專利名稱：調(diào)節(jié)新陳代謝,增殖,分化和細(xì)胞程序死亡的含穩(wěn)定二硫鍵的六肽和其衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及醫(yī)藥，更具體地，涉及藥理學(xué)，即涉及依據(jù)使用在臨床實(shí)踐中，通過對(duì)正常和轉(zhuǎn)化細(xì)胞的新陳代謝，增殖，分化和細(xì)胞程序死亡過程的不同影響，來預(yù)防和治療多種病理癥狀和疾病的肽源的活性代謝物來制備醫(yī)療試劑的方法。
本發(fā)明的背景現(xiàn)代藥理學(xué)工業(yè)持續(xù)不斷地在臨床藥物中強(qiáng)化實(shí)施抗炎性和抗腫瘤化學(xué)療法促使產(chǎn)生了兩個(gè)醫(yī)療-生物學(xué)問題對(duì)藥物試劑產(chǎn)生抗性(耐藥性和藥理學(xué)效力降低)，包括激活MDR-基因系統(tǒng)的情況；產(chǎn)生不需要的吸收作用，首先是，通過改變免疫活性細(xì)胞系統(tǒng)和血細(xì)胞生成，表現(xiàn)對(duì)心臟，肝，腎和神經(jīng)毒性。產(chǎn)生這些問題的典型原因是廣泛服用化學(xué)療法試劑，和由于它們的物理化學(xué)性質(zhì)可能相當(dāng)有效的，但它們的真正屬性對(duì)于生物體可能也是異源的單細(xì)胞微生物制備的試劑。
因此，理論和臨床醫(yī)藥研究目前將更多注意力放在天然的主要代謝物上，即，天然確定的，為生理學(xué)上重要并適當(dāng)?shù)倪^程，觸發(fā)內(nèi)源產(chǎn)生和修飾許多生物化學(xué)產(chǎn)物鏈反應(yīng)的，肽源通常的天然細(xì)胞內(nèi)生物化學(xué)因素。
已知進(jìn)行廣泛研究的代謝物是，具體地是含硫肽和其衍生物，首先這是硫羥基團(tuán)。在給定的基團(tuán)中，三肽“谷胱甘肽”(γ-谷氨?；?半胱氨酰基-甘氨酸；本文后面稱為-GSH)的生物學(xué)作用已進(jìn)行了廣泛地研究。
谷胱甘肽三肽二聚物，氧化型谷胱甘肽(雙-(γ-谷氨酰基)-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸；本文后面稱為-GSSG)，其中具有前述分子式的三肽的兩個(gè)分子通過半光氨酸殘基間的共價(jià)鍵結(jié)合，也是眾所周知的。
還發(fā)現(xiàn)了GSSG刺激/調(diào)節(jié)內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子(包括集落刺激，即生長(zhǎng)因子)的獨(dú)特性質(zhì)[1]。而且，以氧化形式外源引入GSSG到生物基質(zhì)中在藥物試劑[1]壽命方面顯示的穩(wěn)定性增強(qiáng)了這些效果。在與以細(xì)胞因子對(duì)主要信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)和對(duì)細(xì)胞基因組的總影響，并通過后者確定細(xì)胞因子對(duì)增殖，分化和細(xì)胞程序死亡調(diào)節(jié)作用為條件的細(xì)胞因子相互作用后，在細(xì)胞(組織，進(jìn)而器官)中發(fā)展的事件是眾所周知的。
在國(guó)際申請(qǐng)[2]中，當(dāng)通過在GSSG和另一種化合物之間產(chǎn)生共價(jià)鍵獲得后者時(shí)，得到一組以含有氧化型谷胱甘肽(GSSG)衍生物作為起作用原理的藥物試劑如其鹽，或包括GSSG和其鹽的組合的組合物藥物；或作為新組合物的衍生物，即新化合物的配方。而且，首先證明所有在GSSG分子二硫結(jié)構(gòu)方面具有不同程度穩(wěn)定性的技術(shù)溶液，可顯著有效地在正常條件下誘導(dǎo)細(xì)胞因子和造血因子產(chǎn)生，并在病理?xiàng)l件下達(dá)到較大程度。并且，由于二硫形式在生物介質(zhì)中形成了新的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，并具有能誘導(dǎo)產(chǎn)生決定一定范圍細(xì)胞因子如IL-2的廣泛調(diào)節(jié)作用，而不僅僅是其刺激作用以及再生作用的多種細(xì)胞因子和造血因子的特點(diǎn)，GSSG衍生物的藥物形式具有較高程度的GSSG分子穩(wěn)定性。
從還原型谷胱甘肽(GSH)前體中獲得谷胱甘肽三肽二聚體，即氧化型谷胱甘肽，GSSG的方法是眾所周知的。
目前有三種氧化還原型谷胱甘肽形式的主要方法。首先，可使用這種溫和的氧化劑如空氣氧[4，5]氧化GSH[3]中半胱氨酸的相當(dāng)不穩(wěn)定的巰基-SH-基團(tuán)。然而，在這種情況中反應(yīng)速度相當(dāng)?shù)?，因此所需產(chǎn)量需要很長(zhǎng)的時(shí)間(許多天)。使用重金屬催化，具體地，使用有毒的銅催化會(huì)給獲取純的藥物帶來明顯的問題。
在另一種氧化方法中使用更有效的氧化劑如過氧化氫，碘，氰亞鐵酸鉀等[6，7]。這些反應(yīng)通常進(jìn)行非常快(數(shù)十分鐘到幾個(gè)小時(shí))，然而，不利之處是很難控制反應(yīng)狀況，會(huì)導(dǎo)致氧化產(chǎn)物如相應(yīng)酸的衍生物，對(duì)產(chǎn)品的顯著污染。因此，需要加入額外的，有時(shí)是相當(dāng)消耗勞力的會(huì)大大方法成本的提純過程。
另一種氧化方法包括使用氣態(tài)物質(zhì)(氮氧化物)，亞砜和其他化合物作為氧化劑，然而，這些氧化劑可能是稀少的并且對(duì)于放大是不可接受的。
在技術(shù)本質(zhì)上是最接近的，另一種預(yù)先知道的獲得氧化的谷胱甘肽作為具有穩(wěn)定二硫鍵的合成物的方法包括使用過氧化氫作為氧化劑[6]。這種方法在室溫下使用過氧化氫等同物在PH約8.0-8.5的水溶液中實(shí)施。反應(yīng)時(shí)間為約1小時(shí)，產(chǎn)率是90％。主要的雜質(zhì)(多達(dá)10％)是其他氧化產(chǎn)物，其只能通過會(huì)大大增加藥物成本的昂貴的制備性HPLC分離法除去。
本發(fā)明的概述本發(fā)明涉及制備具有基于GSSG，即氧化型谷胱甘肽結(jié)構(gòu)類似物，換句話說是基于具有穩(wěn)定二硫鍵的六肽的預(yù)定性質(zhì)的新型藥物可接受的化合物，以及其藥物可接受的衍生物，用來基于調(diào)節(jié)內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子并因此調(diào)節(jié)正常細(xì)胞的新陳代謝，增殖和分化并誘導(dǎo)腫瘤-和/或病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡來治療多種疾病。
在申請(qǐng)的發(fā)明中，包括較好的實(shí)施方案的實(shí)施例，使用了下列此領(lǐng)域中已接受的術(shù)語。
一般，“合成物”是指不同化學(xué)物種的混合物。“混合物”可以是物理混合物或化學(xué)混合物，即，具有包括化學(xué)鍵或靜電相互作用的化學(xué)相互作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，混合物可通過在溶液中溶解和/或分散不同化學(xué)物種，并沉淀或過濾出產(chǎn)物固體制備。在另一個(gè)實(shí)施方案中，混合物可以是含有不同化學(xué)物種，大部分情況中不多于兩種的通過配位作用(氫)或弱共價(jià)鍵結(jié)合的試劑的均相溶液。
“氧化型谷胱甘肽-基化合物”是指具有谷胱甘肽二聚體基本結(jié)構(gòu)的任何化合物，其中二聚體的每個(gè)單元包括在其上獲得鹽的陽(yáng)離子基團(tuán)，或與半胱氨酸基團(tuán)結(jié)合的谷氨酸衍生物，或甘氨酸基團(tuán)的鹽衍生物，三肽的每個(gè)單元相應(yīng)地彼此通過半胱氨酸硫原子鍵合形成硫-硫鍵(二硫鍵)。“衍生物”可通過將氧化型谷胱甘肽-基化合物或前體的至少一個(gè)反應(yīng)基團(tuán)與另一種化學(xué)物種反應(yīng)制備。氧化型谷胱甘肽-基化合物的一個(gè)實(shí)施例是GSSG·Pt本身，即具有穩(wěn)定二硫鍵的六肽。
使用在本申請(qǐng)中的“藥物可接受的鹽”包括使用在身體中對(duì)身體沒有不需要的有害作用的可接受的任何鹽形式的合成衍生物，包括如鈉，鋰，鋅或釩陽(yáng)離子，即分別為鈉鹽，鋰鹽，鋅鹽或釩鹽。
使用在本申請(qǐng)中的“藥物可接受的組合物”(衍生物)包括合成物，或其衍生物，作為藥物可接受的物質(zhì)，并且可以包括與GSSG·Pt共價(jià)結(jié)合的一組活性代謝物或其他化學(xué)化合物。如這樣的衍生物是與苯丙氨酸共價(jià)結(jié)合的GSSG·Pt或與半胱氨酸共價(jià)結(jié)合的GSSG·Pt。
“新陳代謝”，如使用在本申請(qǐng)中的，包括發(fā)生在有生命的生物體內(nèi)的，在所說的生物體中決定生命功能維持的所有生物化學(xué)反應(yīng)的總體[12]。
“增殖”如本申請(qǐng)所使用的，包括由于組成(細(xì)胞)要素相同形式(細(xì)胞)的繁殖或擴(kuò)增[13，14]。
“分化”如使用在本申請(qǐng)中的，涉及帶有相當(dāng)簡(jiǎn)單的功能到較復(fù)雜，特異性功能的細(xì)胞轉(zhuǎn)化的細(xì)胞變化，包括獲得或擁有區(qū)別于源細(xì)胞的性質(zhì)，如通過組織特異基因表達(dá)給定細(xì)胞種類所發(fā)生的形態(tài)上和/或功能上異質(zhì)性[15，16，17，18]。
“細(xì)胞程序死亡”如本申請(qǐng)所使用的，包括由細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)信號(hào)啟動(dòng)的形態(tài)上可區(qū)別形式的遺傳學(xué)上編程性，生理學(xué)細(xì)胞死亡[19，20。21]。
“細(xì)胞因子”如本申請(qǐng)所使用的，包括由在免疫反應(yīng)發(fā)育，造血作用和不同疾病發(fā)病機(jī)理中起到重要作用，通過基因激活實(shí)施它們的作用，參與調(diào)節(jié)所有免疫系統(tǒng)事件的不同細(xì)胞種類產(chǎn)生的肽源調(diào)節(jié)化合物[19，22]。
“醫(yī)療藥物”如本申請(qǐng)所使用的，包括含有本發(fā)明合成物如GSSG·Pt和衍生物的任何藥物形式，其對(duì)腫瘤疾病，感染性疾病，血液疾病，免疫疾病，神經(jīng)退行性變疾病或其他疾病有治療效果。
如本文所使用的，“腫瘤和感染性疾病”，“不同起源的造血作用和免疫抑制”和“其他疾病”意指任何腫瘤或感染性疾病，由紅細(xì)胞或骨髓細(xì)胞抑制或免疫參數(shù)功能或量上的減少引起的或伴生的任何病況，以及任何其他疾病或病理狀況，在這些病況中此領(lǐng)域中的技術(shù)人員會(huì)認(rèn)為對(duì)刺激/調(diào)節(jié)前面所述的細(xì)胞因子和/或造血因子內(nèi)源生成和/或細(xì)胞程序死亡機(jī)理誘導(dǎo)是有利的。
本發(fā)明公開了大量具有穩(wěn)定二硫鍵的氧化型谷胱甘肽基化合物，具體地，以約3000∶1到約1∶1之間比率含有本發(fā)明的化合物和金屬物質(zhì)的合成物，其中金屬物質(zhì)包括從下列包括鉑和鈀的組中選取的金屬，其中氧化型谷胱甘肽基化合物以化學(xué)方法與金屬物質(zhì)相互作用。選擇給出的金屬組是由于鉑和鈀在氧化反應(yīng)方面具有催化屬性。較好地，金屬是鉑，因?yàn)樵诘蜐舛葧r(shí)它是有效的催化劑。理想地，金屬物質(zhì)，與氧化型谷胱甘肽基化合物組合，使合成物可溶解在生物介質(zhì)中。
本發(fā)明的一個(gè)方面提供了含有氧化型谷胱甘肽基化合物和金屬物質(zhì)的合成物。一小部分金屬物質(zhì)可以是不溶的，只要不溶部分不會(huì)對(duì)生物系統(tǒng)產(chǎn)生任何毒性或有害的影響。鉑物料可以從下列組中選取，包括鉑鹽，配位化合物和有機(jī)金屬化合物。較好地，鉑物料是鉑配位化合物如順式-鉑(順式-Pt(NH3)2Cl或順式-二氨二氯鉑(氯化鉑或鉑的氯鹽)或鉑的鉀鹽)。
在一個(gè)較好的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及制備新型氧化型谷胱甘肽基化合物和順式-二氨二氯鉑或鉑酸鉀。本文會(huì)使用便利的簡(jiǎn)短形式符號(hào)，如含有GSSG本身和順式-鉑的合成物將表達(dá)為GSSG·Pt。衍生物將附帶新型附著化學(xué)基團(tuán)表示如，雙-[組氨酰基]-GSSG。
本發(fā)明還提供一種新型方法，用來獲得作為具有化學(xué)式為雙-(γ-L-谷氨?；?-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸二鈉鹽的二硫鍵和鉑物料如順式-二氨二氯鉑或鉑酸鉀的合成物的氧化型谷胱甘肽，較好地，以摩爾比3000∶1；更好地，以摩爾比1000∶或10∶1。
依據(jù)本發(fā)明，合成物特點(diǎn)在于具有穩(wěn)定二硫鍵，由于將二硫鍵引入到生物介質(zhì)中，從而在生物介質(zhì)中以二硫鍵形式提供了較長(zhǎng)的藥物半衰期。
用來制備合成物的本發(fā)明方法的一般步驟包括當(dāng)過氧化氫氧化劑與與鉑物料催化劑，具體地，順式-二氨二氯鉑或鉑酸鉀結(jié)合時(shí)，使用還原型谷胱甘肽進(jìn)行氧化反應(yīng)。本方法允許使用較少量的過氧化氫(如，0.9當(dāng)量的)，使得在產(chǎn)生高產(chǎn)率GSSG(根據(jù)HPLC數(shù)據(jù)高于98％)時(shí)消除過氧化產(chǎn)物產(chǎn)生。這樣，獲得的產(chǎn)物具有高純度并且不需要額外的提純。
應(yīng)指出的是，將通過任何前述過程獲得的現(xiàn)成的氧化型谷胱甘肽與復(fù)合鉑化合物以給定的比率簡(jiǎn)單混合產(chǎn)生顯著低的技術(shù)上和經(jīng)濟(jì)上的效果。在這種情況中，會(huì)招致購(gòu)買現(xiàn)成氧化型谷胱甘肽的額外花費(fèi)(其價(jià)格是還原型的2-3倍)或招致實(shí)施氧化形式合成的額外花費(fèi)，為獲得藥物提純花費(fèi)資金，即產(chǎn)生兩-階段的合成物制備。
本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了一種穩(wěn)定氧化型谷胱甘肽基化合物的二硫鍵的方法。方法包括將氧化型谷胱甘肽基化合物與金屬物質(zhì)相互作用。金屬物質(zhì)包括從包括鉑和鈀的金屬組中選取的?！胺€(wěn)定二硫鍵”是指維持GSSG半胱氨酸的兩個(gè)硫原子之間的鍵并預(yù)防氧化型谷胱甘肽基化合物(GSSG)回到還原型形式(GSH)的容易順暢的逆轉(zhuǎn)。通過維持GSSG形式的谷胱甘肽基化合物較長(zhǎng)的一段時(shí)間，化合物可以在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間在生物介質(zhì)中具有藥物有效性。
在一個(gè)實(shí)施方案中，“將氧化型谷胱甘肽基化合物與金屬物質(zhì)相互作用”包括提供谷胱甘肽基化合物，并將這種化合物與氧化劑和鉑物料反應(yīng)?！肮入赘孰幕衔铩笔侵溉魏尉哂邪ü劝彼?鹽/衍生物結(jié)合半胱氨酸/鹽/衍生物結(jié)合甘氨酸/鹽/衍生物結(jié)構(gòu)的化合物。谷胱甘肽基化合物的實(shí)例包括谷胱甘肽自身或任何衍生物，其中衍生物可以通過將反應(yīng)基與另一種化學(xué)物種反應(yīng)來制備。產(chǎn)物將是氧化型谷胱甘肽的結(jié)構(gòu)類似物，即具有穩(wěn)定二硫鍵的六肽。因此，在本發(fā)明的這個(gè)實(shí)施方案中，谷胱甘肽基化合物是還原形式的，如GSH，與氧化劑反應(yīng)包括氧化谷胱甘肽基化合物制備硫-硫鍵。氧化劑可以是任何可以裂解谷胱甘肽基化合物的S-H鍵產(chǎn)生氫和具有硫基自由基的化合物的物種，硫基自由基最終與另一個(gè)硫基自由基反應(yīng)提供硫-硫鍵。可實(shí)施這種S-H鍵裂解的多種氧化劑在此領(lǐng)域中是眾所周知的。在一個(gè)較好的實(shí)施方案中，氧化劑是從下列組中選取的，包括氧和過氧化氫。
在這種方法中，谷胱甘肽基化合物與氧化劑和鉑物料的反應(yīng)包括氧化反應(yīng)。反應(yīng)物的相對(duì)量較好地為約1當(dāng)量的谷胱甘肽基化合物和少于約1當(dāng)量的氧化劑如過氧化氫，更好地，約0.9當(dāng)量的過氧化氫。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在存在少于1當(dāng)量的氧化劑的情況下，氧化反應(yīng)包括反應(yīng)約1當(dāng)量的谷胱甘肽基化合物和約0.0003當(dāng)量到約1當(dāng)量之間的鉑物料，更好地，約0.001當(dāng)量到約0.1當(dāng)量之間的鉑物料，更好地，約0.001當(dāng)量到約0.01當(dāng)量之間的鉑物料。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在存在少于1當(dāng)量的氧化劑的情況下，約1當(dāng)量的谷胱甘肽基化合物與約1當(dāng)量的鉑物料反應(yīng)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，方法包括用約0.9當(dāng)量的過氧化氫和約0.001當(dāng)量的順式-鉑氧化谷胱甘肽基化合物。這種方法的一個(gè)有利特點(diǎn)是增加氧化谷胱甘肽基化合物的速度。這種方法的另一個(gè)有利特點(diǎn)是產(chǎn)物合成物的產(chǎn)率增加到大于約98％的量，并且這種產(chǎn)率的增加伴隨著純度增加。合成物的提純簡(jiǎn)單到顯著的程度，因?yàn)榭梢詫?shí)施液體色譜獲得合成物純度高于99％，其符合藥物標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)這種方法，先有技術(shù)方法已經(jīng)獲得僅為75％-93％的氧化型谷胱甘肽。
在一個(gè)較好的實(shí)施方案中，合成物在存在順式-二氨二氯鉑的情況下通過氧化還原型谷胱甘肽一個(gè)步驟合成。反應(yīng)條件可以通過使用少于1當(dāng)量的過氧化氫精確調(diào)節(jié)。因此，可以減少過氧化產(chǎn)物形成，產(chǎn)生接近定量產(chǎn)率的產(chǎn)物。這樣，一個(gè)步驟的合成物合成提供了顯著的技術(shù)上的簡(jiǎn)化并產(chǎn)生具有穩(wěn)定二硫鍵的合成物GSSG·Pt。
在一個(gè)較好的實(shí)施方案中，反應(yīng)在含有還原型谷胱甘肽單鈉鹽的溶液中實(shí)施，并在室溫下攪拌加入約0.9當(dāng)量的過氧化氫和約0.001當(dāng)量的具有下列組合的下列復(fù)合水溶鉑或鈀化合物
a)Pt[(NH3)2]Cl2順式-二氨二氯鉑(II)，b)K2[PtCl4]四氯鉑酸鉀(II)，c)K2[PtCl4]四氯鈀酸鉀(II)，并以它們作為GSH分子氧化反應(yīng)的催化劑。氧化反應(yīng)一般進(jìn)行約1.5-2小時(shí)?？赏ㄟ^HPLC測(cè)定法實(shí)施對(duì)氧化過程完成的控制。通過將反應(yīng)溶液凍干產(chǎn)生含有摩爾比為1000∶1(通過對(duì)鉑和鈉的光譜分析證實(shí))的氧化型谷胱甘肽和順式二氨二氯鉑的合成物完成反應(yīng)過程。根據(jù)氨基酸測(cè)試，NMR(1H)光譜，HPLC的停留時(shí)間的數(shù)據(jù)，獲得的合成物的肽組成與六肽，雙-(γ-L-谷氨?；?-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸對(duì)應(yīng)?；旌衔镔|(zhì)不超過2％，計(jì)算干合成物作為二鈉鹽的產(chǎn)物產(chǎn)率為96％-98％。
本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了一種刺激內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子的方法，包括給需要刺激細(xì)胞因子和造血因子或兩者的哺乳動(dòng)物體內(nèi)引入，有效量的含有比率在約3000∶1到約1∶1之間的氧化型谷胱甘肽基化合物和金屬物料的合成物的步驟，其中金屬物料包括從下列包括鉑和鈀的組中選取的金屬。
本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了一種增強(qiáng)和延長(zhǎng)氧化型谷胱甘肽基化合物刺激內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子的能力的方法。所說的方法包括將氧化型谷胱甘肽基化合物與金屬物料以約3000∶1到約1∶1的比率相互作用的步驟，其中金屬物料包括從下列包括鉑和鈀的組中選取的金屬。
并且，本發(fā)明另一個(gè)方面提供了一種治療患有疾病的受試體的方法，疾病是從包括下列疾病的組中選取的致癌性疾病，感染性疾病，缺血性疾病或神經(jīng)退行性變疾病。方法包括給需要這種治療的受試體服用，刺激內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和/或造血因子或兩者的有效量的，含有比率為約3000∶1到約1∶1之間的氧化型谷胱甘肽基化合物和金屬物料的合成物，以獲得治療效果?！爸委熜Ч卑ň徍突颊卟r，預(yù)防或治療不需要的身體狀況，并可以包括從下列組中選取的過程，包括調(diào)節(jié)正常細(xì)胞的增殖，調(diào)節(jié)正常細(xì)胞的分化，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡，其中轉(zhuǎn)化細(xì)胞可包括病理上改變的細(xì)胞，首先，包括腫瘤轉(zhuǎn)化細(xì)胞和病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞。
在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化型谷胱甘肽基化合物具有通式 其中A，B，D，E，G和H每個(gè)可以是從包括有機(jī)單元和有機(jī)單元的鹽的組中選取的。較好地，“有機(jī)單元”允許谷胱甘肽基化合物在生物介質(zhì)中保持可溶性，另外，有機(jī)單元不應(yīng)給應(yīng)用劑量的氧化型谷胱甘肽基化合物帶來毒性?？梢岳斫庹J(rèn)為，A，B，D，E，G和H可以是相同的或是不同的。較好地，A-H基團(tuán)每個(gè)可以包括從下列組中選取的單元，包括胺基團(tuán)，羧基基團(tuán)和酰胺。如，A-H可以表示氨基酸或通過酰胺鍵結(jié)合的衍生物?？商鎿Q地，A-H中的任何兩個(gè)可通過至少一個(gè)共價(jià)鍵彼此結(jié)合。這樣，A-H可形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，合成物包括比金屬物料超量較多的氧化型谷胱甘肽基化合物，較好地比率在約3000∶1到1∶1之間，更好地比率在約1000∶1到10∶1之間，更好地比率在約1000∶1到約100∶1之間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，合成物包括等量的氧化型谷胱甘肽基化合物和金屬物料，即比率為約1∶1。
在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化型谷胱甘肽基化合物是氧化型谷胱甘肽本身(GSSG)和其鹽，其中A和E都是-CO2H，B和D都是-NH2，G和H都是-CO2M，M是抗衡離子。抗衡離子可以是質(zhì)子，有機(jī)基離子如四烷基-銨，堿性金屬，堿土金屬，或過渡金屬元素?？梢岳斫庹J(rèn)為，在水溶介質(zhì)中，A-H的任何一個(gè)可以包括離子化基團(tuán)，如A和E可以是-CO2，B和D可以是-NH2+，離子化基團(tuán)可通過適當(dāng)?shù)目购怆x子中和。
堿性合成物可通過前述方法制備，在存在氧化劑的情況下從金屬和還原型谷胱甘肽相互作用中制備。
獲得的包括GSSG·Pt物質(zhì)的這些化合物和其藥物可接受的藥物形式，可用作治療用途的醫(yī)療藥物，根據(jù)需要這種藥物的受試體的初始受試體生物學(xué)狀況，來刺激/調(diào)節(jié)大范圍的細(xì)胞因子和造血因子的內(nèi)源產(chǎn)生，和/或再生細(xì)胞因子的作用以及實(shí)施涉及正常細(xì)胞(新陳代謝，增殖和分化調(diào)節(jié))和轉(zhuǎn)化細(xì)胞(細(xì)胞程序死亡機(jī)理誘導(dǎo))的分化作用?！稗D(zhuǎn)化細(xì)胞”是指腫瘤轉(zhuǎn)化細(xì)胞和/或病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞。
GSSG·Pt物質(zhì)和其藥物可接受的衍生物，具體地其鹽的治療致癌疾病和包括病毒感染的感染性疾病的治療效果，可以解釋為刺激廣泛的內(nèi)源細(xì)胞因子產(chǎn)生，具有專門激活轉(zhuǎn)化細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡的獨(dú)特能力。
實(shí)施的試驗(yàn)和臨床研究表明，從GSSG·Pt物質(zhì)和其衍生物中獲得的藥物的治療效果取決于可考慮認(rèn)為是在治療多種疾病中的它們的合適用途的，多細(xì)胞因子激活作用和再生細(xì)胞因子和造血因子作用的能力。
依據(jù)本發(fā)明，對(duì)具體器官/組織具有最大親和力和生物-藥理學(xué)作用的，提供調(diào)節(jié)正常細(xì)胞中的新陳代謝，增殖和分化過程，及在腫瘤和/或病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡機(jī)理的醫(yī)療試劑包括前述合成物，GSSG·Pt，即具有穩(wěn)定二硫鍵的六肽，作為活性原理。
依據(jù)本發(fā)明，醫(yī)療試劑設(shè)計(jì)用來調(diào)節(jié)內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子，和/或再生細(xì)胞因子的作用，因此，提供調(diào)節(jié)新陳代謝，增殖，分化和細(xì)胞程序死亡的過程。
依據(jù)本發(fā)明，醫(yī)療試劑被設(shè)計(jì)用來治療致癌疾病，感染性疾病，免疫學(xué)疾病，血液學(xué)疾病，缺血性疾病，神經(jīng)退行性變疾病，新陳代謝病變和內(nèi)分泌疾病。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療肺癌的醫(yī)療試劑包括含有GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療惡性黑素瘤的醫(yī)療試劑包括含有雙-[3-碘代-酪氨酰基]-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療腦腫瘤的醫(yī)療試劑包括含有雙-[多巴胺]-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療結(jié)腸直腸癌的醫(yī)療試劑包括含有雙-[半胱胺]-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療乳腺癌的醫(yī)療試劑包括含有半胱胺-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療前列腺癌的醫(yī)療試劑包括含有GSSG·Pt鋅鹽的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療卵巢癌的醫(yī)療試劑包括含有茶堿-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療急性成淋巴細(xì)胞白血性增生的醫(yī)療試劑包括含有GSSG·Pt鋰鹽的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療急性成骨髓細(xì)胞白血性增生的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt鋰鹽和半胱胺-GSSG·Pt和它們的組合的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療肺結(jié)核的醫(yī)療試劑包括含有雙-[組氨酰基]-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療從包括病毒性肝炎B，病毒性肝炎C和它們混合感染的疾病組中選取的疾病的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt和次黃苷-5-monophosphatyl-GSSG·Pt的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療從包括腦膜炎，膿毒癥的疾病組中選取的疾病的醫(yī)療試劑包括含有四-多巴胺-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療腹膜炎的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt和四-多巴胺-GSSG·Pt和它們的組合的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療病毒源，具體地是Rift Valley熱，和/或細(xì)菌源，具體地是兔熱病的特別危險(xiǎn)的感染的醫(yī)療試劑包括從含有體細(xì)胞抗原-GSSG·Pt和/或抗體(抗體細(xì)胞抗原的)-GSSG·Pt的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療急性胰腺炎的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt和次黃苷-5-monophosphatyl-GSSG·Pt和它們的組合的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療化膿性手術(shù)后后遺癥的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt和次黃苷-5-monophosphatyl-GSSG·Pt和它們的組合的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療AIDS的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt和尿嘧啶核苷-[5-monophosphatyl]-GSSG·Pt和它們的組合的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療感染源免疫抑制性疾病的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt和尿嘧啶核苷-[5-monophosphatyl]-GSSG·Pt和它們的組合的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療血管球性腎炎的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt和GSSG·Pt鋰鹽和它們的組合的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt和GSSG·Pt鋰鹽和它們的組合的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療膠原性疾病的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt和GSSG·Pt鋰鹽和它們的組合的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt和GSSG·Pt鋰鹽和它們的組合的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療過敏性病況的醫(yī)療試劑包括從含有GSSG·Pt和二氫氟化物-GSSG·Pt和它們的組合的合成物組中選取的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療I類糖尿病的醫(yī)療試劑包括含有GSSG·Pt釩鹽的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療II類糖尿病的醫(yī)療試劑包括含有雙-[lipoyl]-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療缺血性大腦病況的醫(yī)療試劑包括含有雙-[苯丙氨酰基]-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療缺血性心臟病的醫(yī)療試劑包括含有雙-[carnosyl]-GSSG·Pt([β-丙氨?；?L-組氨?；鵠-GSSG·Pt)的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療主要表現(xiàn)為功能性心肌失調(diào)癥的缺血性心臟病的醫(yī)療試劑包括含有丙三醇-[1，3-二phosphatyl]GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療神經(jīng)退行性變疾病的醫(yī)療試劑包括含有雙-[3，4-二羥基苯丙氨酰基]-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療脫髓鞘癥的醫(yī)療試劑包括含有雙-[3，4-二羥基苯丙氨酰基]-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療大腦組織缺氧的醫(yī)療試劑包括含有γ-羥基-[丁?；鵠-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療狂燥-抑郁性精神病的醫(yī)療試劑包括含有γ-氨基-[丁?；鵠-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療表現(xiàn)為在脈管動(dòng)脈硬化-形成脂蛋白平衡中的新陳代謝紊亂的疾病的醫(yī)療試劑包括含有雙-[煙?；鵠-GSSG·Pt的合成物。
依據(jù)本發(fā)明，較好的醫(yī)療試劑被用來治療由下丘腦-腦垂體-卵巢的改變引起的內(nèi)分泌疾病的醫(yī)療試劑包括含有folliculyl-[琥珀?；鵠-GSSG·Pt的合成物。
本發(fā)明用附隨示圖演示，示圖是示意的，不意味著對(duì)范圍的限定。在這些圖中，在不同圖中演示的每個(gè)相同或接近相同的組成由單一數(shù)字表示。為了清楚，在演示不是使此領(lǐng)域中普通技術(shù)人員理解本發(fā)明所必需的情況下，不是每一個(gè)組成在每一張圖中都標(biāo)出，也不是本發(fā)明的每個(gè)實(shí)施方案的每種組成都顯示出。
本發(fā)明附圖的簡(jiǎn)述

圖1表示雙-(γ-L-谷氨酰基)-L-半胱氨酰-雙-甘氨酸二鈉鹽和順式-二氨二氯鉑的結(jié)構(gòu)。
圖2表示氧化型谷胱甘肽二鈉亞和順式-二氨二氯鉑的合成物的合成流程。
圖3顯示了由于氮原子的孤對(duì)電子，鉑和兩個(gè)NH3基團(tuán)間的供體-受體鍵。
圖4顯示了GSSG分子二硫鍵穩(wěn)定化的提議機(jī)理，由于配體交換-二硫鍵上的NH3基團(tuán)-和通過由于硫原子的孤對(duì)電子在鉑原子和兩個(gè)硫原子間形成的供體-受體鍵。
圖5顯示了GSSG分子穩(wěn)定化的提議機(jī)理，通過在圖4中給出的機(jī)理以及通過谷胱甘肽的NH2基團(tuán)上的NH3配體的交換(NH2基團(tuán)匯集和GS片段，相對(duì)地)形成GSSG·Pt合成物的新“生物物理學(xué)”，用方塊(□)表示供體部位，圓環(huán)表示( )受體部位。
圖6顯示GSSG·Pt分子化學(xué)修飾的主要部位(圓環(huán)內(nèi)的)。
圖7顯示雙-苯丙氨酰基-GSSG·Pt的結(jié)構(gòu)。
圖8顯示了雙-(L-苯丙氨?；肔-谷氨?；?-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸和順式-二氨二氯鉑的合成流程。
圖9顯示了雙-(γL-谷氨?；?-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸的結(jié)構(gòu)。
圖10顯示了源產(chǎn)物的處理步驟，即還原型谷胱甘肽和過氧化氫，PH＝8(GSSG·Pt鋰鹽的合成流程步驟)。
圖11顯示了單體六肽雙-(γL-谷氨酰基)-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸的提取(III，GSSG·Pt鋰鹽合成流程的步驟)。
圖12顯示了將氧化型GSSG(III)形式轉(zhuǎn)化成GSSG·Pt鋰鹽。
圖13顯示了對(duì)照組(1)，和用GSSG(2)，GSSG·Pt(3)溫育48小時(shí)治療后正常細(xì)胞的DNA降解特性。
圖14顯示了對(duì)照組(1)，和用GSSG(2)，GSSG·Pt(3)溫育48小時(shí)治療后HL-60細(xì)胞的DNA降解特性。
圖15(a)顯示了S-硫乙胺·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖15(b)顯示了雙-[DL-6，8-thioetic acid]·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖15(c)顯示了[β-丙氨?；?L-組氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖15(d)顯示了[9-β-D-ribofuranosyl腺嘌呤基1]·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖15(e)顯示了雙-[L-2-氨基-4-[甲基硫代]丁酸]·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖16(a)顯示了雙-[甲硫氨酰基]·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖16(b)顯示了雙-[天冬氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖16(c)顯示了雙-[組氨酰基]·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖16(d)顯示了雙-[3-碘代-酪氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖16(e)顯示了雙-[γ-氨基丁?；鵠·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖16(f)顯示了雙-[γ-羥基丁?；鵠·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖16(g)顯示了雙-[3，4-二羥基苯丙氨酰基]·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖17(a)顯示了雙-煙?；?谷胱甘肽二硫化物(雙-[嘧啶-3-羰基])·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖17(b)顯示了尿苷-5’-monophosphatyl·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖17(c)顯示了次黃苷-5’-monophosphatyl·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖17(d)顯示了folliculyl琥珀酰基·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖17(e)顯示了丙三醇-1，3-二phosphatyl·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖18(a)顯示了四-多巴胺·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖18(b)顯示了茶堿·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
圖19(a)顯示了雙-carnosyl·谷胱甘肽二硫化物(雙-[β-丙氨?；?L-組氨?；鵠-GSSG·Pt)的結(jié)構(gòu)。
圖20(a)顯示了非-對(duì)稱的混合二硫化物化合物的結(jié)構(gòu)。
圖20(b)顯示了對(duì)稱的混合二硫化物化合物的結(jié)構(gòu)。
圖20(c)顯示了對(duì)稱的和雙橋連混合二硫化物化合物的結(jié)構(gòu)。
圖21(a)顯示了二釩酸鹽的結(jié)構(gòu)。
圖21(b)顯示了二氫氟酸鹽的結(jié)構(gòu)。
圖21(c)顯示了二鋰鹽的結(jié)構(gòu)。
圖21(d)顯示了鋅鹽的結(jié)構(gòu)。
圖22顯示了polipeptide[抗原或抗體]·谷胱甘肽二硫化物的結(jié)構(gòu)。
合成物合成流程在圖2中提供。
GSSG·Pt合成物獲得為是氧化型谷胱甘肽的結(jié)構(gòu)類似物的給定化合物，即，依據(jù)其化學(xué)式具有穩(wěn)定二硫鍵的六肽，提供了兩個(gè)方向的新作用。
首先-用鉑化合物對(duì)二硫鍵的穩(wěn)定作用顯著地增強(qiáng)了GSSG·Pt在生物介質(zhì)中氧化型形式的壽命，大大延伸了對(duì)GSSG特異的生物藥理學(xué)作用。此外，鉑物料和氧化型谷胱甘肽(GSSG)分子之間的相互作用提供了配體交換的可能性，即，替換NH3基團(tuán)，擁有兩對(duì)孤對(duì)電子的兩個(gè)硫原子可與鉑原子包含在供體/受體鍵中。由于氧化型谷胱甘肽基化合物的NH2基團(tuán)的匯集和通常GSSG構(gòu)象的穩(wěn)定作用(圖5)，還可以考慮增加有關(guān)前述二硫鍵的穩(wěn)定作用的可能性。
其次-在合成物內(nèi)存在鉑化合物以同樣顯著的方式增加了GSSG·Pt化學(xué)修飾能力，以GSSG·Pt和另一種化學(xué)(生物化學(xué))化合物之間的共價(jià)鍵為基礎(chǔ)，獲得多種其衍生物作為新型化合物(新物質(zhì)結(jié)構(gòu)式)。而且，在合成物中的Pt是GSSG·Pt和另一種化學(xué)/生物化學(xué)組成之間共價(jià)鍵形成的催化劑。
通過對(duì)基本GSSG·Pt分子的化學(xué)修飾，可能產(chǎn)生新型藥物，其中在擁有以氧化型谷胱甘肽與順式-二氨二氯鉑為基礎(chǔ)的已表現(xiàn)出高度醫(yī)療生物活性的基本結(jié)構(gòu)的分子中，有其他共價(jià)鍵合生物化學(xué)化學(xué)分子的片段。對(duì)共價(jià)鍵合組合的應(yīng)用使得多種重要藥物特性如穩(wěn)定性和組合物的標(biāo)準(zhǔn)化屬性得到增強(qiáng)。化學(xué)修飾的基礎(chǔ)是具有兩個(gè)初級(jí)谷氨酸氨基基團(tuán)，胱氨酸二硫鍵和甘氨酸的羧基基團(tuán)和谷氨酸的α-羰基基團(tuán)的GSSG·Pt六肽核(圖6)。
有意選取的生物化學(xué)上顯著的分子的共價(jià)鍵合片段可以顯著地改善基本GSSG·Pt物料的醫(yī)療生物特性，使得它們對(duì)每種具體治療目的更具有選擇性，在所需的治療過程中產(chǎn)生明顯的改善。其可能以在生物化學(xué)活性機(jī)理方面片段添加的作用，向靶細(xì)胞或靶分子轉(zhuǎn)運(yùn)藥物分子的明顯改善，增強(qiáng)的對(duì)受體的親和力，氧化-還原(氧化還原作用)潛能必要的重新分布和多種因素以及它們的組合為條件。因此，應(yīng)做的事情是獲得多種具有預(yù)定屬性的新型化學(xué)化合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化型谷胱甘肽基化合物可以是谷胱甘肽和半胱胺的衍生物。谷胱甘肽可以在合成物制備后衍生，或可以在制備合成物前衍生，即GSH可以在氧化成二聚物前衍生。圖15(a，b，c，d)描述了不同谷胱甘肽基化合物及接著獲得氧化型谷胱甘肽基化合物的多種實(shí)施例。
在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化型谷胱甘肽基化合物具有?；某跫?jí)谷氨酸氨基基團(tuán)。這種變體最適合通過N-保護(hù)的活化氨基酸衍生物進(jìn)行?；?，其中在半胱氨酸巰基基團(tuán)的臨時(shí)保護(hù)步驟后接著縮合(活化酯法)，除去N-和S-保護(hù)基團(tuán)，通過加入順式-二氨二氯鉑用過氧化氫氧化，產(chǎn)生在谷氨酸氨基基團(tuán)上被氨基酸修飾的GSSG·Pt合成物。在這個(gè)實(shí)施方案中，氧化型谷胱甘肽基化合物可以從下列組中選取，包括雙-[甲硫氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物(圖16a)，雙-[天冬氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物(圖16b)，雙-[組氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物(圖16c)，雙-[3-碘代-酪氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物(圖16d)，雙-[γ-氨基丁酰基]·谷胱甘肽二硫化物(圖16e)，雙-[γ-羥基丁酰基]·谷胱甘肽二硫化物(圖16f)，雙-[3，4-二羥基苯丙氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物(圖16g)。
當(dāng)合成物包括苯丙氨酰基基團(tuán)時(shí)，化合物是雙-苯丙氨?；?GSSG·Pt(參看圖7)。
根據(jù)這種基本流程，依據(jù)通過被保護(hù)的氨基酸，羥基酸，碳酸和它們的衍生物的衍生物對(duì)氨基基團(tuán)的酰化作用，合成所有其他GSSG·Pt修飾。由于修飾分子的具體性質(zhì)對(duì)方法作出少許改變是可能的。初始GSH化合物的保護(hù)基團(tuán)包括Bam(N-羥甲基苯甲酰胺)。氨基酸(AA)可以用如BOC(氨基甲酸丁酯)或O-Su(N-羥基琥珀酰亞胺酯；具體細(xì)節(jié)參看圖8)基團(tuán)來保護(hù)。 當(dāng)合成物是雙-甲硫氨?；?GSSG·Pt時(shí)，即(Met)2GSSG·Pt，甲硫氨酸的摻入可包括縮合步驟后BOC-保護(hù)基團(tuán)解封閉。
當(dāng)合成物是雙-天冬氨?；?GSSG·Pt時(shí)，天冬氨酸基團(tuán)可依據(jù)前述通用流程引入。β-羧基基團(tuán)的保護(hù)基較好地除去，如果可能，如果需要同時(shí)使用BOC保護(hù)基。N-BOC-天冬氨酸的β-叔丁基酯，即BOC-Asp(OBU’)-OSu，可在縮合步驟使用。保護(hù)基可通過三氟乙酸(TFA)除去。
當(dāng)合成物是雙-組氨?；?GSSG·Pt時(shí)，組氨酸咪唑環(huán)可通過二-叔丁基-氧羰基組氨酸衍生物保護(hù)，即BOC-His(BOC)-OSu，其可使用在縮合步驟。如在前面情況中，保護(hù)基可通過三氟乙酸除去。
當(dāng)合成物是雙-3-碘代-酪氨酰基-GSSG·Pt時(shí)，可能的保護(hù)基是對(duì)酸不穩(wěn)定的保護(hù)基如叔丁基酯。使用在縮合步驟的酪氨酸衍生物可以是BOC-Tyr(OBu’)-OSu。
當(dāng)合成物是GAGA-GSSG·Pt(γ-氨基丁?；?GSSG·Pt)時(shí)，對(duì)酸不穩(wěn)定的保護(hù)性叔丁氧基羰基(BOC)基團(tuán)可使用在縮合步驟。
當(dāng)合成物是GOBA-GSSG·Pt(γ-羥基丁酰基-GSSG·Pt)時(shí)，對(duì)酸不穩(wěn)定的基團(tuán)叔丁基酯(其可通過三氟乙酸溶液除去)可用來保護(hù)GOBA羥基基團(tuán)。使用在縮合步驟的衍生物可以是GAGA(OBu’)-OSu。
當(dāng)合成物是雙-lipoyl-GSSG·Pt時(shí)，可以相信認(rèn)為，硫辛酸的副功能基團(tuán)不需要特別保護(hù)。在縮合步驟中可能使用硫辛酸的活化(羥基琥珀酰亞胺)酯。也不需要TFA處理。
當(dāng)合成物是雙-3，4-二羥基苯丙氨?；?GSSG·Pt(雙-DOPA-GSSG·Pt)時(shí)，為了引入DOPA分子，需要通過叔丁酯預(yù)先保護(hù)3，4-二羥基苯丙氨酸的兩個(gè)羥基基團(tuán)及通過BOC-保護(hù)基保護(hù)氨基基團(tuán)。對(duì)于使用合成物前體的縮合步驟，可獲得超摩爾量使用的活化酯(羥基琥珀酰亞胺或戊氟代苯基酯)。使用三氟所有溶液除去保護(hù)基可同時(shí)進(jìn)行。
當(dāng)合成物是雙-[carnosyl]-GSSG·Pt(雙 β 丙氨酰基-L-組氨?；?GSSG·Pt)，在縮合步驟前，肌肽可保護(hù)為β丙氨酸氨基基團(tuán)和組氨酸咪唑基團(tuán)的雙-BOC衍生物。然后，如前所述實(shí)施縮合步驟和接著的解封閉。雙-[carnosyl]-GSSG的結(jié)構(gòu)可在圖19a中找到。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化型谷胱甘肽基化合物含有與從包括雜環(huán)碳酸和核苷酸的組中選取的單元鍵合的酰胺或磷酰胺。氧化型谷胱甘肽基化合物所實(shí)例包括雙-煙酰基-谷胱甘肽二硫化物(雙-[嘧啶-3-羰基]·谷胱甘肽二硫化物)(圖17a)，尿苷-5’-monophosphatyl·谷胱甘肽二硫化物(圖17b)，次黃苷-5’-monophosphatyl·谷胱甘肽二硫化物(圖17c)，folliculyl琥珀酰基·谷胱甘肽二硫化物(圖17d)，和丙三醇-1，3-二phosphatyl·谷胱甘肽二硫化物(圖17e)。
當(dāng)合成物是雙-煙?；?GSSG·Pt(雙-嘧啶-3-羰基-GSSG·Pt)時(shí)，不含副功能基團(tuán)的煙堿酸可引入到與合成物前體的縮合物中，并且沒有獲得保護(hù)的衍生物作為相應(yīng)的活化酯如羥基琥珀酰亞胺或戊氟代苯基。TFA處理除去保護(hù)基也不需要。
當(dāng)合成物是尿苷-5’-monophosphatoyl-GSSG·Pt(UMP-5’-GSSG·Pt)時(shí)，存在N，N-二環(huán)己基-碳化二亞胺的尿苷-5’-單磷酸可在與酰胺的反應(yīng)中形成磷酰胺連接[10]。合成物前體可含有保護(hù)的羧基基團(tuán)，如用作為氨基組成的四三甲基甲硅烷基衍生物。解封閉可在柔和的水-醇體系中實(shí)施。
當(dāng)合成物是次黃苷-5’-monophosphatoyl-GSSG·Pt時(shí)，IMP-5’-GSSG·Pt，合成流程與前述衍生物的合成流程相似(UMP-5’-GSSG)。
當(dāng)合成物是folliculyl琥珀?；?GSSG·Pt時(shí)，在GSSG·Pt和雌酮之間的連接可通過酰胺和酯鍵通過琥珀酰殘基產(chǎn)生。雌酮可通過與琥珀酐反應(yīng)轉(zhuǎn)化到活化衍生物中，接著通過N，N-二環(huán)己基碳化二亞胺和保護(hù)的或封閉的合成物前體還有四-三甲基甲硅烷基衍生物縮合。解封閉可在水-醇溶液中實(shí)施。
當(dāng)合成物是丙三醇-1，3-二phosphatyl-GSSG·Pt時(shí)，修飾可使用保護(hù)的合成物前體，四-三甲基甲硅烷基衍生物作為氨基組成，通過碳化二亞胺法實(shí)施。合成法與磷酰胺衍生物合成法相似(參看實(shí)施例13和14)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化型谷胱甘肽基化合物可從包括四-多巴胺·谷胱甘肽二硫化物(圖18a)和茶堿·谷胱甘肽二硫化物(圖18b)的組中選取。酰胺連接的形成可出現(xiàn)在合成物羧基基團(tuán)和酰胺之間。全部四個(gè)羧基基團(tuán)的反應(yīng)性非常相似，因此，可獲得混合產(chǎn)物。
當(dāng)合成物是四-多巴胺-GSSG·Pt時(shí)，多巴胺的3，4-二叔丁基酯可用作氨基組成和二叔丁基氧羰基衍生物，合成物可用作羧基組成?？s合可通過N，N-二環(huán)己基-碳化二亞胺實(shí)施，除去保護(hù)基可使用三氟乙酸溶液實(shí)施。
當(dāng)合成物是GSSG·Pt-茶堿時(shí)，茶堿可用作氨基組成，合成物前體可用作羧基組成，如二-叔丁基氧羰基衍生物?？s合可使用“F”復(fù)合物實(shí)施。除去保護(hù)基可使用三氟乙酸溶液實(shí)施。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化型谷胱甘肽基化合物可以包括混合的二硫化物?？赡艿慕M合結(jié)構(gòu)可包括混合二硫化物的形成(對(duì)稱和非對(duì)稱的)。(參看圖20a-20c)一種結(jié)構(gòu)(圖20b)可通過巰基起始物料的共同氧化形成。這可以不需要其他保護(hù)基和縮合方法。
另一種化合物(圖20a)可通過在半胱胺氨基基團(tuán)和合成物前體的一個(gè)羧基基團(tuán)之間形成酰胺鍵獲得。其可能需要引入N-保護(hù)基及活化合成物前體的羧基基團(tuán)。由于存在羧基基團(tuán)，其需要控制化學(xué)當(dāng)量和/或?qū)Ξa(chǎn)物實(shí)施色譜分離。
由于存在其他氨基組成等同物，合成條件與結(jié)構(gòu)20b不同。在色譜提純中，使用結(jié)構(gòu)20b作為參考。
其從結(jié)構(gòu)20c獲得，通過在巰基反應(yīng)中形成其他二硫鍵。在產(chǎn)品的色譜分離中，其需要使用結(jié)構(gòu)20b作為參考。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化型谷胱甘肽基化合物可以是從包括堿金屬鹽，堿土金屬鹽和過渡金屬鹽的組中選取的鹽。這種鹽的實(shí)例包括二釩酸鹽(圖21a)，二氫氟酸鹽(圖21b)，二鋰鹽(圖21c)，二多巴銨鹽和二鋅鹽(圖21d)。
這些鹽可通過加入相應(yīng)量的鹽形成組成，堿或酸獲得。含有氨基基團(tuán)的鹽的實(shí)例包括GSSG·Pt的二釩酸鹽((HVO3)2-GSSG·Pt)或GSSG·Pt的二氫氟化物((HF)2·GSSG·Pt)。含有羧基基團(tuán)的鹽的實(shí)例包括二鋰鹽GSSG·Pt(參看實(shí)施例2)，GSSG·Pt二多巴銨鹽或GSSG·Pt鋅鹽。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，依據(jù)前面描述的方法，可獲得包含合成物如六肽雙-(-L-谷氨?；?-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸二鈉鹽和順式-二氨二氯鉑(順式-鉑)的藥物。
其他較好的衍生物包括GSSG·Pt物料衍生物的鈉鹽形式，鋰鹽，鉀鹽，鈣鹽，鋅鹽，鉬鹽，釩鹽和其他鹽形式，以及通過與苯丙氨酸共價(jià)鍵合獲得的GSSG·Pt衍生物，或與甲硫氨酸和包括本文描述氨基酸的D和L形式的其他氨基酸；或與半胱胺，硫鋅酸，或與次黃苷共價(jià)鍵合獲得的GSSG·Pt衍生物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)使用組合物包括50％的GSSG·Pt和全部L形式的氨基酸以及50％的GSSG·Pt和兩種化學(xué)上相當(dāng)?shù)陌被?，一種表示為D形式，另一種表示為L(zhǎng)形式時(shí)，在這種情況中，可獲得GSSG·Pt治療效果的免疫學(xué)，生物學(xué)和分子生物學(xué)作用的表現(xiàn)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，基于GSSG·Pt和蛋白質(zhì)分子(多肽源物質(zhì))之間的共價(jià)鍵形成，形成了多肽化合物。重要的是，作為蛋白質(zhì)物質(zhì)，使用的或者是從微生物獲得的抗原，或者是從用抗原免疫動(dòng)物身體后獲得的抗體。在圖22中，有一個(gè)基于一種物質(zhì)的羧基基團(tuán)和另一種物質(zhì)的氨基基團(tuán)之間的肽鍵CO-NH形成，形成GSSG·Pt和蛋白質(zhì)物質(zhì)的化合物的實(shí)例。蛋白質(zhì)分子與GSSG·Pt分子的綴合物可通過GSSG·Pt的一個(gè)羧基基團(tuán)和蛋白質(zhì)的α-或ε-NH2基團(tuán)之間肽(酰胺)鍵形成而獲得。水溶碳化二亞胺或戊二醛可用作綴合試劑。目標(biāo)產(chǎn)品可通過透析或凝膠色譜法提純。
在血液和組織(器官)中引入到生物介質(zhì)中的新型GSSG·Pt的藥物代謝動(dòng)力學(xué)(與GSSG本身比較)表明GSSG·Pt分子對(duì)GSSG代謝酶適用性很小，首先對(duì)依賴NADP·H+還原酶，將GSSG還原成GSH的主要酶，適用性很小。據(jù)此，在生物介質(zhì)中二硫化物形式的GSSG·Pt的半衰期就顯著地增加了(參看表5，6和7和實(shí)施例3和4)。
將具有穩(wěn)定二硫鍵的六肽(GSSG·Pt)的新型藥物代謝動(dòng)力學(xué)與結(jié)構(gòu)類似物，即氧化型谷胱甘肽(GSSG)進(jìn)行根本上的比較，為新確定下列生物-藥理學(xué)作用提供最優(yōu)表現(xiàn)·在放射和化學(xué)免疫抑制的條件下，刺激/調(diào)節(jié)內(nèi)源產(chǎn)生顯著廣泛范圍的細(xì)胞因子，生長(zhǎng)和造血因子(IL-1α和γ，IL-2，IL-3，IL-4，IL-6，IL-8，IL-10和IL-12，TNF-α，IFN-α和IFN-γ，促紅細(xì)胞生成素，集落-刺激因子)(參看實(shí)施例5-7)；
·由于機(jī)理誘導(dǎo)免疫顯著基因的氧化還原敏感性表達(dá)和細(xì)胞信號(hào)-傳導(dǎo)系統(tǒng)的關(guān)鍵蛋白質(zhì)“鑒定”半胱氨酸修飾，再生一些細(xì)胞因子作用(IL-2，IL-12，IFN-α和IFN-γ)；·調(diào)節(jié)在細(xì)胞中，特別是免疫細(xì)胞，神經(jīng)元以及肝和腎細(xì)胞中形成氧化還原-輪廓的主要酶的活性；·在接受放射和高劑量組合化療的患者中恢復(fù)降低的骨髓造血作用，包括紅細(xì)胞，白細(xì)胞和血小板數(shù)量以及CD3+，CD4+，CD8+，CD16/56+，CD19/20+，CD25+，CD34+，CD95+(參看實(shí)施例9-13)；·嗜肝作用以及減小心臟，腎和神經(jīng)毒性癥候(在活性抗細(xì)菌，抗病毒和抗腫瘤化療條件下)；·有關(guān)正常細(xì)胞(包括在功能應(yīng)激作用下的細(xì)胞)和轉(zhuǎn)化細(xì)胞的分化作用，即，在在正常細(xì)胞/組織中的新陳代謝，增殖和分化刺激，同時(shí)，能僅在腫瘤和/或病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡。
本發(fā)明藥物的另一個(gè)有利特點(diǎn)是GSSG·Pt物料和其鹽對(duì)新陳代謝異?，F(xiàn)象的糾正作用，特別是對(duì)II類糖尿病的碳水化合物代謝損傷的糾正作用。在這種情況中(參看實(shí)施例7)，由于GSSG·Pt物料(其釩鹽)的作用，恢復(fù)組織中正常cAMP/cGMP比率以及硫醇-二硫化物比率，在患者血液中提供穩(wěn)定固定到正常值的葡萄糖含量，這是很可觀的治療效果。
制備合成物的方法使合成作為設(shè)計(jì)藥物具有多種新性質(zhì)基礎(chǔ)的不同種合成物成為可能，也就是
·增加的生物化學(xué)藥物穩(wěn)定性，即，GSSG新陳代謝酶的“非-攻擊能力”(即對(duì)這些酶功能非常小的影響)，首先，依賴NADP·H+谷胱甘肽還原酶的“非-攻擊能力”，基本上增加了在生物介質(zhì)中二硫化物形式的藥物半衰期；·具有高水平供體-受體潛能的新生物物理學(xué)組成；·在所說的分子內(nèi)存在新活性位點(diǎn)，因此完全新的進(jìn)行化學(xué)修飾的能力。
合成物的屬性使其可作為單一細(xì)胞的“回轉(zhuǎn)儀”，在極端外部環(huán)境因素(物理，化學(xué)和生物因素)條件下提供恢復(fù)下列平衡·在細(xì)胞因子分布內(nèi)，即主要調(diào)節(jié)增殖的細(xì)胞因子；主要調(diào)節(jié)免疫活性細(xì)胞分化的細(xì)胞因子；·細(xì)胞氧化還原勢(shì)能的比率，包括由于恢復(fù)硫醇-二硫化物新陳代謝，電子動(dòng)力學(xué)的供體/受體平衡；NAD/NAD·H和NADP/NADP·H的比率；·cAMP/cGMP比率，細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)離子化鈣的變化；·轉(zhuǎn)錄分化因子(NFκB)和增殖因子(AP-1)的關(guān)系；p53，p21和Ras-蛋白質(zhì)的功能活性表現(xiàn)的關(guān)系，因此，考慮到在正常和轉(zhuǎn)化細(xì)胞中這些作用基本上不同的表現(xiàn)，提供細(xì)胞增殖，分化和細(xì)胞程序死亡的平衡。
在氧化型谷胱甘肽基化合物的二硫鍵和鉑物料之間存在化學(xué)的相互作用形成對(duì)生物系統(tǒng)的電子平衡方案的新生物物理學(xué)感應(yīng)。同時(shí)不受任何理論的約束，化學(xué)的相互作用可被認(rèn)為是供體/受體對(duì)，其中在硫原子上的孤電子對(duì)能潛在地與電子缺乏物質(zhì)相互作用，如鉑物料。再者，同時(shí)不受任何機(jī)理的約束，如果細(xì)胞活性和細(xì)胞物理狀態(tài)至少部分由整個(gè)生物系統(tǒng)的供體/受體相互作用來確定，那么，在電子供體和具有等同生物勢(shì)能的受體間的平衡可以是一種生命參數(shù)。這種平衡的變化可用來調(diào)節(jié)不同細(xì)胞的功能和物理性質(zhì)[11]。移動(dòng)電子源可以包括π-電子，如氮，氧和硫的孤對(duì)電子。在正常細(xì)胞中只有很少的受體基團(tuán)(如-C＝O-基團(tuán))能通過供體電子如π-電子的供體/受體動(dòng)力學(xué)來平衡。
惡性細(xì)胞的特點(diǎn)在于劇烈地破壞了供體/受體的平衡，具有過量的供體電子。在癌細(xì)胞中幾乎沒有受體分子。對(duì)在這種情況中的這種不平衡的可能解決方法是存在在相同分子內(nèi)具有供體/受體特性的分子，如GSSG·Pt物料。將GSSG·Pt引入到生物介質(zhì)中可使生物介質(zhì)中電子平衡的恢復(fù)。這種恢復(fù)可包括在涉及形成活性氧的反應(yīng)中鉑原子的催化作用，如過氧化物陰離子自由基，純氧。
在當(dāng)前情況中，細(xì)胞電子平衡是GSSG·Pt物料與細(xì)胞GSH相互作用產(chǎn)生氧化還原，即供體/受體對(duì)(這說明所說的供體是GSH)。如果在細(xì)胞中有高含量的GSH，這是具有高增殖性動(dòng)力，助氧化性的，即氧化性的腫瘤轉(zhuǎn)化細(xì)胞的特點(diǎn)，那么GSSG·Pt物料的性質(zhì)就以最顯然的方式表現(xiàn)了。在這種情況中，在腫瘤細(xì)胞中形成氧化應(yīng)激，僅使腫瘤細(xì)胞線粒體功能改變，產(chǎn)生細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)。
對(duì)于正常但“勞累”，“疲勞”的細(xì)胞，可存在有氧化-還原勢(shì)能優(yōu)化作用，新陳代謝轉(zhuǎn)化的生物能量提供，基因組功能位點(diǎn)，具體地，免疫顯著基因和轉(zhuǎn)錄因子的氧化還原敏感性適當(dāng)表達(dá)。
對(duì)于轉(zhuǎn)化細(xì)胞，GSSG·Pt可能有與涉及π-電子的鏈轉(zhuǎn)化反應(yīng)重要功能的不相容性，破壞沿呼吸鏈的電子/質(zhì)子轉(zhuǎn)化反應(yīng)的線粒體氧化還原反應(yīng)(從線粒體中釋放細(xì)胞色素C)，混亂NAD·H+/NADP·H比率，即產(chǎn)生細(xì)胞程序死亡的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)。
作用原理，具有能刺激/有益地調(diào)節(jié)內(nèi)源細(xì)胞因子和造血因子產(chǎn)生以及誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞細(xì)胞程序死亡的穩(wěn)定二硫鍵的，GSSG與從包括鉑和鈀的組中選取的金屬物質(zhì)的合成物(GSSG·Pt/Pd)，可通過下列新穎的，由作者研究的肽合成技術(shù)獲得。GSSG與復(fù)合鉑(II)或鈀(II)化合物的合成物的合成方法將170克(0.55摩爾)的還原型谷胱甘肽(GSH)懸浮在200毫升水，伴隨攪拌，和139毫升(0.55摩爾)的4N氫氧化鈉溶液中，然后將下列溶液中的一種加入a)170毫升0.05％順式-二氨二氯鉑順式-[Pt(NH3)2Cl]水溶液(0.28毫摩爾)；b)235毫升0.05％四氯鉑鉀K2[PtCl4]水溶液(0.28毫摩爾)；c)185毫升0.05％四氯鈀鉀K2[PdCl4]水溶液(0.28毫摩爾)；將獲得的透明，淡黃色溶液冷卻到18-20℃，將283毫升的3％過氧化氫溶液(H2O2溶液)以小部分經(jīng)5分鐘加入，以反應(yīng)化合物的溫度不超過22-25℃(浸沒的溫度計(jì))的速度加入。
加入過氧化氫溶液(H2O2溶液)30分鐘后，測(cè)定pH值。然后將4N腐蝕性蘇打溶液逐滴加入，使pH達(dá)到5.6-5.8，并伴隨溫度控制，溫度應(yīng)在22-25℃內(nèi)。然后，將冷卻停止但攪拌在室溫繼續(xù)進(jìn)行30分鐘以上。
通過HPLC測(cè)定實(shí)施對(duì)氧化反應(yīng)完成的控制。制備HPLC用的液相色譜裝置，Beckman，Sol.類，136型，Det.168，LunaPhenomenex ODS 4.6×250毫米柱，或同樣的柱。為制備HPLC移動(dòng)相，將20立方厘米的甲基氰和1立方厘米的新鮮蒸餾的三氟乙酸加入到1000立方厘米量瓶中，加入去離子水將體積增加到刻度上?；旌先芤翰⑼ㄟ^在真空中晃動(dòng)脫氣。
在加入全部量的過氧化氫30分鐘后，通過高產(chǎn)液相色譜(HPLC)法核查氧化反應(yīng)完成。使用微注射器，取10μl反應(yīng)化合物并將它們?nèi)芙獾?毫升的移動(dòng)相(0.1％三氟乙酸∶甲基氰，98∶2)中。將20μl獲得的溶液加入到色譜Beckman 126溶劑型，Diod排列探測(cè)器168型，Luna Phenomenex ODS 4.6×250毫米柱，或同樣的柱中。用等度法實(shí)施洗脫，以1毫升/分鐘流速在0.1％三氟乙酸∶甲基氰，98∶2的系統(tǒng)中洗脫30分鐘，在220納米檢測(cè)，掃描190-600納米。
在前述條件下，對(duì)于還原型谷胱甘肽，停留時(shí)間是5.0±0.5分鐘，對(duì)于氧化型谷胱甘肽停留時(shí)間是11.0±0.5分鐘。
如果依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)色譜譜整合后的HPLC數(shù)據(jù)，氧化型谷胱甘肽的量少于97％，那么以相同方式攪拌繼續(xù)30分鐘以上，并重復(fù)HPLC控制。
如果產(chǎn)物等于或超過97％時(shí)，則認(rèn)為反應(yīng)完成了，可以進(jìn)入反應(yīng)溶液過濾階段，這時(shí)，使用孔大小不超過0.7μm的過濾器。
在真空(1毫米汞柱)中氯化鈣和五氧化二磷上在100℃干燥到恒重，干燥中的重量損失不超過5％。
根據(jù)HPLC數(shù)據(jù)在制備的產(chǎn)物中主要物質(zhì)含量不低于98％。
這樣，獲得了氧化型谷胱甘肽與Pt(II)或Pd(II)復(fù)合化合物的合成物。
表觀白色無味粉末。
溶解性溶解于水，注射用0.9％氯化鈉等張溶液；不溶于95％乙醇，氯仿，醚和其他有機(jī)溶劑。
溶液透明度和顏色10毫升水中0.05克藥物溶液是透明并無色的溶液。
1％溶液的pH值電勢(shì)測(cè)定為5.0-6.0，裝置是pH/mV/℃儀Cole Parmer，59003-15型或相同的。
真實(shí)性a)氨基酸分析(6N鹽酸，110℃，20小時(shí))，甘氨酸-2.0±15％；谷氨酸-2.0±15％；半胱氨酸-2.0±40％；氨基酸分析儀AAA T-339M Prague或相同的。
b)HPLC-在排放時(shí)，其對(duì)應(yīng)雙-(-L-谷氨?；?-L-半胱氨酰-雙-甘氨酸二鈉鹽的標(biāo)準(zhǔn)。
色譜條件裝置-BECKMAN“Gold Nouveau色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)”6.0版，Diod排列探測(cè)器126型或相同的。
測(cè)定-移動(dòng)相中20μl的0.1％藥物溶液，在ULTRASPEREODS 250±4.6毫米柱上用轉(zhuǎn)化C18相，在等度條件甲基氰-0.1％三氟乙酸(2∶98)中色譜；流速為1毫升/分鐘，在220納米測(cè)定，掃描190-600納米。
純度(主要物質(zhì)含量)a)在HPLC中不少于98％；b)在氨基酸分析中不少于85％(依據(jù)部分“真實(shí)性”分析，“a”項(xiàng)使用精確重量)。
元素含量確定方法將精確測(cè)定的重量(約50毫克)溶解在50毫升重蒸餾水中，并將溶液用作分析。
在由英國(guó)VG Elemental制備的裝置上，使用感應(yīng)結(jié)合等離子體，通過質(zhì)譜測(cè)定分析法定量確定鉑含量。分析法的相對(duì)精確度是5％。
在由美國(guó)Therno Jarell Ash制備的裝置上，使用感應(yīng)結(jié)合等離子體，通過原子發(fā)射光譜法定量確定其他元素含量。分析法的相對(duì)精確度是5％。
c)依據(jù)發(fā)射光譜法測(cè)定鈉(Na)含量為7.0±0.5％。
d)依據(jù)質(zhì)譜法測(cè)定鉑(Pt)含量為0.032±0.01％。
e)依據(jù)質(zhì)譜法測(cè)定鉑(Pd)含量為0.017±0.01％。元素含量，μg/克
因此，為了隨后使用在動(dòng)物和人類中的獲得的六肽合成物(GSSG·Pt)，可用作為可注射藥物形式的藥物可接受的GSSG·Pt衍生物，通過將一定量的物質(zhì)溶解在注射用無菌水中或溶解在任何藥物可接受的溶劑中制備，合成濃度為0.01-3.0％。為了在試驗(yàn)設(shè)置中體外應(yīng)用，GSSG·Pt或其衍生物可溶解在表現(xiàn)相應(yīng)試驗(yàn)可接受的溶劑中，如培養(yǎng)介質(zhì)，等張鹽水溶液，葡萄糖溶液等。
GSSG·Pt，其鹽和組合物的可注射藥物形式已在動(dòng)物研究以及對(duì)病人的廣泛臨床試驗(yàn)和中間試驗(yàn)中測(cè)試。用于人類和動(dòng)物的藥物形式應(yīng)在無菌和不含熱原的條件下制備，盡力預(yù)防藥物形式的化學(xué)或細(xì)菌污染。
本發(fā)明提供有益的特性是，含有合成物或其衍生物的藥物具有對(duì)內(nèi)源細(xì)胞因子產(chǎn)生過程的調(diào)節(jié)作用，因此，調(diào)節(jié)T-和B-淋巴細(xì)胞亞群(CD+-細(xì)胞)的增殖和分化過程。藥物誘導(dǎo)可導(dǎo)致產(chǎn)生寬范圍的細(xì)胞因子和造血因子和CD+-淋巴細(xì)胞。因此，在這個(gè)范圍內(nèi)，從細(xì)胞因子相互作用方面來看，有關(guān)它們刺激的效果的刺激劑-細(xì)胞因子和拮抗劑-細(xì)胞因子都有(如IL-1α和β和IL-4的“關(guān)系”)。由此，根據(jù)初始患者免疫發(fā)生系統(tǒng)狀態(tài)，超活性或活性不足，本發(fā)明的藥物能恢復(fù)在系統(tǒng)中破壞的平衡。
給出的方案在實(shí)施例9-13中演示，實(shí)施例顯示患有免疫抑制的患者(接受放療或組合化療的癌癥患者)，細(xì)胞因子合成誘導(dǎo)(IL-1α和β，IL-2，IL-3，IL-4，IL-6，IL-10和IL-12，IFN-α和IFN-γ)可伴隨著CD3+，CD4+，CD8+，CD16/56+，CD25+，CD34+數(shù)量的恢復(fù)；患有免疫自攻擊癥狀的患者-在細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞或成纖維細(xì)胞的克隆體上，在病毒肝炎C情況中，F(xiàn)as-Ag(CD95+)表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞程序死亡機(jī)理誘導(dǎo)并消除病毒轉(zhuǎn)化和/或“攻擊的”細(xì)胞。
本發(fā)明的另一個(gè)有益特性包括，在注射引入GSSG·Pt物料后10分鐘(在第30分鐘觀察到峰值(從淋巴細(xì)胞獲得的細(xì)胞溶質(zhì)蛋白的最大量磷酸化))發(fā)現(xiàn)合成物對(duì)分離的人類淋巴細(xì)胞的影響，顯著增加了淋巴細(xì)胞細(xì)胞溶質(zhì)蛋白酪氨酸的磷酸化程度，這是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)活性的統(tǒng)一特點(diǎn)。由于GSSG·Pt物料的影響(參看實(shí)施例8)，cAMP，cGMP，依賴?yán)w維醇-磷酸信號(hào)系統(tǒng)的主要因素的這些狀態(tài)上的改變，引起氧化-還原敏感性基因表達(dá)，首先，是與細(xì)胞因子和造血因子合成有關(guān)的免疫顯著基因。因此，用于治療目的的GSSG·Pt物料不僅刺激細(xì)胞因子和造血因子內(nèi)源產(chǎn)生，還提供生物化學(xué)和生理學(xué)上細(xì)胞因子作用的再生，具體地，在腫瘤和逆轉(zhuǎn)錄病毒病理?xiàng)l件下觀察到的受體對(duì)細(xì)胞因子敏感性喪失的情況中。
在腫瘤和/或病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞中，細(xì)胞程序死亡機(jī)理可通過GSSG·Pt物料的多種細(xì)胞因子激活作用，其對(duì)依賴p53和不依賴p53細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)機(jī)理的影響，以及通過在惡性細(xì)胞(癌細(xì)胞)中供體/受體π-電子平衡的變化來誘導(dǎo)(參看實(shí)施例14-16)。
根據(jù)初始患者生物學(xué)狀況，包括他的免疫狀況免疫缺損，即活性不足；或免疫自攻擊，即超活性；存在腫瘤-或病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞-合成物和/或其藥物可接受的衍生物能分別用作內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子刺激劑/改造劑，和/或作為細(xì)胞程序死亡機(jī)理誘導(dǎo)劑。
合成物可通過多種方式服用口服或以從下列組中選取的溶液服用，包括吸入溶液，局部用滴液，眼滴液，鼻內(nèi)注入液，表皮涂劑藥膏，靜脈內(nèi)溶液，注射液，和栓劑。較好地，谷胱甘肽通過注射服用或局部服用。
在一個(gè)實(shí)施方案中，合成物以約0.1毫克/公斤體重到約1.0毫克/公斤體重之間的劑量服用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，合成物以約1毫克/平方米體表面積到約100毫克/平方米體表面積的劑量服用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物可一天使用一次或多次，通過一天或多天的脈沖服用或連續(xù)服用，直到獲得所需的治療效果。
在一個(gè)較好的實(shí)施方案中，將GSSG·Pt物料藥物可接受的衍生物引入到身體中，對(duì)于GSSG·Pt或其鹽以每公斤體重0.01到0.1毫克的GSSG·Pt物料的劑量；或以每平方米體表面積1到100毫克的劑量，當(dāng)表皮使用/通過滴入時(shí)，也以每平方米體表面積1到100毫克的劑量，每24小時(shí)期間至少一次。同樣，藥物可以通過連續(xù)注射或別的方式引入到身體中，對(duì)于GSSG·Pt本身和其鹽，24小時(shí)總劑量從每公斤體重0.1毫克到1.0毫克，及在每24個(gè)小時(shí)期間從每平方米體表面積1毫克到100毫克。
在合成物以溶液服用時(shí)，較好地，溶液含有合成物濃度在約1％到約10％。較好地，注射用的GSSG·Pt物料藥物可接受的衍生物是在藥物可接受的溶劑中，如，包括水，葡萄糖溶液，氯化鈉的等張溶液，合成鹽溶液的水溶液。也可使用其他生理學(xué)上的溶劑或載體。當(dāng)合成物以注射形式服用時(shí)，較好的可注射形式包括濃度在約0.01％到約3％之間的合成物溶液。
對(duì)于包括使用在不同體腔的局部應(yīng)用，有機(jī)溶劑或載體可以膏劑，糊劑，霜?jiǎng)┗蛩▌┬问绞褂谩?br> 下面給出的本發(fā)明實(shí)施方案的實(shí)施例演示了本發(fā)明實(shí)踐應(yīng)用的可行性，并證實(shí)其有效性，還演示了考慮到寬范圍列出的疾病(實(shí)施例9-18)使用一組研制的醫(yī)療藥物的便利方法。本發(fā)明實(shí)施方案的實(shí)施例實(shí)施例1合成雙-(L-苯丙氨酰基γL-谷氨?；?-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸二鈉鹽(I)藥物總特性1.名稱雙-(L-苯丙氨?；肔-谷氨?；?-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸二鈉鹽，與順式二氨二氯鉑的合成物。
2.結(jié)構(gòu)式-參看圖7。
3.總分子式C38H48N8O14Na2S2·[Pt(NH3)2Cl2]。
4.分子量950，94C38H48N8O14Na2S2含Pt0.033％。
5.表觀白色無味粉末。
6.溶解性溶解于水，注射用0.9％氯化鈉等張溶液；不溶于95％乙醇，氯仿，醚和其他有機(jī)溶劑。
7.溶液透明度和顏色0.05克藥物的10毫升水溶液是透明的無色的。
8. 0.1％溶液的pH值5.75(電勢(shì)測(cè)定)
9.真實(shí)性a)氨基酸分析(6N鹽酸，110℃，20小時(shí))，(誤差量20％，對(duì)于半胱氨酸-35％)，相應(yīng)地甘氨酸-2.00；谷氨酸-1.92；半胱氨酸-1.81；苯丙氨酸-2.04。
b)NMR(1H)-光譜，依據(jù)-“BRUKER”AM 500，500MHz，D2O。
δ片段 氨基酸7.20 -Cαγ-H苯丙氨酸4.70 -CαH- 半胱氨酸3.75 -CαH- 谷氨酸3.27 -CH2- 甘氨酸2.95 -CH2- 半胱氨酸2.52 -CH2- 谷氨酸2.15 -CH2- 谷氨酸10.純度(主要物質(zhì)含量)a)在HPLC中不少于97％；裝置BECKMAN“Gold Nouveau色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)”6.0版，Diod排列探測(cè)器126型。測(cè)定-移動(dòng)相中20μl的0.1％藥物溶液，在ULTRASPERE ODS 250±4.6毫米柱上用轉(zhuǎn)化C18相，在等度條件甲基氰-0.1％三氟乙酸(2∶98)中色譜；流速為1毫升/分鐘，在220納米測(cè)定，掃描190-600納米，PDA功能-輪廓圖，3D。
b)在氨基酸分析中不少于85％(依據(jù)9a項(xiàng)使用精確重量分析)；c)薄層色譜是均相的，將5μl藥物溶液引入到譜帶中實(shí)施分析。板是Kieselgel60f(Merck)10×5厘米的板，系統(tǒng)n.丁醇-乙酸-水(4∶1∶1)。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法實(shí)施顯像-(水合)茚三酮和氯/對(duì)二氨基聯(lián)苯。Rf＝0.15；d)依據(jù)發(fā)射光譜法測(cè)定鈉(Na)含量為4.8％。
e)依據(jù)質(zhì)譜法測(cè)定鉑(Pt)含量為0.033％。
元素含量，μg/克銀(Ag) ＜1.0(少于0.0001％)鋁(Al)2.0砷(As) ＜1.0鋇(Ba) ＜0.50鈹(Be) ＜0.05鈣(Ca)7.0鎘(Cd) ＜0.05鈷(Co) ＜0.5鉻(Cr)1.7銅(Cu) ＜0.5鐵(Fe) ＜1.0鉀(K) ＜2.5硒(Se) ＜2.0
鎂(Mg)＜2.5錳(Mn)＜0.2鉬(Mn)＜0.2鎳(Ni)＜0.5鉛(Pb)＜0.40鍶(Sr) 1.9鈦(Ti)＜0.5釩(V) ＜0.5鋅(Zn) 0.65銻(Sb)＜0.5確定方法將精確測(cè)定的重量(約50毫克)溶解在50毫升重蒸餾水中，并將溶液用作分析。
在由英國(guó)VG Elemental制備的PQe裝置上，使用感應(yīng)結(jié)合等離子體，通過質(zhì)譜測(cè)定分析法定量確定鉑含量。分析法的相對(duì)精確度是5％。
在由美國(guó)Therno Jarell Ash制備的TRACE 61E裝置上，使用感應(yīng)結(jié)合等離子體，通過原子發(fā)射光譜法定量確定其他元素含量。分析法的相對(duì)精確度是5％。
12.干燥中的重量損失10％，干燥直到在100℃真空中(1毫米汞柱)氯化鈣和五氧化二磷上恒重。
(II)合成方法描述13.過程化學(xué)流程-參看圖8。
14.方法描述(III)將產(chǎn)物(I)γL-谷氨?；?L-半胱氨?；?雙-甘氨酸3.07克(10毫摩爾)和N-羥甲基苯甲酰胺(II)5.89克(13毫摩爾)溶解在30毫升無水三氟乙酸(TFA)中在室溫混合1小時(shí)。然后在40℃真空將溶劑蒸餾，在剩余物中加入30毫升無水乙醇，在真空中再次蒸餾溶劑，這個(gè)過程再重復(fù)兩次。產(chǎn)物通過在50毫升無水二乙基醚中研磨結(jié)晶，在過濾器中過濾并用2×20毫升的無水醚沖洗，進(jìn)-步在真空中在氫氧化鉀和五氧化二磷上干燥。在90％乙醇中重結(jié)晶。獲得產(chǎn)物-5.50克(80％)。Rf＝0.43；Kieselgel60f(Merck)10×5厘米，系統(tǒng)n.丁醇-乙酸-水(4∶1∶1)。
(V)將產(chǎn)物(III)4.40克(10毫摩爾)在15毫升蒸餾水和25毫升二氧雜環(huán)乙烷的混合物中攪拌，混合，加入10毫升(20毫摩爾)的2N氫氧化鈉溶液。
然后將3.62克(10毫摩爾)的苯丙氨酸N--羥基琥珀酰亞胺酯(IV)加入到反應(yīng)混合物中，并在室溫下連續(xù)攪拌12小時(shí)。
然后將混合物在40℃真空蒸發(fā)到干燥。將殘留物溶解在200毫升乙酸乙酯中并用2×20毫升的1N硫酸，水，重碳酸鈉(2×50)沖洗，水和有機(jī)層在無水氯化鈣上面。然后在40℃真空中將乙酸乙酯蒸餾到干燥，產(chǎn)物從乙酸乙酯/醚中結(jié)晶。
通過過濾分離結(jié)晶物，并在真空中五氧化二磷上干燥至恒重。獲得產(chǎn)物(V)-4.88克(70％)。Rf＝0.43；Kieselgel60f(Merck)10×5厘米，系統(tǒng)n.丁醇-乙酸-水(4∶1∶1)。
(VI)將產(chǎn)物(V)6.87克(10毫摩爾)溶解在20毫升蒸餾的三氟乙酸中，將溶液在室溫下保持2小時(shí)。然后將產(chǎn)物用純醚(約200毫升)沉淀，過濾，并在真空中氫氧化鉀上干燥至恒重。獲得產(chǎn)物(V)-5.28克(90％)。Rf＝0.48；Kieselgel60f(Merck)10×5厘米，系統(tǒng)n.丁醇-乙酸-水(4∶1∶1)。
(VII)將產(chǎn)物(IV)5.87克(10毫升)溶解在100毫升甲醇-水的混合物中，然后加入200毫升(10號(hào)摩爾)乙酸汞溶液，將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后用硫化氫鼓吹流過溶液20分鐘。在測(cè)試中控制沉淀效率。將硫化汞沉淀過濾；濾出物在真空中蒸發(fā)到體積為10毫升；然后加入200毫升異丙醇，冷卻到0-4℃產(chǎn)物結(jié)晶。將結(jié)晶物過濾，用異丙醇，丙酮沖洗，在真空中C2O5上干燥。獲得產(chǎn)物(VII)-3.72克(82％)。Rf＝0.30；Kieselgel60f(Merck)10×5厘米，系統(tǒng)n.丁醇-乙酸-水(4∶1∶1)。
(VIII)將產(chǎn)物(VII)4.54克(10毫摩爾)懸浮到20毫升水中并伴隨攪拌，然后加入5毫升(10毫摩爾)2N氫氧化鈉溶液和4.8毫升0.05％順式-二氨二氯鉑(cis-[Pr(NH3)2Cl2])的水溶液。將溶液冷卻到18-20℃，在一小部分中經(jīng)約2分鐘加入5.1毫升3％的溶液，以溫度不超過22-25℃的速度加入。全部量的過氧化氫加入后30分鐘測(cè)定溶液的pH值，通過加入必要量的4N氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié)到5.6-5.8，其堿監(jiān)測(cè)溶液溫度(溫度在22-25℃內(nèi))。在沒有外源冷卻的情況下連續(xù)攪拌溶液30分鐘。然后通過HPLC實(shí)施對(duì)反應(yīng)混合物的控制分析。為此，將從反應(yīng)混合物中取出10μl并溶解在1毫升的移動(dòng)相中。如果，依據(jù)HPLC的數(shù)據(jù)，氧化型形式含量等于或超過95％，反應(yīng)認(rèn)為是完成了。否則，在室溫下再繼續(xù)攪拌30分鐘，重復(fù)HPLC測(cè)定。
然后將反應(yīng)溶液用孔大小不大于0.7μm的過濾器過濾，將濾出物凍干。獲得的干燥產(chǎn)物在40℃真空中無水氯化鈣上干燥到恒重。獲得產(chǎn)物4.51克(95％)。
依據(jù)5-12項(xiàng)對(duì)制備物質(zhì)進(jìn)行分析。實(shí)施例2合成雙-(γ-L-谷氨?；?-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸鋰鹽(I)藥物總特性1.名稱雙-(γ-L-谷氨?；?-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸二鋰鹽與順式二氨二氯鉑的合成物。
2.結(jié)構(gòu)式-參看圖9。
3.總分子式C20H30N6Oi2Li2S2·[Pt(NH3)2Cl2]。
4.分子量624.49 C20H30N6O12Li2S2含Pt0.032％。
5.表觀白色無味粉末。
6.溶解性溶解于水，注射用0.9％氯化鈉等張溶液；不溶于95％乙醇，氯仿，醚和其他有機(jī)溶劑。
7.溶液透明度和顏色0.05克藥物的10毫升水溶液是透明的無色的。
8. 0.1％溶液的pH值5.0-6.0(電勢(shì)測(cè)定)9.真實(shí)性a)氨基酸分析(6N鹽酸，110℃，20小時(shí))，相應(yīng)地甘氨酸-2.0(2.0)；谷氨酸-1.9(2.0)；半胱氨酸-1.7(2.0)。
b)NMR(1H)-光譜，相應(yīng)地CH2(δ，2.05，2.40，3.00，3.80)；CH(δ，3.72，4.65)。
c)依據(jù)產(chǎn)出時(shí)間HPLC與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)。
10.純度(主要物質(zhì)含量)a)在HPLC中＞95％；b)在氨基酸分析中＞85％；c)薄層色譜(TLC)是均相的；d)依據(jù)發(fā)射光譜法測(cè)定鋰(Li)含量為2.2±0.1％。
e)依據(jù)質(zhì)譜法測(cè)定鉑(Pt)含量為0.0l-0.02％。
(II)產(chǎn)物合成步驟流程(A→B→C)A.還原型谷胱甘肽的氧化(γ-L-谷氨?；?L-半胱氨?；?甘氨酸)
A1-在PH＝8時(shí)過氧化氫處理源還原型谷胱甘肽的步驟-參看圖10。
源化合物(I)γ-L-谷氨?；?L-半胱氨酰基-甘氨酸(GSH)H-γ-L-Glu-L-Cys-Glu-OH試劑1)過氧化氫(35％)Fluka2)氨水溶液(25％)反應(yīng)條件在20℃(pH＝8.0)攪拌試劑和水溶液(I)20分鐘。
A2-分離游離六肽雙-(γ-L-谷氨?；?-L-半胱氨?；?雙-甘氨酸(參看圖11) 源化合物A1步驟的反應(yīng)混合物。
試劑冰乙酸。
反應(yīng)條件用冰乙酸酸化A1步驟的反應(yīng)混合物，至pH＝5.0，溶液過濾并凍干產(chǎn)物。
A氧化步驟過程控制通過HPLC，在Delta Pack C18柱(0.1％TFA-MeCN，0-25％)上；監(jiān)測(cè)化合物(III)存在的峰值(＞97％)(7.4±0.4分鐘)，化合物(I)沒有峰值(3.0±0.3分鐘)。
B.氧化型形式(III)轉(zhuǎn)化成鋰鹽(IV)-參看圖12。
源化合物游離六肽(III)。
試劑1N氫氧化鋰溶液。
反應(yīng)條件a)用兩個(gè)當(dāng)量的氫氧化鋰滴定化合物(III)水溶液b)在35-40℃真空中蒸發(fā)水；c)用異丙醇沉淀產(chǎn)物；d)沉淀過濾；e)用丙酮沖洗沉淀；f)在35-40℃真空中干燥產(chǎn)物。
B步驟過程控制監(jiān)測(cè)試劑的量和干燥中的技術(shù)條件。
C.獲得產(chǎn)物的質(zhì)量控制。
1.依據(jù)HPLC，主要物料含量＞97％。
在移動(dòng)相中使用20μl的0.1％藥物溶液實(shí)施分析，在250±4.6毫米柱上用轉(zhuǎn)化C18相，在等度條件甲基氰-0.1％三氟乙酸(2∶98)中色譜；流速為1毫升/分鐘，在220納米測(cè)定。使用在相同條件下獲得的步驟峰值實(shí)施對(duì)比。
2.依據(jù)對(duì)非-氧化型硫醇基團(tuán)含量的分光光度分析數(shù)據(jù)，主要物料含量＞95％。
分析將0.12毫升的0.5％藥物溶液放在25毫升量瓶中，1毫升0.1％Tris-鹽酸溶液用pH＝8，0.01M EDTA和1毫升2％NaBH4溶液緩沖。將反應(yīng)混合物在20℃溫育30分鐘。通過在0.05毫升部分經(jīng)2小時(shí)攪拌加入0.6毫升1M鹽酸中止反應(yīng)，并經(jīng)3分鐘攪拌加入2毫升丙酮。然后加入0.25毫升Elman試劑，使用0.1M的磷酸緩沖溶液(pH＝8.0)將體積增至刻度線。在412納米測(cè)定光學(xué)密度，水是對(duì)比溶液。同時(shí)，實(shí)施使用標(biāo)準(zhǔn)藥物過程，獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。
3.存在外源混合物依據(jù)TLC數(shù)據(jù)，藥物是均相的。
將5μl的0.1％藥物溶液引入到譜帶中實(shí)施分析。板是Kieselgel60f(Merck)10×5厘米的板，系統(tǒng)n.丁醇-嘧啶-乙酸-水(150∶100∶30∶120)。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法實(shí)施顯像-(水合)茚三酮和氯/對(duì)二氨基聯(lián)苯。
4.依據(jù)發(fā)射光譜法測(cè)定鋰(Li)含量為2.2±0.1％。實(shí)施例3在引入靜脈內(nèi)后GSSG·Pt和GSSG在血液血清和組織中的藥物代謝動(dòng)力學(xué)和新陳代謝研究在GSSG·Pt和GSSG以不同劑量引入到靜脈內(nèi)后，參與GSSG新陳代謝的酶的活性變化和GSSG的時(shí)間-濃度曲線。在以2毫克/公斤和20毫克/公斤劑量靜脈內(nèi)引入單一GSSG·Pt和GSSG后，評(píng)定60分鐘期間，在動(dòng)物血液血清，肝，腎，脾和淋巴細(xì)胞中氧化型谷胱甘肽濃度的變化。此外，也評(píng)定參與GSSG新陳代謝的酶的活性變化(谷胱甘肽還原酶，谷胱甘肽-過氧化酶，谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶，γ-谷氨?；?轉(zhuǎn)肽酶)。
這些研究在雄性CBA鼠(標(biāo)準(zhǔn)體重-180到200克)中實(shí)施。組成5組動(dòng)物(每組中不少于15只鼠)。下面對(duì)組進(jìn)行描述。
對(duì)照組#1-接受測(cè)試物質(zhì)的載體的單一注射的(常用鹽水-(NS))而不是藥物注射的-動(dòng)物；測(cè)試組#2-接受2毫克/公斤劑量的GSSG注射的動(dòng)物(GSSG溶解在常用鹽水中)；#3-接受20毫克/公斤劑量的GSSG注射的動(dòng)物(GSSG溶解在常用鹽水中)；#4-接受2毫克/公斤劑量的GSSG·Pt注射的動(dòng)物(GSSG·Pt溶解在常用鹽水中)；#5-接受接受20毫克/公斤劑量的GSSG·Pt注射的動(dòng)物(GSSG·Pt溶解在常用鹽水中)；獲取1，2，5，10，20，40和60分鐘的血液樣品，將血清分離并依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法實(shí)施濃度分析，其中主要步驟有蛋白質(zhì)沉淀，從樣品中除去非-極性和中度極性化合物，接著在等度和線性梯度洗脫條件下使用分光光度測(cè)定法實(shí)施色譜分析。
藥物靜脈內(nèi)引入中，在血液血清，不同器官和淋巴細(xì)胞中GSSG含量的變化在表1-4中列出。
通過Boehringer Mannheim GmbH制備的標(biāo)準(zhǔn)試劑盒確定參與GSSG新陳代謝的酶的活性(谷胱甘肽還原酶EC.1.6.4.2；谷胱甘肽-過氧化酶EC.1.11，1，9；谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶EC.2.5.1.18；γ-谷氨?；?轉(zhuǎn)肽酶EC.2.3.2.2)。在GSSG·Pt和GSSG以2毫克/公斤劑量引入到靜脈內(nèi)后，酶活性變化值在表5，6，7中列出。
比較藥物在血液血清，肝，腎，脾和淋巴細(xì)胞中的藥物動(dòng)力學(xué)分布，藥物代謝動(dòng)力學(xué)方面GSSG·Pt比GSSG有明顯優(yōu)勢(shì)是顯然的。第10分鐘的GSSG濃度幾乎與初始的濃度相同，而在相同時(shí)間，GSSG·Pt濃度比初始參數(shù)超過50倍，并保持在高濃度一直到研究結(jié)束。在血液血清中和組織中的最大GSSG·Pt濃度超過GSSG最大濃度的3倍。這些特點(diǎn)決定了與GSSG相比GSSG·Pt作用持續(xù)時(shí)間更有效。
如從表5，6，7材料中所推出的，使用大量已證實(shí)的指數(shù)，GSSG藥物增加了約兩倍的參與硫醇代謝的酶的活性，而GSSG·Pt沒有顯著地改變硫醇代謝酶，主要是HADP·H-谷胱甘肽還原酶的活性，這說明了作為涉及參與谷胱甘肽新陳代謝的主要酶的底物，GSSG·Pt具有較高的藥物穩(wěn)定性，因此，致使在血液血清和不同器官中較長(zhǎng)時(shí)間存在氧化型谷胱甘肽形式。目前考慮認(rèn)為在有關(guān)腫瘤轉(zhuǎn)化機(jī)理中起到重要作用的GSSG·Pt對(duì)谷胱甘肽-S-還原酶的作用，發(fā)現(xiàn)是前述內(nèi)容的非常重要的例外。顯示出給出酶的活性受到GSSG·Pt的刺激，而且，與GSSG相比受到較大程度上刺激(表5，6，7)。
因此，對(duì)獲得數(shù)據(jù)的分析顯示GSSG·Pt對(duì)主要谷胱甘肽新陳代謝酶(首先是谷胱甘肽-還原酶)的選擇性作用具有較高的穩(wěn)定性，確定了藥物代謝動(dòng)力學(xué)的新動(dòng)力學(xué)。其促進(jìn)新的生物-藥理學(xué)作用并因此促進(jìn)新的GSSG·Pt治療作用的表現(xiàn)。實(shí)施例4在靜脈內(nèi)引入試驗(yàn)中比較分析GSSG·Pt和GSSG藥物代謝動(dòng)力學(xué)1.GSSG藥物代謝動(dòng)力學(xué)。
1.1初始數(shù)據(jù)
1.2平均值圖示
靜脈內(nèi)引入GSSG藥物代謝動(dòng)力學(xué)曲線1.3藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)
2.GSSG·Pt藥物代謝動(dòng)力學(xué)
2.1初始數(shù)據(jù)
2.2平均藥物濃度圖示
靜脈內(nèi)引入GSSG·Pt藥物代謝動(dòng)力學(xué)曲線
2.3藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)
結(jié)論對(duì)GSSG·Pt和GSSG藥物的對(duì)比分析顯示，通過直接法和通過在模型上估定獲得的主要GSSG·Pt藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)(最大血液濃度和有效藥物作用持續(xù)時(shí)間)超過GSSG藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)約2-3倍。通過計(jì)算GSSG·Pt藥物代謝動(dòng)力學(xué)曲線下面積確定的顯示藥物血液存在持續(xù)時(shí)間綜合指數(shù)超過GSSG的相應(yīng)指數(shù)的4倍。因此，由于更有益的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，與GSSG藥物相比，GSSG·Pt藥物具有更高藥理學(xué)活性和生物有效性。實(shí)施例5GSSG·Pt和GSSG體外對(duì)人類外周血液?jiǎn)魏税准?xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的影響評(píng)定氧化型谷胱甘肽(GSSG)以及其結(jié)構(gòu)類似物，具有穩(wěn)定二硫鍵的六肽，體外對(duì)人類外周血液?jiǎn)魏税准?xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的影響。
通過在細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中加入測(cè)試物質(zhì)后馬上加入促細(xì)胞分裂原，伴刀豆球蛋白A(ConA)來觸發(fā)白細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子。在細(xì)胞曝露在ConA和測(cè)試物質(zhì)中的24小時(shí)中，取樣培養(yǎng)物上清液并保存，直到在-70℃確定細(xì)胞因子。
為了在存在測(cè)試物質(zhì)的每個(gè)濃度下，評(píng)定細(xì)胞的功能狀況和它們應(yīng)答促細(xì)胞分裂原的能力，在初始同時(shí)加入ConA和測(cè)試物質(zhì)后，將對(duì)照細(xì)胞培養(yǎng)物，含有相同濃度的測(cè)試物質(zhì)，溫育72小時(shí)。在溫育完成前16小時(shí)，加入3H-胸苷，摻入到DNA中的標(biāo)記速度可認(rèn)為是細(xì)胞測(cè)試系統(tǒng)功能狀況的標(biāo)準(zhǔn)。
將從雄性健康志愿者獲取的靜脈血收集到塑料肝素化管(測(cè)定過內(nèi)毒素的)中。
對(duì)測(cè)試物質(zhì)(GSSG以及GSSG·Pt)的下列五個(gè)最終濃度進(jìn)行評(píng)定5000μg/毫升；500μg/毫升；50μg/毫升；5μg/毫升；和0.5μg/毫升。通過加入50毫升含有適當(dāng)量的預(yù)先溶解的測(cè)試物質(zhì)的介質(zhì)，在不少于六個(gè)培養(yǎng)皿中建立每個(gè)濃度。另外六個(gè)培養(yǎng)皿用作對(duì)照培養(yǎng)物僅加入50μl的介質(zhì)。
在將測(cè)試物質(zhì)加入到培養(yǎng)物中后，立即將50μl含有ConA(含量為最終濃度達(dá)到4.0μg/毫升所需的量)(Sigma，細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試)的介質(zhì)加入到除了用來評(píng)定自發(fā)吸收3H-胸苷的另外三個(gè)培養(yǎng)皿(不含Con A)的所有培養(yǎng)皿中。
在37℃5％二氧化碳氛圍中溫育24小時(shí)后，(從每組六個(gè)相同的培養(yǎng)皿中)將三個(gè)培養(yǎng)皿中內(nèi)容物取出，離心，將上清液冷凍并保存在-70℃下，直到實(shí)施細(xì)胞因子測(cè)定。將(每組六個(gè)相同的培養(yǎng)皿中的)另外三個(gè)培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)物在上述條件下進(jìn)一步溫育。
開始溫育后的56個(gè)小時(shí)，將1.0μCi的3H-胸苷加入到所有保留的培養(yǎng)物中，將板再溫育16個(gè)小時(shí)，然后收獲培養(yǎng)皿中的內(nèi)容物，并將其轉(zhuǎn)移到玻璃纖維過濾器上，用5％三氯乙酸和乙醇處理。將過濾器干燥，使用液體閃爍計(jì)數(shù)儀，Betaplate 1250(LKB)確定它們的放射性活度(每分鐘計(jì)數(shù)，cpm)。
三份相同培養(yǎng)物的平均放射性活度值用來計(jì)算促細(xì)胞分裂原刺激作用指數(shù)ConA刺激的培養(yǎng)物的平均cpm值與未刺激的培養(yǎng)物(沒有ConA的三個(gè)培養(yǎng)物)的平均cpm值的比率。對(duì)于測(cè)試物質(zhì)以不同濃度存在的情況，這種刺激作用指數(shù)可作為細(xì)胞功能狀況和細(xì)胞應(yīng)答促細(xì)胞分裂原刺激作用的能力的標(biāo)準(zhǔn)。
只有三份它們的72小時(shí)對(duì)照培養(yǎng)物發(fā)展出對(duì)ConA的促細(xì)胞分裂應(yīng)答，刺激作用指數(shù)的值在范圍15到50時(shí)，三份24小時(shí)培養(yǎng)物的上清液才隨后進(jìn)行細(xì)胞因子含量測(cè)試。
通過ELISA法，使用購(gòu)得的試劑盒(Medgenix，Belgium)確定白細(xì)胞介素-1b(IL-1b)；白細(xì)胞介素-2(IL-2)；白細(xì)胞介素-3(IL-3)；白細(xì)胞介素-4(IL-4)；白細(xì)胞介素-6(IL-6)；白細(xì)胞介素-8(IL-8)；白細(xì)胞介素-10(IL-10)；白細(xì)胞介素-12(IL-12)；腫瘤壞死因子-α，γ(TNF-α，γ)，和干擾素-α，γ(IFN-α，γ)的濃度，并表示為pg/毫升培養(yǎng)物上清液。
在表8，9中列出了顯而易見的發(fā)現(xiàn)，如能從表8和9中看到，在培養(yǎng)介質(zhì)中加入GSSG和GSSG·Pt會(huì)對(duì)人類單核白細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)上顯著的與劑量相關(guān)的刺激作用。然而，與GSSG的作用相比，對(duì)研究的細(xì)胞因子產(chǎn)生，以及刺激和調(diào)節(jié)寬范圍的細(xì)胞因子產(chǎn)生方面，GSSG·Pt的刺激作用更顯著(1.5-2倍)。在表8和9中可清楚地看到相關(guān)的細(xì)胞因子變化的相關(guān)性(IL-1b，IL-2，TNF-α，γ增加，IL-4，IL-10減少)。
因此，鑒于它們相互調(diào)節(jié)作用，通過顯著地刺激寬范圍的細(xì)胞因子釋放到培養(yǎng)介質(zhì)中，表現(xiàn)了GSSG·Pt體外對(duì)人類外周單核白細(xì)胞作用，并且因此，證實(shí)GSSG·Pt對(duì)人類血液細(xì)胞自然產(chǎn)生細(xì)胞因子的刺激和調(diào)節(jié)作用。實(shí)施例6GSSG·Pt和GSSG對(duì)產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子的影響以及在環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的血液-和免疫抑制中對(duì)血細(xì)胞生成和免疫參數(shù)的影響1.在由服用單一的抑制細(xì)胞生長(zhǎng)試劑C環(huán)磷酰胺(CP)誘導(dǎo)的血液-和免疫抑制鼠科動(dòng)物模型中評(píng)定，氧化型(GSSG)谷胱甘肽以及其結(jié)構(gòu)類似物，具有穩(wěn)定二硫鍵的六肽。
設(shè)計(jì)試驗(yàn)來評(píng)定五天時(shí)間服用測(cè)試物質(zhì)，對(duì)CP-治療的鼠科動(dòng)物脾細(xì)胞體外產(chǎn)生白細(xì)胞介素-1(IL-1)；白細(xì)胞介素-2(IL-2)；白細(xì)胞介素-3(IL-3)；白細(xì)胞介素-4(IL-4)；白細(xì)胞介素-6(IL-6)；白細(xì)胞介素-8(IL-8)；白細(xì)胞介素-10(IL-10)；白細(xì)胞介素-12(IL-12)；腫瘤壞死因子-α，γ(TNF-α，γ)，干擾素-α，γ(IFN-α，γ)和G-CSF，M-CSF能力的影響。此外，在服用CP后8天確定血液白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)和骨髓細(xì)胞性(有核細(xì)胞數(shù))。然后將一些接受CP的動(dòng)物用綿羊血紅細(xì)胞(SRBC)攻擊，評(píng)定對(duì)抗原的體液免疫反應(yīng)。
給雄性CBA鼠(180到200克體重)腹腔內(nèi)注射50毫克/公斤劑量的CP。組成四組動(dòng)物(每組不少于15只鼠)。下面對(duì)組進(jìn)行描述。
對(duì)照組·#1-接受常用鹽水(NS)單一注射而不是CP注射的動(dòng)物，其進(jìn)一步用測(cè)試物質(zhì)載體(常用鹽水)治療；·#2-接受單一CP注射的動(dòng)物，其進(jìn)一步用測(cè)試物質(zhì)載體(常用鹽水)治療；測(cè)試組·#3-接受單一CP注射的動(dòng)物，其進(jìn)一步用5毫克/公斤劑量的測(cè)試物質(zhì)(溶解在常用鹽水中的GSSG)治療；·#4-接受單一CP注射的動(dòng)物，其進(jìn)一步用5毫克/公斤劑量的GSSG·Pt(溶解在常用鹽水中)治療。
CP注射后24小時(shí)，將每組中的五只動(dòng)物用SRBC(0.5毫升NS中107個(gè)細(xì)胞，腹腔內(nèi))免疫接種。
在CP注射第3天(免疫接種后24小時(shí))，開始腹腔內(nèi)注射測(cè)試或參考物質(zhì)(如上面已作的描述)。注射實(shí)施5天，一天一次。
5天治療過程完成后24小時(shí)(CP注射后的第8天)，將鼠無痛苦處死，并無菌制備測(cè)定脾淋巴細(xì)胞體外自發(fā)產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子的脾細(xì)胞培養(yǎng)物。
同時(shí)，收集血液和骨髓樣品進(jìn)行白細(xì)胞，淋巴細(xì)胞和骨髓成核細(xì)胞計(jì)數(shù)。
從免疫接種動(dòng)物獲得的血清樣品測(cè)試SRBC凝集素的量(注射CP后第8天，免疫接種后第7天)。
表10中顯示了在環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)血液-和免疫抑制的背景下，在接受測(cè)試物質(zhì)的鼠中，脾細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子的參數(shù)，骨髓和血液計(jì)數(shù)指數(shù)，和對(duì)綿羊血紅細(xì)胞的免疫反應(yīng)。
依據(jù)表10數(shù)據(jù)，服用GSSG·Pt做到規(guī)范細(xì)胞因子和造血因子的生成，而GSSG僅有很小的刺激作用。此外，GSSG·Pt還刺激寬范圍的細(xì)胞因子和造血因子生成，以及對(duì)證實(shí)在相應(yīng)病理過程中相關(guān)細(xì)胞因子變化的具有正相關(guān)性的有關(guān)細(xì)胞因子狀況的轉(zhuǎn)變有顯著的調(diào)節(jié)作用。
因此，使用在CP-誘導(dǎo)血液-和免疫抑制動(dòng)物中的GSSG·Pt產(chǎn)生對(duì)內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子顯著的刺激作用，并會(huì)使骨髓和血液細(xì)胞指數(shù)以及對(duì)綿羊血紅細(xì)胞免疫反應(yīng)的恢復(fù)。
2.此項(xiàng)研究的目的是探究GSSG·Pt對(duì)環(huán)磷酰胺-誘導(dǎo)的血球減少(myelopenia)模式的功效。
研究在體重160.0克的雄性白鼠上實(shí)施。在背部一次皮下注射環(huán)磷酰胺，劑量為100毫克/公斤(載體是注射用水)。
組成四組動(dòng)物(每組不少于15只動(dòng)物)。下面對(duì)組進(jìn)行描述。
對(duì)照組·#1-接受單一常用鹽水(NS)注射而不是CP注射的動(dòng)物，其進(jìn)一步用測(cè)試物質(zhì)載體(常用鹽水)治療；·#2-接受單一CP注射的動(dòng)物，其進(jìn)一步用測(cè)試物質(zhì)載體(常用鹽水)治療；測(cè)試組·#3-接受單一CP注射的動(dòng)物，其進(jìn)一步用GSSG·Pt治療(溶解在常用鹽水中)，劑量為5毫克/公斤；在CP注射后第2天，開始腹腔內(nèi)注射測(cè)試物質(zhì)或參考物質(zhì)(一天一次，進(jìn)行10-15天)。
在每一系列試驗(yàn)(10-15天)的最后，將試驗(yàn)動(dòng)物使用過量醚無痛苦處死，并獲取外周血液(尾部靜脈)和骨髓(腿節(jié))進(jìn)行分析。使用通用標(biāo)準(zhǔn)方法實(shí)施血液學(xué)研究。外周血液分析結(jié)果在表11中列出；脊髓X射線選影分析結(jié)果在表12中列出。
分析表11的結(jié)果可以注意到，根據(jù)觀察的項(xiàng)目(在第15天有最大量表現(xiàn))，劑量為100毫克/公斤的環(huán)磷酰胺發(fā)現(xiàn)對(duì)具有絕對(duì)和相對(duì)的淋巴細(xì)胞缺少癥的所有形成血液因素實(shí)施了顯著的細(xì)胞減少作用。
應(yīng)注意到，有四只動(dòng)物死亡在第9天，第10天，第12天和第14天。事實(shí)上，所有這些動(dòng)物表現(xiàn)出軟弱，體力不足，體重減少。
服用GSSG·Pt提供了顯著的刺激作用。可觀察到總體狀態(tài)改善，正性體重變化，在血液中出現(xiàn)未成熟細(xì)胞形成說明骨髓造血作用激活。沒有動(dòng)物死亡記錄。
對(duì)脊髓X射線選影分析顯示，劑量為100毫克/根據(jù)的環(huán)磷酰胺發(fā)現(xiàn)實(shí)施顯著的脊髓毒性作用。紅細(xì)胞，trombocyto-和淋巴細(xì)胞生成特別受到抑制。在第15天脊髓抑制作用是最顯著的。
服用GSSG·Pt具有可觀的脊髓刺激作用。
經(jīng)15天每天服用劑量為10毫克/公斤的藥物GSSG·Pt可對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的細(xì)胞-和脊髓減少癥發(fā)揮顯著的脊髓刺激作用。服用藥物提供了治療動(dòng)物的100％存活率，而在對(duì)照組中有30％死亡率。實(shí)施例7GSSG和(Li·GSSG·Pt)對(duì)放射誘導(dǎo)的-血液-免疫抑制中的細(xì)胞因子和造血因子產(chǎn)生以及對(duì)血細(xì)胞生成和免疫參數(shù)的影響在由總劑量為1Gy的單一放射作用誘導(dǎo)的血液-和免疫抑制的鼠科動(dòng)物模型中[19，22，27-37]，評(píng)定氧化型(GSSG)和其結(jié)構(gòu)類似物，其是GSSG·Pt的鋰鹽(Li·GSSG·Pt)。
設(shè)計(jì)試驗(yàn)來評(píng)定七天時(shí)間每天服用測(cè)試物質(zhì)(在放射后2小時(shí)開始服藥)，對(duì)放射處理的鼠科動(dòng)物脾細(xì)胞體外產(chǎn)生白細(xì)胞介素-1(IL-1α，β)；白細(xì)胞介素-2(IL-2)；白細(xì)胞介素-3(IL-3)；白細(xì)胞介素-4(IL-4)；白細(xì)胞介素-6(IL-6)；白細(xì)胞介素-8(IL-8)；白細(xì)胞介素-10(IL-10)；白細(xì)胞介素-12(IL-12)；腫瘤壞死因子-α，γ(TNF-α，γ)，干擾素-α，γ(IFN-α，γ)和G-CSF，M-CSF能力的功效。此外，在放射后第8天確定血液白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)和骨髓細(xì)胞性(有核細(xì)胞數(shù))，以及脾和脊髓集落刺激能力。
給雄性CBA鼠(180到200克體重)單一劑量為180kV用0.5毫米Cu過濾的X-射線的照射(在15mA，距離-70厘米，持續(xù)2分鐘28秒)。總吸收劑量有約1Gy。
組成四組動(dòng)物(每組不少于12只鼠)。下面對(duì)組進(jìn)行描述。
對(duì)照組·#1-接受模擬照射過程以再生應(yīng)激反應(yīng)的動(dòng)物，其進(jìn)一步用測(cè)試物質(zhì)載體(常用鹽水)治療；·#2-接受劑量為1Gy放射的動(dòng)物，其進(jìn)一步用測(cè)試物質(zhì)載體(常用鹽水)治療；測(cè)試組·#3-接受劑量為1Gy放射的動(dòng)物，其進(jìn)一步用5毫克/公斤劑量的測(cè)試物質(zhì)(溶解在常用鹽水中的GSSG)治療；#4-接受劑量為1Gy放射的動(dòng)物，其進(jìn)一步用5毫克/公斤劑量的測(cè)試物質(zhì)(溶解在常用鹽水中的Li·GSSG·Pt)治療。
照射后2小時(shí)，開始腹腔內(nèi)注射測(cè)試物質(zhì)或參考物質(zhì)(如上面所描述的)。注射實(shí)施7天一天一次。
完成7天治療過程后24小時(shí)(照射后第8天)，將鼠無痛苦處死，并無菌制備測(cè)定脾淋巴細(xì)胞體外自發(fā)產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子(白細(xì)胞介素-1(IL-1α，β)；白細(xì)胞介素-2(IL-2)；白細(xì)胞介素-3(IL-3)；白細(xì)胞介素-4(IL-4)；白細(xì)胞介素-6(IL-6)；白細(xì)胞介素-8(IL-8)；白細(xì)胞介素-10(IL-10)；白細(xì)胞介素-12(IL-12)；腫瘤壞死因子-α，γ(TNF-α，γ)，干擾素-α，γ(IFN-α，γ)和G-CSF，M-CSF)的脾細(xì)胞培養(yǎng)物。
同時(shí)，收集血液，脾，和骨髓樣品進(jìn)行血液白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，脾和骨髓成核細(xì)胞計(jì)數(shù)。
此外，通過集落-形成單位(CFU)在靜脈內(nèi)接受從對(duì)照組或測(cè)試組動(dòng)物中獲取的脾或骨髓細(xì)胞的照射損傷CBA鼠的脾中直接計(jì)數(shù)法，測(cè)定脾和骨髓細(xì)胞的血細(xì)胞生成集落-形成能力。
照射后第8天照射動(dòng)物的產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子的脾細(xì)胞量，血液，骨髓和脾細(xì)胞指數(shù)，以及骨髓和脾臟中集落形成參數(shù)(集落形成單位，CFU)，在表13中列出。
如從表中數(shù)據(jù)顯然得到，服用Li·GSSG·Pt致使脾細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子的統(tǒng)計(jì)上顯著恢復(fù)，而GSSG產(chǎn)生較顯著的作用。然而，Li·GSSG·Pt還刺激寬范圍的細(xì)胞因子和造血因子生成，以及調(diào)節(jié)與相應(yīng)病理過程相關(guān)的細(xì)胞因子狀態(tài)的變化。
因此，使用Li·GSSG·Pt作為患有發(fā)展的放射誘導(dǎo)血液和免疫抑制的動(dòng)物的適用方法，產(chǎn)生對(duì)內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子顯著的刺激-調(diào)節(jié)作用，還會(huì)導(dǎo)致血液，淋巴和造血器官的細(xì)胞組合物以及骨髓和脾臟集落形成活性的有效恢復(fù)。實(shí)施例8GSSG·Pt合成物和其鹽對(duì)磷酸化修飾過程以及對(duì)帶有IL-2受體的淋巴細(xì)胞的影響研究使用GSSG·Pt和其鹽再生細(xì)胞因子的免疫生物學(xué)作用的分子機(jī)理。
在對(duì)GSSG·Pt合成物和其鹽鈉鹽(Na)，鋰鹽(Li)和鎂鹽(Mg)的研究活動(dòng)中，在由單一服用抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)磷酰胺(CF)誘導(dǎo)的血液-和免疫抑制的鼠科動(dòng)物模型中進(jìn)行評(píng)定。
在這項(xiàng)研究中，評(píng)定五天服用測(cè)試物質(zhì)對(duì)淋巴細(xì)胞細(xì)胞溶質(zhì)蛋白質(zhì)對(duì)酪氨酸的磷酸化程度能力的影響，以及對(duì)IL-2受體的“活性”淋巴細(xì)胞載體量的影響。
雄性CBA鼠(18到20克體重)腹腔內(nèi)注射給服單一劑量為50毫克/公斤的CP。注射CP后，24小時(shí)后給動(dòng)物服用劑量為5毫克/公斤的測(cè)試物質(zhì)。測(cè)試物質(zhì)服用五天(每天，一天一次)。服用測(cè)試物質(zhì)完成后24小時(shí)，將鼠無痛苦處死，并收集血液樣品進(jìn)行研究。
在梯度Ficoll和3-乙酰氨基-5-乙酰甲氨基-2，4，6-三碘苯甲酸鹽(Histopaque，Sigma)中離心分離多形核白細(xì)胞部分。將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)到2×106個(gè)每1毫升培養(yǎng)介質(zhì)(RPMI 1640，Sigma)，培養(yǎng)介質(zhì)含有HEPES(20mM)；谷氨酰胺(2mM)；慶大霉素(50毫克/毫升)；胎牛血清(10％)。通過錐蟲藍(lán)排阻法評(píng)定細(xì)胞生存能力，將細(xì)胞懸浮液置于96-培養(yǎng)皿微滴定板的培養(yǎng)皿中-每個(gè)培養(yǎng)皿200,000個(gè)細(xì)胞。
在單核涂片上依據(jù)Hrogan A.F.(1994)，確定IL-2受體的淋巴細(xì)胞載體量。IL-2受體的鏈p53和p75的單核抗體用作第一抗體。為了顯示第一抗體，使用抗鼠科動(dòng)物免疫球蛋白的多克隆兔抗體標(biāo)記。計(jì)數(shù)將IL-2受體的淋巴細(xì)胞載體數(shù)計(jì)作與總淋巴細(xì)胞數(shù)量的百分比。
為代謝標(biāo)記，將淋巴細(xì)胞培養(yǎng)在加入10％牛血清的IgGa介質(zhì)中。通過在無磷介質(zhì)DME中溫育10-12個(gè)小時(shí)實(shí)施用[32P]正磷酸代謝標(biāo)記，無磷介質(zhì)DME含有100μCi/毫升的[32P]正磷酸鹽。在每中樣品中加入0.2毫升的含同位素介質(zhì)。溫育后，通過移液及在6000g離心作用30分鐘破壞細(xì)胞。獲得的上清液在Fu法(1992)中用作與多克隆抗體免疫沉淀磷酸酪氨酸。蛋白質(zhì)A-sefarose用來沉淀免疫復(fù)合物。沉淀物沖洗三次，在“Gamma”計(jì)數(shù)儀上計(jì)數(shù)沉淀物活性。
依據(jù)實(shí)施研究的結(jié)果(表14)，可以發(fā)現(xiàn)，在GSSG·Pt合成物對(duì)分離淋巴細(xì)胞的作用10分鐘時(shí)(參考表14)，可觀察到淋巴細(xì)胞細(xì)胞溶質(zhì)蛋白質(zhì)的酪氨酸的磷酸化程度顯著增加，這是信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)活性的綜合指示。這些由于GSSG·Pt合成物作用產(chǎn)生的變化，很大程度是由于GSSG·Pt合成物衍生物作用產(chǎn)生的變化，確定了對(duì)氧化-還原-敏感性基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，首先是免疫學(xué)上重要的基因，與細(xì)胞因子和造血因子合成有關(guān)的基因。
在表15中，數(shù)據(jù)顯示了在接受測(cè)試物質(zhì)的具有環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)血液-和免疫抑制癥的CBA鼠中，淋巴細(xì)胞細(xì)胞溶質(zhì)蛋白質(zhì)的酪氨酸的磷酸化程度和IL-2受體的淋巴細(xì)胞載體的百分比。
使用GSSG·Pt合成物鹽致使IL-2受體的淋巴細(xì)胞載體百分比增加，并幾乎正?；鼈兊牧?正常值為18.3±1.6％)。當(dāng)研究淋巴細(xì)胞細(xì)胞溶質(zhì)蛋白質(zhì)的酪氨酸的磷酸化程度時(shí)，也發(fā)現(xiàn)了相似的規(guī)律性。
使用GSSG·Pt合成物鹽致使在由環(huán)磷酰胺模擬的免疫缺損情況中IL-2受體的淋巴細(xì)胞載體的百分比恢復(fù)。信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的淋巴細(xì)胞細(xì)胞溶質(zhì)蛋白質(zhì)的酪氨酸的磷酸化程度增加，可能是所描述的測(cè)試物質(zhì)的免疫刺激作用的一個(gè)因素。
因此，樣品提供了GSSG·Pt能再生(模擬)多種細(xì)胞因子，首先是IL-2的調(diào)節(jié)作用的證據(jù)。我們是指細(xì)胞內(nèi)機(jī)理的GSSG·Pt合成物的誘導(dǎo)作用實(shí)施對(duì)免疫活性系統(tǒng)和造血細(xì)胞的細(xì)胞因子信號(hào)調(diào)節(jié)作用，如IL-2再生。實(shí)施的研究已顯示，在環(huán)磷酰胺模擬的免疫缺損情況中，器官免疫原生成和血細(xì)胞生成的細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的淋巴細(xì)胞細(xì)胞溶質(zhì)蛋白質(zhì)的酪氨酸的磷酸化程度的變化產(chǎn)生對(duì)活性淋巴細(xì)胞內(nèi)容物的動(dòng)力學(xué)正?；饔?。
因此，使用治療目的的藥物形式的GSSG·Pt合成物和其衍生物比僅僅刺激細(xì)胞因子和造血因子的內(nèi)源產(chǎn)生，還提供免疫生物化學(xué)細(xì)胞因子作用的再生，特別是在主要在腫瘤學(xué)的和氧化-還原病毒病理?xiàng)l件中觀察到的受體脫敏情況中。實(shí)施例9使用在患有胃癌，腹膜轉(zhuǎn)移，腹水，脾腫大和膽汁郁積性肝炎患者中的GSSG·Pt的治療作用和刺激內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子的作用診斷患有胃腫瘤(中度分化程度的腺癌)兩年多的33歲患者。1993年患者進(jìn)行了惡性胃潰瘍手術(shù)，在porte hepatis中發(fā)現(xiàn)大量密集淋巴結(jié)，認(rèn)為是轉(zhuǎn)移。
1994年1月，化療(5-UF)過程并發(fā)了嚴(yán)重的膽汁郁積，實(shí)施左右肝膽管的經(jīng)皮排出。六個(gè)月后，通過Brown吻合術(shù)使用可改變的肝穿刺排出實(shí)施choledochoejunostomy。
1995年11月，患者情況惡化。根據(jù)檢查，患者患有活性續(xù)發(fā)性肝炎。肝臟增大并疼痛，從肋拱突出5-6厘米。血液化學(xué)指數(shù)顯示長(zhǎng)期異常，并通過實(shí)施治療很難恢復(fù)正常膽紅素-40.0由于間接(高達(dá)31.0)；轉(zhuǎn)氨酶活性-約比高限正常值高6倍，hypoalbunemia高達(dá)26％；還有高丙種球蛋白癥；高血膽固醇癥，量高達(dá)10.2u摩爾/升。
在fibrogastrocopy(1995年11月)期間，證實(shí)在胃體的中部區(qū)域存在胃癌并延伸約8厘米。腫瘤為類固態(tài)。胃壁堅(jiān)硬。組織檢查確定腫瘤為中度分化腺癌。1995年12月，患者進(jìn)行了探測(cè)性剖腹手術(shù)。發(fā)現(xiàn)腹水及遍及腹膜的多處轉(zhuǎn)移和脾腫大。患者的情況被確認(rèn)為手術(shù)不可治愈的。
作出使用GSSG藥物形式的決定。將藥物非腸道注射(肌肉內(nèi)和靜脈內(nèi))，此外，藥物形式通過內(nèi)窺鏡在腫瘤周圍局部注射使用。用作肌肉內(nèi)和靜脈內(nèi)注射的平均劑量為0.1-0.5毫克/公斤，用作局部注射的劑量-在臟器原位高達(dá)50毫克。藥物的非腸道注射每隔一天使用，一天兩次(早上靜脈內(nèi)注射，晚上肌肉內(nèi)注射)，三周期間，和之后，經(jīng)四周一周兩次。通過內(nèi)窺鏡實(shí)施的藥物引入七天一次。使用fibrogastroduodenoscopy開始用藥物治療兩個(gè)月后顯示食道可通過了，粘膜呈粉紅色，賁門瓣?duì)铙w部分閉合。在空胃狀態(tài)，胃中有中等量的泡沫樣分泌物，其被膽汁濃密染色。腫瘤范圍為4.8厘米。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)在血液和血液化學(xué)指數(shù)方面的顯著改善，肝的大小減小達(dá)3厘米(低于肋拱)。
治療完成后六個(gè)月(1996年7月)，患者情況顯著惡化。根據(jù)檢查續(xù)發(fā)性肝炎復(fù)發(fā)。肝臟大小和軟弱方面增加，從肋拱突出4厘米。血液化學(xué)指數(shù)顯示異常，并通過實(shí)施治療很難恢復(fù)正常膽紅素-36.0由于間接(高達(dá)28.0)；轉(zhuǎn)氨酶活性-約比高限正常值高四倍，hypoalbunemia高達(dá)21％；還有高丙種球蛋白癥；高血膽固醇癥，量高達(dá)9.42u摩爾/升。
在fibrogastrocopy(1996年7月)期間，證實(shí)在胃體的中部區(qū)域存在胃癌并延伸約6厘米。腫瘤為類固態(tài)。胃壁堅(jiān)硬。組織檢查確定腫瘤為中度分化腺癌。1996年8月，患者進(jìn)行了探測(cè)性剖腹手術(shù)。發(fā)現(xiàn)腹水及遍及腹膜的多處轉(zhuǎn)移和脾腫大。
考慮到以前實(shí)施的治療方法，作出使用以前服用GSSG藥物的結(jié)構(gòu)類似物的新型藥物GSSG·Pt的決定。依據(jù)相同的服用法引入藥物非腸道(肌肉內(nèi)和靜脈內(nèi))注射，此外，藥物形式通過內(nèi)窺鏡在腫瘤周圍局部注射使用。用作肌肉內(nèi)和靜脈內(nèi)注射的平均劑量為0.1-0.5毫克/公斤，用作局部注射的劑量-在臟器原位高達(dá)50毫克。藥物的非腸道注射每隔一天使用，一天兩次(早上靜脈內(nèi)注射，晚上肌肉內(nèi)注射)，三周期間，和之后，經(jīng)四周一周兩次。通過內(nèi)窺鏡實(shí)施的藥物引入七天一次。
用藥物開始治療后兩個(gè)月，肝臟突出肋拱1厘米，觸診不軟弱。依據(jù)超聲檢查數(shù)據(jù)在以前確定的癌癥部位有纖維狀組織。在fibrogastrocopy中食道可通過了，粘膜呈粉紅色，賁門瓣?duì)铙w部分閉合。胃壁有彈性。在空胃狀態(tài)中，胃中有中等量的泡沫分泌物和唾液。腫瘤范圍為1.5厘米。十二指腸可自由通過。同時(shí)，顯示出血液和血液化學(xué)指數(shù)方面的顯著改善。
比較藥物GSSG·Pt和GSSG的治療效果，發(fā)現(xiàn)使用前者更有優(yōu)勢(shì)，其在臨床，生物化學(xué)，血液學(xué)和免疫指數(shù)和fibrogastrocopy方面顯示出正性改變(與服用GSSG后腫瘤大小減小40％相比，服用GSSG·Pt時(shí)腫瘤大小減小75％)(表16和17)。并且，在表17中可以看出，GSSG·Pt刺激寬范圍的細(xì)胞因子和造血因子生成，對(duì)它們含量變化具有調(diào)節(jié)作用。
因此，依據(jù)本發(fā)明的治療方法致使腫瘤過程顯著退化，同時(shí)產(chǎn)生在血液學(xué)，血液化學(xué)和免疫參數(shù)方面有顯著的有益改變，及對(duì)生命質(zhì)量的顯著改善。實(shí)施例10使用GSSG·Pt治療肺癌的治療效果患者#1Resnikov Eugeniy Fridrihovich出生年1938年診斷右肺上部肺葉癌癥組織診斷#45760(國(guó)家肺病研究中心)-小細(xì)胞癌病例史#4024
受治時(shí)病狀咳嗽，有難以吐出的粘痰，輕度用力呼吸困難。
客觀檢查患者情況是令人滿意的。外周淋巴結(jié)沒有增大。在右肺的上部和中部區(qū)域粗糙呼吸聲音減弱。有很弱的干燥羅音，極輕度用力呼吸困難。
X光線照相術(shù)(初始數(shù)據(jù))由于增大的右旁管淋巴結(jié)上部中隔膜陰影變寬。右根上部模糊陰影變寬。在兩肺中顯著空隙變化的背景中，在右肺外周S3區(qū)域有額外的陰影。右肺葉間邊緣變厚。結(jié)論有轉(zhuǎn)移到根部和中隔膜的淋巴結(jié)中的癥狀以及淋巴管炎的聲音。
治療過程使用GSSG·Pt藥物進(jìn)行三個(gè)免疫化療過程。
治療后患者情況顯著改善輕微虛弱還存在，但沒有呼吸困難。
客觀檢查情況令人滿意。外周淋巴結(jié)沒有增大。在右肺的中部有輕微呼吸聲音。在其他部分呼吸聲音是肺泡音。沒有羅音。
X光線照相術(shù)(實(shí)施治療后)肺域特別透明。在右肺的S區(qū)域有輕微滲透癥狀。根部沒有增大。在右根部的投影中沒有其他構(gòu)成。上部中隔膜陰影沒有增大?？梢源_定單旁管淋巴結(jié)。
患者#2Semyonov Petr Alexandrovich出生年1945年診斷右肺癌癥，肝轉(zhuǎn)移組織診斷#45998-小細(xì)胞癌病例史#4076受治時(shí)病狀咳嗽，有難以吐出的粘痰，中度用力呼吸困難。虛弱，腰部區(qū)域延伸至胃持續(xù)疼痛。在最近六個(gè)月期間患者體重減輕6公斤。
客觀檢查情況中度嚴(yán)重。鞏膜有黃疸。呼吸聲音粗糙，在右肺上部和中部減弱。在右鎖骨上區(qū)域，可以觸診到增大的淋巴結(jié)(固體連貫性，幾乎不移動(dòng)，大小-3.0和1.0厘米，無痛感)。聽診時(shí)，有粗糙呼吸聲音，在右肺中部減弱。有單一干燥羅音，極輕度用力呼吸困難。肝突出肋拱3.5厘米。
檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)中部肺葉支氣管癌，中部肺葉換氣不足，局限性肺炎。超聲檢查-有轉(zhuǎn)移性肝損傷的聲音。
X光線照相術(shù)(初始數(shù)據(jù))右肺中部肺葉尺寸減小(換氣不足)。在增加的肺模式背景中，有沿著水平肺葉間胸膜有明顯邊緣的，密集的，幾乎均勻的滲透區(qū)域。右根部不能確定。右肺的上部和下部肺葉和左肺沒有任何具體特性?？v膈器官不顯著地被移位。
治療過程使用GSSG·Pt藥物進(jìn)行三個(gè)免疫化療過程。
治療后患者情況顯著改善沒有虛弱和呼吸困難，出現(xiàn)食欲?；颊唧w重增加5公斤。血液指數(shù)恢復(fù)。
客觀檢查情況令人滿意。外周淋巴結(jié)沒有增大。在右肺中部有微弱呼吸聲音。在其他部分是肺泡聲。沒有羅音。
依據(jù)肝臟超聲波檢查和CAT掃描數(shù)據(jù)；全質(zhì)過程衰退。
X光線照相術(shù)(實(shí)施治療后)在胸部X光線圖片中中部肺葉有不明顯的肺膨脹不全癥狀。根部是結(jié)構(gòu)性的并且沒有增大，右根部輕微向下移位。心臟大小沒有增加。
與初始數(shù)據(jù)相比，有顯著的正向進(jìn)展在右部肺組織變得更透明(換氣不足癥狀減輕)，沒有滲透性陰影。
結(jié)論評(píng)定GSSG·Pt藥物的治療效力，發(fā)現(xiàn)如下1.指數(shù)(總體狀況的改善，病理學(xué)上癥狀缺乏，體重增加)臨床恢復(fù)；2.X光線照相圖片的改變(肺部組織透明度增加，滲透性陰影缺乏，肺膨脹不全和換氣不足消失)；3.血液指數(shù)恢復(fù)(增加紅細(xì)胞量和血色素含量，恢復(fù)白細(xì)胞量)；4.超聲波和CAT掃描數(shù)據(jù)的改變(全腫瘤過程衰退)；5.免疫指數(shù)恢復(fù)和CD16+，CD25+量增加，顯示抗腫瘤監(jiān)視系統(tǒng)恢復(fù)；6.誘導(dǎo)寬范圍的細(xì)胞因子合成以及調(diào)制它們含量的相互調(diào)節(jié)(IL-1β，IL-4，TNF-α含量變化的相關(guān)性)。
因此，在給出的臨床實(shí)施例中，已顯示使用GSSG·Pt藥物提供了臨床，X光線學(xué)上，血液學(xué)上和免疫指數(shù)的快速恢復(fù)，確保免疫和造血系統(tǒng)的更有效的恢復(fù)。前述內(nèi)容說明腫瘤過程衰退，最終產(chǎn)生患者的生命質(zhì)量顯著增加。實(shí)施例11使用GSSG·Pt治療慢性病毒肝炎B(CHBV)的治療效果患者No.1Kupchenko Vladimir Mikhailovich出生年1945年診斷CHBV，復(fù)制期(PCB HBV+)，中度活性等級(jí)病例史#1068受治時(shí)癥狀虛弱，右肋拱下不舒服，惡心沒有食欲。
既往病癥在最近六年期間，患者感到在右肋拱下階段性呈現(xiàn)鈍痛，虛弱，尿顏色變化。檢查中發(fā)現(xiàn)膽紅素血癥，量高達(dá)34u摩爾/升，ALT增加到5.4毫摩爾/小時(shí)升。在醫(yī)院檢查中確定CHBV血清標(biāo)記和PCR HBV(+)。
客觀檢查患者情況令人滿意。肝臟突出肋拱2厘米。肝臟邊緣堅(jiān)硬并軟弱。
沒有實(shí)施預(yù)先治療。
治療過程依據(jù)服藥法服用GSSG藥物實(shí)施治療過程。
實(shí)施治療過程后情況有下列正向改變-顯著的總體情況的改善，不虛弱和惡心，消除不舒服感覺。肝臟突出肋拱0.5厘米。肝臟邊緣柔軟但不軟弱。
患者No.2Lukashenko Igor Mateyevich出生年1964年診斷CHBV，復(fù)制期(PCB HBV+)，中度活性等級(jí)病例史#1043受治時(shí)癥狀相當(dāng)虛弱，，沒有食欲，出汗，尿液黯淡。
既往病癥患者從1996年開始感覺不舒服，當(dāng)時(shí)第一次出現(xiàn)右肋拱下鈍痛。體溫升高到38.7℃，嘔吐，尿液黯淡。通過血清診斷并證實(shí)是急性病毒性肝炎B。患者接受解毒和抗菌治療。然而，后來又觀察到增加的Hbs Ag和ALT值，持續(xù)的病毒復(fù)制期活性。最后一次檢查發(fā)現(xiàn)膽紅素超量到78微摩爾/升，ALT增加到6.2毫摩爾/小時(shí)升。在醫(yī)院檢查中確定CHBV血清標(biāo)記和PCR HBV(+)。
客觀檢查總體情況令人滿意，皮膚和鞏膜有黃疸。肝臟突出肋拱2.5厘米。肝臟邊緣堅(jiān)硬并軟弱。
預(yù)先治療從97年9月17日，患者服用無環(huán)鳥苷21天。這個(gè)過程完成后，增加量的ALT-高達(dá)2.1毫摩爾/小時(shí)升，膽紅素到32微摩爾/升。Hbs Ag度沒有改變?；颊叩臓顟B(tài)確定為顯著生命力衰弱癥。
治療過程依據(jù)服藥法服用GSSG·Pt藥物實(shí)施治療過程。
實(shí)施治療過程后情況有下列正向改變-顯著的總體情況的改善，不虛弱，出汗和惡心。皮膚和鞏膜沒有黃疸，尿液變得正常，消除不舒服感覺。肝臟突出肋拱0.5厘米。肝臟邊緣柔軟但不軟弱。
比較(表20和21)對(duì)GSSG·Pt和GSSG藥物的治療效果進(jìn)行比較分析，前者顯示出優(yōu)勢(shì)，表現(xiàn)如下1.生物化學(xué)指數(shù)正?；?ALT和膽紅素降低)；2.顯著的HBsAg降低和復(fù)制終止；3.免疫指數(shù)正常化及CD95+含量增加，說明在病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞中激活細(xì)胞程序死亡過程；4.顯著調(diào)節(jié)寬范圍的細(xì)胞因子。實(shí)施例12使用GSSG·Pt治療急性病毒性肝炎B(AHBV)的治療效果患者全名Minina Oksana Alexandrovna性別女年齡20患者登記卡678診斷急性病毒性肝炎B(HBs Ag“+”)，復(fù)制期(PCR HDV“+”)，延續(xù)形式；慢性病毒性肝炎D，復(fù)制期(PCR，HDV“+”)檢查期間病狀虛弱，食欲減退既往病癥患者在1997年8月感覺不舒服，當(dāng)時(shí)她注意到明顯的虛弱，不舒服，背骨疼痛，體溫升高到38.8℃。10天后出現(xiàn)尿液黯淡，鞏膜有黃疸?；颊呤苤斡诓《靖腥鹃T診，門診中她接受了解毒，解痙，抗菌治療。然而，復(fù)制病毒活性和增加的GPT量仍然存在。持續(xù)的細(xì)胞溶解型癥狀提供了服用GSSG·Pt藥物的基礎(chǔ)。
沒有實(shí)施預(yù)先治療。
使用GSSG·Pt藥物治療后從97年10月30日到11月23日。
治療過程完成后患者的狀況患者的情況令人滿意，她感覺到食欲增加，虛弱減少。
結(jié)論(表22-24)使用GSSG·Pt藥物的免疫調(diào)節(jié)過程提供了下列正向改變生物化學(xué)指數(shù)正?；?；HBV和HDV復(fù)制終止；HBs Ag連貫性終止；誘導(dǎo)病毒感染細(xì)胞細(xì)胞程序死亡；總體狀況改善；穩(wěn)定的治療效果。實(shí)施例13使用GSSG·Pt治療慢性病毒性肝炎C(CHCV)的治療效果患者全名Zubov Vitaliy Valerievich性別男年齡18
患者病例號(hào)1043診斷慢性病毒性肝炎C，復(fù)制期(PCR HCV“+”)，中度表現(xiàn)活性；慢性病毒性肝炎B，整合期(PCR HBV“-”)；麻醉藥物中毒，麻醉劑癮。
檢查期間病狀1997年8月患者開始注意到膝關(guān)節(jié)和背骨疼痛。血液測(cè)試中，發(fā)現(xiàn)膽紅素量達(dá)到34u摩爾/升，GPT量達(dá)到2.1毫摩爾/小時(shí)升。在從1997年8月15日在醫(yī)院檢查期間，發(fā)現(xiàn)抗-HCV免疫球蛋白和肝炎C病毒的復(fù)制活性。
既往病歷患者14歲開始服用毒品，到檢查時(shí)，他每天服用多達(dá)2克海洛因。他在戒癮癥狀中。
沒有實(shí)施預(yù)先治療。
使用GSSG·Pt藥物進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)治療過程從1997年8月15日到1997年9月7日。
治療過程完成后患者狀況患者狀況令人滿意。他感覺到明顯的虛弱減少。在右肋下和關(guān)節(jié)中沒有痛感。據(jù)患者描述在較短的時(shí)間內(nèi)在幾乎沒有痛苦情況下戒癮癥狀減小。生物化學(xué)指數(shù)正常化及病毒復(fù)制活性消除顯著。
結(jié)論使用GSSG·Pt藥物的免疫調(diào)節(jié)治療過程提供了正向改變，其表現(xiàn)為生物化學(xué)和血清指數(shù)正常化；HCV復(fù)制終止。免疫指數(shù)和細(xì)胞因子狀態(tài)參數(shù)與感染過程控制和病毒復(fù)制消除相關(guān)。治療后使用FasAg(CD95+)的單克隆抗體通過液相色譜檢查患者外周血液淋巴細(xì)胞顯示，CD95+細(xì)胞增加，說明在病毒感染細(xì)胞中激活編程性細(xì)胞死亡過程。在監(jiān)測(cè)中，在治療后一個(gè)月和三個(gè)月中這種狀況的穩(wěn)定性顯著。
在使用GSSG·Pt藥物中，藥物中毒伴隨戒癮癥狀可快速改正，患者痛苦較小。
在使用GSSG·Pt藥物對(duì)具有復(fù)制活性并伴隨藥物中毒的慢性肝炎C的免疫調(diào)節(jié)過程中，提供下列結(jié)果1.血液中的生物化學(xué)指數(shù)正?；?；2.血液學(xué)上的指數(shù)正?；?；3.HCV復(fù)制終止；4.免疫血液指數(shù)和細(xì)胞因子狀況正?；?；5.誘導(dǎo)外周血液淋巴細(xì)胞中的細(xì)胞程序死亡過程；6.快速改正毒品戒癮癥狀；7.穩(wěn)定的治療效果。實(shí)施例14對(duì)比分析在正常細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞中GSSG·Pt和GSSG對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育和細(xì)胞程序死亡DNA降解作用的影響對(duì)比分析在正常細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞(HL-60)中GSSG·Pt和GSSG對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育和細(xì)胞程序死亡DNA降解作用的影響。為此，將GSSG和GSSG·Pt與從健康的志愿者血液中獲取的HL-60脊髓種系細(xì)胞和正常人類淋巴細(xì)胞溫育24小時(shí)。
將從健康的志愿者血液中獲取的靜脈血液收集到肝素化的測(cè)試管中，其已測(cè)試過內(nèi)毒素。血液白細(xì)胞的單核部分通過在ficoll-3-乙酰氨基-5-乙酰甲氨基-2，4，6-三碘苯甲酸鹽(Histopaque，Sigma)梯度中離心獲得。細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)到2×10個(gè)細(xì)胞每毫升細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)(RPMI 1640)，含有20mM HEPES，2mM谷氨酰胺，50毫克/毫升慶大霉素和10％胎牛血清。通過錐蟲藍(lán)排阻法評(píng)定細(xì)胞生存能力，將細(xì)胞懸浮液置于24-和96-培養(yǎng)皿微滴定板的培養(yǎng)皿中-每個(gè)培養(yǎng)皿250,000個(gè)細(xì)胞。
HL-60脊髓種系細(xì)胞在加入10％胎牛血清的RPMI-1640介質(zhì)中培養(yǎng)。培養(yǎng)在封閉燒瓶?jī)?nèi)實(shí)施，介質(zhì)體積是12毫升，每四天替換，在測(cè)試新鮮介質(zhì)中的細(xì)胞懸浮液前，直接倒入24-培養(yǎng)皿微滴定板中(每個(gè)培養(yǎng)皿的細(xì)胞濃度為每個(gè)培養(yǎng)皿250,000個(gè)細(xì)胞)，測(cè)試物質(zhì)-GSSG和GSSG·Pt-加入到相應(yīng)的培養(yǎng)皿中直到最終濃度為100μg/毫升。
在測(cè)試物質(zhì)加入到培養(yǎng)物中后24，48小時(shí)，實(shí)施測(cè)試測(cè)試物質(zhì)的作用。
分析過程包括下列溫育24-48小時(shí)后，通過錐蟲藍(lán)排阻法計(jì)算總細(xì)胞量和死亡細(xì)胞量；之后，將細(xì)胞懸浮液離心(在Eppendorf-測(cè)試管中12.000g離心10分鐘)。在DNA分離前將細(xì)胞碎片冷凍并保持在-70℃。通過Kirbi-Georgiyev苯酚法實(shí)施DNA分離。向細(xì)胞碎片中加入0.5毫升10％SDS和0.5毫升的TE-緩沖液，TE-緩沖液含有0.1M EDTA和0.1M Tris-鹽酸，pH為8.0(“A”緩沖液)，通過將管晃動(dòng)15分鐘將碎片重新懸浮。然后將等量苯酚加入，通過pH為8.0的0.01M Tris-鹽酸調(diào)節(jié)，將產(chǎn)物混合2分鐘，并在Eppendorf-測(cè)試管中以12.000g離心15分鐘。離心完成后，將上層水相再一次用苯酚處理。用苯酚處理后，將上層水相用與水相以等量混合的苯酚-氯仿混合物(1∶1)處理兩次。在12.000g通過離心10分鐘分離水相。泵出并與等量氯仿一次混合。之后，將其在12.000g離心，分離上層相，與雙倍量的蒸餾乙醇混合，冷卻到-20℃，并在-20℃保持一夜。通過在12.000g離心10分鐘收集DNA沉淀。將上清液除去，用200μl 70％乙醇沖洗沉淀，冷卻到-20℃5分鐘。以相同的條件再一次離心，之后將沉淀空氣干燥1小時(shí)。然后，將其稀釋到10μl的A緩沖液中，通過Dishe法確定DNA的量，并在2％瓊脂糖凝膠(使用由“Pharmacia LKB，生物化學(xué)有限公司”(奧地利)制備的NA等級(jí)瓊脂糖)中實(shí)施電泳。DNA電泳分離在由“Pharmacia LKB，生物化學(xué)有限公司”(奧地利)制備的裝置中的一塊2％瓊脂糖凝膠中實(shí)施。使用緩沖溶液0.04M Tris-鹽酸，pH7，含有0.02M乙酸鈉和0.02M EDTA。瓊脂糖(2％)制備在電極緩沖液中。將DNA樣品(2-5ug)置于凝膠槽中。使用電場(chǎng)強(qiáng)度6W/厘米實(shí)施電泳3小時(shí)。根據(jù)溴-苯酚藍(lán)運(yùn)動(dòng)觀察樣品推進(jìn)。電泳完成時(shí)，將凝膠塊從裝置中取出，放入內(nèi)有溴化etidium溶液(3ug/毫升水)的盤中，在暗處放30分鐘。溫育完成后，將凝膠用水沖洗，并在由“PharmaciaLKB，生物化學(xué)有限公司”(奧地利)制備的透照儀上使用波長(zhǎng)254納米在遞質(zhì)紫外線照射中檢測(cè)。使用帶有紅色濾光片的ZenitE照相機(jī)給凝膠拍照。
研究結(jié)果在表28和29和圖13和14中列出。在表28和29的數(shù)據(jù)中可以看出，GSSG和GSSG·Pt對(duì)正常細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞的影響是具有可替換特性的。GSSG和GSSG·Pt刺激正常細(xì)胞增殖(表28)。從正常細(xì)胞獲得的DNA(表28)的電泳顯示，在有生命力細(xì)胞的均勻大分子組成特性的背景下，僅存在可檢測(cè)量的細(xì)胞程序死亡部分。
相反，在脊髓源(HL-60)癌細(xì)胞培養(yǎng)物中，由于兩種藥物的影響(表29，圖14)，觀察到激活細(xì)胞程序死亡以及抑制細(xì)胞分裂。作用的多樣性是定量性的。
因此，GSSG作用后死亡HL-60細(xì)胞的量比GSSG·Pt作用后的死亡HL-60細(xì)胞量確實(shí)少(表29)。(GSSG·Pt與GSSG相比)對(duì)HL-60細(xì)胞有較強(qiáng)影響效力的明顯指示是電泳分析后獲得的細(xì)胞程序死亡部分的特點(diǎn)。沒有與藥物一起溫育的HL-60細(xì)胞的DNA電泳顯示存在有生命力的細(xì)胞的大分子的，幾乎均勻的DNA特性(圖14，#2帶)。與GSSG·Pt和GSSG一起溫育24小時(shí)和48小時(shí)的細(xì)胞的DNA電泳顯示，DNA寡聚核小體降解(圖14，分別為1和3帶)，即，細(xì)胞程序死亡梯譜，就是編程性細(xì)胞死亡的不可爭(zhēng)議的標(biāo)志。然而，用GSSG治療的HL-60細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡梯譜中含有大量的有生命力細(xì)胞的大分子DNA特性(圖14，#1帶)，而，用GSSG·Pt治療的細(xì)胞的大分子DNA基本上不存在(圖14，#3帶)。
HL-60細(xì)胞缺失p53基因(p53基因缺失)，通過GSSG和GSSG·Pt治療誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡僅在沒有包括p53產(chǎn)品的情況中才出現(xiàn)。因此，可以說GSSG和GSSG·Pt藥物激活與p53基因產(chǎn)品無關(guān)的編程性細(xì)胞死亡的內(nèi)部輪廓。P53缺失存在于約半數(shù)癌癥病理情況中。試驗(yàn)結(jié)果可以認(rèn)為是顯示了GSSG和，特別是GSSG·Pt對(duì)腫瘤化療的效力。
結(jié)論實(shí)施的研究得到的數(shù)據(jù)顯示GSSG和GSSG·Pt藥物能增加正常細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)的生存力，相反，并能誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡，即行使抗腫瘤活性。此外，依據(jù)客觀生存力標(biāo)準(zhǔn)，即用GSSG治療后顯著地顯示存在大分子DNA，而在GSSG·Pt治療后幾乎不存在大分子DNA，涉及誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞細(xì)胞程序死亡的GSSG·Pt活性顯著優(yōu)越于GSSG藥物的活性。因此，從作為細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)中重要試劑的缺失p53基因的脊髓種系HL-60細(xì)胞中獲得的數(shù)據(jù)中，我們可以得到
GSSG和GSSG·Pt藥物誘導(dǎo)與p53基因產(chǎn)品無關(guān)的細(xì)胞程序死亡發(fā)展的內(nèi)部輪廓；基于合成物的GSSG·Pt藥物比GSSG具有較高的化療活性(根據(jù)在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡作用)。實(shí)施例15分析在正常細(xì)胞和缺失p53抗腫瘤基因具有增加的ras-基因表達(dá)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞中GSSG·Pt對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育和細(xì)胞程序死亡DNA降解的作用根據(jù)p53基因是細(xì)胞程序死亡發(fā)展的重要因素，ras-基因是有關(guān)細(xì)胞反應(yīng)的能產(chǎn)生多種效果的因素，對(duì)比分析GSSG·Pt對(duì)不同種系的轉(zhuǎn)化細(xì)胞(HL-60，C-8，A-4)的生長(zhǎng)發(fā)育和細(xì)胞程序死亡DNA降解的影響。HL-60細(xì)胞培養(yǎng)物是缺失p53基因的myeloluekosis源的人類細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)物C-8和A-4是轉(zhuǎn)化的鼠科動(dòng)物成纖維細(xì)胞，具有含ras基因和是腺病毒抗原片段的Ela表達(dá)增強(qiáng)因子的基因的質(zhì)粒。而且，A-4細(xì)胞缺失p53基因，C-8細(xì)胞含有完整p53基因。供體血液淋巴細(xì)胞片用作為含有完整p53基因的人類細(xì)胞對(duì)照物。
HL-60(p53--)脊髓種系細(xì)胞在加入10％胎牛血清的RPMI-1640介質(zhì)中培養(yǎng)。細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)在封閉燒瓶?jī)?nèi)實(shí)施，介質(zhì)體積是12毫升，每四天替換。在測(cè)試新鮮介質(zhì)中的細(xì)胞懸浮液前，直接倒入24-培養(yǎng)皿微滴定板中(每個(gè)培養(yǎng)皿的細(xì)胞濃度為每個(gè)培養(yǎng)皿250,000個(gè)細(xì)胞)，測(cè)試物質(zhì)-GSSG·Pt-加入到相應(yīng)的培養(yǎng)皿中直到最終濃度為10-100μg/毫升。
將健康志愿者的靜脈血液收集到肝素化的測(cè)試管中，其已測(cè)試過內(nèi)毒素。血液白細(xì)胞的單核部分通過在ficoll-3-乙酰氨基-5-乙酰甲氨基-2，4，6-三碘苯甲酸鹽(Histopaque，Sigma)梯度中離心獲得。細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)到2×10個(gè)細(xì)胞每毫升細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)(RPMI 1640)，含有20mM HEPES，2mM谷氨酰胺，50毫克/毫升慶大霉素和10％胎牛血清。通過錐蟲藍(lán)排阻法評(píng)定細(xì)胞生存能力，將細(xì)胞懸浮液置于24-和96-培養(yǎng)皿微滴定板的培養(yǎng)皿中-每個(gè)培養(yǎng)皿250,000個(gè)細(xì)胞。
鼠科動(dòng)物轉(zhuǎn)化成纖維細(xì)胞在加入10％胎牛血清的DMEM介質(zhì)中培養(yǎng)。細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)在封閉燒瓶?jī)?nèi)實(shí)施，介質(zhì)體積是12毫升，每四天替換。在測(cè)試新鮮介質(zhì)中的細(xì)胞懸浮液前，直接倒入24-培養(yǎng)皿微滴定板中(每個(gè)培養(yǎng)皿的細(xì)胞濃度為每個(gè)培養(yǎng)皿50,000個(gè)細(xì)胞)，測(cè)試物質(zhì)-GSSG·Pt-加入到相應(yīng)的培養(yǎng)皿中直到最終濃度為10-100μg/毫升。
在測(cè)試物質(zhì)加入到培養(yǎng)物中后24，48小時(shí)，實(shí)施測(cè)試測(cè)試物質(zhì)的作用。
分析過程包括下列溫育24-48小時(shí)后，通過錐蟲藍(lán)排阻法計(jì)算總細(xì)胞量和死亡細(xì)胞量；之后，將細(xì)胞懸浮液離心(在Eppendorf-測(cè)試管中3.000g離心10分鐘)。在DNA分離前將細(xì)胞碎片冷凍并保持在-70℃。通過Kirbi-Georgiyev苯酚法實(shí)施DNA分離。向細(xì)胞碎片中加入0.5毫升10％SDS和0.5毫升的TE-緩沖液，TE-緩沖液含有0.1M EDTA和0.1M Tris-鹽酸，PH為8.0(“A”緩沖液)，通過將管晃動(dòng)15分鐘將碎片重新懸浮。然后將等量苯酚加入，通過PH為8.0的0.01M Tris-鹽酸調(diào)節(jié)，將產(chǎn)物混合2分鐘，并在Eppendorf-測(cè)試管中以12.000g離心15分鐘。離心完成后，將上層水相再一次用苯酚處理。用苯酚處理后，將上層水相用與水相以等量混合的苯酚-氯仿混合物(1∶1)處理兩次。在12.000g通過離心10分鐘分離水相。泵出并與等量氯仿一次混合。之后，將其在12.000g離心，分離上層相，與雙倍量的蒸餾乙醇混合，冷卻到-20℃，并在-20℃保持一夜。通過在12.000g離心10分鐘收集DNA沉淀。將上清液除去，用200μl 70％乙醇沖洗沉淀，冷卻到-20℃5分鐘。以相同的條件再一次離心，之后將沉淀空氣干燥1小時(shí)。然后，將其稀釋到10μl的A緩沖液中，通過Dishe法確定DNA的量，并在2％瓊脂糖凝膠(使用由“Pharmacia LKB，生物化學(xué)有限公司”(奧地利)制備的NA等級(jí)瓊脂糖)中實(shí)施電泳。DNA電泳分離在由“Pharmacia LKB，生物化學(xué)有限公司”(奧地利)制備的裝置中的一塊2％瓊脂糖凝膠中實(shí)施。使用緩沖溶液0.04M Tris-鹽酸，PH7，含有0.02M乙酸鈉和0.02M EDTA。瓊脂糖(2％)制備在電極緩沖液中。將DNA樣品(2-5ug)置于凝膠槽中。使用電場(chǎng)強(qiáng)度6W/厘米實(shí)施電泳3小時(shí)。根據(jù)溴-苯酚藍(lán)指示儀運(yùn)動(dòng)觀察樣品推進(jìn)。電泳完成時(shí)，將凝膠塊從裝置中取出，放入內(nèi)有溴化etidium溶液(3μg/毫升水)的盤中，在暗處放30分鐘。溫育完成后，將凝膠用水沖洗，并在由“Pharmacia LKB，生物化學(xué)有限公司”(奧地利)制備的透照儀上使用波長(zhǎng)254納米在遞質(zhì)紫外線照射中檢測(cè)。使用帶有紅色濾光片的Zenit E照相機(jī)給凝膠拍照。
研究結(jié)果在表30，31，32和33中列出。從表31中明顯得到，GSSG·Pt誘導(dǎo)缺失p53基因的HL-60細(xì)胞培養(yǎng)物中細(xì)胞程序死亡。在濃度為10μg/毫升時(shí)作用有些顯示。然而，在濃度為100μg/毫升時(shí)作用更明顯。并且，還觀察到多種DNA核小體大小的DNA細(xì)胞程序死亡片段的聚集，這是編程性細(xì)胞死亡不可爭(zhēng)議的標(biāo)志。
相反，GSSG·Pt對(duì)正常細(xì)胞有刺激作用，即，觀察到某種增殖(表30)。從正常細(xì)胞獲得的DNA電泳顯示出，它表現(xiàn)了有生命力細(xì)胞的均勻大分子組成特性。
因此，對(duì)正常細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞的藥物作用的不同是根本上的不同。GSSG·Pt不同作用的機(jī)理可能以通過ras-信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)激活不依賴于p53的細(xì)胞程序死亡途徑為條件。Ras-系統(tǒng)能通過促細(xì)胞分裂因子級(jí)聯(lián)刺激細(xì)胞增殖和分化，及通過另一種細(xì)胞信號(hào)級(jí)聯(lián)誘導(dǎo)程序細(xì)胞死亡(編程性細(xì)胞死亡)。
為了核實(shí)這一點(diǎn)，比較GSSG·Pt對(duì)具有增強(qiáng)的ras-基因表達(dá)但在完整p53基因(野生型)存在方面不同的鼠科動(dòng)物成纖維細(xì)胞-細(xì)胞C-8(p53++)，或p53基因缺失(基因缺失)-(細(xì)胞A-4(p53--))的影響。從表32和33中可以看出，在兩種細(xì)胞種系中都呈現(xiàn)GSSG·Pt作用。細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)表現(xiàn)顯著。這說明了不依賴于p53細(xì)胞程序死亡途徑的激活。在兩種細(xì)胞種系中都存在激活的ras-基因可以作為在轉(zhuǎn)化的成纖維細(xì)胞中比在HL-細(xì)胞中表現(xiàn)更顯著的細(xì)胞程序死亡的一種解釋。這證實(shí)了通過ras-信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡。在濃度為10μg/毫升時(shí)GSSG·Pt對(duì)A-4和C-8細(xì)胞的作用沒有區(qū)別。在濃度為100μg/毫升時(shí)，GSSG·Pt對(duì)A-4細(xì)胞的影響顯著大于對(duì)C-8細(xì)胞的影響。缺失p53-蛋白質(zhì)甚至可以認(rèn)為增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞中細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)的ras-信號(hào)傳導(dǎo)途徑。
P53基因缺失出現(xiàn)在約半數(shù)癌癥疾病情況中。這些試驗(yàn)的結(jié)果可以說明GSSG·Pt對(duì)這些腫瘤化療的效力結(jié)論從這些研究獲得的數(shù)據(jù)顯示，GSSG·Pt能增加正常細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)生存能力，反之，能誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的細(xì)胞程序死亡，即，形使抗腫瘤活性。此外，在藥物高濃度情況下，涉及轉(zhuǎn)化細(xì)胞(缺失p53基因)細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)的GSSG·Pt活性甚至超過對(duì)具有完整p53基因的細(xì)胞的GSSG·Pt誘導(dǎo)活性。依據(jù)客觀生存力標(biāo)準(zhǔn)，即存在大分子DNA，在正常供體細(xì)胞(從淋巴細(xì)胞片上獲取)用GSSG·Pt治療后大量出現(xiàn)，細(xì)胞死亡事實(shí)上不存在，而在GSSG·Pt對(duì)轉(zhuǎn)化細(xì)胞作用情況中，觀察到DNA細(xì)胞程序死亡降解，即，甚至在缺失p53基因的細(xì)胞中(特別刺激)有不可逆轉(zhuǎn)的細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)的標(biāo)志。以前，在實(shí)施例9中顯示了在GSSG·Pt治療后激活細(xì)胞因子的范圍。考慮到細(xì)胞因子作用可能通過ras-信號(hào)-傳導(dǎo)途徑激活作用來確定，細(xì)胞因子刺激作用也能通過與ras-蛋白質(zhì)的相互作用產(chǎn)生抗腫瘤效果。實(shí)施例16在缺失抗腫瘤基因的鼠科動(dòng)物轉(zhuǎn)化細(xì)胞中分析GSSG·Pt對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育和細(xì)胞程序死亡DNA降解的影響GSSG·Pt對(duì)具有活性ras-基因和完整p21基因(p21++；C-8細(xì)胞)的細(xì)胞種系的轉(zhuǎn)化成纖維細(xì)胞和剔除p21基因(p21--)的鼠科細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育和細(xì)胞程序死亡DNA降解的影響。
P21++種系細(xì)胞是鼠科狀況成纖維細(xì)胞，具有含ras基因和是腺病毒抗原片段的Ela表達(dá)增強(qiáng)因子的基因的質(zhì)粒，但含有完整p53基因和p21基因。P21(--)種系含有完整p53基因和ras基因，但缺失p21基因。在細(xì)胞分裂G1相的減弱調(diào)節(jié)條件下，它可以評(píng)定GSSG·Pt對(duì)細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)的影響。
細(xì)胞培養(yǎng)物在加入10％胎牛血清的DMEM介質(zhì)中培養(yǎng)。細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)在封閉燒瓶?jī)?nèi)實(shí)施，介質(zhì)體積是12毫升，每四天替換。在測(cè)試新鮮介質(zhì)中的細(xì)胞懸浮液前，直接倒入24-培養(yǎng)皿微滴定板中(每個(gè)培養(yǎng)皿的細(xì)胞濃度為每個(gè)培養(yǎng)皿50,000個(gè)細(xì)胞)，測(cè)試物質(zhì)-GSSG·Pt-加入到相應(yīng)的培養(yǎng)皿中直到最終濃度為100μg/毫升。
在測(cè)試物質(zhì)加入到培養(yǎng)物中后24，48小時(shí)，實(shí)施測(cè)試測(cè)試物質(zhì)的作用。
分析過程包括下列溫育24-48小時(shí)后，通過錐蟲藍(lán)排阻法計(jì)算總細(xì)胞量和死亡細(xì)胞量；之后，將細(xì)胞懸浮液離心(在Eppendorf-測(cè)試管中3.000g離心10分鐘)。在DNA分離前將細(xì)胞碎片冷凍并保持在-70℃。通過Kirbi-Georgiyev苯酚法實(shí)施DNA分離。加入0.5毫升10％SDS實(shí)施細(xì)胞裂解。加入等量苯酚，用pH為8.0的0.01M Tris-鹽酸調(diào)節(jié)，產(chǎn)物混合2分鐘，并在Eppendorf-測(cè)試管中以13.000g離心15分鐘。苯酚脫蛋白重復(fù)兩次。之后將水相用苯酚-氯仿混合物(1∶1)處理兩次，并用氯仿處理一次。通過在20℃加入兩倍體積的96％的乙醇過夜沉淀核酸。通過在13.000g離心30分鐘收集DNA，輕輕倒出并用70％乙醇沖洗，空氣干燥。干燥后將沉淀溶解在TE緩沖液中、在獲得的溶液中確定DNA濃度(通過Dishe法)。通過在2％瓊脂糖凝膠(使用由“Pharmacia LKB，生物化學(xué)有限公司”(奧地利)制備的NA等級(jí)瓊脂糖)中電泳確定核酸的組分含量。DNA電泳分離在由“Pharmacia LKB，生物化學(xué)有限公司”(奧地利)制備的裝置中的一塊2％瓊脂糖凝膠中實(shí)施。電泳在TAE緩沖液中PH7.4(0.04M Tris，0.02M乙酸鈉和0.02M EDTA)電場(chǎng)強(qiáng)度6W/厘米實(shí)施3小時(shí)。根據(jù)溴-苯酚藍(lán)指示儀運(yùn)動(dòng)觀察樣品推進(jìn)。在將凝膠用溴化etidium(5μg/毫升水)干燥后，電泳結(jié)果在由“Pharmacia LKB，生物化學(xué)有限公司”(奧地利)制備的透照儀上(波長(zhǎng)＝254納米)在遞質(zhì)紫外線照射中檢測(cè)。
研究結(jié)果在表34和35中列出。從表34中明顯得到，GSSG·Pt誘導(dǎo)具有活性ras-基因的p21細(xì)胞培養(yǎng)物中的細(xì)胞程序死亡，表現(xiàn)為多種DNA核小體尺寸的DNA細(xì)胞程序死亡片段的聚集。
在具有非活性ras-信號(hào)-傳導(dǎo)系統(tǒng)但缺失在G1相中的細(xì)胞周期延遲控制的P21(--)細(xì)胞中，GSSG·Pt誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡比在p21++細(xì)胞中誘導(dǎo)程度要小(表34，35)。這可能與ras系統(tǒng)能通過促細(xì)胞分裂因子級(jí)聯(lián)刺激細(xì)胞增殖和分化和通過另一種細(xì)胞信號(hào)級(jí)聯(lián)來誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡(編程性細(xì)胞死亡)的事實(shí)有關(guān)。缺失p21基因表達(dá)可在ras-信號(hào)傳導(dǎo)途徑的特異級(jí)聯(lián)的相互關(guān)系產(chǎn)生變化，從而在缺失p21基因情況中減弱藥物的細(xì)胞程序死亡刺激作用。
由于P21基因缺失不常出現(xiàn)在腫瘤疾病中，考慮除了對(duì)p21基因突變的腫瘤具有較低的效力外，這些試驗(yàn)的結(jié)果可以說明GSSG·Pt對(duì)這些腫瘤化療的效力。
結(jié)論實(shí)施研究獲得的數(shù)據(jù)表明，GSSG·Pt藥物能在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中活性誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡，即，形使抗腫瘤活性。增強(qiáng)的ras基因表達(dá)促進(jìn)轉(zhuǎn)化細(xì)胞C-8中的細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)，說明通過ras-信號(hào)-傳導(dǎo)系統(tǒng)實(shí)施GSSG·Pt抗腫瘤活性。在p21基因表達(dá)缺失的情況中減弱的藥物效力可通過ras-信號(hào)-傳導(dǎo)途徑的促細(xì)胞分裂和細(xì)胞程序死亡級(jí)聯(lián)中的因子重新分配來確定。
然而，在GSSG·Pt作用后，甚至在p21缺失細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)存在DNA細(xì)胞程序死亡降解，即，不可逆轉(zhuǎn)細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)的標(biāo)志。
根據(jù)前述內(nèi)容我們可以得到GSSG·Pt合成物基的藥物·通過依賴ras細(xì)胞程序死亡途徑的誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)涉及腫瘤轉(zhuǎn)化細(xì)胞的化療活性；·在包括p21缺失細(xì)胞的腫瘤轉(zhuǎn)化細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡發(fā)展。實(shí)施例17GSSG·Pt釩鹽對(duì)患有糖尿病患者的治療作用患者Bronavetz Lidia Sergeyevna性別女年齡37門診卡#63診斷糖尿病，不依賴胰島素類-II類，糖尿病血管病，IV級(jí)既往病癥在31歲時(shí)開始顯示高血糖。1994年10月，患者受治于醫(yī)院#16的內(nèi)分泌科。在患者遺傳史母親方有糖尿病病例。糖尿病逐漸發(fā)展，血液葡萄糖含量從12.1到15.7毫摩爾/升波動(dòng)，糖尿7％。
預(yù)先治療在疾病開始時(shí)，患者經(jīng)常到醫(yī)院受治；在1994年六個(gè)月期間，她服用Insulinlente S.N.C-32 IU和磺脲基團(tuán)的口服低血糖癥試劑；然后取消胰島素，患者使用抗糖尿病試劑-對(duì)氨苯磺酰丁脲(Bucarban)，氨磺丁脲(Diabeton)。血液葡萄糖含量從10.7到15.4毫摩爾/升變化，糖尿3-7％。
1998年1月，患者到醫(yī)院受治，使用下列治療用藥法氨磺丁脲(Diabeton)0.08克-一天兩次一次兩片，Glucobay 0.1每天三次。
血液葡萄糖含量9.00 12.6毫摩爾/升12.0012.0毫摩爾/升14.0015.3毫摩爾/升17.0019.1毫摩爾/升6.0 11.5毫摩爾/升糖尿-達(dá)3％。
由于預(yù)先治療無效，決定使用GSSG·Pt釩鹽藥物。
GSSG·Pt釩鹽的醫(yī)院治療用藥法從98年1月17日開始10天期間一天一次-靜脈內(nèi)注射GSSG·Pt釩鹽(每天劑量-0.01-0.5毫克/公斤)。
接著10天期間-每隔一天靜脈內(nèi)注射GSSG·Pt釩鹽(每天劑量-0.01-0.5毫克/公斤)。
接著10天期間(第三個(gè)10天)-每天一次靜脈內(nèi)注射GSSG·Pt釩鹽(每天劑量-0.01-0.5毫克/公斤)。
GSSG·Pt釩鹽治療伴隨著氨磺丁脲(Diabeton)和Glucobay變化的治療用藥。氨磺丁脲(Diabeton)服用0.08一天兩次，Glucobay 0.08一天三次。
餐后血液葡萄糖恢復(fù)到正常值，沒有超過8.2-10.6毫摩爾/升。出院后，患者在門診接受GSSG·Pt釩鹽治療一個(gè)月。
GSSG·Pt釩鹽的門診治療用藥一個(gè)月一天一次肌肉內(nèi)注射GSSG·Pt釩鹽(每天劑量-0.01-0.5毫克/公斤)。
用GSSG·Pt釩鹽藥物治療的隨后兩個(gè)月期間，記錄兩個(gè)階段的葡萄糖含量降低到1.5-2.5毫摩爾/升，因此，降低抗糖尿病藥物劑量。治療兩個(gè)月后，取消Glucobay。
治療過程完成后患者狀況在服用GSSG·Pt釩鹽藥物作為維持基礎(chǔ)治療四個(gè)月后，患者總體狀況顯著改善，評(píng)定為滿意。血液學(xué)，生物化學(xué)，免疫學(xué)血液指數(shù)的發(fā)展在表36和37中提供。
評(píng)價(jià)葡萄糖，cAMP/cGMP，硫醇-二硫化物比率和其他分析參數(shù)的指數(shù)發(fā)展。
葡萄糖含量發(fā)展是抗糖尿病藥物的作用效果的綜合標(biāo)準(zhǔn)。服用GSSG·Pt釩鹽藥物和口服抗糖尿病藥物(Diabeton和Glucobay)的組合治療致使血液葡萄糖正?；档虳iabeton的治療劑量并取消Glucobay。血液學(xué)，生物化學(xué)和免疫參數(shù)變化特性顯示了新陳代謝和系統(tǒng)反應(yīng)總體恢復(fù)，還不能確定GSSG·Pt釩鹽藥物的抗糖尿病要素。使用下列指數(shù)-cAMP/cGMP，硫醇-二硫化物比率-可以基本上定性GSSG·Pt釩鹽影響穩(wěn)定血液葡萄糖含量的細(xì)胞反應(yīng)復(fù)合物的分子機(jī)理。具體地，關(guān)鍵的細(xì)胞內(nèi)信使-cAMP和cGMP-確定葡萄糖流入細(xì)胞內(nèi)新陳代謝過程的強(qiáng)度。而且，依賴于-cGMP的酶細(xì)胞系統(tǒng)確定細(xì)胞葡萄糖攝入強(qiáng)度。接著，cGMP含量由細(xì)胞氧化勢(shì)能來確定。具體地，氧化劑增加cGMP含量，相反，抗氧化劑實(shí)施對(duì)其含量的抑制作用。因此，反映抗-和過氧化劑平衡的細(xì)胞內(nèi)硫醇-二硫化物比率決定細(xì)胞內(nèi)-cAMP/cGMP指數(shù)的值。將生物體考慮為一個(gè)整體，我們可以分析血液中的這些指數(shù)作為與葡萄糖含量波動(dòng)相關(guān)的綜合性內(nèi)在介質(zhì)，因?yàn)槠咸烟切玛惔x以及硫醇-二硫化物新陳代謝和環(huán)狀核苷酸系統(tǒng)，對(duì)于我們生物體中的所有細(xì)胞種類的功能形使是不能廢棄的要素。
獲得的結(jié)果顯示了GSSG·Pt釩鹽藥物降低葡萄糖的作用。此外，這種作用遵從cGMP含量增加的發(fā)展(cAMP/cGMP指數(shù)的降低)和TDR值的降低(硫醇氧化形式的增加)?？紤]到血液葡萄糖調(diào)節(jié)作用中氧化硫醇形式和cGMP的調(diào)節(jié)可能性，可以說出GSSG·Pt釩鹽藥物的調(diào)節(jié)低血糖作用的基本機(jī)理。尤其是，GSSG·Pt釩鹽藥物對(duì)細(xì)胞氧化還原輪廓的調(diào)節(jié)作用，提供增大的氧化劑要素含量，接著以對(duì)cGMP有利重新分布環(huán)狀核苷酸系統(tǒng)中的平衡(誘導(dǎo)鳥苷酸環(huán)化酶，抑制磷酸二酯酶，分別為cGMP的合成和破壞酶)。cGMP的調(diào)節(jié)作用刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)過程到依賴胰島素組織中，致使血液葡萄糖含量降低。
結(jié)論在組合糖尿病治療方案中使用GSSG·Pt釩鹽藥物可獲得下列治療效果·生命質(zhì)量改善血液葡萄糖含量穩(wěn)定；·降低葡萄糖藥物的用藥劑量降低；·血液學(xué)，生物化學(xué)和免疫學(xué)指數(shù)恢復(fù)到正常值。實(shí)施例18對(duì)比研究在傷寒熱和新鮮兔熱病疫苗模式中GSSG·Pt和GSSG·Pd的輔助性活性在用化學(xué)合成的傷寒熱和新鮮兔熱病疫苗免疫接種的白鼠試驗(yàn)中測(cè)定GSSG·Pt和GSSG·Pd的輔助性活性。
試驗(yàn)中，使用從“Rappolovo”工廠(醫(yī)療科學(xué)俄羅斯學(xué)院)獲得的體重18-20克的隨意飼養(yǎng)的成年雄性鼠。使用購(gòu)得的藥物實(shí)施免疫接種。兔熱疫苗腹腔內(nèi)引入，劑量為250個(gè)微生物細(xì)胞，傷寒熱疫苗皮下引入，以等同于0.2倍人類疫苗的預(yù)先選取優(yōu)化劑量。
在免疫接種前，及在免疫接種當(dāng)天，在劑量為每次注入5毫克/公斤的抗原注射前40-60分鐘，引入0.5毫升量的GSSG·Pt和GSSG·Pd，通過腹腔內(nèi)途徑一天一次，共2天。在相同時(shí)期對(duì)照動(dòng)物注入0.5毫升的氯化鈉等張溶液。
通過遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTHR)并確定特異抗體的方式，通過它們對(duì)細(xì)胞和體液免疫的作用測(cè)定GSSG·Pt和GSSG·Pd的輔助性效用。在免疫接種后第14天實(shí)施測(cè)試。為了獲得DTHR，給鼠在右后腿皮下注射0.05毫升相應(yīng)抗原(S.Typhi的土拉菌素或O-抗原)，在左后腿注射相同量的氯化鈉等張溶液。24小時(shí)后，用過量醚無痛苦處死鼠，在踝關(guān)節(jié)處切掉兩條后腿并稱重，然后計(jì)算反應(yīng)指數(shù)。兔熱病和傷寒熱試劑的菌體抗原的抗體通過采用相應(yīng)抗原紅細(xì)胞診斷測(cè)試法的間接凝集測(cè)試法確定；GSSG·Pt和GSSG·Pd對(duì)抗體發(fā)展的作用可用兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)來測(cè)定-血清轉(zhuǎn)化頻率和抗體滴定度值。
獲得的數(shù)據(jù)顯示，在免疫接種前三次腹腔內(nèi)注入劑量為5毫克/公斤的GSSG·Pt和GSSG·Pd產(chǎn)生對(duì)化學(xué)合成的傷寒熱和新鮮兔熱病疫苗增強(qiáng)的免疫反應(yīng)，(與對(duì)照動(dòng)物相比)表現(xiàn)出對(duì)這些微生物的菌體抗原的更密集的抗體發(fā)展和更大程度的DTHR。依據(jù)這些應(yīng)注意到，兩種研究藥物的輔助性功能實(shí)際上是相似的，因?yàn)槊庖叻磻?yīng)值的不明顯的差異在統(tǒng)計(jì)上是可忽略的。
因此，含有鉑和鈀的氧化型谷胱甘肽的新型衍生物是具有與兔熱病和傷寒熱試劑的抗原有關(guān)的輔助性作用的生物學(xué)-藥理學(xué)活性化合物。
此領(lǐng)域中的技術(shù)人員會(huì)容易地意識(shí)到，本文所列出的所有參數(shù)僅是實(shí)施例，實(shí)際的參數(shù)將取決于使用本發(fā)明的方法和設(shè)備的具體應(yīng)用。因此，可以理解認(rèn)為，前述實(shí)施方案僅是以實(shí)施例方式演示，在所附權(quán)利要求書和其等同物的范圍內(nèi)，本發(fā)明可以用不同于本文具體描述的其他方式實(shí)施。
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表一 在以不同劑量靜脈注射GSSG后，GSSG在CBA鼠血清中含量(μg/ml)的變化。M±m(xù)
*p＜0.01-相對(duì)于0分鐘時(shí)含量計(jì)算p值。表二 在以不同劑量靜脈注射GSSG后，GSSG·Pt在CBA鼠血清中含量(μg/ml)的變化。M±m(xù)
*p＜0.01-相對(duì)于0分鐘時(shí)含量計(jì)算p值。表三 在以2μg/ml劑量靜脈注射GSSG后，GSSG在CBA鼠血清和不同器官中含量的變化。M±m(xù)
*p＜0.01-相對(duì)于沒有注射藥物的動(dòng)物的相似參數(shù)計(jì)算p值**-f(fitogram)-10-15克表四 在以2ug/ml劑量靜脈注射GSSG后，GSSG·Pt在CBA鼠血清和不同器官中含量的變化。M±m(xù)
*p＜0.01-相對(duì)于沒有注射藥物的動(dòng)物的相似參數(shù)計(jì)算p值**-f(fitogram)-10-15克表五 在完整CBA鼠中參與硫醇新陳代謝的酶的活性，M±m(xù)
(1)-HADP用量的活性，微摩爾/分/每1毫克蛋白質(zhì)(2)-還原谷胱甘肽用量的活性，微摩爾/分/每1毫克蛋白質(zhì)(3)-以μkat/L表示的活性表六 在以20μg/毫升劑量靜脈注射GSSG后，在CBA鼠中參與硫醇新陳代謝的酶活性的變化，M±m(xù)
(1)-HADP用量的活性，微摩爾/分/每1毫克蛋白質(zhì)(2)-還原谷胱甘肽用量的活性，微摩爾/分/每1毫克蛋白質(zhì)(3)-以μkat/L表示的活性*p＜0.01-相對(duì)于沒有注射藥物的動(dòng)物的相似參數(shù)計(jì)算p值表七 在以20μg/毫升劑量靜脈注射GSSG·Pt后，在CBA鼠中參與硫醇新陳代謝的酶活性的變化，M±m(xù)
(1)-HADP用量的活性，微摩爾/分/每1毫克蛋白質(zhì)(2)-還原谷胱甘肽用量的活性，微摩爾/分/每1毫克蛋白質(zhì)(3)-以μkat/L表示的活性*p＜0.01-相對(duì)于沒有注射藥物的動(dòng)物的相似參數(shù)計(jì)算p值表八 GSSG對(duì)體外人類單核白細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的影響，M±m(xù)
注(*)-與對(duì)照物比較數(shù)值間的差異顯著表九 GSSG·Pt對(duì)體外人類單核白細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的影響，M±m(xù)
表十 在用環(huán)磷酰胺治療的鼠中，GSSG和GSSG·Pt對(duì)脾臟細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子，骨髓和血液指數(shù)，和對(duì)SRBC免疫反應(yīng)的影響，M±m(xù)
與完整動(dòng)物組比較(*)-與對(duì)照組比較(CP+常用鹽水)(◆)差異顯著(p＜0.05)表11 在預(yù)先注射100毫克/公斤劑量的環(huán)磷酰胺及用10毫克/公斤劑量GSSG·Pt治療后，對(duì)患有血球減少癥的雄性鼠的總體血液分析，M±m(xù)
注*表示，對(duì)置信水平為P＞0.95的完整組的顯著性區(qū)別表12 在預(yù)先注射100毫克/公斤劑量的環(huán)磷酰胺及用10毫克/公斤劑量GSSG·Pt治療后，對(duì)患有血球減少癥的雄性鼠的脊髓X線選影照片，M±m(xù)
注*表示，對(duì)置信水平為P＞0.95的完整組的顯著性區(qū)別表13 在照射動(dòng)物中，GSSG和GSSG·Pt對(duì)脾細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子，骨髓，脾臟和血液細(xì)胞指數(shù)，以及骨髓和脾臟造血細(xì)胞集落形成能力的影響，M±m(xù)
(*)與完整動(dòng)物相比差異顯著；(◆)與服用常用鹽水的照射動(dòng)物對(duì)照組相比差異顯著(p＜0.05)。
表14顯示細(xì)胞因子增生作用的GSSG·Pt合成物的免疫調(diào)節(jié)作用的分子機(jī)理
注(1)臨時(shí)點(diǎn)表現(xiàn)從以100μg/毫升濃度注入GSSG·Pt合成物時(shí)刻起的間隔特性。
(2)按照零點(diǎn)作為對(duì)照量符號(hào)*指變化的可靠性(p＜0.01)。
表15在環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)情況下，GSSG·Pt合成物鹽對(duì)CBA鼠的攜帶IL-2受體的淋巴細(xì)胞與總淋巴細(xì)胞量間分百分比和對(duì)酪氨酸磷酸化量的影響
*P＜0.05相對(duì)于從常用鹽水應(yīng)用中獲得的數(shù)據(jù)計(jì)算p值。
表16在患有胃癌，腹膜轉(zhuǎn)移，腹水和脾腫大的患者中GSSG對(duì)血液和免疫指數(shù)和細(xì)胞因子量的影響
表17 在患有胃癌，腹膜轉(zhuǎn)移，腹水和脾腫大的患者中GSSG·Pt對(duì)血液和免疫指數(shù)和細(xì)胞因子量的影響
表18 在患有肺癌并發(fā)肝轉(zhuǎn)移的患者中GSSG對(duì)血液，生物化學(xué)，免疫指數(shù)發(fā)展和細(xì)胞因子含量的影響
表19在患有肺癌并發(fā)肝轉(zhuǎn)移的患者中GSSG對(duì)血液，生物化學(xué)，免疫指數(shù)發(fā)展和細(xì)胞因子含量的影響
表20在患有慢性HBV(病毒性肝炎B)的患者中GSSG對(duì)血液，生物化學(xué)，血清，免疫指數(shù)和細(xì)胞因子含量的變化的影響
表21在患有慢性HBV(病毒性肝炎B)的患者中GSSG·Pt對(duì)血液，生物化學(xué)，血清，免疫指數(shù)和細(xì)胞因子含量的變化的影響
表22 患有急性病毒性肝炎B的患者用GSSG·Pt藥物治療后和前血液，血清和生物化學(xué)參數(shù)的變化
表23患有急性病毒性肝炎B患者用GSSG·Pt藥物治療時(shí)，患者免疫學(xué)狀況
表24患有急性病毒性肝炎B患者用GSSG·Pt藥物治療時(shí)，患者細(xì)胞因子狀況
表25在患有慢性病毒性肝炎C患者中使用GSSG·Pt藥物治療前和后，血液，血清和生物化學(xué)參數(shù)的變化
表26患有慢性病毒性肝炎C的患者在用GSSG·Pt藥物治療后和前，患者的免疫狀況
表27患有慢性病毒性肝炎C的患者在用GSSG·Pt藥物治療后，患者細(xì)胞因子狀況
表28體外48小時(shí)溫育后GSSG和GSSG·Pt對(duì)正常淋巴細(xì)胞量的作用結(jié)果(M±m(xù))(p＜0.05)
*-初始細(xì)胞量-250,000/毫升**-沒有藥物在加入10％胎牛血清的RPMI 1640中溫育表29用GSSG和GSSG·Pt治療后48小時(shí)期間HL-60細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育(M±m(xù))(p＜0.05)
*-初始細(xì)胞量-250,000/毫升**-與對(duì)照物相比差異顯著-GSSG(p＜0.05)**-沒有藥物在加入10％胎牛血清的RPMI 1640中溫育表30體外48小時(shí)溫育期間GSSG·Pt對(duì)正常淋巴細(xì)胞量的影響(M±m(xù))(p＜0.05)
*-初始細(xì)胞量-250,000/毫升xx-沒有藥物在加入10％胎牛血清的RPMI 1640中溫育表31用GSSG·Pt治療后48小時(shí)溫育期間HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞程序死亡發(fā)展(M±m(xù))(p＜0.05)
*-初始細(xì)胞量-250,000/毫升**-與對(duì)照物相比差異顯著-GSSG(p＜0.05)xx-沒有藥物在加入10％胎牛血清的RPMI 1640中溫育表32用GSSG·Pt治療后48小時(shí)溫育期間C-8細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞程序死亡發(fā)展(M±m(xù))(p＜0.05)
*-初始細(xì)胞量-50,000/毫升**-與對(duì)照物相比差異顯著-GSSG(p＜0.05)xx-沒有藥物在加入10％胎牛血清的RPMI 1640中溫育表33用GSSG·Pt治療后48小時(shí)溫育期間A-4細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞程序死亡發(fā)展(M±m(xù))(p＜0.05)
*-初始細(xì)胞量-50,000/毫升**-與對(duì)照物相比差異顯著-GSSG(p＜0.05)xx-沒有藥物在加入10％胎牛血清的RPMI 1640中溫育表34用GSSG·Pt治療后48小時(shí)溫育期間C-8細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞程序死亡發(fā)展(M±m(xù))(p＜0.05)
*-初始細(xì)胞量-50,000/毫升**-與對(duì)照物相比差異顯著-GSSG(p＜0.05)xx-沒有藥物在加入10％胎牛血清的RPMI 1640中溫育表35用GSSG·Pt治療后48小時(shí)溫育期間p21(--)細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞程序死亡發(fā)展(M±m(xù))(p＜0.05)
*-初始細(xì)胞量-50,000/毫升**-與對(duì)照物相比差異顯著-GSSG(p＜0.05)**-沒有藥物在加入10％胎牛血清的RPMI 1640中溫育表36在患有糖尿病患者中與之高度相關(guān)的血液葡萄糖和生物化學(xué)血液指數(shù)(r1和r2＞0.85)*
*-r1-血液葡萄糖發(fā)展和CAMP/cGMP比率變化的相關(guān)性比率；r2-血液葡萄糖發(fā)展和硫醇-二硫化物比率變化的相關(guān)性比率表37 在患有糖尿病的患者中血液，生物化學(xué)和免疫指數(shù)
表38劑量為5毫克/公斤的GSSG·Pt和GSSG·Pd對(duì)兔熱病O-抗原的抗體發(fā)展的影響
表39劑量為5毫克/公斤的GSSG·Pt和GSSG·Pd對(duì)抗兔熱病O-抗原的DTHR(遲發(fā)型超敏反應(yīng))的影響
注*P＜0.05表40劑量為5毫克/公斤的GSSG·Pt和GSSG·Pd對(duì)S.Typhi的O-抗原的抗體發(fā)展的影響
表41 劑量為5毫克/公斤的GSSG·Pt和GSSG·Pd對(duì)抗S.Typhi的O-抗原的DTHR(遲發(fā)型超敏反應(yīng))的影響
注*P＜0.0權(quán)利要求
1.一種合成物，包括比率為約3000∶1到約1∶1之間的氧化型谷胱甘肽基化合物和金屬物料，其中金屬物料包括從含有鉑和鈀的組中選取的金屬。
2.依據(jù)權(quán)利要求1的合成物，其中合成物包括比率為約1000∶1到約1∶1之間的氧化型谷胱甘肽基化合物和金屬物料。
3.依據(jù)權(quán)利要求2的合成物，其中合成物包括比率為約1000∶1到約10∶1之間的氧化型谷胱甘肽基化合物和金屬物料。
4.依據(jù)權(quán)利要求2的合成物，其中合成物包括比率為約1000∶1到約100∶1之間的氧化型谷胱甘肽基化合物和金屬物料。
5.依據(jù)權(quán)利要求1的合成物，其中金屬是是鉑。
6.依據(jù)權(quán)利要求3的合成物，其中鉑物料從下列組中選取的，包括鉑鹽，配位化合物和有機(jī)金屬化合物。
7.依據(jù)權(quán)利要求6的合成物，其中鉑物料是鉑配位化合物。
8.依據(jù)權(quán)利要求7的合成物，其中配位化合物是順式-鉑。
9.依據(jù)權(quán)利要求1的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物具有下列結(jié)構(gòu)式 其中A，B，D，E，G和H可以是相同的或是不同的，每個(gè)是從包括有機(jī)單元和有機(jī)單元的鹽的組中選取的。
10.依據(jù)權(quán)利要求9的合成物，其中A，B，D，E，G和H可以是相同的或是不同的，每個(gè)包括從下列單元組中選取的單元，包括氨基基團(tuán)，羧基基團(tuán)和酰胺。
11.依據(jù)權(quán)利要求10的合成物，其中A，B，D，E，G和H中的任何兩個(gè)通過至少一個(gè)共價(jià)鍵彼此鍵合。
12.依據(jù)權(quán)利要求11的合成物，其中A，B，D，E，G和H中的任何兩個(gè)通過酰胺鍵彼此鍵合。
13.依據(jù)權(quán)利要求10的合成物，其中A，B，D，E，G和H可以是相同的或是不同的，每個(gè)包括一個(gè)氨基酸。
14.依據(jù)權(quán)利要求10的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是氧化型谷胱甘肽，其中A和E都是-CO2H，B和D都是-NH2，G和H都是-CO2M，M是抗衡離子。
15.依據(jù)權(quán)利要求10的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是S-硫乙胺·谷胱甘肽二硫化物。
16.依據(jù)權(quán)利要求10的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是雙-[DL-6，8-thioetic acid]·谷胱甘肽二硫化物。
17.依據(jù)權(quán)利要求10的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是[β-丙氨?；?L-組氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物。
18.依據(jù)權(quán)利要求10的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是[9-β-D-ribofuranosyl腺嘌呤基1]·谷胱甘肽二硫化物。
19.依據(jù)權(quán)利要求10的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是雙-[L-2-氨基-4-[甲基硫代]丁酸]·谷胱甘肽二硫化物。
20.依據(jù)權(quán)利要求10的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是雙-[L-苯基丙氨?；鵠谷胱甘肽二硫化物。
21.依據(jù)權(quán)利要求10的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物具有氧化型谷胱甘肽的?；某跫?jí)谷氨酸氨基基團(tuán)。
22.依據(jù)權(quán)利要求21的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是從下列組中選取的，包括雙-[甲硫氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物；雙-[天冬氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物；雙-[組氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物；雙-[3-碘代-酪氨?；鵠·谷胱甘肽二硫化物；雙-[γ-氨基丁?；鵠·谷胱甘肽二硫化物；雙-[γ-羥基丁?；鵠·谷胱甘肽二硫化物；雙-[lipoyl]·谷胱甘肽二硫化物；和雙-[3，4-二羥基苯丙氨酰基]·谷胱甘肽二硫化物。
23.依據(jù)權(quán)利要求8的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物含有與從包括雜環(huán)碳酸和核苷酸的組中選取的單元鍵合的酰胺或磷酰胺。
24.依據(jù)權(quán)利要求23的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是從下列組中選取的，包括雙-[嘧啶-3-羰基]·谷胱甘肽二硫化物，尿苷-5’ -monophosphatoyl·谷胱甘肽二硫化物，次黃苷-5’-monophosphatoyl·谷胱甘肽二硫化物，folliculyl琥珀?；す入赘孰亩蚧锖捅?1，3-二phosphatyl·谷胱甘肽二硫化物。
25.依據(jù)權(quán)利要求10的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是從下列組中選取的，包括四-多巴胺·谷胱甘肽二硫化物和茶堿·谷胱甘肽二硫化物。
26.依據(jù)權(quán)利要求1的合成物，其中氧化型谷胱甘肽基化合物與金屬物料化學(xué)上相互作用。
27.依據(jù)權(quán)利要求26的合成物，其中合成物具有下列結(jié)構(gòu)式
28.一種穩(wěn)定氧化型谷胱甘肽基化合物的二硫鍵的方法，包括將氧化型谷胱甘肽基化合物與金屬物料相互作用，金屬物料包括從含有鉑和鈀的組中選取的金屬。
29.依據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中金屬是鉑。
30.依據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中鉑物料以相對(duì)于氧化型谷胱甘肽基化合物約0.0003當(dāng)量到約1當(dāng)量之間的量存在。
31.依據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中鉑物料以相對(duì)于氧化型谷胱甘肽基化合物約0.001當(dāng)量到約0.01當(dāng)量之間的量存在。
32.依據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中鉑物料以相對(duì)于氧化型谷胱甘肽基化合物約0.001當(dāng)量到約0.1當(dāng)量之間的量存在。
33.依據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中鉑物料以相對(duì)于氧化型谷胱甘肽基化合物約0.001當(dāng)量到約1當(dāng)量之間的量存在。
34.依據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中鉑物料從下列組中選取的，包括鉑鹽，配位化合物和有機(jī)金屬化合物。
35.依據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中鉑物料是順式-鉑。
36.依據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中氧化型谷胱甘肽基化合物具有下列結(jié)構(gòu)式 其中A，B，D，E，G和H可以是相同的或是不同的，每個(gè)是從包括有機(jī)單元和有機(jī)單元的鹽的組中選取的。
37.依據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中相互作用包括提供谷胱甘肽三肽基化合物；將谷胱甘肽三肽鈉鹽與氧化劑和從包括鉑和鈀的組中選取的金屬物相互作用反應(yīng)，獲得三肽二聚物，這是一種氧化型谷胱甘肽的結(jié)構(gòu)類似物，就是說，是具有穩(wěn)定二硫鍵的六肽。
38.依據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中氧化劑是從包括氧和過氧化氫的組中選取的。
39.依據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中氧化劑是過氧化氫。
40.依據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中反應(yīng)步驟包括將1當(dāng)量的谷胱甘肽基化合物與少于約1當(dāng)量的過氧化氫和在約0.0003當(dāng)量到約1當(dāng)量之間的鉑物料反應(yīng)。
41.依據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中反應(yīng)步驟包括將將1當(dāng)量的谷胱甘肽基化合物與少于約1當(dāng)量的過氧化氫和在約0.001當(dāng)量到約0.1當(dāng)量之間的鉑物料反應(yīng)。
42.依據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中反應(yīng)步驟包括將將1當(dāng)量的谷胱甘肽基化合物與少于約1當(dāng)量的過氧化氫和在約0.001量到約0.01當(dāng)量之間的鉑物料反應(yīng)。
43.依據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中反應(yīng)步驟包括將將1當(dāng)量的谷胱甘肽基化合物與少于約1當(dāng)量的過氧化氫和在約0.001當(dāng)量到約1當(dāng)量之間的鉑物料反應(yīng)。
44.依據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中反應(yīng)步驟包括將將1當(dāng)量的谷胱甘肽基化合物與約0.9當(dāng)量的過氧化氫和在約0.0003當(dāng)量到約1當(dāng)量之間的鉑物料反應(yīng)。
45.依據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中反應(yīng)步驟包括將將1當(dāng)量的谷胱甘肽基化合物與約0.9當(dāng)量的過氧化氫和在約0.001當(dāng)量到約0.1當(dāng)量之間的鉑物料反應(yīng)。
46.依據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中反應(yīng)步驟包括將將1當(dāng)量的谷胱甘肽基化合物與約0.9當(dāng)量的過氧化氫和在約0.001當(dāng)量到約0.01當(dāng)量之間的鉑物料反應(yīng)。
47.依據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中反應(yīng)步驟包括將將1當(dāng)量的谷胱甘肽基化合物與約0.9當(dāng)量的過氧化氫和在約0.001當(dāng)量到約1當(dāng)量之間的鉑物料反應(yīng)。
48.依據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中相互作用包括在約1當(dāng)量的氧化型谷胱甘肽基化合物中加入約0.0003當(dāng)量到約1當(dāng)量之間的鉑物料。
49.依據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是從包括堿金屬鹽，堿土金屬鹽和過度金屬鹽的組中選取的一種鹽。
50.依據(jù)權(quán)利要求49的方法，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是從下列組中選取的一種鹽，包括鋰鹽，鈉鹽，鉀鹽，鎂鹽，鈣鹽，釩鹽，錳鹽，鐵鹽，鉬鹽，辛鹽和銀鹽。
51.依據(jù)權(quán)利要求37和50的方法，其中從包括堿金屬鹽，堿土金屬鹽和過度金屬鹽的組中選取的氧化型谷胱甘肽基鹽是獲得的，即是合成的。
52.依據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中氧化型谷胱甘肽基化合物是含氟鹽。
53.一種刺激內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子的方法，包括給需要刺激產(chǎn)生細(xì)胞因子或造血因子或兩者的哺乳動(dòng)物體內(nèi)引入有效量的合成物，包括比率在約3000∶1到約1∶1之間的氧化型谷胱甘肽基化合物和金屬物料，其中金屬物料包括從含有鉑和鈀的組中選取的金屬，經(jīng)一段時(shí)間獲得治療作用。
54.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中比率在約1000∶1到約1∶1之間。
55.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中比率在約1000∶1到約10∶1之間。
56.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中比率在約1000∶1到約100∶1之間。
57.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中金屬物料是鉑物料。
58.依據(jù)權(quán)利要求54的方法，其中鉑物料是順式-鉑。
59.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中合成物是口服的。
60.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中疾病是從下列疾病組中選取的，包括腫瘤疾病，感染性疾病，免疫疾病，缺血性疾病，神經(jīng)退行性變疾病，新陳代謝疾病，內(nèi)分泌疾病和其他疾病。
61.依據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中腫瘤疾病是從下列疾病組中選取的，包括肺癌，惡性黑素瘤，腦腫瘤，結(jié)腸直腸癌，乳腺癌，前列腺癌，卵巢癌，急性成淋巴細(xì)胞白血性增生和急性成骨髓細(xì)胞白血性增生。
62.依據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中感染性疾病是從下列疾病組中選取的，包括肺結(jié)核，病毒性肝炎B，病毒性肝炎C，混合感染(HBV和BCV)，皰疹，腦膜炎(膿毒癥)，腹膜炎，急性胰腺炎和化膿性手術(shù)后后遺癥。
63.依據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中免疫疾病是從下列疾病組中選取的，包括AIDS，感染性源的免疫抑制，放射性源的免疫抑制，毒性源的免疫抑制，血管球性腎炎，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，膠原性疾病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡和過敏病況。
64.依據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中缺血性疾病是從下列疾病組中選取的，包括缺血性腦病況和缺血性心臟病。
65.依據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中神經(jīng)退行性變疾病是從下列疾病組中選取的，包括Alzheimer癥，Parkinson癥，遺傳性(Huntington癥)舞蹈病，肌萎縮性側(cè)索硬化，神經(jīng)-AIDS，脫髓鞘癥。
66.依據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中神經(jīng)退行性變疾病是從下列疾病組中選取的神經(jīng)行為疾病，包括麻醉劑戒癮，腦組織氧，燥狂-抑郁精神病和精神分裂癥。
67.依據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中新陳代謝疾病是動(dòng)脈硬化癥。
68.依據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中內(nèi)分泌疾病與下丘腦-垂體-卵巢功能病變有關(guān)。
69.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中治療作用包括從下列組中選取的過程，包括調(diào)節(jié)正常細(xì)胞的增殖，調(diào)節(jié)正常細(xì)胞的分化和誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡。
70.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中合成物服用劑量在約0.1毫克/公斤體重到約1.0毫克/公斤體重之間。
71.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中合成物服用劑量在約1毫克/平方米體表面積到約100毫克/平方米體表面積之間。
72.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中合成物以從下列組中選取的溶液形式服用，包括吸入溶液，局部用注入液，眼滴液，鼻內(nèi)注入液，表皮涂劑藥膏，靜脈內(nèi)溶液，注射液，和栓劑。
73.依據(jù)權(quán)利要求71的方法，其中溶液含有濃度從約1％到約10％的合成物。
74.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中合成物以可注射形式服用。
75.依據(jù)權(quán)利要求73的方法，其中可注射形式包括溶液中合成物濃度在約0.01％到3％之間。
76.依據(jù)權(quán)利要求73的方法，其中合成物服用劑量在約0.01毫克/公斤體重到約1.0毫克/公斤體重之間。
77.依據(jù)權(quán)利要求73的方法，其中合成物服用劑量在約1毫克/平方米體表面積到約100毫克/平方米體表面積之間。
78.一種增強(qiáng)并延長(zhǎng)氧化型谷胱甘肽基化合物刺激內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子的能力的方法，所說的方法包括以比率在約3000∶1到約1∶1之間將氧化型谷胱甘肽基化合物與金屬物料相互作用，其中金屬物料包括從含有鉑和鈀的組中選取的金屬。
79.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中所說的細(xì)胞是哺乳動(dòng)物體內(nèi)的細(xì)胞，所說的合成物至少一天至少一天一次以從約0.01毫克/公斤體重到約1.0毫克/公斤體重的量引入到所說的身體中。
80.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中所說的細(xì)胞是哺乳動(dòng)物體內(nèi)的細(xì)胞，所說的合成物以從約1.0毫克/平方米局部區(qū)域面積到約100毫克/平方米局部區(qū)域面積的量局部引入到局部區(qū)域。
81.一種治療患有疾病的受試體的方法，包括給需要這種治療的受試體服用有效量的合成物以刺激內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和/或造血因子或兩者，以獲得治療作用，合成物包括比率在約3000∶1到約1∶1之間的氧化型谷胱甘肽和金屬物料，其中金屬物料包括從含有鉑和鈀的組中選取的金屬。
82.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中比率在約1000∶1到約1∶1之間。
83.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中比率在約1000∶1到約10∶1之間。
84.依據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中比率在約1000∶1到約100∶1之間。
85.調(diào)節(jié)內(nèi)源產(chǎn)生細(xì)胞因子和造血因子和/或再生細(xì)胞因子作用的醫(yī)療試劑，提供在正常細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞和/或轉(zhuǎn)化細(xì)胞中新陳代謝，增殖，分化和細(xì)胞程序死亡的過程調(diào)節(jié)，含有有效量的依據(jù)權(quán)利要求1-27的合成物作為活性成分。
86.依據(jù)權(quán)利要求85的醫(yī)療試劑，設(shè)計(jì)用來治療腫瘤疾病，感染性疾病，免疫疾病，血液疾病，缺血性疾病，神經(jīng)退行性變疾病，新陳代謝病變和內(nèi)分泌疾病。
87.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療肺癌。
88.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有雙-[3-碘代-酪氨?；鵠-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療惡性黑素瘤。
89.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有雙-[多巴胺]-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療腦腫瘤。
90.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有雙-[半胱胺]-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療結(jié)腸直腸癌。
91.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有半胱胺-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療乳腺癌。
92.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有GSSG·Pt二鋅鹽的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療前列腺癌。
93.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有茶堿-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療卵巢癌。
94.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有GSSG·Pt鋰鹽的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療急性成淋巴細(xì)胞白血性增生。
95.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt二鋰鹽和半胱胺-GSSG·Pt和它們的組合的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療急性成脊髓細(xì)胞白血性增生。
96.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有雙-[組氨?；鵠-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療肺結(jié)核。
97.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和次黃苷-5-monophosphatyl-GSSG·Pt的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療從包括病毒性肝炎B，病毒性肝炎C，和它們的混合感染的組中選取的疾病。
98.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和次黃苷-5-monophosphatyl-GSSG·Pt的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療皰疹。
99.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有四-多巴胺-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療從包括腦膜炎，膿毒癥的組中選取的疾病。
100.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和四-多巴胺-GSSG·Pt的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療腹膜炎。
101.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有抗原-GSSG·Pt和/或抗體-GSSG·Pt的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療病毒源引起的特別危險(xiǎn)的感染，具體地是Rift Valley熱和細(xì)菌源引起的特別危險(xiǎn)的感染，具體地是兔熱病。
102.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和次黃苷-5-monophosphatyl-GSSG·Pt和它們的組合的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療急性胰腺炎。
103.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和次黃苷-5-monophosphatyl-GSSG·Pt和它們的組合的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療化膿性手術(shù)后后遺癥。
104.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和尿苷-[5-monophosphatyl]-GSSG·Pt和它們的組合的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療AIDS。
105.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和尿苷-[5-monophosphatyl]-GSSG·Pt和它們的組合的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療感染性源的免疫抑制。
106.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和GSSG·Pt鋰鹽和它們的組合的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療血管球性腎炎。
107.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和GSSG·Pt鋰鹽和它們的組合的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
108.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和GSSG·Pt鋰鹽和它們的組合的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療膠原性疾病。
109.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和GSSG·Pt鋰鹽和它們的組合的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
110.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括從含有GSSG·Pt和二氫氟化物-GSSG·Pt和它們的組合的組中選取的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療遺傳性過敏癥形式的過敏病況。
111.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括GSSG·Pt合成物的釩鹽，設(shè)計(jì)用來治療糖尿病-I類。
112.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有雙-[lipoyl]-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療糖尿病-II類。
113.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有雙-[苯基丙氨?；鵠-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療缺血性腦病況。
114.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有[β-丙氨酰基-組氨?；鵠-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療缺血性心臟病。
115.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有丙三醇-[1，3-diphosphatyl]-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療主要表現(xiàn)為功能性心肌失調(diào)癥的缺血性心臟病。
116.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有雙-[3，4-二羥基苯基丙氨?；鵠-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療神經(jīng)退行性變疾病。
117.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有雙-[3，4-二羥基苯基丙氨?；鵠-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療脫髓鞘癥。
118.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有γ-羥基-[丁?；鵠-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療腦組織缺氧。
119.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有γ-氨基-[丁酰基]-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療燥狂-抑郁性精神病。
120.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有雙-[nicotinoyl]-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療表現(xiàn)為在形成脈管動(dòng)脈硬化脂蛋白平衡中新陳代謝病變的疾病。
121.依據(jù)權(quán)利要求85-86的試劑，包括含有folliculyl-[琥珀酰基]-GSSG·Pt的衍生合成物，設(shè)計(jì)用來治療內(nèi)分泌疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)新陳代謝,增殖,分化和細(xì)胞程序死亡機(jī)理的合成物,用來治療多種醫(yī)學(xué)病況,合成物包括氧化型谷胱甘肽基化合物,其具有二硫鍵,和金屬物料,具體地其中金屬物料是鉑或鈀。氧化型谷胱甘肽基化合物和金屬物料可以比率3000∶1存在,較好地以1000∶1存在。氧化型谷胱甘肽基化合物可以是氧化型谷胱甘肽本身或鹽或衍生物。本發(fā)明的一個(gè)特點(diǎn)是合成物具有比氧化型谷胱甘肽基化合物本身更穩(wěn)定的二硫鍵,顯著地增強(qiáng)了合成物的生物－藥理學(xué)活性,并增加其進(jìn)行化學(xué)修飾產(chǎn)生具有新型治療作用的新型產(chǎn)物的能力。本文提供了制備合成物的方法,這種方法的優(yōu)點(diǎn)在于提供高產(chǎn)量高純度的合成物。還公開了使用本發(fā)明的合成物治療各種醫(yī)學(xué)病況的方法。
文檔編號(hào)A61P25/28GK1371388SQ99813388
公開日2002年9月25日 申請(qǐng)日期1999年11月19日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月23日
發(fā)明者利昂德·安德烈維基·科澤赫耶金, 安德烈·利昂德維基·科澤赫耶金, 馬克·鮑里斯維基·鮑佐維斯基 申請(qǐng)人:諾維洛斯醫(yī)療公司