專(zhuān)利名稱(chēng)：多醚類(lèi)抗結(jié)核抗麻風(fēng)病藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗結(jié)核抗麻風(fēng)病藥物，特別是一種含有多醚類(lèi)抗菌素的抗結(jié)核抗麻風(fēng)病藥物組合物。
現(xiàn)臨床使用的抗結(jié)核藥物有異煙肼、對(duì)氨基水楊酸鈉、鏈霉素、乙胺丁醇、乙硫異煙肼及利福平等力復(fù)霉素類(lèi)等多種藥物(陳新謙等《新編藥物學(xué)》第二十版，人民衛(wèi)生出版社，北京，1988年，第98～99頁(yè)、第130～136頁(yè))。但這些藥物對(duì)九十年代以來(lái)爆發(fā)流行的耐藥結(jié)核沒(méi)有治療效果，多重耐藥結(jié)核病迄今尚無(wú)有效的化療藥物(感染癥(日)，1996年，第26卷第6期，第27～32頁(yè)；國(guó)外醫(yī)藥抗生素分冊(cè)，1998年，第19卷第3期，第218～220頁(yè))。
目前臨床使用的磺砜類(lèi)抗麻風(fēng)藥如氨苯砜、二乙酰氨苯砜、苯丙砜等有嚴(yán)重的積蓄作用和對(duì)肝、造血系統(tǒng)等的毒性反應(yīng)(陳新謙等《新編藥物學(xué)》第二十版，人民衛(wèi)生出版社，北京，1988年，第137-139頁(yè))。
多醚類(lèi)抗菌素6016系70年代末被發(fā)現(xiàn)(J.C.S.Chem.Comm.，1978年，第875～876頁(yè)；J.Antiot.，1979年，第32卷第3期，第244～246頁(yè))、并稱(chēng)有防治雞球蟲(chóng)病用途的抗菌素(特開(kāi)昭54-84576號(hào)明細(xì)書(shū))，但未曾產(chǎn)品化使用。除6016以外，已知的多醚類(lèi)抗菌素還有很多種，已產(chǎn)品化用于防治雞球蟲(chóng)病的有鹽霉素(salinomycin)、莫能菌素(monensin)、馬杜霉素(maduramicin)、那拉菌素(narasin)、拉沙洛菌素(lasalocid)等5種(FEEDING，1987年，第27卷第7號(hào)，第94～107頁(yè))。但這些多醚類(lèi)抗菌素都只作為動(dòng)物飼料添加劑用于家畜家禽的肥育增重或疾病防治，至今尚無(wú)人用多醚類(lèi)抗菌素治療藥物。
本發(fā)明的目的是研制一種高效、無(wú)交叉耐藥性、且對(duì)耐藥結(jié)核菌有效的抗結(jié)核抗麻風(fēng)等細(xì)菌感染性疾病的治療藥物。
M＝Na，K，Li，NH4，等式(I)
本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)式(I)化合物(代號(hào)6016，見(jiàn)特開(kāi)昭54-84576號(hào)明細(xì)書(shū))有很強(qiáng)的抗結(jié)核抗麻風(fēng)病作用，尤其對(duì)現(xiàn)有抗結(jié)核藥物耐藥的結(jié)核菌有很好的抑殺作用，并用其作為主要活性成分制成一類(lèi)新型抗結(jié)核抗麻風(fēng)病藥物組合物。
本發(fā)明的藥物組合物可以是各種劑型的，包括口服、注射及外用等，具體如片劑、膠囊、腸溶膠囊、油劑、乳劑、脂質(zhì)體、毫微囊、肌注、靜注、靜滴、噴霧劑、粉劑、膏劑、外用消毒劑等，也可以是6016與適宜的免疫佐劑配伍制成的復(fù)方制劑。可用與6016相容且對(duì)人體無(wú)毒的載體作為賦形劑或添加劑，制成各種劑型。抗菌素6016的體內(nèi)給藥用量范圍是0.01～7毫克/千克體重/日，較好的用量為0.1～5毫克/千克體重/日，優(yōu)選用量為0.25～3.5毫克/千克體重/日；體外用藥濃度范圍是0.125～1000微克/毫升，較好的濃度范圍為0.25～250微克/毫升，優(yōu)選濃度范圍為0.5～50微克/毫升。
安全性試驗(yàn)本發(fā)明的藥物組合物的小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，灌胃給藥時(shí)6016的半數(shù)致死量(LD50)為78.20毫克/千克體重。
在對(duì)沙門(mén)氏菌的誘變?cè)囼?yàn)(Ames試驗(yàn))中，用平皿摻入試驗(yàn)預(yù)保溫法檢測(cè)6016對(duì)沙門(mén)氏菌四株標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試菌株的誘變作用，結(jié)果表明6016在0.25微克～2.5毫克/皿濃度范圍內(nèi)，在活化和非活化兩種測(cè)試條件下，均不誘發(fā)TA97、TA98、TA100和TA102四菌株回復(fù)突變率升高，表明6016在Ames試驗(yàn)中無(wú)基因誘變性，即無(wú)致突變致癌作用。
藥效學(xué)試驗(yàn)體外抗菌試驗(yàn)采用抗結(jié)核試驗(yàn)通用培養(yǎng)基，按常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行。受試菌種采用人型H37RV、牛型、非洲等標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核桿菌，淋巴、堪薩斯、胃以及可作為麻風(fēng)病初篩指標(biāo)的鳥(niǎo)等非典型致病分枝桿菌以及臨床分離的結(jié)核菌株等。體外抗菌試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的藥物組合物對(duì)人型強(qiáng)毒結(jié)核桿菌H37RV、臨床分離的結(jié)核菌、對(duì)現(xiàn)有抗結(jié)核藥物單獨(dú)或多重耐藥的臨床分離結(jié)核菌、鳥(niǎo)分枝桿菌(作為抗麻風(fēng)初篩指標(biāo))以及淋巴、堪薩斯、胃等非典型致病分枝桿菌都有很強(qiáng)的抑殺作用，對(duì)各種結(jié)核菌的最低抑菌濃度(MIC)處在0.25μg/ml水平，最低殺菌濃度(MBC)在0.125～0.5μg/ml之間，比同試的陽(yáng)性對(duì)照藥物異煙肼還強(qiáng)。
體內(nèi)抗結(jié)核試驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)人型強(qiáng)毒結(jié)核桿菌H37RV菌株，在小鼠或豚鼠等動(dòng)物身上按常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行。動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的藥物組合物也具有體內(nèi)抗結(jié)核作用。
實(shí)施例1多醚類(lèi)抗菌素6016鈉鹽水溶液劑受試藥物及陽(yáng)性對(duì)照品制備1.抗菌素6016鈉鹽按無(wú)菌操作稱(chēng)取10mg樣品，置于無(wú)菌試管內(nèi)(帶橡皮塞)，加二甲基甲酰胺和丙酮各0.2ml溶解。然后加無(wú)菌雙蒸餾水9.6ml，即成均勻穩(wěn)定的白色乳狀懸濁液。隨后視需要用雙蒸餾水稀釋成各種濃度。用同樣方法制備未加樣品的空白溶液，供空白對(duì)照試驗(yàn)使用。
2.利福平四川制藥股份有限公司產(chǎn)品，紅色粉末(批號(hào)9704420)，按常規(guī)制備成1mg/ml水溶液。
3.異煙肼天津市氨基酸公司人民制藥廠產(chǎn)品，25mg/ml的注射液(批號(hào)041028)，用無(wú)菌雙蒸餾水稀釋成一系列濃度的溶液備用。體外抗結(jié)核及抗菌試驗(yàn)一、受試菌株1.標(biāo)準(zhǔn)菌株共試驗(yàn)了15株，包括人型有毒結(jié)核菌標(biāo)準(zhǔn)株H37RV、牛型結(jié)核菌株、非洲結(jié)核菌株以及鳥(niǎo)型、胞內(nèi)、淋巴、堪薩斯、戈登、胃、龜亞、馬爾摩、田鼠、偶發(fā)、草、恥垢等非典型分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株。
2.結(jié)核桿菌臨床分離株共試驗(yàn)了16株，包括TB98-9、TB98-10、TB98-11、TB98-12、TB98-13、TB98-14、TB98-18、TB98-29、TB97-49、TB97-84、TB97-121、TB97-154、TB97-170、TB97-171、TB97-172和TB97-179。以上菌株均由全軍結(jié)核病中心臨床實(shí)驗(yàn)室從結(jié)核病住院患者的痰標(biāo)本中分離到，并按常規(guī)進(jìn)行了菌型鑒定。二、培養(yǎng)基采用改良羅氏雞卵培養(yǎng)基、蘇通半流體培養(yǎng)基和匡氏瓊脂培養(yǎng)基，均按常規(guī)方法制備。三、試驗(yàn)方法1.最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定方法本試驗(yàn)采用試管二倍稀釋法。接種菌量改良羅氏培養(yǎng)基斜面和匡氏瓊脂培養(yǎng)基斜面分別接種1μg濕菌/ml的菌懸液0.1ml(約為103CFU)；蘇通半流體培養(yǎng)基接種菌種量為每毫升培養(yǎng)基加10μg濕菌/ml的菌懸液0.1ml，使培養(yǎng)基中菌的濃度為1μg/ml。改良羅氏培養(yǎng)基和蘇通半流體培養(yǎng)基于37℃培養(yǎng)箱中孵育，匡氏瓊脂培養(yǎng)基于36℃培養(yǎng)箱中孵育，以沒(méi)有菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)管所含最小的藥物濃度為該藥對(duì)所試菌株的最小抑菌濃度(MIC)。人型結(jié)核菌株、牛型結(jié)核菌株、非洲結(jié)核菌株和龜亞型分枝桿菌在三種培養(yǎng)基上孵育第四周觀察結(jié)果；偶發(fā)、草和恥垢分枝桿菌在三種培養(yǎng)基上孵育第7天觀察結(jié)果；其它非典型分枝桿菌孵育2周觀察結(jié)果。
2.最小殺菌濃度(MBC)的測(cè)定方法采用上述三種培養(yǎng)基，取在MIC測(cè)定中未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)的MIC以上各管，分別用0.5ml生理鹽水反復(fù)沖洗斜面，吹吸20余次后取0.1ml接種到相同培養(yǎng)基的平皿上，作活菌計(jì)數(shù)(37℃培養(yǎng)3天至4周)，以平皿上無(wú)菌落生長(zhǎng)的試管中所含最低藥物濃度為該藥的最小殺菌濃度(MBC)。四、試驗(yàn)結(jié)果抗菌素6016及陽(yáng)性對(duì)照藥物異煙肼和利福平在蘇通半流體培養(yǎng)基、匡氏培養(yǎng)基和改良羅氏雞卵培養(yǎng)基上對(duì)分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株的抗菌活性測(cè)試結(jié)果分別歸納如表1、表2(蘇通半流體培養(yǎng)基及匡氏培養(yǎng)基)和表5(改良羅氏雞卵培養(yǎng)基)所示。
表3、表4(蘇通半流體培養(yǎng)基及匡氏培養(yǎng)基)和表6(改良羅氏雞卵培養(yǎng)基)則分別給出6016及陽(yáng)性對(duì)照藥物異煙肼和利福平在不同培養(yǎng)基上對(duì)結(jié)核桿菌臨床分離株的抗菌活性測(cè)試結(jié)果。
表1 本發(fā)明的藥物6016對(duì)分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株的MIC和MBC(μg/ml)值測(cè)定結(jié)果*<
>*注蘇通半流體培養(yǎng)基上的結(jié)果(與匡氏瓊脂培養(yǎng)基上結(jié)果基本一致)。
表2 本發(fā)明的藥物6016對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株的抗菌活性測(cè)定結(jié)果*<
*注蘇通半流體培養(yǎng)基上的結(jié)果(與匡氏瓊脂培養(yǎng)基結(jié)果此基本一致)。
表3 本發(fā)明的藥物6016對(duì)臨床分離結(jié)核桿菌的抗菌活性測(cè)定結(jié)果*<
*注蘇通半流體培養(yǎng)基上的結(jié)果(匡氏瓊脂培養(yǎng)基上結(jié)果與此基本一致)。
表4 本發(fā)明的藥物6016對(duì)臨床分離結(jié)核桿菌的抗菌活性測(cè)定結(jié)果*<
*注蘇通半流體培養(yǎng)基上的結(jié)果(與匡氏瓊脂培養(yǎng)基上結(jié)果基本一致)。
表5 6016對(duì)分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株的MIC和MBC(μg/ml)測(cè)定結(jié)果
注改良羅氏雞卵培養(yǎng)基上的結(jié)果(比表1結(jié)果高很多倍)。
表6本發(fā)明的藥物6016對(duì)臨床分離結(jié)核桿菌的抗菌活性測(cè)定結(jié)果
注改良羅氏雞卵培養(yǎng)基上的結(jié)果(比表4結(jié)果高很多倍)。
上述結(jié)果表明1.抗菌素6016對(duì)人型和非洲結(jié)核桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(參見(jiàn)表1)以及結(jié)核菌臨床分離株(參見(jiàn)表3及表4)都有很強(qiáng)的抑菌和殺菌作用，對(duì)大多數(shù)臨床分離結(jié)核菌株的MIC在0.25μg/ml水平，比異煙肼的MIC值低得多(參見(jiàn)表4)。
2.抗菌素6016對(duì)結(jié)核菌株的MBC在0.125至0.5μg/ml之間，這一濃度值比異煙肼對(duì)結(jié)核菌的MBC值低(參見(jiàn)表2至表4)。
3.對(duì)異煙肼或利福平單獨(dú)耐藥及同時(shí)對(duì)異煙肼和利福平耐藥的菌株對(duì)6016仍很敏感(參見(jiàn)表4)，表明6016與異煙肼、利福平無(wú)交叉耐藥性。
4.抗菌素6016對(duì)鳥(niǎo)、淋巴、堪薩斯、胃等非典型致病分枝桿菌有很好的抑菌和殺菌效果(表1)，而鳥(niǎo)分枝桿菌的生物學(xué)特征與麻風(fēng)分枝桿菌十分近似，可作為抗麻風(fēng)作用的初篩指標(biāo)，表明6016具有抗麻風(fēng)作用。
5.抗菌素6016在體外對(duì)牛型結(jié)核桿菌、偶發(fā)、胞內(nèi)和龜亞分枝桿菌的抑菌和殺菌作用較弱(表1)。
6.抗菌素6016、異煙肼和利福平對(duì)所試菌株在羅氏改良培養(yǎng)基上的MIC和MBC值(表5和表6)比在蘇通半流體培養(yǎng)基上和匡氏瓊脂培養(yǎng)基上的結(jié)果(表1、表2和表4)高出10至30倍。但MIC和MBC的變化基本一致，趨勢(shì)平行，表明系因培養(yǎng)基的組成不同所致。
總之，體外試驗(yàn)結(jié)果表明，6016具有很強(qiáng)的抗結(jié)核菌作用和抗麻風(fēng)作用，尤其對(duì)現(xiàn)有抗結(jié)核藥耐藥的結(jié)核菌有很強(qiáng)的抑殺作用，對(duì)部分非典型致病菌也顯示出較高抗菌效果。實(shí)施例2 多醚類(lèi)抗菌素6016鈉鹽油制劑動(dòng)物體內(nèi)抗結(jié)核試驗(yàn)一、動(dòng)物與材料動(dòng)物采用昆明種小鼠(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心)，體重20～24克，雌雄各半；受試菌株用人型強(qiáng)毒結(jié)核分枝桿菌H37RV(93009號(hào)，北京生物制品藥品檢定所)；受試藥物6016鈉鹽油制劑(250μg/ml)。二、方法與結(jié)果取人型強(qiáng)毒結(jié)核分枝桿菌H37RV在改良羅氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)4周，取該培養(yǎng)物，用稱(chēng)重法制成5mg/ml的菌懸液，給每只小鼠尾靜脈注射0.2ml，注射接種菌種第3天分組，每組20只，雌雄各半，組間體重分布均勻，設(shè)模型對(duì)照組和不同劑量的受試藥物組。接種菌種第4天開(kāi)始每天灌胃給藥一次，并觀察動(dòng)物的反應(yīng)狀況，死亡時(shí)間和數(shù)量以及體重變化，并將半數(shù)死亡時(shí)間為主要指標(biāo)。接種菌種第33天處死動(dòng)物，解剖臟器，肉眼觀察肝、肺、脾等臟器的結(jié)核病變程度并稱(chēng)取臟器重量。
臟器病變指數(shù)表示肉眼所觀察的臟器病變程度重度病變，結(jié)核病灶多而密，指數(shù)為30；中度病變，結(jié)核病灶可見(jiàn)但不多，指數(shù)為20；輕度病變，幾乎看不見(jiàn)結(jié)核病灶，指數(shù)為10。病變程度居于重度、中度、輕度之間者，按常規(guī)依據(jù)觀察結(jié)果評(píng)估病變指數(shù)。
結(jié)果見(jiàn)表7及表8。
表7在6016體內(nèi)抗H37RV結(jié)核菌試驗(yàn)中被試小鼠的半數(shù)死亡時(shí)間
表8 肉眼觀察臟器病變指數(shù)(平均數(shù)，每組20只小鼠)
權(quán)利要求
1.一種抗結(jié)核、抗麻風(fēng)病藥物組合物，其特征在于該組合物中含有抗結(jié)核、抗麻風(fēng)病有效量的式(I)化合物及可藥用載體和/或賦形劑。
M＝Na，K，Li，NH4式(I)
2.權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征是該藥物組合物可以是各種劑型，包括固體、液體和膏劑，用于口服、注射及外用。
3.權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征是該藥物組合物的體內(nèi)給藥用量范圍是0.01～7毫克/千克體重/日，較好的用量為0.1～5毫克/千克體重/日，優(yōu)選用量為0.25～3.5毫克/千克體重/日；體外用藥濃度范圍是0.125～1000微克/毫升，較好的濃度范圍為0.25～250微克/毫升，優(yōu)選濃度范圍為0.5～50微克/毫升。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗結(jié)核抗麻風(fēng)病藥物組合物。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)式(Ⅰ)化合物有很強(qiáng)的抗結(jié)核抗麻風(fēng)病作用,尤其對(duì)現(xiàn)有抗結(jié)核藥物耐藥的結(jié)核菌有很好的抑殺作用。本發(fā)明用式(Ⅰ)化合物作為主要活性成分制成的一類(lèi)新型抗結(jié)核抗麻風(fēng)病藥物高效、無(wú)交叉耐藥性、且對(duì)耐藥結(jié)核菌有效。
文檔編號(hào)A61K31/70GK1259347SQ99124999
公開(kāi)日2000年7月12日 申請(qǐng)日期1999年12月27日 優(yōu)先權(quán)日1999年12月27日
發(fā)明者崔承彬, 蔡兵, 李文欣, 邢仁昌, 鄭應(yīng)華, 大岳望 申請(qǐng)人:北京生物醫(yī)藥研究所