性菌，它是一 種分布廣泛的斜頓病菌，在臨床上，它能引起菌血病、耳、眼、^S軟組織、骨及關(guān)節(jié)、心內(nèi) 膜和呼吸系統(tǒng)等的感染，是人類的三，病菌之一，是引趟巿炎的首，病菌。由于 有形成生 物TO等多重耐藥機(jī)制，耐藥率高，常在臨床上引^^員固性、難治性感染，成為臨床治療的棘手問 題。
細(xì)菌生物l鵬或稱為菌膜，是細(xì)菌為適應(yīng)不禾啲自然環(huán)境、維持自身生命而發(fā)生的形態(tài)學(xué)變 化，形成一種有禾盱生存的棘的生命5腺。當(dāng)生物體內(nèi)的細(xì)菌處于生長發(fā)育不禾啲環(huán)境時(shí)，菌 體周邊會(huì)分泌多糖復(fù)合物，使細(xì)菌相互粘連，附^惰性物附fJ生物醫(yī)學(xué)材料或粘膜表面并將其 自身包繞在其中而形成的皿物，使細(xì)菌可以停留在一^HS宜的微環(huán)境中而不會(huì)被沖散。生物被
膜的這種特殊結(jié)構(gòu)可以作為一種屏p章保護(hù)細(xì)菌抵御抗an物的殺傷和mm宿主免疫系統(tǒng)的清除，
而成為潛在的感染源，導(dǎo)lfe隹治性臨床生t^鵬的相關(guān)感染。鞭毛介導(dǎo)的泳動(dòng)(swimming motility) 和IV型菌毛介導(dǎo)的蹭動(dòng)(twitchingmotility)都參與了生物柳莫的早期形成。其中，蹭動(dòng)是f魏菌 在固相表面上，依靠IV型菌毛的收縮和延伸，向周圍運(yùn)動(dòng)的能力。
對(duì)生物M^形成機(jī)制的研究，國內(nèi)尚未見相關(guān)報(bào)道。由于生物MH有非常重要的臨床意義，最近 幾年，已弓胞國外一些科學(xué)家的重視，使他們涉赴匕領(lǐng)職行研究。但其形成機(jī)制仍有許多未知 領(lǐng)域等待探索。目前已知，生物被膜的形成大致分為三步個(gè)體細(xì)胞的吸附；微菌落的形成；及 成突擬鵬的發(fā)育。我們對(duì)銅綠假單胞菌生物鵬形^"后錢因/m丄的研究可以±真補(bǔ)國內(nèi)這"^頁域 的空白，并完善銅綠假單胞菌生物MIi^成的機(jī)理。
發(fā)明內(nèi)容1本發(fā)明目的是^^綠假單胞菌生tM^^+目^S因、即鞭，動(dòng)相關(guān)基因力w丄' 并用該基因?yàn)樾滤幇尹c(diǎn)研制抑制銅綠假單胞菌的新型藥物。
本發(fā)明^的銅綠假單胞菌鞭^it動(dòng)相關(guān)基因具有如序列表所示核苷 列，其基因 長度為1689bp，位ffl綠假單胞菌基因組169節(jié)10946—10950。
，的銅綠假單胞，^動(dòng)相，因力m丄可以用于以該基因?yàn)樾滤幇尹c(diǎn)設(shè)計(jì)并制MCM 物；以及在食品衛(wèi)生和耐藥防治諸方面的鵬。
本發(fā)明基因的獲得方法^ffl人工Mu轉(zhuǎn)座fe^ (—種基于噬菌體Mu轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座技術(shù))，造 成銅綠假單胞菌基因突變，粒突變子文庫。臓曾動(dòng)能力喪失的突變子，〗頓5amHI酶切基因 組DNA，酶切片段與pUC18載體連接，il31電轉(zhuǎn)化將連接，導(dǎo)入^lf桿菌DH5a，用卡那霉素和氨 節(jié)青霉素雙抗LB平板篩選陽性轉(zhuǎn)化子，測(cè)定轉(zhuǎn)化子中插入片段的核苷,列，發(fā)現(xiàn)Mu插入的基 因，確定此基因與銅綠假單胞MII^M動(dòng)有相關(guān)性。
本發(fā)明的有^m:
實(shí)M現(xiàn)本發(fā)明基因的缺失f雜使IV型菌毛介導(dǎo)的蹭動(dòng)能力喪失。
Mu插入失活的基因泳動(dòng)能力喪失，說明此基因與銅綠假單胞mH毛的運(yùn)動(dòng)有關(guān)，3^t鞭^g 動(dòng)相關(guān)新基因的發(fā)現(xiàn)以及揭^ff基因的功倉娜有指導(dǎo)意義。
ilii本發(fā)明，可以針對(duì)^j丄基因設(shè)計(jì)藥物，限制其正常毅，使得細(xì)菌無法iliilE斷話動(dòng)形 成生辦鵬，斷氐其耐藥性，達(dá)到治療銅綠假單胞菌弓l起的感染的目的。

圖1題曾動(dòng)能力喪失的陽性轉(zhuǎn)化子的蹭動(dòng)運(yùn)動(dòng)檢測(cè)圖， 1 、野 PA68作為陽',照2、 ^ml::Mu PA68突變株 圖2是Mu克隆子酶切產(chǎn)物電泳圖，1、 DL15000 2、質(zhì)粒3、質(zhì)粒酶切 圖3是Mu轉(zhuǎn)座子PCR產(chǎn)物電泳圖(用PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)化子的Mu轉(zhuǎn)座子)， 4、 DL20005、 Mu克卩好PCR產(chǎn)物。 用Mu-kam Pl和Mu-kam P2作為引物，克隆子質(zhì)粒DNA為模板，可以擴(kuò)增出700bp的特異性片 段，說明所檢測(cè)的克隆子質(zhì)粒中攜帶著插入了 Mu轉(zhuǎn)座子的基因片段。
具體實(shí)lfi^1
^JS例i: ^fflMu轉(zhuǎn)座技術(shù)進(jìn)行突變子文庫的^
(1) 將臨床分離糊綠假單胞菌PA68接種于50 ml L-broth培養(yǎng)基(10 g/L胰蛋白腺5 g/L酵 母粉，5g/LNaCl)中，37°C,200 rpm振蕩培微夜。
(2) 次日按l: 100接種至200mlL—broth培養(yǎng)基中，200ipm， 37。C培養(yǎng)至ODs4o"0.5，終止蹄。
(3) 于2。C 7000 g離心10 min，收集菌體。
(4) 依7細(xì)##^、、 1/2#|R、 1/5#|只在冰浴中預(yù)冷的300福蔗糖溶體織浮、洗滌菌體，2 。C畫g離心10min,倒凈賺。
(5) 根據(jù)菌體的多少用不同體積的300mM薪塘溶液混勻,并fflii活細(xì)胞計(jì)數(shù)制備，度約為1011 個(gè)cells/ml的感受態(tài)細(xì)胞。
(6) 將感受態(tài)細(xì)胞^g 100"滑， 一部分直接用于電轉(zhuǎn)化，1分在液氮中冷凍后，放—80 'C^II中保存。另一部分直接放一80"}*||保#^用。
(7) 取感受態(tài)細(xì)胞100 u 1、質(zhì)粒pSMC28和Mu轉(zhuǎn)座復(fù)，約50ng，加入到在冰浴中預(yù)冷的0.2 cm 電轉(zhuǎn)化杯中(陰'艦照只加感受態(tài)細(xì)胞不加質(zhì)粒)，在Bio-Rad電穿孑W灶設(shè)置電容25nF，電阻 200 Wf口戰(zhàn)的電壓誠電擊。
(8) 電擊后將轉(zhuǎn)化體系轉(zhuǎn)入職37。C溫浴的900ulL-broth培養(yǎng)基中。37°C， 225rpm，培養(yǎng)1 h 。
(9) 取100 u L菌液涂布于50 P g/ral Km抗性平feh，溫箱37°C過夜±咅養(yǎng)，24小時(shí)后即可觀察結(jié) 果。
(10) 腿夜培養(yǎng)的篩選平肚挑取數(shù)個(gè)菌落，分別接種到1 ral的L一broth中，37。C， 200卬m 振蕩培養(yǎng)16_18 h。
(11) 取2ul菌漸射鎌，以AIMu轉(zhuǎn)座子上的特異序列Mul (5， -GCAACTGTCCATACTCTGA-3，) 和Mu2 (5， - CGCTGGGTTTATCGTCGA-3')做引物，用PCR方法擴(kuò)增Mu轉(zhuǎn)座子片段。同時(shí)分別以 銅綠假單胞離株M粒pHTH2做陰'股陽'斷照。擴(kuò)增^f牛為，先在94。C職性15min，然后， 94。C變性l min， 55。C退火1 min， 72。C延伸1 min，共30個(gè)循環(huán)，翻72。C延伸10 min。
(12) PCR產(chǎn)鵬0. 8%瓊脂撒鵬中電泳檢測(cè)，EB染船紫外燈下觀察結(jié)果并留照片，具有700bp 卡那霉素抗性基因的轉(zhuǎn)化子即為Mu轉(zhuǎn)座復(fù)，轉(zhuǎn)化子。
實(shí)施例2:突變子的蹭動(dòng)能力的檢測(cè)
(1) 在無菌塑料培養(yǎng)皿內(nèi)鋪上一層蹭動(dòng)能力檢測(cè)培養(yǎng)基[10g/L胰蛋白胨，5g/L酵職，5g/LNaCl， 1% (W/V)顆粒狀瓊月識(shí)]。
(2) 從Mu轉(zhuǎn)座子突變文庫中活化突變菌株。
(3) 用滅菌的牙^t兆取皿，乎UtS曾動(dòng)培養(yǎng)基，將細(xì)菌接種到培養(yǎng)基下面的塑料平皿上，37'C1咅養(yǎng)
24小時(shí)。
(4) 細(xì)菌就會(huì) IV型菌毛的收縮和伸展在培養(yǎng)基TM的塑料表面以接種點(diǎn)為圓心，向周圍蔓延生
長，產(chǎn)生圓形的菌暈。
(5) 將培養(yǎng)難輕揭去，用考馬司爛她液(10%乙酸，0.06%#馬司賠)她塑料平皿20分 沐倒掉染液，用自彩K沖,皿lmin，觀察細(xì)菌因蹭動(dòng)而產(chǎn)生的環(huán)，篩淑曾動(dòng)能力喪失或減弱 的突變子(圖1)。
實(shí)施例3:銅綠假單胞菌生物^ 自皿因的克隆 1 Mu轉(zhuǎn)座復(fù)』轉(zhuǎn)化子基因組DNA的提取
(1) 將銅綠假單胞菌Mu轉(zhuǎn)座復(fù)激轉(zhuǎn)化子接于5mL LB液體i歸基中，30°C 200r/min過夜培養(yǎng)。
(2) 4°C 5000r/min離心10射中，棄上清，菌體重懸于200^翻早緩沖液。
(3) 加入4tiL 10 mg/ml的RNase， 37。C7JC浴30射中。
(4) 加入8pL 20 mg/mL的蛋白酶K， 20% SDS 5&，于56。C7JC浴30射中。
(5) 分另傭等#^只苯酚，苯酚:氯仿(1:1)和氯仿# 提1次，12000r/min離心10 5Ht。
(6) 加入2倍^f只冷凍的^7jC乙醇，于-20'C放置30射中。
(7) 挑出DNA， 70%乙瞎先滌2次，真空千燥。
(8) 溶于50mL TE， -20°(:保存。 2大量提取大腸桿菌質(zhì)粒pUC18
(1) 25mL液體LB培養(yǎng)基，接入攜帶質(zhì)粒pUQ8的 [桿菌單皿，3CTC、 200r/min培養(yǎng)過夜。
(2) 菌液的OD6oo歡于1.0后，4。C 6000r/min離心10倂中，棄上清。
(3) 加STE溶液(100mMNaCl， 10 mMTris. Cl pH8. 0, lrnMEDTA) 12.5mL洗細(xì)胞，4°C 6000r/min 離心10恤棄上清。
(4) 加溶液I (50 mM葡萄糖，10 mM EDTA， 25mM Tris.Cl， pH8.0) 0. 5mL再向各管中加入溶 菌酶(反應(yīng)濃度20^ig/mL)，輕微混，37。C7]C浴15-30min。
(5) 加溶液II (0.2 M NaOH, 1% SDS) lmL輕輕混勻至透明，冰浴10射中。
(6) 加入溶液in (3 M KAc， 5 M乙酸，pH4.8) 0.75mL劇烈振蕩后，冰浴30射中。
(7) 4°C 12000r/min離心5併中，肚清。
(8) 力口入0. 7 ^f只的異丙醇，室^fi 15溯。
(9) 4'C 12000r/min離心10辦中，棄上清。
(10) 力口入100^L TE溶液溶解核酸。
(11) 力口入RNase (反應(yīng)濃度為100^ig/rnL) 37。C7JC浴30 ^H中。
(12) ^^P凍酚:氯仿(1:1)，抽提，振蕩均勻，4°C 12000r/min離心15射中，社清。
(13) 加入2 ft^f只的^7K乙醇和1/10 #|只的3mol/LNaAc (pH4.8)， -20。C體20倂t沉淀DNA。
(14) 4'C 12000r/min離心10溯，棄上清。
(15) 加入lmL70。/。的冷乙^ 先DNA沉淀兩次，干燥。
(16) 加入50nLTE溶解質(zhì)粒，-2(TC保存。
3基因組DNA和質(zhì)粒pUC18的酶切(50^L體系) 10 X buffer 5uL
fern HI 2 ia
DNA 10 PL
ddH20 33 y L
混勻，30。C水浴過夜。 4酶的滅活與純化
(1) 酶切體系置于65。C7K浴15艦之后降鼓溫。
(2) TE補(bǔ)^400&，等^f只的苯酚:氯仿(1:1)抽提一次。
(3) 加入2倍^f只的^7K乙醇和1/10 ^R的3mol/LNaAc (pH4. 8)， -20。C方j(luò)[K 20辦t沉淀DNA。
(4) 4°C 12000r/min離心10併中，棄上清。
(5) 加入lmL7W。的冷乙IMDNA沉淀兩次，真空千燥。
(6) pUC18溶于88nL lm mol/L Tris~Cl，基因組DNA溶于l^iL TE。 5 pUC18去磷酸化
pUC18 88|oL
lOXbuffer lO^L CIAP (堿性磷酸酶) 2pL 置于37。C7K浴30^H中。 6去磷酸化酶的除去-
(1) TE補(bǔ)^200^iL，加入2pL 0.5 mol/L EDTA。
(2) 75。CtR浴10倂中，使酶失活，并降S^溫。
(3) 等^f只的苯酚:氯仿(1:1)抽提一次。
(4) 加入2倍^f只的5^JC乙醇和1/10 #|只的3mol/L NaAc (pH4. 8)， -2CTC方爐20倂t沉淀DNA。
(5) 4°C 12000r/min離心10倂中，棄上清。
(6) 加入lmL7(^的冷乙il^DNA沉淀兩次，真空千燥。
(7) 繊溶于5|A ddH20中。 ， 7基因組DNA和質(zhì)粒pUC18的連接(15^1體系)
DNA 1mL ddH20 IO^iL pUC18 W
混勻，45。C7]C浴5粥中后，ffiil冰浴，再加T4連接酶1.5pL， 10Xbuffer 1.5^iL， 14-16。C 水浴過夜。
8連接產(chǎn)物的處理
(1) TE補(bǔ)^200^iL。
(2) 加入2倍^f只的^7]C乙醇和1/10 ^fR的3raol/L NaAc (pH4. 8)， -20。C方JCS 20併t沉淀DNA。
(3) 4°C 12000r/min離心10 ^!中，棄上清。
(4) 加入lraL7(F。的冷乙醇洗DNA沉淀兩次，真空干燥。
(5) 沉淀溶于5pL ddH20中。
9 ;yg桿菌DH5a感受態(tài)細(xì)胞的制備
(1)將;^桿菌單鵬接種于5mLLB液體培養(yǎng)基中，37°C、 200轉(zhuǎn)/併中過夜培養(yǎng)。
(2) 過夜培養(yǎng)的菌液按l: lOO接種于lOOmL LB液體培養(yǎng)基中，37°C、 220 r/min振蕩培養(yǎng)。
(3) 菌液OD柳在0.5-0.6之間時(shí)終止培養(yǎng)并置于冰上。
(4) 轉(zhuǎn)移至250mL離心中，4°C、 6000r/min離心10min，雌菌體。
(5) 100mL預(yù)冷的ddH2O懸浮洗滌細(xì)胞，4°C 6000r/min離心10併中，收集菌體。
(6) 50mL預(yù)冷的l(F。甘油懸浮洗滌細(xì)胞，4°C 6000r/min離心10併中，收集菌體。
(7) 用2mL予敬令的lTO甘油懸浮洗滌細(xì)胞，4'C 6000r/min離心10溯，棄上清，盡量吸干管壁 上的殘留液體。
(8) 用200mL預(yù)冷的10T。甘油培養(yǎng)基S1;細(xì)胞。
(9) 100倍稀釋后測(cè)菌液OD6Go，用預(yù)冷的10%甘油培養(yǎng)液將菌液稀釋至濃度為2xl0""-3xl(^個(gè) 細(xì)BS/mL (100600約相當(dāng)于2>101()個(gè)細(xì)11/1111)。
(10) 將菌液，，每管95pL。用于電轉(zhuǎn)4fc^-7(TC保存。
大腸桿菌DH5a的電轉(zhuǎn)化方法
(1) 5^ DNA連接產(chǎn)物與95pL大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞混勻，冰浴5-10射中。
(2) 混^tl轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的0.2cm電轉(zhuǎn)化杯中(陰',照不加混合物，只加感受態(tài)細(xì)胞)，在Bio-Rad 電轉(zhuǎn)化處設(shè)置2.50kv，進(jìn)行電擊。
(3) 從電轉(zhuǎn)化杯中吸出電轉(zhuǎn)化體系，并用lmL37X:預(yù)熱的S0C液體培養(yǎng)基(20^胰蛋白胨，5g/L 酵^ih 0.5g/LNaC120mM葡萄糖，10mM氯化鎂)稀釋后，37°C， 150轉(zhuǎn)/併中培養(yǎng)1小時(shí)。
(4) 菌液，涂布于含20咖ol/L MgS04 50pg/mL卡那霉素和IOO嗎/mL氨節(jié)青霉素的LB固體 培養(yǎng)基上，37。C倒置過夜培養(yǎng)。
克隆子的篩選、鑒定
(1) /Aa夜培養(yǎng)的艦平feJ:挑取轉(zhuǎn)化子，小量提M粒，用限制性內(nèi)切酶MI酶切，并以 pUC185a/ H I酶切產(chǎn)物為對(duì)照。
(2) 以DL15000為DNA標(biāo)準(zhǔn)，在O. 8%瓊脂撒 中電泳檢測(cè)鑒定，釤隨同時(shí)具有pUC18載體帶 和外源目的基因帶的克隆子(圖2)。
(3) 同時(shí)以從轉(zhuǎn)化子中提取的質(zhì)粒為纟鎌，用Mu轉(zhuǎn)座子DNA片段的Mu轉(zhuǎn)座子檢測(cè)弓卿Mu-kam Pl和Mu-kara P2進(jìn)行PCR (具^^"法同實(shí)施例1中皿)。電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物，以DL2000為DNA標(biāo)準(zhǔn)， 以質(zhì)粒pHTH2為頓照，若能擴(kuò)增出700bp的特異性帶，貝i脫明轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒中含有AXMu轉(zhuǎn)座子 DNA片段，克隆^i力(圖3)。 (4)對(duì)成功克隆的轉(zhuǎn)化子質(zhì)^ffl行測(cè)序。 12克隆子質(zhì)粒的DNA測(cè)序
將用15%甘油管保存的轉(zhuǎn)化子菌液，用以Mii轉(zhuǎn)座子兩端的反向序列為依據(jù)設(shè)計(jì)的AM42P2作為 引ttiS行測(cè)序。^Lt海英俊公司進(jìn)行DNA測(cè)序，測(cè)定轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)側(cè)翼的核苷,列。
13.基因推斷
測(cè)序結(jié)果在銅綠假單胞菌的基因組數(shù)據(jù)庫(http〃www. pseudomonas.com)或GenBank (http:〃麗.ncbi. nlm. nih.印v/)的BLAST中進(jìn)行序列t瀏最終發(fā)5^f需基因。
序列表
<110>南開大學(xué)
<120〉銅綠假單胞菌生物W^細(xì)錢因何^Zffl
<160〉 1
〈10>1
<211〉1689
〈12>DNA
<213〉銅綠假單胞菌(ftm/cww)way am/^ ay") <400>1
atggtcacag gagccacgtc cctcagtctg gtgcgcgacg agttgttcgc caccatggaa 60 c郷ccgaac agggtcttga gcagttcatt gccgagcggc agaatggcag cctactgcag 120 cacgccgtcg aatgcctgca acagatccgc ggcaccctca acctgatcga gctggccggc 180 gccgagctgc tggcccagga agccctgcag ctggcgaccg acattcccac cggcgtcagc 240 gaggagcgcg acggccagct ggcagccctg ggcaacgccc tgtacgtgct gcgccgctac 300 ctggagaacg tcgaggccaa tcgccaggag atccccgaac tgctcttgcc ggcgatcaac 360 gaagtgcgct gtgccgcagg gcagccggcg ctgccggaaa gtttcttctt cagcgcccga 420 ctggatatcc cgcggccgcc gagcaccgcc atcgaccacc tgccttccga agccgaactg 480 ggcgaggaaa gccggcggat gcgccacatg taxxagatcg gcctgctcgg gctgatccgc 540 gaacagaacc tctatcccag cctcaagttg atgggccgcg cgctggcgcg cctcgacagc 600 ctgcacggcg gggtggcccg ttcgcggctg tgctggatcg gcgccgcggc gatcgagtcg 660 atcgtcgatg gccaactgtt gccacgcaag tcgcgtaagc aactgttctc gcgcatcgac 720 cgcgagctca agcaattgct gatcggccct gcctacgagg cgccgcgcca tctgctcaag 780 gaactgcttt acctggtggc gctgtccgat ggccagggcc cgcgttcgcg cgaggtccgc 840 gaactgcttg ggctggcgcc gctgccgttc accgaccact tgctggaaga ggaatcgcag ■ cgcttgtccg gtcccggcca gtcggtgatg cgttcgctgt ccacggcgat ccgcgaggaa 960 ctcgccgggg tcaaggacat gctcgacctg atcgagcgcg gcgtggccca gccggacagc 1020 ctgaccaacc tgcatgcgca actgggcaag aactcggccg gcaccgccct gcagacccag ggcgtcgccg attcgccgcc ggcgttgctg agcatggtcg gcaacctcga gcgcggcgag cccgggcagg aagccgatgc attcgccgtg atcg鄉(xiāng)鄉(xiāng)ccaaggccgg cctggccctg tccaatggcg acaagctcaa cctggccaac ggtctctggt tcctcggtca ggagcgcgcc atccagcagc gcatgatcga gaccgcgcag gccgacgccc tgaccagtct cgaatactat ggccagccgg acgtcctcga cctcgccagc gccgcctga
ctgagcaaga ccctcggcat ggtcggcctg 1080 ctacccaccg tggccgcctg ggctgccagc 1140 cgcctggccg atgcggtgct ctacgtggaa 1200 cgccgcatca tccggccgac tccggcggag 1260 caccagttgg ccgaggcgcg catcgtggtg 1320 gccaagcgtg cgatcaccgc gtacctggaa 1380 gtcccggcca gcctgcaggc ggtccggggt 1440 gcgctgctgg tcggcggctg cgccgactac 1500 已tgccgtcgg aacagatgct ggaaaccctc 1560 ctcgagggcg gtgccgtgct gcgtccgcag 1620 gccagcgtca aggcgctcgg actgccggtg 1680
1689
權(quán)利要求
1、一種銅綠假單胞菌鞭毛運(yùn)動(dòng)相關(guān)基因fimL，其核苷酸序列如序列表所示，其基因長度為1689bp，位于銅綠假單胞菌基因組169節(jié)10946-10950。
2、 權(quán)利要求l戶脫的銅綠假單胞繊秘動(dòng)相錢因7 m/:的應(yīng)用，用于以該基因?yàn)樾屡?點(diǎn)設(shè)計(jì)并制紘鵬物。
全文摘要
本發(fā)明公開了銅綠假單胞菌生物被膜形成相關(guān)基因fimL。屬于微生物生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明與銅綠假單胞菌致病性的研究息息相關(guān)，此基因大小為1689bp，國際上對(duì)該基因的功能沒有報(bào)道。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該基因的缺失能夠使IV型菌毛介導(dǎo)的蹭動(dòng)能力喪失。IV型菌毛及它所介導(dǎo)的蹭動(dòng)在銅綠假單胞菌生物被膜形成的早期起著必不可少的作用。生物被膜的形成提高了銅綠假單胞菌的耐藥性，常在臨床上引起頑固性、難治性感染，成為臨床治療的棘手問題。用銅綠假單胞菌生物被膜形成相關(guān)基因fimL為新藥靶點(diǎn)研制抗菌藥物，為臨床治療和耐藥防治服務(wù)。
文檔編號(hào)C12N15/31GK101195826SQ20071006018
公開日2008年6月11日 申請(qǐng)日期2007年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月26日
發(fā)明者喬明強(qiáng), 單志英, 張秀明, 徐海津, 芳 白, 白艷玲 申請(qǐng)人:南開大學(xué)