該藥已為臨床用藥量的1200 倍，可以認(rèn)為臨床用藥安全無毒。
[0192] 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精 神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種口服液大鼠模型，其特征在于，該口服液大鼠模型包括：大鼠耐氧模型、大鼠慢 性心衰模型、大鼠急性心衰模型、水負(fù)荷大鼠模型。2. 如權(quán)利要求1所述的口服液大鼠模型，其特征在于，大鼠耐氧模型包括：小鼠常壓耐 缺氧時(shí)間模型、小鼠減壓耐缺氧時(shí)間模型、小鼠耳殼微循環(huán)模型。3. 如權(quán)利要求2所述的口服液大鼠模型，其特征在于，小鼠常壓耐缺氧時(shí)間模型的建 立方法為： 取18~21g小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組分別灌服大、中、小劑量組口服液，芪 藶強(qiáng)心膠囊混懸液和同體積的生理鹽水，灌胃量均為0. 3ml/10g ;每天給藥1次，連續(xù)給藥7 天；于第7天灌胃給藥1小時(shí)，禁食12小時(shí)，將小鼠放入盛有IOg鈉石灰的125ml磨口廣口 瓶中，每瓶1只，瓶口涂凡士林密封，立即用秒表記錄每只小鼠從瓶口密封到死亡的時(shí)間， 以呼吸停止為小鼠死亡指標(biāo)，觀察小鼠存活時(shí)間； 小鼠減壓耐缺氧時(shí)間模型的建立方法為： 取18~21g小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，分別灌服大、中、小劑量口服液，芪藶 強(qiáng)心膠囊混懸液及同體積生理鹽水；每天給藥1次，連續(xù)給藥7天；于第7天灌胃1小時(shí)，禁 食12小時(shí)，將小鼠放入盛有IOg鈉石灰的125ml磨口廣口瓶?jī)?nèi)，連接減壓裝置，瓶口瓶涂凡 士林密封；用秒表記錄每只小鼠從瓶口密封到死亡時(shí)間，以呼吸停止為死亡指標(biāo)，記錄小鼠 存活時(shí)間； 小鼠耳殼微循環(huán)模型的建立方法為： 取18~21g小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，分別灌服大、中、小劑量口服液組，芪 藶強(qiáng)心膠囊混懸液及同體積生理鹽水；每天給藥1次，連續(xù)給藥10天，第10天灌胃后Ih開 始試驗(yàn)；小鼠腹腔注射5%的0. 06ml/10g水合氯醛進(jìn)行麻醉，將麻醉好的小鼠腹部向下固 定在小鼠觀察臺(tái)上，調(diào)節(jié)耳托高度，使耳廓平展在耳托上，在耳廓表面滴加少許香柏油，將 觀察臺(tái)置于顯微鏡的載物臺(tái)上，用全自動(dòng)圖像分析儀觀察各組小鼠耳廓細(xì)動(dòng)脈A、細(xì)靜脈V 管徑、血流速度及毛細(xì)血管開放數(shù)，調(diào)節(jié)視野范圍，使正常小鼠耳殼微循環(huán)情況相似；立即 尾靜脈注射鹽酸腎上腺素注射液l〇mg/kg，2min后，分別觀察各小鼠耳廓耳廓細(xì)動(dòng)脈A、細(xì) 靜脈V管徑、血流速度及毛細(xì)血管開放數(shù)。4. 如權(quán)利要求1所述的口服液大鼠模型，其特征在于，大鼠慢性心衰模型的建立方法 為： 步驟一、分組給藥： 取體重200-220g健康雄性大鼠造慢性心衰模型，采用腹主動(dòng)脈縮窄法建立；方法為大 鼠腹腔注射1 %戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉，劍突下腹正中切口，分層打開腹腔，在腎動(dòng)脈水 平以上鈍性游離腹主動(dòng)脈，將7號(hào)針頭平行置于腹主動(dòng)脈上，用0號(hào)手術(shù)絲線將腹主動(dòng)脈和 針頭一同結(jié)扎，然后緩慢將針頭撤出，使大鼠腹主動(dòng)脈直徑縮窄為〇.7mm，分層關(guān)腹；術(shù)后 腹腔注射青霉素，每天1次，連續(xù)6天，預(yù)防感染；假手術(shù)組開腹后將手術(shù)絲線穿過腹主動(dòng) 脈，不結(jié)扎，其它操作同手術(shù)組；手術(shù)后4周，取手術(shù)成功大鼠72只，隨機(jī)分為6組，分別灌 服大、中、小劑量口服液、芪藶強(qiáng)心膠囊混懸液，模型組均灌服同體積生理鹽水，灌服標(biāo)準(zhǔn)為 2ml/100g;另取單做解剖手術(shù)、不結(jié)扎腹主動(dòng)脈，假手術(shù)4周成功的12只雄性大鼠作為假手 術(shù)組，灌服同體積生理鹽水，灌服標(biāo)準(zhǔn)為2ml/100g ;每天給藥1次，連續(xù)給藥6周；各組大鼠 均每天上午給藥、下午喂飼； 步驟二、進(jìn)行心臟動(dòng)力學(xué)變化指標(biāo)、心臟指數(shù)、心臟形態(tài)變化、生化指標(biāo)的測(cè)定。5. 如權(quán)利要求4所述的口服液大鼠模型，其特征在于，對(duì)大鼠慢性心衰模型的心臟動(dòng) 力學(xué)變化指標(biāo)測(cè)定的具體方法為： 于最后1次灌胃后Ih后，禁食不禁水12h，大鼠用20%烏拉坦腹腔注射麻醉，用量為 lg/kg，將大鼠固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)，分離右頸總動(dòng)脈，遠(yuǎn)端結(jié)扎，近端夾閉血管，在動(dòng)脈壁剪一小 口，插入直徑為1mm帶肝素的心導(dǎo)管，經(jīng)壓力轉(zhuǎn)換器連接多導(dǎo)生理記錄儀，推進(jìn)導(dǎo)管，觀察 示波器，當(dāng)出現(xiàn)左室波型后停止推進(jìn)，穩(wěn)定2分鐘后記錄HR、左室收縮內(nèi)壓LVSP、左室舒張 末壓LVEDP、左室內(nèi)壓最大變化速率土dp/dtmax ; 對(duì)大鼠慢性心衰模型中心臟指數(shù)的測(cè)定的具體方法為： 左室舒、縮功能測(cè)定完后，股動(dòng)脈放血處死動(dòng)物，取血分離血清測(cè)定血清LDH、BNP和 cTnl ;然后取全心稱重，再分離左心室稱重，計(jì)算全心指數(shù)和左心室指數(shù)；稱重前用吸水紙 吸去心臟內(nèi)的血液； 對(duì)大鼠慢性心衰模型中心臟形態(tài)變化的測(cè)定的具體方法為： 實(shí)驗(yàn)結(jié)束，處死大鼠，取心臟，切取約0. 5cm3左心室組織，10%甲醛固定，石蠟包埋、切 片、HE染色，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查；評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為： 0分：正常；1分：輕度心肌纖維肥大，左室增厚，心肌輕度變性；2分：中度心肌纖維肥 大，左室增厚，心肌中度變性；3分：重度心肌纖維肥大、左室厚度、心肌重度變性； 對(duì)大鼠慢性心衰模型中生化指標(biāo)的測(cè)定包括乳酸脫氫酶的測(cè)定、大鼠腦鈉素/腦鈉尿 肽BNP ELISA的測(cè)定、大鼠心肌肌鈣蛋白I cTnl的ELISA測(cè)定。6. 如權(quán)利要求1所述的口服液大鼠模型，其特征在于，大鼠急性心衰模型的建立方法 為： 步驟一、分組給藥： 取體重220~240g大鼠60只，雄性，隨機(jī)均分為6組，每組12只，其中1組為空白對(duì) 照組，另5組造大鼠急性心衰模型；造模型5組分別灌服大、中、小劑量口服液、芪藶強(qiáng)心膠 囊混懸液和同體積的生理鹽水，灌服標(biāo)準(zhǔn)為2ml/100g ;空白對(duì)照組灌同體積的生理鹽水， 灌服標(biāo)準(zhǔn)為2ml/100g ;每天給藥1次，連續(xù)給藥7天，于最后1次給藥后0. 5h，造模型5組 大鼠用10%水合氯醛腹腔注射，注射標(biāo)準(zhǔn)為3ml/kg，大鼠麻醉后，仰臥于手術(shù)臺(tái)并固定，分 離氣管及右側(cè)頸總動(dòng)脈，分別進(jìn)行氣管及頸總動(dòng)脈插管，氣管插管連接動(dòng)物呼吸機(jī)行機(jī)械 通氣，頸總動(dòng)脈插管連接壓力傳感器，將信號(hào)輸入微機(jī)生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)；心室導(dǎo)管插入左 心室，連接壓力傳感器，手術(shù)后穩(wěn)定IOmin后，記錄心率HR、動(dòng)脈收縮壓SP、動(dòng)脈舒張壓DP、 動(dòng)脈平均壓AP、左心室收縮壓LVSP、左心室終末舒張壓LVEDP、左心室內(nèi)壓最大上升速率 +dp/dtmax、左心室內(nèi)壓最大下降速率一dp/dtmax;記錄正常大鼠各項(xiàng)指標(biāo)后，從尾靜脈推 注35%普羅帕酮，注射標(biāo)準(zhǔn)為31111/1^，3~5111111推完，注射后記錄5、10、15、20、30、40111111上 述指標(biāo)的變化，取血，離心分離血清，冷凍保存，測(cè)血清肌鈣蛋白水平； 步驟二、進(jìn)行心臟動(dòng)力學(xué)變化的測(cè)定、心臟指數(shù)的測(cè)定、心臟形態(tài)變化的測(cè)定、ELISA法 測(cè)定大鼠心肌肌鈣蛋白I cTnl。7. 如權(quán)利要求6所述的口服液大鼠模型，其特征在于，大鼠急性心衰模型中心臟動(dòng)力 學(xué)變化的測(cè)定的具體方法為： 于最后1次灌胃后Ih后，禁食不禁水12h，大鼠用20%烏拉坦腹腔注射麻醉，注射標(biāo)準(zhǔn) 為lg/kg，將大鼠固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)，分離右頸總動(dòng)脈，遠(yuǎn)端結(jié)扎，近端夾閉血管，在動(dòng)脈壁剪一 小口，插入直徑為1mm帶肝素的心導(dǎo)管，經(jīng)壓力轉(zhuǎn)換器連接多導(dǎo)生理記錄儀，推進(jìn)導(dǎo)管，觀 察示波器，當(dāng)出現(xiàn)左室波型后停止推進(jìn)，穩(wěn)定2分鐘后記錄HR、左室收縮內(nèi)壓LVSP、左室舒 張末壓LVEDP、左室內(nèi)壓最大變化速率土dp/dtmax ; 對(duì)大鼠急性心衰模型中心臟指數(shù)的測(cè)定的具體方法為： 左室舒、縮功能測(cè)定完后，股動(dòng)脈放血處死動(dòng)物，取血分離血清測(cè)定血清LDH、BNP和 cTnl ;然后取全心稱重，再分離左心室稱重，計(jì)算全心指數(shù)和左心室指數(shù)；稱重前用吸水紙 吸去心臟內(nèi)的血液； 對(duì)大鼠急性心衰模型中心臟形態(tài)變化的測(cè)定的具體方法為： 實(shí)驗(yàn)結(jié)束，處死大鼠，取心臟，切取約0. 5cm3左心室組織，10%甲醛固定，石蠟包埋、切 片、HE染色，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查；評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為： 0分：正常；1分：輕度心肌纖維肥大，左室增厚，心肌輕度變性；2分：中度心肌纖維肥 大，左室增厚，心肌中度變性；3分：重度心肌纖維肥大、左室厚度、心肌重度變性。8. 如權(quán)利要求1所述的口服液大鼠模型，其特征在于，水負(fù)荷大鼠模型的建立方法為： 取清潔級(jí)體重180~200g大鼠，wistar，雄性，實(shí)驗(yàn)前先篩選大鼠泌尿作用，大鼠禁食 不禁水12h，灌服25ml/kg的生理鹽水，2h內(nèi)收集的尿量達(dá)到所灌入量的40%以上的大鼠用 于利尿?qū)嶒?yàn)，取篩選合格的大鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只；于實(shí)驗(yàn)前1天晚上大鼠禁 食不禁水，第2天各組大鼠分別按20ml/kg的灌胃體積灌服大、中、小劑量的口服液、呋塞米 片混懸液、芪藶強(qiáng)心膠囊混懸液和同體積的蒸餾水，立即輕壓下腹部使膀胱排空，立即將大 鼠放入代謝籠，每籠一只，每隔Ih記一次尿量，共計(jì)5h，收集給藥后5h的總尿量，測(cè)尿液中 Na+、K+、Cr 的濃度。9. 一種使用如權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)所述的口服液大鼠模型測(cè)定口服液對(duì)大鼠模型 影響的實(shí)驗(yàn)方法，其特征在于，口服液對(duì)大鼠模型影響的實(shí)驗(yàn)方法包括對(duì)大鼠耐氧模型的 影響的實(shí)驗(yàn)、對(duì)大鼠慢性心衰模型的影響的實(shí)驗(yàn)、對(duì)大鼠急性心衰模型的影響的實(shí)驗(yàn)、對(duì)水 負(fù)荷大鼠模型的影響的實(shí)驗(yàn)、急性毒性實(shí)驗(yàn)； 對(duì)大鼠耐氧模型的影響的實(shí)驗(yàn)包括對(duì)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間的影響的實(shí)驗(yàn)、對(duì)小鼠減壓 耐缺氧時(shí)間的影響的實(shí)驗(yàn)、對(duì)小鼠耳殼微循環(huán)的影響的實(shí)驗(yàn)； 急性毒性實(shí)驗(yàn)的具體方法為： 取體重19~22g小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為口服液組和生理鹽水對(duì)照組；實(shí)驗(yàn)前 禁食不禁水12h，口服液組按小鼠灌服的最大體積灌服最大灌服濃度的口服液混懸液，并于 1日之內(nèi)連給3次，每次間隔8h ;生理鹽水對(duì)照組灌服同體積的生理鹽水，然后給動(dòng)物以正 常飲食，連續(xù)觀察14天。10. 如權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述的口服液大鼠模型，其特征在于，口服液的組分為： 人參150g、丹參200g、薤白200g、葶藶子250g、茯苓250g ;制成1000 mL ; 口服液的制備方法： 稱取人參、丹參兩味藥材加10倍量85%乙醇，回流提取3次，每次lh，合并提取液，過 濾，70°C減壓回收乙醇，藥液備用；取處方中剩余三味藥材和上述醇提殘?jiān)?2倍量水，提 取3次，每次lh，合并三次提取液，過濾，濾液濃縮至1:1，Iml相當(dāng)于Ig生藥，離心，加入苯 甲酸鈉、甜蜜素適量，煮沸30min，放冷至室溫，高速離心，濾過，濾液濃縮至適量，與回收乙 醇后的藥液合并，混勻，靜置24h，濾過，再加水至lOOOmL，混勻，灌裝，滅菌，即得； 口服液的使用方法：口服，每次l〇ml，一日3次；根據(jù)心衰程度即I、IIJII度每次分別 應(yīng)用 10ml、20ml、30ml。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種純中藥口服液大鼠模型及測(cè)定對(duì)模型影響的實(shí)驗(yàn)方法，該方法包括對(duì)大鼠耐氧模型的影響的實(shí)驗(yàn)、對(duì)大鼠慢性心衰模型的影響的實(shí)驗(yàn)、對(duì)大鼠急性心衰模型的影響的實(shí)驗(yàn)、對(duì)水負(fù)荷大鼠模型的影響的實(shí)驗(yàn)、急性毒性實(shí)驗(yàn)；所述的對(duì)大鼠耐氧模型的影響的實(shí)驗(yàn)包括對(duì)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間的影響的實(shí)驗(yàn)、對(duì)小鼠減壓耐缺氧時(shí)間的影響的實(shí)驗(yàn)、對(duì)小鼠耳殼微循環(huán)的影響的實(shí)驗(yàn)。本發(fā)明通過臨床觀察實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討了口服液治療氣虛型慢性心力衰竭的療效及不良反應(yīng)情況，為口服液治療慢性心力衰竭的作用機(jī)制研究提供了理論借鑒。
【IPC分類】A61K36/00, G01N33/15, A01K67/027, G01N33/48
【公開號(hào)】CN104983747
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410848112
【發(fā)明人】趙京生, 易偉國(guó), 劉弘, 魏遠(yuǎn)亮, 張正臣
【申請(qǐng)人】中國(guó)人民解放軍第一五二中心醫(yī)院
【公開日】2015年10月21日
【申請(qǐng)日】2014年12月31日