日落黃色素在抗炭疽桿菌中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及日落黃色素 （Sunset Yellow，C16HwN2Na2O7S 2)在抗炭疽桿菌中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 炭疽桿菌是一種全世界范圍內(nèi)流行的人畜共患的病原菌，該病原菌可以感染羊、 馬等食草動(dòng)物，2001年使用炭疽進(jìn)行生物恐怖事件使得對(duì)炭疽桿菌的研究迅速升溫。炭疽 桿菌菌體粗大，兩端平截或凹陷，是致病菌中最大的細(xì)菌。排列似竹節(jié)狀，無鞭毛，無動(dòng)力， 革蘭氏染色陽性，該菌在氧氣充足，溫度適宜（25~30°C )的條件下易形成芽胞。炭疽桿菌 的莢膜與炭疽毒素是主要的致病物質(zhì)。莢膜具有抗吞噬作用，有利于細(xì)菌在機(jī)體組織內(nèi)繁 殖與擴(kuò)散。炭疽毒素的毒性作用主要是直接損傷微血管的內(nèi)皮細(xì)胞，使血管通透性增加，有 效循環(huán)血量不足，微循環(huán)灌注量明顯減少，血液呈高凝狀態(tài)，易形成感染性休克和彌散性血 管內(nèi)凝血。
[0003] 人類主要通過工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)而感染。機(jī)體抵抗力降低時(shí)，接觸污染物品可發(fā)生下列 疾?。?br>[0004] 1.皮膚炭疽最常見，多發(fā)生于屠宰、制革或毛刷工人及飼養(yǎng)員。該菌由體表破損處 進(jìn)入體內(nèi)，開始在入侵處形成水癤、水皰、膿皰、中央部呈黑色壞死，周圍有浸潤(rùn)水腫、如不 及時(shí)治療，細(xì)菌可進(jìn)一步侵入局部淋巴結(jié)或侵入血流，引起敗血癥死亡。
[0005] 2.腸炭疽由食入病獸肉制品所致，以全身中毒癥狀為主，并有胃腸道潰瘍、出血及 毒血癥，發(fā)病后2~3日內(nèi)死亡。
[0006] 上述疾病若引起敗血癥時(shí)，可繼發(fā)"炭疽性腦膜炎"。炭疽桿菌的致病性取決于莢 膜和毒素的協(xié)同作用。因此在牛羊等家畜的喂養(yǎng)過程中，應(yīng)該需要有效地抑制炭疽桿菌的 藥物，該藥物的效果是在牛羊等家畜的食料中抑制炭疽桿菌的生長(zhǎng)，而不影響牛羊等家畜 的健康狀況。
[0007] 日落黃色素，屬于人工合成色素，分子式：C16HltiN2Na 2O7S2化學(xué)名1 - (4' 一磺基一 1' 一苯偶氮）一 2 -萘酚一 6 -磺酸二鈉，是一種在食品行業(yè)中廣泛應(yīng)用的食品著色劑，水 溶性好，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。其安全性高，危害性小。目前尚無日落黃色素抑制炭疽桿菌等病原 微生物的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種日落黃色素在抗炭疽桿菌中的應(yīng)用。
[0009] 日落黃色素在制備抑制炭疽桿菌生長(zhǎng)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0010]日落黃色素在制備抑制炭疽桿菌增殖的產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。 [0011]日落黃色素在制備預(yù)防和/或治療由炭疽桿菌感染引起的疾病的產(chǎn)品中的應(yīng)用 也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0012] 上述任一所述的應(yīng)用中，所述日落黃色素的工作濃度具體為lmg/ml-5mg/ml。
[0013] 日落黃色素在制備預(yù)防和/或治療家畜腸道炭疽桿菌感染的產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬 于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0014] 日落黃色素作為家畜飼料添加劑的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0015] 上述任一所述的應(yīng)用中，所述家畜為?；蜓?。
[0016] 上述任一所述的應(yīng)用中，所述日落黃色素分子式為C16HwN 2Na2O7S2，化學(xué)名為1 一 (4' 一磺基一 Γ 一苯偶氮）一 2 -萘酚一 6 -磺酸二鈉。
[0017] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)日落黃色素，在一定的濃度范圍內(nèi)，可有效抑制炭疽桿菌的生長(zhǎng)，從而 在治療炭疽感染方面發(fā)揮巨大作用。
【附圖說明】
[0018] 圖1為不同濃度的日落黃色素培養(yǎng)基培養(yǎng)炭疽桿菌。
[0019] 圖2為日落黃色素培養(yǎng)基培養(yǎng)3小時(shí)后炭疽桿菌生長(zhǎng)OD值測(cè)定。
[0020] 圖3為日落黃色素培養(yǎng)基培養(yǎng)6小時(shí)后炭疽桿菌生長(zhǎng)OD值測(cè)定。
【具體實(shí)施方式】
[0021 ] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0022] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0023] 炭疽桿菌為普通（Bacillus anthraci)在文獻(xiàn)"Bacillus anthracis, Erlendur Helgason,Ole Andreas 0kStad, Dominique A, et al.Caugant3Bacillus cereus, and Bacillus thuringiensis-One Species on the Basis of Genetic Evidence. Appl. Environ. Microbiol. June200066:62627-30. "中公開過，為普通炭疽桿菌致病菌。
[0024] 公眾可從中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所獲得。
[0025] 實(shí)施例1、日落黃色素抑制炭疽桿菌實(shí)驗(yàn)
[0026] -、培養(yǎng)基的制備
[0027] 每升日落黃色素培養(yǎng)基按照如下方法制備：將胰蛋白胨10g，酵母提取物5g， NaC15g，日落黃色素，加水溶解并定容至1L，培養(yǎng)基的pH=7,將該培養(yǎng)基于121°C濕熱滅菌 半小時(shí)，制備而成。
[0028] 本實(shí)施例制備的日落黃色素培養(yǎng)基中，日落黃色素的濃度是0.1 g/L、0. 5g/L、lg/L 或5g/L，分別得到0· lmg/ml、0. 5mg/ml、lmg/ml和5mg/ml日落黃色素培養(yǎng)基。
[0029] 不含日落黃色素的對(duì)照培養(yǎng)基按照如下方法制備：將胰蛋白胨10g，酵母提取物 5g，NaC15g，加水溶解并定容至1L，培養(yǎng)基的pH=7,將該培養(yǎng)基于121°C濕熱滅菌半小時(shí)，制 備而成。
[0030] 二、微生物染色
[0031] 炭疽桿菌活化：將炭疽桿菌按照體積百分含量1%的接種量接種于LB培養(yǎng)基， 37°C 200r/min搖床培養(yǎng)過夜，得培養(yǎng)液。
[0032] 三、液體培養(yǎng)的抑菌實(shí)驗(yàn)觀察
[0033] 采用對(duì)照培養(yǎng)基、lmg/ml和5mg/ml日落黃色素培養(yǎng)基對(duì)步驟二活化的炭疽桿菌 進(jìn)行培養(yǎng)，接種量均為1%(體積百分含量)，37°C 200r/min搖床培養(yǎng)過夜。觀察并記錄炭疽 桿菌生長(zhǎng)狀況，結(jié)果如圖1所示。
[0034] 圖IA中，0為對(duì)照培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的菌液；1為lmg/ml日落黃色素培養(yǎng)基培養(yǎng)得 到的菌液；5為5mg/ml日落黃色素培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的菌液。
[0035] 培養(yǎng)液的透明度可以直接反應(yīng)炭疽桿菌菌體密度的大小，圖IA為在燈光下炭疽 桿菌的培養(yǎng)液，結(jié)果表明，日落黃色素濃度越高對(duì)炭疽桿菌的增殖抑制程度越高。
[0036] 同樣按照上述方法采用對(duì)照培養(yǎng)基、0. lmg/ml、0. 5mg/ml、lmg/ml和5mg/ml日落 黃色素培養(yǎng)基對(duì)步驟二活化的炭疽桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)8000r/min高速離心獲得沉淀，結(jié)果 如圖IB所示。
[0037] 圖IB中，0為對(duì)照培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的菌液離心后的沉淀；0. 1為0. lmg/ml日落黃 色素培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的菌液離心后的沉淀；〇. 5為0. 5mg/ml日落黃色素培養(yǎng)基培養(yǎng)得到 的菌液離心后的沉淀；1為lmg/ml日落黃色素培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的菌液離心后的沉淀；5為 5mg/ml日落黃色素培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的菌液離心后的沉淀。
[0038] 根據(jù)炭疽桿菌菌體沉淀多少可以直觀判斷菌體生成量，圖IB表明，隨著日落黃色 素濃度的升高，其對(duì)炭疽桿菌的增殖抑制程度也隨之升高。
[0039] 四、定量分析日落黃色素抑制炭疽菌體密度實(shí)驗(yàn)
[0040] 采用對(duì)照培養(yǎng)基、lmg/ml和5mg/ml日落黃色素培養(yǎng)基對(duì)步驟二活化的炭疽桿菌 進(jìn)行培養(yǎng)，接種量體積比為1%，37°C 200r/min搖床培養(yǎng)6小時(shí)。分別在3小時(shí)和6小時(shí)取 各培養(yǎng)液，利用分光光度計(jì)在〇D=600nm波長(zhǎng)下檢測(cè)培養(yǎng)液中菌體的密度。
[0041] 培養(yǎng)3小時(shí)后炭疽桿菌生長(zhǎng)OD值測(cè)定結(jié)果如圖2所示。
[0042] 培養(yǎng)6小時(shí)后炭疽桿菌生長(zhǎng)OD值測(cè)定結(jié)果如圖3所示。
[0043] 圖2和圖3表明，與對(duì)照組相比，5mg/ml和lmg/ml日落黃色素培養(yǎng)基對(duì)炭疽桿菌 的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用。
[0044] 以上結(jié)果表明，日落黃色素對(duì)炭疽桿菌的生長(zhǎng)有明顯抑制作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 日落黃色素在制備抑制炭疽桿菌生長(zhǎng)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。2. 日落黃色素在制備抑制炭疽桿菌增殖的產(chǎn)品中的應(yīng)用。3.日落黃色素在制備預(yù)防和/或治療由炭疽桿菌感染引起的疾病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。4.日落黃色素在制備預(yù)防和/或治療家畜腸道炭疽桿菌感染的產(chǎn)品中的應(yīng)用。5.日落黃色素作為家畜飼料添加劑的應(yīng)用。6. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的應(yīng)用，其特征在于：所述家畜為牛或羊。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的應(yīng)用，其特征在于：所述日落黃色素分子式為 Cif5HltjN2Na2O 7S2，化學(xué)名為1-(4'一磺基一1'一苯偶氮）一2-萘酌-6-磺酸二鈉。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種日落黃色素在抗炭疽桿菌中的應(yīng)用。本發(fā)明公開了日落黃色素在制備抑制炭疽桿菌生長(zhǎng)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)日落黃色素可有效抑制炭疽桿菌的生長(zhǎng)，從而在治療炭疽感染方面發(fā)揮巨大作用。
【IPC分類】A61P31/04, A61K31/655
【公開號(hào)】CN105012322
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410155770
【發(fā)明人】凌焱, 陳惠鵬, 李玉霞, 吳遜, 白東梅, 張昕, 凌婧怡, 李偉東, 劉剛, 周圍, 李北平, 高原, 岳俊杰, 梁龍
【申請(qǐng)人】中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所
【公開日】2015年11月4日
【申請(qǐng)日】2014年4月17日