專利名稱：金絲桃素和金絲桃提取物:特效的t－型鈣通道阻斷劑,及其作為t－型鈣通道的目標(biāo)療法 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及貫葉連翹(Hypericum perforatum)，貫葉連翹提取物，貫葉連翹中具有的化合物，如金絲桃素，和金絲桃素的衍生物和類似物。本發(fā)明的一方面在于發(fā)現(xiàn)貫葉連翹(以下除特別說(shuō)明之外都稱之為金絲桃)，金絲桃提取物，金絲桃中特定的化合物，包括金絲桃素、假金絲桃素、貫葉金絲桃素、無(wú)貫葉金絲桃素(ashyperforin)、櫟精、櫟素、異櫟素、金絲桃苷、蕓香苷、柔夷花序黃酮和海棠苷、金絲桃素的衍生物和類似物，可以用于針對(duì)不同生物體系(如心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng))中的T-型鈣通道的療法，用于治療可通過(guò)T-型鈣阻斷劑治療的疾病?？赏ㄟ^(guò)T-型鈣阻斷劑治療的疾病包括抑郁癥、慢性心力衰竭、充血性心力衰竭、局部缺血癥狀、心律不齊、心絞痛、高血壓、低胰島素和高胰島素癥、糖尿病、高醛甾酮癥、癲癇癥、偏頭痛、腦老化或神經(jīng)衰退等相關(guān)疾病，例如阿耳茨海默氏病癥和早產(chǎn)(preterm labor)。
臨床研究發(fā)現(xiàn)金絲桃對(duì)治療中等程度的抑郁癥有效。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)金絲桃提取物可以緩解抑郁癥狀。有研究報(bào)導(dǎo)通過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間治療金絲桃提取物對(duì)鼠腦皮層前部的腎上腺素的受體有向低調(diào)節(jié)的作用。一些報(bào)導(dǎo)稱金絲桃素抑制生物體中的一元胺氧化酶的活性，但另外一些報(bào)導(dǎo)不能證實(shí)此作用。其它建議的機(jī)理涉及對(duì)血液中的復(fù)合胺的作用。使用很高的劑量，金絲桃提取物抑制血液中的復(fù)合胺再次攝入，盡管其中哪種化學(xué)物質(zhì)起作用還不確定。研究說(shuō)明金絲桃素和假金絲桃素可以抑制多種病毒。據(jù)報(bào)導(dǎo)金絲桃素抑制生物體中的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，也能抑制蛋白質(zhì)激酶C而有效地引發(fā)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的死亡。也有報(bào)導(dǎo)稱金絲桃素可以抑制表皮生長(zhǎng)因子中的受體酪氨酸激酶。這些新的作用與抗病毒和抗腫瘤活性相關(guān)。
F.R.Buhler，高血壓雜志補(bǔ)編，15(5):s3-7,1997；B.Cremers等，心血管病理學(xué)雜志，報(bào)導(dǎo)T-型通道涉及起搏器活性，較低的鈣的峰值，神經(jīng)波動(dòng)和共振，和反彈內(nèi)火。據(jù)稱Mibefradil，一種選擇性T-通道阻斷劑，會(huì)引起外圍和冠狀血管舒張。且沒(méi)有反射交感神經(jīng)的活動(dòng)，并對(duì)肌肉收縮力沒(méi)有負(fù)面影響。其可以提高冠狀血管流量而不加大氧氣的消耗，并會(huì)引起心跳的輕微減緩，因而引起心臟舒張。后者改善心肌和小血管的灌注。Mibefradil可以減少心室異位的情形。通過(guò)T-通道抑制作用可以鈍化腎素-血管緊縮素-醛甾酮體系以及內(nèi)皮作用?？梢韵嘈畔鄬?duì)傳統(tǒng)的非選擇性或L-型鈣通道阻斷劑，Mibefradil對(duì)心血管疾病的治療可以達(dá)到更高的治療效果和更好的滿意程度。Mibefradil臨床用于高血壓和心絞痛的治療。據(jù)報(bào)導(dǎo)唑尼沙胺，一種抗癲癇藥物，減小T-型鈣電流(M.Kito等病的侵襲(Seizure),5(2)卷，115-9頁(yè)，1996)。T-型鈣通道通過(guò)加強(qiáng)刺激這些細(xì)胞可以促進(jìn)胰島素的分泌。因此，T-型鈣通道可用于低-或高胰島素癥狀的治療標(biāo)的(A.Bhattacharjee等，內(nèi)分泌學(xué)，138(9)卷，3735-40頁(yè)，1997)。M.F.Rossier等于1996年建議T-型鈣通道活性與類固醇的生成直接相關(guān)。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)金絲桃素和含0.3％金絲桃素的金絲桃提取物具有特殊的T-通道抑制作用。本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)金絲桃素和金絲桃提取物可以作為特效的T-鈣離子通道阻斷劑?；诖擞^點(diǎn)，金絲桃素，金絲桃提取物，除貫葉連翹之外的金絲桃屬植物的提取物，含金絲桃素的其它植物提取物，金絲桃組分，包括金絲桃素，根據(jù)本發(fā)明的金絲桃素衍生物和類似物，期望可用于因T-鈣通道引起疾病如心律不齊、冠狀動(dòng)脈疾病、心絞痛、高血壓、偏頭痛、糖尿病和早產(chǎn)等的治療。
本發(fā)明范圍包括使用金絲桃；金絲桃提取物；金絲桃組分，包括金絲桃素、假金絲桃素、貫葉金絲桃素、無(wú)貫葉金絲桃素、櫟精、櫟素、異櫟素、金絲桃苷、蕓香苷、柔夷花序黃酮和海棠苷；金絲桃素的衍生物或金絲桃素的類似物用于治療動(dòng)物與T-型鈣通道有關(guān)或能用T-鈣阻斷劑治療的健康紊亂。這些與T-型鈣離子通道有關(guān)或能用T-型鈣離子阻斷劑治療的健康紊亂包括抑郁癥、慢性心力衰竭、充血性心力衰竭、局部缺血癥狀、心律不齊、心絞痛、高血壓、低胰島素和高胰島素癥、糖尿病、高醛甾酮癥、癲癇癥、偏頭痛、腦老化或神經(jīng)衰退等相關(guān)疾病，例如阿耳茨海默氏病癥和早產(chǎn)。
圖2顯示硝苯地平對(duì)培養(yǎng)的N1E-115細(xì)胞中的L-型鈣電流活性的作用。當(dāng)細(xì)胞對(duì)金絲桃素(10μM)沒(méi)有響應(yīng)時(shí)加入硝苯地平中。1μM的硝苯地平明顯抑制電流，意味著L-型鈣通道的存在。
圖3說(shuō)明金絲桃素對(duì)N1E-115細(xì)胞中的T-型鈣電流活性的作用。當(dāng)劑量在0.1-10μM之間，金絲桃素對(duì)T-型鈣電流的抑制作用與劑量有關(guān)。
圖4顯示金絲桃素對(duì)T-型鈣通道活性中溶劑對(duì)照的效果。當(dāng)金絲桃素溶于50％的乙醇和50％的二甲亞砜中，該溶劑用于測(cè)試其對(duì)T-型電流的作用。當(dāng)用量相當(dāng)于溶解0.1-10μM金絲桃素時(shí)，該對(duì)照溶劑對(duì)T-型鈣電流量沒(méi)有影響。
圖5顯示金絲桃提取物對(duì)T-型鈣電流的作用。金絲桃提取物含0.3％的金絲桃素，并溶于外加的溶劑中。當(dāng)濃度為50微克/毫升時(shí)，金絲桃提取物明顯抑制T-型鈣通道電流。
圖6顯示金絲桃素對(duì)血管平滑肌細(xì)胞中的L-型鈣電流的作用。
圖7顯示金絲桃素對(duì)幼鼠心室細(xì)胞中的L-型鈣電流的作用。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)市售得到的標(biāo)準(zhǔn)金絲桃提取物和純的金絲桃素可以抑制培養(yǎng)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中的T-型鈣通道活性，金絲桃提取物中的主要化合物有金絲桃素，假金絲桃素，黃酮醇配糖和間苯三酚等。
金絲桃提取物可以從市售來(lái)源得到，也可以從最初的完整的新鮮或干燥的金絲桃植物中提取，其中金絲桃植物中以金絲桃素計(jì)所含的金絲桃素基團(tuán)的萘并二蒽酮含量不少于0.04％。金絲桃提取物可以方便地通過(guò)有機(jī)溶劑提取或二氧化碳的超臨界流體提取得到(E.Bombardell和P.Morazzoni,Fitoterapia,66卷，43-68頁(yè)，1995；S.S.Chatterjeei等，Pharmacopsychiat.,31卷補(bǔ)編，7-15頁(yè)，1998；W.Dimpfel,Pharmacopsychiat.,31卷補(bǔ)編，30-35頁(yè)，1998)。例如1千克磨細(xì)的干燥貫葉連翹與8升80％乙醇混合在55℃氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌1小時(shí)?；旌衔镌诘?dú)獗Ｗo(hù)下離心并收集上層清液。加入0.1％維生素C并減壓干燥提取液得到金絲桃提取物。值得注意的是其它溶劑如除乙醇外的醇，丙酮，甲基丁基酮，正己烷，二甲亞砜和甲苯也可用于提取貫葉連翹得到金絲桃提取物。貫葉連翹這種植物可以在世界范圍得到，如英格蘭、中國(guó)、荷蘭、法國(guó)、德國(guó)、意大利、俄羅斯、西班牙和瑞典。
本發(fā)明的另一種具體實(shí)施方式
包括不同于小連翹屬植物或貫葉連翹的金絲桃屬物種的提取物，和含金絲桃素的其它植物提取物，也包括用這些提取物治療與T-型鈣通道有關(guān)或能用T-型鈣阻斷劑治療的健康紊亂的方法。本發(fā)明的范圍也包括用不同于小連翹屬植物(貫葉連翹)的金絲桃屬物種，和含金絲桃素的其它植物治療與T-型鈣通道有關(guān)或能用T-鈣通道阻斷劑治療的健康紊亂的方法。
金絲桃提取物通常含金絲桃素和不同量的其它化學(xué)物質(zhì)，包括假金絲桃素；多種類黃酮，如櫟精、櫟素、異櫟素、金絲桃苷、蕓香苷、柔夷花序黃酮和海棠苷；間苯三酚，如貫葉金絲桃素和無(wú)貫葉金絲桃素；植物芳香油；和氧雜蒽酮。本發(fā)明中，金絲桃組分包括金絲桃素，假金絲桃素，類黃酮，如櫟精、櫟素、異櫟素、金絲桃苷、蕓香苷、柔夷花序黃酮和海棠苷；間苯三酚，如貫葉金絲桃素和無(wú)貫葉金絲桃素；來(lái)自貫葉連翹的植物芳香油；和氧雜蒽酮。本發(fā)明的其它具體實(shí)施方式
是金絲桃提取物組分包括金絲桃素，假金絲桃素，類黃酮，如櫟精、櫟素、異櫟素、金絲桃苷、蕓香苷、柔夷花序黃酮和海棠苷；間苯三酚，如貫葉金絲桃素和無(wú)貫葉金絲桃素；來(lái)自貫葉連翹的植物芳香油；和氧雜蒽酮。本發(fā)明的范圍也包括使用金絲桃組分和金絲桃提取物組分治療與T-型鈣通道有關(guān)或能用T-鈣通道阻斷劑治療的健康紊亂的方法。
本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步的具體實(shí)施方式
包括金絲桃素衍生物和類似物。金絲桃提取物中的除金絲桃素外的化學(xué)物質(zhì)可以加強(qiáng)金絲桃素的生物活性，被證實(shí)對(duì)抑制T-型鈣通道活性有協(xié)同作用。本發(fā)明的范圍也包括使用金絲桃衍生物和類似物治療與T-型鈣通道有關(guān)或能用T-鈣通道阻斷劑治療的健康紊亂的方法。
術(shù)語(yǔ)“金絲桃素類似物”指與金絲桃素化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物，并與金絲桃素一樣能阻斷T-型鈣通道活性，但“金絲桃素類似物”不包括Mibefradil。金絲桃素類似物的例子包括大黃素和具有下列結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物。 在本申請(qǐng)中，金絲桃素衍生物是從金絲桃素改性后的化合物。假金絲桃素可以被認(rèn)為是金絲桃素的衍生物。本發(fā)明中的金絲桃素和金絲桃素衍生物包括具有下列結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物。 其中R1為H、OH、OR或OCOR；R2為H、R、F、Cl、Br、I或SO3H；R3為H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；
R4為H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；R5為H、R、F、Cl、Br、I或SO3H；R6為H、OH、OR或OCOR；R7為H、OH、OR或OCOR；R8為H、R、F、Cl、Br、I或SO3H；R9為H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；R10為H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；R11為H、R、F、Cl、Br、I或SO3HR12為H、OH、OR或OCOR；和R為烷基或取代的烷基。
值得注意的當(dāng)R1,R3,R4,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H，且R9和R10是甲基時(shí)，則結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物是金絲桃素本身。當(dāng)R1,R3,R4,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,且R9是甲基和R10是羥甲基時(shí)，則結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物是假金絲桃素。
本發(fā)明中，“R”指C1-C30的直鏈或支鏈的飽和或不飽和碳?xì)浠鶊F(tuán)。優(yōu)選，R是C1-C6的直鏈或支鏈的飽和或不飽和碳?xì)浠鶊F(tuán)。
烷基R可以選擇性地有一至三個(gè)取代基，分別選自O(shè)H,OR,酰氧基，COOH，烷氧羰基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，硝基或苯基或F,Cl,Br或I原子。
進(jìn)一步優(yōu)選的是結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1是H、OH、OR或OCOR；R2是H或R；R3是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR或CH2OCOR；
R4是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR或CH2OCOR；R5是H或R；R6是H、OH、OR或OCOR；R7是H、H、OR或OCOR；R8是H或R；R9是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR或CH2OCOR；R10是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR或CH2OCOR；R11是H或R；R12是H、OH、OR或OCOR；和所述烷基是選擇性取代的C1-C6烷基，以及使用這些化合物用于治療可用T-鈣通道阻斷劑治療的健康紊亂方法。
還優(yōu)選的是，R是選擇性取代的甲基或乙基。
通過(guò)適當(dāng)?shù)娜〈簏S素蒽酮的二聚反應(yīng)可以合成本發(fā)明中的帶烷基或取代烷基的金絲桃素衍生物，即在R2,R3,R4,R5,R8,R9,R10和/或R11位帶有烷基或取代烷基的具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物(參見(jiàn)Y.Mazur等，CA2,029,993；H.Falk等，Monatsh.Chem.,126卷，993-1000頁(yè)，1995,H.Falk和T.N.H.Tran,Monatsh.Chem.,127卷，717-723頁(yè)，1996；R.Altmann等，Monatsh.Chem.,129卷，235-244頁(yè)，1998；G.A.Kraus和W.Zhang,Bioorg.Med.Chem.,5卷，2633-2636頁(yè)，1995)。例如，其中R1,R3,R4,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H，且R9和R10是C19H39的金絲桃素衍生物由具有結(jié)構(gòu)式Ⅰ的蒽酮在N-氧化吡啶，哌啶和吡啶中的硫酸亞鐵存在下二聚而合成得到。
O-取代的金絲桃素衍生物或金絲桃素類似物可以通過(guò)金絲桃素衍生物和/或金絲桃素類似物上的酚OH的直接醚化或酯化而合成得到(參見(jiàn)H.Falk和T.N.H.Tran,Monatsh.Chem.,127卷，717-723頁(yè)，1996；G.A.Kraus和W.Zhang,Bioorg.Med.Chem.,5卷，2633-2636頁(yè)，1995)。例如，金絲桃素在堿性條件下與硫酸二甲酯進(jìn)行甲基化反應(yīng)合成金絲桃素衍生物，其中R1,R3,R4,R6,R7和R12是甲氧基，R2,R5,R8和R11是H，且R9和R10是甲基。
通過(guò)金絲桃素衍生物和/或金絲桃素類似物上的直接鹵化或磺化而合成得到鹵代或磺化的金絲桃素衍生物，即其中R2,R5,R8和/或R11為鹵素或磺酸基的具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，或者鹵代或磺化的金絲桃素類似物(參見(jiàn)H.Falk和W.Schmitzberger,Monatsh.Chem.,124卷，77-81頁(yè)，1993；H.Falk等，Monatsh.Chem.,129卷，309-318頁(yè)，1998)。例如R2,R5,R8和/或R11為Br的金絲桃素衍生物可通過(guò)金絲桃素在吡啶中溴化得到。
其它具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的金絲桃素衍生物可以通過(guò)已知的方法從金絲桃素，假金絲桃素或金絲桃素的衍生物的衍生而得到。例如，根據(jù)T.w.Greene和P.G.M.Wuts在“有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)”(JohnWiley & Sons,Inc.,1991，引用于此作參考)提供的方法，金絲桃素，假金絲桃素或以上描述的金絲桃素的衍生物中的一個(gè)或多個(gè)OH可以轉(zhuǎn)化成保護(hù)的OH。類似地，使用H.Bundgard在“藥物前體的設(shè)計(jì)”(Elsevier Science Publishers,Amsterdam,1985,引用于此作參考)中描述的方法，將金絲桃素或假金絲桃素轉(zhuǎn)化成金絲桃素或假金絲桃素的藥物前體可以得到一些金絲桃素的衍生物。本發(fā)明包括以上描述的藥劑的前體形式以及使用醫(yī)藥前體治療與T-型鈣通道有關(guān)或能用T-鈣通道阻斷劑治療的健康紊亂的方法。例如，金絲桃素前體，假金絲桃素前體和使用金絲桃素前體或假金絲桃素前體治療與T-型鈣通道有關(guān)或能用T-鈣通道阻斷劑治療的健康紊亂的方法。
本發(fā)明也提供藥物組合物，其包含金絲桃，金絲桃提取物，或金絲桃中的化合物，即金絲桃組分，包括金絲桃素、假金絲桃素、貫葉金絲桃素、無(wú)貫葉金絲桃素、櫟精、櫟素、異櫟素、金絲桃苷、蕓香苷、柔夷花序黃酮和海棠苷、金絲桃素的衍生物和類似物，可以與醫(yī)藥可接受載體相混合。本發(fā)明的范圍也包括含至少兩種金絲桃素組分的藥物組合物，其中一種優(yōu)選為金絲桃素，含或不含醫(yī)藥可接受的載體。進(jìn)一步優(yōu)選的是含金絲桃素和假金絲桃素的藥物組合物。還優(yōu)選含金絲桃素和貫葉金絲桃素的藥物組合物。本發(fā)明的另一方面是含金絲桃組分和金絲桃衍生物或金絲桃類似物的藥物組合物。
可使用多種標(biāo)準(zhǔn)提取物，使得每天的劑量在0.4-2.7毫克金絲桃素之間。這些提取物由不同的制造商用不同的方法制備。標(biāo)準(zhǔn)化的提取物總共含0.24-0.32％的金絲桃素。
主要化合物，金絲桃素和假金絲桃素(萘并二蒽酮)，天然地存在金絲桃植物中作為色素和特征標(biāo)記，可用甲醇或乙醇提取。金絲桃素和假金絲桃素也可以通過(guò)已知的技術(shù)人工合成。合成的金絲桃素可以由市售得到。類似地，金絲桃素提取物組分，如金絲桃素，假金絲桃素，類黃酮，間苯三酚和氧雜蒽酮，可以用已知的合成方法得到，或由高壓液相色譜分離金絲桃提取物，再由相關(guān)技術(shù)人員采用已知工作流程得到。
本發(fā)明也提供使用金絲桃；金絲桃提取物；金絲桃組分，如金絲桃素，假金絲桃素，類黃酮，如櫟精、櫟素、異櫟素、金絲桃苷、蕓香苷、柔夷花序黃酮和海棠苷；間苯三酚，如貫葉金絲桃素和無(wú)貫葉金絲桃素；來(lái)自貫葉連翹的植物芳香油；和氧雜蒽酮；金絲桃衍生物；金絲桃類似物；或以上描述的藥物組合物治療與T-型鈣通道有關(guān)或能用T-鈣通道阻斷劑治療的健康紊亂的方法。這些方法中，金絲桃；金絲桃提取物；金絲桃組分，如金絲桃素，假金絲桃素，類黃酮，如櫟精、櫟素、異櫟素、金絲桃苷、蕓香苷、柔夷花序黃酮和海棠苷；間苯三酚，如貫葉金絲桃素和無(wú)貫葉金絲桃素；來(lái)自貫葉連翹的植物芳香油；和氧雜蒽酮；金絲桃衍生物；金絲桃類似物；或以上描述的藥物組合物可用于動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物如人，這些治療可以根據(jù)需要通過(guò)注射，眼睛，局部，口服或直腸，或者呼吸進(jìn)行。注射方法包括靜脈、皮下和肌肉注射。
金絲桃提取物，金絲桃素，假金絲桃素，類黃酮如櫟精、櫟素、異櫟素、金絲桃苷、蕓香苷、柔夷花序黃酮和海棠苷，間苯三酚如貫葉金絲桃素和無(wú)貫葉金絲桃素，來(lái)自貫葉連翹的植物芳香油，和氧雜蒽酮，金絲桃衍生物，金絲桃類似物等用于注射，眼睛，局部，口服或直腸治療時(shí)，可以使這些藥劑與傳統(tǒng)的載體、賦形劑、粘接劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、顏料、香料等物質(zhì)用醫(yī)藥可以接受的方法相混合。
現(xiàn)在描述本發(fā)明方法中所使用的活性藥劑的劑量。對(duì)于金絲桃提取物，除貫葉連翹外金絲桃屬的物種的提取物，含金絲桃素的其它植物提取物，其每天攝入的劑量為每千克體重0.05-500毫克，優(yōu)選每千克體重0.5-50毫克。對(duì)于金絲桃素，每天攝入的劑量為每千克體重0.0001-10毫克，優(yōu)選每千克體重0.0015-0.15毫克。對(duì)于金絲桃素衍生物，如假金絲桃素，或金絲桃素類似物，每天攝入的劑量為每千克體重0.001-5毫克。對(duì)于除金絲桃素和假金絲桃素之外的金絲桃提取物組分或金絲桃組分，每天攝入的劑量為每千克體重0.01-100毫克，優(yōu)選每千克體重0.05-50毫克。
新鮮或干燥的貫葉連翹都可用于治療與T-型鈣通道有關(guān)或能用T-鈣通道阻斷劑治療的健康紊亂。本發(fā)明中，“新鮮的貫葉連翹”包括新鮮狀態(tài)下完整的貫葉連翹植物或貫葉連翹植物的部分。本發(fā)明中，“干燥的貫葉連翹”包括干燥狀態(tài)下完整的貫葉連翹植物或貫葉連翹植物的部分，和由干燥的完整的貫葉連翹植物或貫葉連翹植物的部分研磨得到的粉末。本發(fā)明的治療方法也可以使用新鮮或干燥的貫葉連翹進(jìn)行。對(duì)于新鮮的貫葉連翹，每天攝入的劑量為每千克體重1-5000毫克。對(duì)于干燥的貫葉連翹，每天攝入的劑量為每千克體重0.5-2000毫克。
本發(fā)明的方法中，治療特定的患者時(shí)使用的活性藥劑的確切劑量可以選自以上描述“每日攝入劑量”的范圍，其劑量主要取決于活性藥劑，即用于治療的貫葉連翹，金絲桃提取物，金絲桃組分，金絲桃素衍生物或金絲桃素類似物的T-鈣通道的活性，以及需要治療的患者的年齡，種族，性別，種類和健康條件，和需要治療的健康紊亂癥狀的類型和嚴(yán)重程度。如果用于急性治療，以上活性藥劑可以按上述每天劑量的使用不超過(guò)一天。如果需要，以上活性藥劑可以按上述每天劑量對(duì)需要治療的患者一天接一天連續(xù)使用。
所述提取物或金絲桃素也可以與能有效治療上述癥狀的藥物或其它天然物質(zhì)一起使用。
下列實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但并不打算限制本發(fā)明。
使用插入碼-鉗位電路技術(shù)的完整細(xì)胞模式。移液管有2-15M的阻抗。使用Axonpatch-1C(Axon Instrument)的插入碼-鉗位電路放大器記錄膜電流。所有信號(hào)在1千赫茲過(guò)濾并用計(jì)算機(jī)記錄。由于使用20mM鋇離子作為電荷載體測(cè)定的峰值電流很小(大約200pA)，通常不使用系列阻抗補(bǔ)償。如果電容的瞬變現(xiàn)象與內(nèi)在電流的初始值相掩蓋，或如果空間電位控制不充分(即有很長(zhǎng)的神經(jīng)生長(zhǎng)周期的NIE-115細(xì)胞)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不被采用。除非從T和L通道電流的原始記錄上使用峰值(彌補(bǔ)缺漏)特別繪制的電流-電位圖。研究T通道時(shí)保留膜電位固定在-80毫伏，而研究L通道時(shí)保留膜電位固定在-40毫伏。每間隔5秒去偏極200毫秒得到通過(guò)鈣離子通道的鋇電流。記錄每單個(gè)細(xì)胞，5分鐘后得到穩(wěn)定的記錄；隨后在槽液中加入藥物。實(shí)驗(yàn)在室溫(21-22℃)進(jìn)行以延長(zhǎng)細(xì)胞存活時(shí)間和通道記錄時(shí)間。槽液含110mM三氨基甲烷鹽酸緩沖液，5mM氯化鉀，5mM氯化銫，20mM Hepes,30mM葡萄糖，20mM氯化鋇，和0.5mM河豚毒素。移液管(內(nèi)部)溶液含70mM天(門(mén))冬氨酰苯丙氨酸甲酯-二銫，EGTA10,5mM三磷酸腺苷二鈉鹽，5mM丙酮酸鉀鹽，5mM琥珀酸鉀鹽，5mM磷酸肌酸二鈉鹽，15單位/毫升肌氨酸激酶，Hepes,和5mM葡萄糖。使用鹽酸或氫氧化銫調(diào)節(jié)所有溶液的克分滲透壓濃度到310-320mOsm和pH為7.4。


圖1顯示金絲桃素對(duì)L-型鈣離子電流沒(méi)有明顯的作用。圖2顯示硝苯地平(已知的L-型鈣離子通道阻斷劑)明顯抑制L-型鈣離子電流。
圖4說(shuō)明溶劑對(duì)照對(duì)T-型鈣電流沒(méi)有影響。
權(quán)利要求
1．一種在需要治療的動(dòng)物中能用T-型鈣通道阻斷劑治療的健康紊亂的治療方法，該方法包括對(duì)所說(shuō)的動(dòng)物使用有效量的活性藥劑，其中所說(shuō)的活性藥劑是貫葉連翹，金絲桃提取物，除貫葉連翹之外的金絲桃屬物種的提取物，金絲桃組分，金絲桃素衍生物或金絲桃素類似物，其條件是當(dāng)活性藥劑是貫葉連翹或金絲桃提取物時(shí)，所說(shuō)的健康紊亂不是抑郁癥或偏頭痛。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的金絲桃素衍生物是具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物， 其中R1是H、OH、OR或OCOR；R2是H、R、F、Cl、Br、I或SO3H；R3是H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；R4是H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；R5是H、R、F、Cl、Br、I或SO3H；R6是H、OH、OR或OCOR；R7是H、OH、OR或OCOR；R8是H、R、F、Cl、Br、I或SO3H；R9是H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；R10是H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；R11是H、R、F、Cl、Br、I或SO3H；R12是H、OH、OR或OCOR；和R是可選擇性取代的C1-C30烷基；其前提條件是排除下列化合物(A)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R3,R4,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H，且R9和R10是甲基；(B)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R9,R10,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,且R3和R4是甲基；(C)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R3,R4,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,R9是甲基，和R10是CH2OH；(D)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R3,R4,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,R9是CH2OH，和R10是甲基；(E)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R9,R10,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,R3是甲基，和R4是CH2OH；(F)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R9,R10,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,R3是CH2OH，和R4是甲基。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中可以用T-型鈣通道阻斷劑治療的健康紊亂是抑郁癥、慢性心力衰竭、充血性心力衰竭、局部缺血癥狀、心律不齊、心絞痛、高血壓、低胰島素癥、高胰島素癥、糖尿病、高醛甾酮癥、癲癇癥、偏頭痛、腦老化、神經(jīng)衰退疾病或早產(chǎn)。
4．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的金絲桃組分是金絲桃素、假金絲桃素、貫葉金絲桃素、無(wú)貫葉金絲桃素、櫟精、櫟素、異櫟素、金絲桃苷、蕓香苷、柔夷花序黃酮或海棠苷。
5．根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中R是選擇性地由一到三個(gè)取代基取代的C1-C30烷基，所述烷基分別選自羥基、烷氧基、酰氧基、羧基、烷氧羰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基或苯基或F、Cl、Br或I原子。
6．根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中R1是H、OH、OR或OCOR；R2是H或R；R3是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR或CH2OCOR；R4是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR或CH2OCOR；R5是H或R；R6是H、OH、OR或OCOR；R7是H、OH、OR或OCOR；R8是H或R；R9是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR或CH2OCOR；R10是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR或CH2OCOR；R11是H或R；R12是H、OH、OR或OCOR；和R是選擇性取代的C1-C6烷基。
7．根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述R是選擇性取代的甲基或乙基。
8．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的動(dòng)物是人。
9．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的活性藥劑是金絲桃提取物。
10．根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所說(shuō)的有效劑量是每千克動(dòng)物體重大約0.05-500毫克。
11．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的活性藥劑是金絲桃素。
12．根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所說(shuō)的有效劑量是每千克動(dòng)物體重大約0.0015-15毫克。
13．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，該方法進(jìn)一步包括按照權(quán)利要求1的描述對(duì)所說(shuō)的動(dòng)物使用額外的活性藥劑。
14．根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中使用的活性藥劑中的一種是金絲桃素。
15．根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中使用的活性藥劑中的另一種是假金絲桃素。
16．根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中使用的活性藥劑中的另一種是貫葉金絲桃素。
17．根據(jù)權(quán)利要求15的方法，該方法還包括對(duì)所說(shuō)的動(dòng)物使用貫葉金絲桃素。
18．具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物， 其中R1是H、OH、OR或OCOR；R2是H、R、F、Cl、Br、I或SO3H；R3是H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；R4是H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；R5是H、R、F、Cl、Br、I或SO3H；R6是H、OH、OR或OCOR；R7是H、OH、OR或OCOR；R8是H、R、F、Cl、Br、I或SO3H；R9是H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；R10是H、R、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR、COOH或COOR；R11是H、R、F、Cl、Br、I或SO3H；R12是H、OH、OR或OCOR；和R是可選擇性取代的C1-C30烷基；其條件是排除下列化合物(A)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R3,R4,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,且R9和R10是甲基；(B)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R9,R10,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,且R3和R4是甲基；(C)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R3,R4,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,R9是甲基，和R10是CH2OH；(D)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R3,R4,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,R9是CH2OH，和R10是甲基；(E)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R9,R10,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,R3是甲基，和R4是CH2OH；(F)具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物，其中R1,R9,R10,R6,R7和R12是OH,R2,R5,R8和R11是H,R3是CH2OH,和R4是甲基。
19．根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中所述R是C1-C30烷基，其選擇性地帶有一至三個(gè)取代基，該取代基分別選自羥基、烷氧基、酰氧基、羧基、烷氧羰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基或苯基或F、Cl、Br或I原子。
20．根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中R1是H、OH、OR或OCOR；R2是H或R；R3是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR或CH2OCOR；R4是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR、CH2OCOR；R5是H或R；R6是H、OH、OR或OCOR；R7是H、OH、OR或OCOR；R8是H或R；R9是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR或CH2OCOR；R10是H、OH、OR、OCOR、CH2OH、CH2OR或CH2OCOR；R11是H或R；R12是H、OH、OR或OCOR；和R是選擇性取代的C1-C6烷基。
21．根據(jù)權(quán)利要求20的化合物，其中所述R是選擇性取代的甲基或乙基。
全文摘要
金絲桃素對(duì)T－型鈣通道活性有特殊的抑制效果。含金絲桃素的金絲桃提取物也可抑制T－型鈣通道活性。此外,金絲桃提取物中的其它化學(xué)物質(zhì)對(duì)金絲桃素有協(xié)同作用?；诖?金絲桃素或含金絲桃素的金絲桃提取物可用作T－通道的阻斷劑。金絲桃提取物,金絲桃屬的其它物種的提取物,含金絲桃素的其它植物的提取物,金絲桃素的衍生物,金絲桃素的類似物如假金絲桃素,和其它金絲桃提取物組分可以用于針對(duì)T－型鈣通道的療法,用于與T－型通道畸變有關(guān)的疾病的治療。提供了使用金絲桃素和金絲桃提取物的方法。
文檔編號(hào)A61P25/28GK1308492SQ99808429
公開(kāi)日2001年8月15日 申請(qǐng)日期1999年7月9日 優(yōu)先權(quán)日1998年7月9日
發(fā)明者杰奎琳·J·單, 吳喜成, 彼得·K·T·龐, 凌雷 申請(qǐng)人:Cv技術(shù)公司