一種抑制新城疫病毒的制劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于海洋生物技術領域，具體涉及一種抑制新城疫病毒的制劑。
【背景技術】
[0002] 殼聚糖是一種天然陽離子多糖，由于2位氨基的存在，表現(xiàn)出一定的親水性和堿 性，在酸性水溶液中易被質(zhì)子化，而產(chǎn)生多種生物學活性，如抗菌、抗腫瘤等。研宄表明，殼 聚糖的抑菌活性主要與其分子上的氨基有關，在環(huán)境PH小于其pKa時，氨基被質(zhì)子化帶正 電荷，能破壞細胞膜穩(wěn)定性、干擾物質(zhì)轉(zhuǎn)運等方式抑制或殺滅微生物。
[0003] 新城疫是由新城疫病毒（NDV)引起禽類的一種以呼吸道、消化道黏膜出血為典型 癥狀的高度接觸性、急性敗血性傳染病。具有分布范圍廣、易感禽類多、經(jīng)濟損失大、影響國 際貿(mào)易等特點。目前新城疫的防治主要以預防為主，雖然有多種疫苗和免疫方法，但是該病 的發(fā)病率卻仍是居高不下。其主要原因有母源抗體的干擾、病毒引起的免疫抑制等。由于 新城疫防治困難，給我國已造成了巨大的經(jīng)濟損失，引起了人們的極大關注。同時作為免疫 損傷性疾病，對于新城疫的研宄是系統(tǒng)性研宄免疫損傷性疾病的重要基礎。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種抑制新城疫病毒的制劑。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案為：
[0006] -種抑制新城疫病毒的制劑，抑制新城疫病毒的制劑為殼聚糖胺代衍生物；
[0007] 殼聚糖胺代衍生物為N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶呛?或6-脫氧-6-溴代-N-鄰苯二 甲?；鶜ぞ厶?。
[0008] 所述制劑為殼聚糖胺代衍生物溶解液；殼聚糖胺代衍生物溶解液為N-鄰苯二甲 ?；鶜ぞ厶堑娜芙庖汉?或6-脫氧-6-溴代-N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶堑娜芙庖?。
[0009] 所述殼聚糖胺代衍生物溶解液為殼聚糖胺代衍生物經(jīng)生理鹽水溶解獲得。
[0010] 所述抑制新城疫病毒的制劑是濃度為l-l〇g/L的N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶堑纳?鹽水溶解液和/或l-l〇g/L的6-脫氧-6-溴代-N-鄰苯二甲酰基殼聚糖的生理鹽水溶解 液。
[0011] -種抑制新城疫病毒的制劑的應用，所述制劑作為制備抑制新城疫病毒的藥物。
[0012] 所述制劑作為制備有效降低雞胚尿囊液中的新城疫病毒血凝效價的藥物。
[0013] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0014] 1.本發(fā)明采用不同溶劑溶解殼聚糖胺代衍生物，以不同溶劑對其生物活性的釋放 影響進行了評估，并最終采用生理鹽水作為有效溶劑對殼聚糖胺代衍生物進行溶解釋放， 增加殼聚糖正電荷的衍生物殼聚糖胺代衍生物，對新城疫病毒具有很好的抑制作用。
[0015] 2.經(jīng)過充分溶解的N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶呛?-脫氧-6-溴代-N-鄰苯二甲 ?；鶜ぞ厶菍π鲁且卟《揪哂休^好的抑制效果，尤其是N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶呛?-脫 氧-6-溴代-N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶欠謩e與病毒混合，使新城疫病毒的血凝效價由起始時 的11降低至O。
[0016] 3.經(jīng)過熒光定量PCR實驗發(fā)現(xiàn)，N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶呛?-脫氧-6-溴代-N-鄰 苯二甲?；鶜ぞ厶悄苡行Ы档湍蚰乙褐胁《綬NA含量。同時TLR-3和IL-8降低，而IFN-β、 TNF- α增加表明以上兩種物質(zhì)對于機體的影響可能是直接作用于病毒，并加強病毒對免疫 系統(tǒng)的激活效果。
[0017] 4.本發(fā)明所述殼聚糖胺代衍生物除抗病毒以外，經(jīng)證實具有其他多項優(yōu)異的生物 活性，能使抗病毒效果在綜合作用下發(fā)揮最大，且制備簡單，原材料豐富，作為藥物使用能 有效降低毒副作用及相關生物污染。
【附圖說明】
[0018] 圖1為本發(fā)明實施例提供的N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶牵∟PC)和6-脫氧-6-溴 代-N-鄰苯二甲酰基殼聚糖（6BrNPC)的紅外譜圖。 具體實施例
[0019] 下面結合說明書附圖對本發(fā)明作進一步說明，并且本發(fā)明的保護范圍不僅局限于 以下實施例。
[0020] 實施例1
[0021] EID5tl的測定：取 SPF 雞胚 30 枚，分成 6 組，分別注射 1〇-4、1〇-5、1〇-6、1(Τ、1〇-8、1〇- 9 的雞新城疫Lasota病毒原液，37°C孵育72h后收取尿囊液，測定EID5tl= 1(T8_45/0. 2ml，取 150EID5(I為病毒注射量。
[0022] 藥物安全限度測定：將N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶牵∟PC)、6_脫氧-6-溴代-N-鄰苯 二甲?；鶜ぞ厶牵?BrNPC)、6-氨乙胺基-6-脫氧-N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶牵?ANPC)和6-胺 取代-6-脫氧殼聚糖（6AC)四種物質(zhì)，分別經(jīng)生理鹽水（N)、PBS(P)、二甲亞砜（D)溶解，溶 解成5g/L、10g/L、15g/L三個梯度，分別注射于SPF雞胚尿囊腔中，觀察96小時內(nèi)，完全成 活，繼續(xù)培養(yǎng)至出殼，雞胚外觀健康完整，無殘疾。
[0023] 實驗：
[0024] 將N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶牵∟PC)、6_脫氧-6-溴代-N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶?(6BrNPC)、6_氨乙胺基-6-脫氧-N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶牵?ANPC)和6-胺取代-6-脫氧殼 聚糖（6AC)四種物質(zhì)，分別經(jīng)生理鹽水（N)、PBS(P)、二甲亞砜（D)溶解，溶解成lg/L、5g/L、 10g/L三個梯度。各溶解液抽濾除菌后，備用。將Iasota雞新城疫病毒經(jīng)生理鹽水稀釋為 KT6后（原始病毒效價為2 n，96h內(nèi)導致死亡），而后將病毒稀釋液與上述各物質(zhì)的不同濃 度的溶解液以I: I (v/v)的比例混勻，編號為1-12組，備用。
[0025] 取9-11日齡SPF雞胚，用照蛋器觀察雞胚存活情況并畫出氣室，確定打孔位置。 采用碘伏對雞胚氣室外殼進行消毒后，再用75%酒精消毒，打孔器打孔后注射1-12組溶液 0. 2mL/只。血凝效價< 7為治愈。同時將空白組注射生理鹽水，陽性對照1、2、3組分別為 18/1、58/1、1(^/1黃芪多糖生理鹽水溶解液與病毒1 :1(￥八）混合液。陰性對照為10，(鳥新 城疫病毒與生理鹽水1:1 (v/V)混合液。蠟封，避免感染，放置于37°C孵育箱孵育72h。每 隔8小時觀察雞胚存活情況，將24h內(nèi)死亡雞胚剔除，并將死亡雞胚的尿囊液及時抽取進行 血凝試驗。72h后將所有活胚置于-20°C，冷凍1.5h致死抽取尿囊液進行血凝試驗。結果 如下表1.
[0026] 表1 :不同溶劑中殼聚糖胺代衍生物對新城疫病毒治愈率。
[0027]
【主權項】
1. 一種抑制新城疫病毒的制劑，其特征在于：抑制新城疫病毒的制劑為殼聚糖胺代衍 生物； 殼聚糖胺代衍生物為N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶呛?或6-脫氧-6-溴代-N-鄰苯二甲酰 基殼聚糖。
2. 按權利要求1所述的抑制新城疫病毒的制劑，其特征在于：所述制劑為殼聚糖胺代 衍生物溶解液；殼聚糖胺代衍生物溶解液為N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶堑娜芙庖汉?或6-脫 氧-6-溴代-N-鄰苯二甲酰基殼聚糖的溶解液。
3. 按權利要求2所述的抑制新城疫病毒的制劑，其特征在于：所述殼聚糖胺代衍生物 溶解液為殼聚糖胺代衍生物經(jīng)生理鹽水溶解獲得。
4. 按權利要求3所述的抑制新城疫病毒的制劑，其特征在于：所述抑制新城疫病毒的 制劑是濃度為l-l〇g/L的N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶堑纳睇}水溶解液和/或l-10g/L的 6_脫氧-6-溴代-N-鄰苯二甲酰基殼聚糖的生理鹽水溶解液。
5. -種權利要求1所述的抑制新城疫病毒的制劑的應用，其特征在于：所述制劑作為 制備抑制新城疫病毒的藥物。
6. 按權利要求5所述的抑制新城疫病毒的制劑的應用，其特征在于：所述制劑作為制 備有效降低雞胚尿囊液中的新城疫病毒血凝效價的藥物。
【專利摘要】本發(fā)明屬于海洋生物技術領域，具體涉及一種抑制新城疫病毒的制劑。抑制新城疫病毒的制劑為殼聚糖胺代衍生物；殼聚糖胺代衍生物為N-鄰苯二甲?；鶜ぞ厶呛?或6-脫氧-6-溴代-N-鄰苯二甲酰基殼聚糖。本發(fā)明采用不同溶劑溶解殼聚糖胺代衍生物，對不同溶劑對其生物活性的釋放影響進行了評估，并最終采用生理鹽水作為有效溶劑對殼聚糖胺代衍生物進行溶解釋放，增加殼聚糖正電荷的衍生物殼聚糖胺代衍生物，其對新城疫病毒具有很好的抑制作用。
【IPC分類】A61K31-715, A61P31-14
【公開號】CN104784196
【申請?zhí)枴緾N201510148421
【發(fā)明人】邢榮娥, 何曉飛, 李克成, 秦玉坤, 劉松, 于華華, 李鵬程
【申請人】中國科學院海洋研究所
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年3月31日