一種在體評價中藥藥理活性的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥藥理學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種在體評價中藥藥理活性的新方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥實驗藥理方法是中藥活性評價領(lǐng)域的重要組成部分，傳統(tǒng)的中藥實驗藥理評 價方法是體外試驗法。體外試驗法具有條件可控性強(qiáng)，可在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平進(jìn)行超微、生 化、受體、基因等方面的全面評價。但體外試驗法是用中藥的粗提物直接加入反應(yīng)體系中進(jìn) 行試驗所獲取的評價結(jié)果，在許多情況下該評價結(jié)果非但不能與體內(nèi)試驗結(jié)果相吻合，而 且更不能被臨床應(yīng)用所驗證，致使假陽性和假陰性結(jié)果不斷出現(xiàn)。
[0003] 鑒于上述情況，日本國立京都醫(yī)院的田代真一等首次用柴苓灌胃家兔，取其血清 加入人成纖維母細(xì)胞中培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)有抑制成纖維母細(xì)胞增殖作用，且有時間性和血清濃度 依賴性。繼而，Hiroko Iwama等發(fā)現(xiàn)小柴胡湯煎劑直接加入細(xì)胞培養(yǎng)有致有絲分裂的作用， 但用小柴胡湯煎劑灌胃后的動物血清培養(yǎng)則無此作用。進(jìn)而，田代真一于1988年首次提出 了"血清藥理學(xué)"的概念 [1'2]，使用含有中藥成分的血清替代中藥粗提物進(jìn)行體外試驗，該試 驗方法在某種程度上使評價結(jié)果的可信度大大提高 [3]。因為這種血清所含的中藥成分是經(jīng) 過體內(nèi)一系列生物轉(zhuǎn)化后能夠真正發(fā)揮藥理作用的有效成分，同時也包含那些在中藥有效 成分作用下機(jī)體所產(chǎn)生的內(nèi)源性成分；另外，血清的理化性質(zhì)與細(xì)胞所處的內(nèi)環(huán)境基本相 同，克服了中藥制劑本身的基質(zhì)與性質(zhì)對中藥活性評價結(jié)果的干擾。
[0004] 然而，亦有學(xué)者對血清藥理學(xué)提出質(zhì)疑，提出"加強(qiáng)多層次半體內(nèi)實驗研究"[4]。中 藥血清藥理實驗方法存在的主要問題是：①試驗用含藥血清中的具體成分與組成不明確； ②無法評價含藥血清中的效應(yīng)成分的藥效作用（協(xié)同或拮抗）。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了克服傳統(tǒng)血清藥理評價方法的上述缺陷，本發(fā)明建立了一種用含中藥組分的 生物體液提取物回注的中藥活性評價技術(shù)。具體的技術(shù)方案是：
[0006] (1)制備一定濃度的中藥溶液；
[0007] (2)給予實驗動物由步驟（1)制備的中藥溶液，獲取藥代動力學(xué)[Μ]與藥效動力學(xué) 數(shù)據(jù) [7];采集特定時間點(diǎn)的動物生物體液；
[0008] (3)將步驟⑵采集獲得的動物生物體液經(jīng)適當(dāng)處理，并回注實驗動物體內(nèi)；獲取 含藥血清回注后的藥效動力學(xué)數(shù)據(jù) [7];
[0009] (4)比較由步驟（2)與步驟（3)獲取的藥效動力學(xué)數(shù)據(jù)，評價中藥發(fā)生藥效的時滯 效應(yīng);
[0010] (5)將由步驟（2)獲取的藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)與經(jīng)步驟（4)獲取的時滯效應(yīng)修正后的 步驟（2)的藥效動力學(xué)數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián) [9_11]，評價中藥發(fā)揮藥效的有效成分、協(xié)同與拮抗成分[7_8]。
[0011] 所述的中藥為植物、礦物或動物性中藥材、中藥復(fù)方及中藥的各種現(xiàn)代劑型。所述 的中藥溶液為用中藥制成的供口服或注射用的溶液。所述的實驗動物優(yōu)選小鼠、大鼠、豚 鼠、兔、犬。所述的生物體液優(yōu)選血清、血漿。所述的特定時間點(diǎn)優(yōu)選藥理學(xué)指標(biāo)發(fā)生顯著 變化的時間點(diǎn)，更優(yōu)選藥理學(xué)指標(biāo)發(fā)生最大變化的時間點(diǎn)。
[0012] 所述的生物體液經(jīng)適當(dāng)處理為經(jīng)沉淀蛋白、液-液萃取、固相萃取、減壓干燥、冷 凍干燥等方法處理。
[0013] 所述的回注優(yōu)選血管內(nèi)注射給予實驗動物。所述的時滯效應(yīng)為由于給予所選定中 藥后，實驗動物或其離體臟器所產(chǎn)生的與該中藥相關(guān)的藥理指標(biāo)變化規(guī)律與生物體液提取 物中該中藥相關(guān)的所有可檢測成分濃度變化規(guī)律之間存在的時間滯后效應(yīng)。
[0014] 本發(fā)明還提供了基于上述方法原理編制的數(shù)據(jù)采集與處理程序。所述的數(shù)據(jù)為檢 測的藥理學(xué)指標(biāo)以及由此衍生出來的中藥藥效動力學(xué)參數(shù)或藥效物質(zhì)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。所述的藥 效動力學(xué)參數(shù)為起效時間、最大效應(yīng)時間、效應(yīng)持續(xù)時間。所述的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)為體內(nèi) 移行成分中的效應(yīng)組分、協(xié)同作用組分、拮抗作用組分。所述的體內(nèi)移行成分為血漿或血清 中可檢測成分。所述的可檢測成分為所有可被HPLC、GC、LC-MS n、GC-MSn、LC-NMR檢測的中 藥原始成分及其在動物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物。
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