一種銀黃顆粒的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種銀黃顆粒的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 銀黃顆粒記載于中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)，處方為金銀花100g、黃苳150g，采用水提醇沉的 方法制備，用于急慢性扁桃體炎，急慢性咽喉炎，上呼吸道感染，開水沖服，一次1袋，一日3 次，20日為一個(gè)療程，每袋裝20g。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有銀黃顆粒在提取制備方面采用超臨界技術(shù)的報(bào)道，而采用水 提取等方法，工藝粗糙、復(fù)雜、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過(guò)大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本 品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種銀黃顆粒的制備方法。
[0005] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種銀黃顆粒在制備抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞EC-304 增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過(guò)如下的方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] -種銀黃顆粒的制備方法，由金銀花100g、黃芩150g作為原料藥制成，所述的方 法由下列步驟組成：取上述藥材加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總 萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C02流量l-3ml/g生 藥· min，萃取時(shí)間150-180min，得超臨界萃取物，制粒，制備成顆粒劑，每袋重20g。
[0008] 所述銀黃顆粒的制備方法，所述C02超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分 比為5%。
[0009] 所述銀黃顆粒的制備方法，所述C02超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02 流量2ml/g生藥· min，萃取時(shí)間160min。
[0010] 所述銀黃顆粒在制備抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞EC-304增殖藥物中的應(yīng)用，銀黃顆粒 由金銀花l〇〇g、黃芩150g作為原料藥制成，制備方法為：取金銀花100g、黃芩150g，加入到 C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取 壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C02流量l-3ml/g生藥· min，萃取時(shí)間150-180min，得超臨 界萃取物，制粒，制備成顆粒劑，每袋重20g。
[0011] 所述銀黃顆粒在制備抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞EC-304增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在 于銀黃顆粒的制備方法中所述C02超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0012] 所述銀黃顆粒在制備抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞EC-304增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在 于銀黃顆粒的制備方法中所述C02超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量2ml/ g生藥· min，萃取時(shí)間160min。
[0013] 現(xiàn)有技術(shù)中，銀黃顆粒每袋20g，口服，一次1袋，一日3次，采用本發(fā)明制備成的銀 黃顆粒每袋20g，但含有的藥材量比原來(lái)多，在同樣服用量的情況下具有更多活性成分。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 以下通過(guò)實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。
[0015] 實(shí)施例1 :取金銀花100g、黃芩150g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶 劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力30MPa，溫度30°C，C02流量Iml/ g生藥· min，萃取時(shí)間180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，制粒，制備成顆粒齊I」，每袋重 3g〇
[0016] 實(shí)施例2 :取金銀花100g、黃芩150g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶 劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%，萃取壓力15MPa，溫度50°C，C02流量Iml/ g生藥· min，萃取時(shí)間180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，制粒，制備成顆粒齊I」，每袋重 3g〇
[0017] 實(shí)施例3 :取金銀花100g、黃芩150g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶 劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量2ml/ g生藥· min，萃取時(shí)間160min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，制粒，制備成顆粒齊lj，每袋重 3g〇
[0018] 實(shí)施例4 :銀黃顆粒抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞EC-304增殖的實(shí)驗(yàn)研宄資料
[0019] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0020] I. 1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株：人血管內(nèi)皮細(xì)胞EC-304,南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)， DMEM+10% FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0021] 1. 2實(shí)驗(yàn)藥物：研宄藥物：本發(fā)明銀黃顆粒：按實(shí)施例3方法制備。藥液儲(chǔ)液：稱 取IOOmg銀黃顆粒內(nèi)容物，混懸于5ml無(wú)水乙醇中，0. 2 μ m濾器過(guò)濾，500 μ I doff管分 裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí)0. 2 ym濾器過(guò)濾無(wú)水乙醇以備對(duì)照組之用。
[0022] L 3 實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM(GIBCO 公司 Cat. No. 12100-061Lot. No. 758137);胎牛血清 (浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419) ;NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No.11810-033Lot. No. 1088387) Jrypsin(AMRESC0 公司批號(hào)：2010/04) ;EDTA(AMRESCO 公司批號(hào)：2009/10) ;Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號(hào)：2010242); Str印tomycin Sulfate(AMRESO)公司批號(hào)：2010382);無(wú)水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司 批號(hào)：080310182) ;MTT(Biosharp 批號(hào)：0793) ;PBS(實(shí)驗(yàn)室自配）；
[0023] 1. 4實(shí)驗(yàn)器材：萊卡倒置顯微鏡（德國(guó)Leica型號(hào)：DMlL);可見-紫外光微孔板檢 測(cè)儀（美國(guó)MD公司型號(hào)：SPECTRA MAX 190) ;C02培養(yǎng)箱（FORMA型號(hào)：3111);超凈臺(tái)（蘇 凈集團(tuán)安泰公司制造型號(hào)：SW-CJ-ZFD);純水儀（美國(guó)Spring公司型號(hào)：S/N 020579);精 密移液器（法國(guó)吉爾森公司型號(hào)：P2);電子天平（德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào)：BT323S); 全自動(dòng)高壓滅菌鍋（日本SANK)公司型號(hào)：MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密 實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào)：DHG9123A);冰箱（西門子公司型號(hào)：KG18V21TI);液氮罐（CBS型號(hào)： 2001);低速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào)：KA-1000) ;0. 2μπι濾器（MILLIP0RE型號(hào)： SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿（NEST公司）、96孔培養(yǎng)板（NEST公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移 液管、Tips若干。
[0024] 2實(shí)驗(yàn)方法：l)EC-304細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)（10cm 培養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0. 25%胰 蛋白酶-0. 04% EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后 將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000 rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3 X 104個(gè)/ml。2)將細(xì)胞種入96 孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180μ1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中（37°C，5%C02)常規(guī)培 養(yǎng)。3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50%-70%，加入銀黃顆粒溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。4) 24h 后加入20 μ I MTT溶液（5mg/ml，即0. 5% MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用 吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ 1二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶 解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。6)同時(shí)設(shè)置本底（不加細(xì)胞，只加培 養(yǎng)液），對(duì)照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設(shè)定6個(gè) 復(fù)孔。7)結(jié)果以藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示：細(xì)胞增值抑制率（％) = (對(duì)照孔OD值-給藥 孔OD值）/對(duì)照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0025] 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果：MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì) EC-304細(xì)胞增殖抑制有差異（P〈0. 05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性（P〈0. 01)，當(dāng) 劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異（P〈0. 001)。
[0026] 表1銀黃顆粒對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞EC-304增殖抑制影響研宄（X 土 SD)
[0029] 注：與對(duì)照組比較，*P〈0. 01 ;#P〈0. 001
[0030] 4實(shí)驗(yàn)結(jié)論：銀黃顆?？梢砸种迫搜軆?nèi)皮細(xì)胞EC-304增殖，減少人血管內(nèi)皮細(xì) 胞EC-304的細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種銀黃顆粒的制備方法，由金銀花l〇〇g、黃苳150g作為原料藥制成，其特征在 于所述的方法由下列步驟組成：取上述藥材加入到〇)2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑， 夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，CO2流量 l-3ml/g生藥?min，萃取時(shí)間150-180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，制粒，制備成顆粒 劑，每袋重20g。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述銀黃顆粒的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取夾帶劑 占總萃取溶劑的體積百分比為5%。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述銀黃顆粒的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取的萃取 壓力20MPa，溫度40°C，CO2流量2ml/g生藥?min，萃取時(shí)間160min。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述銀黃顆粒在制備抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞EC-304增殖藥物中的應(yīng) 用，其特征在于銀黃顆粒由金銀花l〇〇g、黃芩150g作為原料藥制成，制備方法為：取金銀花 100g、黃芩150g加入到0)2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積 百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C02流量l-3ml/g生藥.min,萃取時(shí)間 150-180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，制粒，制備成顆粒劑，每袋重20g。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述銀黃顆粒在制備抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞EC-304增殖藥物中的應(yīng) 用，其特征在于銀黃顆粒的制備方法中所述CO 2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百 分比為5%。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述銀黃顆粒在制備抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞EC-304增殖藥物中的應(yīng) 用，其特征在于銀黃顆粒的制備方法中所述〇)2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C， CO2流量2ml/g生藥?min，萃取時(shí)間160min。
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，具體提供一種銀黃顆粒的制備方法，由金銀花100g、黃芩150g作為原料藥制成，采用超臨界萃取制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了銀黃顆粒在制備抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞EC-304增殖藥物中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61K9/16, A61K36/539, A61P35/00
【公開號(hào)】CN104922208
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510362968
【發(fā)明人】趙明亮
【申請(qǐng)人】趙明亮
【公開日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年6月28日