專利名稱：用作iv型磷酸二酯酶抑制劑的喹啉衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型喹啉衍生物，它們的生產(chǎn)方法，它們作為藥物的應(yīng)用和包含它們的藥物組合物。
現(xiàn)在意外地發(fā)現(xiàn)，在8位上被苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基取代的喹啉衍生物(形成一類全新的化合物)如下文所述具有很合乎需要的有用性能，特別是良好的口服活性，改進(jìn)的副作用方式和有可能選擇性抑制PDEIV。
所以，廣義來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供了呈游離態(tài)、N-氧化物、或酸加合鹽或銨鹽形式的8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基、或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-喹啉。8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯基[d]三唑基)-喹啉任選地在喹啉環(huán)的例如3-和/或6-位上被取代。3位上合適的取代基包括C1-4烷基，例如甲基，形成3-(C1-4烷基)-8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-喹啉。6位上優(yōu)選通過(guò)碳原子連接，即形成8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-6-碳-喹啉或者8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-3-(C1-4烷基)-6-碳-喹啉。6位上特別優(yōu)選的是吡啶基甲基，例如吡啶-4-基-甲基。于是優(yōu)選的化合物例如包括，8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-6-(吡啶基甲基)-喹啉或者8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-3-(C1-4烷基)-(6-吡啶基甲基)-喹啉，它們呈游離態(tài)、N-氧化物，或酸加合鹽或銨鹽形式。
苯并[c]噻二唑基表示如下結(jié)構(gòu)的基團(tuán)
苯并[c]呋咱基表示如下結(jié)構(gòu)的基團(tuán)
2-甲基-2H-苯并[d]三唑基表示如下結(jié)構(gòu)的基團(tuán)
本發(fā)明的8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-喹啉優(yōu)選是式I的化合物
其中X是-O-、-S-或-N(CH3)-(優(yōu)選是-O-或-S-)，R1是氫或(C1-4)烷基(優(yōu)選是甲基或氫)，和R2是(C1-4)烷基或吡啶基(優(yōu)選是4-吡啶基)呈游離態(tài)或N-氧化物或者藥物上可接受的酸加合鹽或銨鹽形式。
例如，本發(fā)明包括呈游離堿或酸加合鹽形式的式I化合物，其中X是O或S，R1是氫或(C1-4)烷基，而R2是(C1-4)烷基或吡啶基。
本發(fā)明的8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-喹啉合適地是8-(苯并[c]噻二唑-3-或-4-基)-或8-(苯并[c]呋咱-3-或-4-基)-或8-(2-甲基-2H-苯并[d]三唑-4-或-5-基)-喹啉，優(yōu)選是8-(苯并[c]噻二唑-4-基)-或8-(苯并[c]呋咱-4-基)-或8-(2-甲基-2H-苯并[d]三唑-5-基)-喹啉，例如式Ia的化合物
其中X、R1和R2同上述定義，該化合物呈游離態(tài)、N-氧化物或藥物上可接受的酸加合鹽或銨鹽形式。
烷基可以是支鏈的或直鏈，優(yōu)選是直鏈，甲基是優(yōu)選的。
這些化合物可呈游離態(tài)或者與酸結(jié)合形成酸加合鹽或者與烷基鹵結(jié)合形成銨鹽，或呈N-氧化物形式，而且該分子的這些不同形式被認(rèn)為是藥物上適用的。按本發(fā)明，適用的藥物上可接受的酸加合鹽包括無(wú)機(jī)酸鹽，例如鹽酸的鹽酸鹽，和有機(jī)酸鹽，例如馬來(lái)酸的馬來(lái)酸氫鹽或草酸的草酸鹽。特別是當(dāng)R2是吡啶基時(shí)則構(gòu)成銨和N-氧化物形式，這樣吡啶基環(huán)上的氮被烷基化或被氧化，例如銨鹽包括N-烷基化(如，N-甲基化)吡啶鎓鹽而N-氧化物包括式I或Ia的化合物，其中R2是N-氧-吡啶基，例如1-氧-吡啶-4-基。
本發(fā)明的又一方面提供了生產(chǎn)8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-喹啉的方法，它包括(i)使3-Q-或4-Q-苯并[c]噻二唑、-苯并[c]呋咱或-2-甲基-2H-苯并[d]三唑與8-Q’-喹啉(例如，任選3-(C1-4烷基)-和/或6-碳-取代的)反應(yīng)，其中Q和Q’是能參與交叉偶合反應(yīng)的離去基團(tuán)，例如當(dāng)Q和Q’之一是鹵素(如溴)或三氟甲磺酰時(shí)，則另一個(gè)是合適的金屬的或有機(jī)金屬離去基團(tuán)(例如，B(OH)2-、(CH3(CH2)3)3Sn-、Li、ClZn-或BrMg-)，(ii)任意地對(duì)該產(chǎn)物進(jìn)行N-烷基化(例如與如MeI的烷基鹵反應(yīng))或N-氧化(例如與如間-氯-過(guò)苯甲酸的過(guò)氧化物試劑反應(yīng))，并回收所得的呈游離態(tài)、N-氧化物或者藥物上可接受的酸加合鹽或銨鹽形式的化合物。
反應(yīng)適宜地在鈀或鎳催化劑存在下進(jìn)行，其中加有或不加如銅的其它金屬，例如按類似于已知的芳基偶合反應(yīng)，如Stille、Suzuki、Negishi或Heck反應(yīng)，例如按實(shí)施例1中所述?？蓱?yīng)用標(biāo)準(zhǔn)方法如色譜法或結(jié)晶來(lái)回收和純化所得的8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-喹啉。
例如，式I或Ia的化合物可適宜地這樣制備，即通過(guò)將式II的喹啉
其中R1和R2同前述定義，且Y是(C1-4)烷基，與式III的苯并[c]噻二唑、苯并[c]呋咱或2-甲基-2H-苯并[d]三唑反應(yīng)，
其中X同前述定義，且Z是溴、碘或SO3CF3，并且回收呈游離堿形式或者酸加合鹽形式的所得化合物。
在式II的化合物中，Y優(yōu)選是丁基，如正丁基。在式III的化合物中，Z優(yōu)選是溴。
式II的起始化合物可按已知方法從式IV的化合物制備，
其中R2同前述定義，或從式V的化合物制備，
其中R1和R2同前述定義。例如，式V的化合物可應(yīng)用2-R1-丙烯醛在酸存在下制得。如果R1是氫，則可現(xiàn)場(chǎng)制備丙烯醛(按Skraup的喹啉合成法)。
式III和IV的化合物都是已知的或者可用已知方法制備。其中R2是吡啶-4-基的式IV的化合物，例如可按國(guó)際專利申請(qǐng)WO94/22852中所述方法制備。
實(shí)施例下述實(shí)施例闡釋了本發(fā)明。給出的溫度以攝氏度表示。
實(shí)施例18-(苯并[c]呋咱-4-基)-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉a)8-溴-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉按Manske R.H.F.在Organic Reactions，7，59(1953)中所述的Skraup喹啉合成法制備該化合物，其中應(yīng)用2-溴-4-(吡啶-4-基-甲基)-苯胺(式IV的化合物)。Rf(硅膠，己烷-乙酸乙酯-乙醇65∶35∶10)0.25；熔點(diǎn)96-99℃。
b)6-(吡啶-4-基-甲基)-8-三丁基甲錫烷基-喹啉將8-溴-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉(2.5g，8.36mmol)、六丁基二錫烷(5.33g，9.2mmol)和四(三苯基膦)鈀(485mg，0.42mmol)懸浮于甲苯(40ml)并在氬氣中加熱回流24小時(shí)，然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并過(guò)濾。用乙酸乙酯稀釋濾液，用Na2CO3水溶液洗滌、干燥(Na2SO4)后蒸發(fā)，所得黃色油狀物用色譜法(硅膠，己烷-乙酸乙酯2∶1)純化得黃色油狀標(biāo)題產(chǎn)物。Rf(硅膠，己烷-乙酸乙酯2∶1)0.18。MS(FAB)510(MH+)。
c)8-(苯并[c]呋咱-4-基)-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉將4-溴-苯并[c]呋咱(420mg，2.1mmol)、8-三丁基甲錫烷基-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉(1.0g，1.96mmol)和四(三苯基膦)鈀(20mg，0.0l7mmol)于DMF(15ml)中的懸浮液加熱回流8小時(shí)，然后讓該混合物冷卻，用乙酸乙酯稀釋后用HCl水溶液萃取。用Na2CO3水溶液將合并后的含水萃取液調(diào)至堿性，再用乙酸乙酯萃取。干燥(Na2SO4)有機(jī)萃取物得棕色油狀物，從該油狀物結(jié)晶出標(biāo)題化合物。熔點(diǎn)154-157℃；MS(FAB)339(MH+)。
實(shí)施例28-(苯并[c]噻二唑-4-基)-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉用類似于實(shí)施例1c)的方法制備，但應(yīng)用4-溴-苯并[c]噻二唑。其鹽酸化物的熔點(diǎn)為150-155℃。MS(FAB)391(MH+)。
實(shí)施例36-(吡啶-4-基-甲基)-8-(苯并[c]呋咱-3-基)-喹啉用類似于實(shí)施例1c)的方法制備，但應(yīng)用3-溴-苯并[c]呋咱。熔點(diǎn)183-188℃。MS(FAB)339(MH+)。
實(shí)施例48-(苯并[c]呋咱-4-基)-3-甲基-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉a)8-溴-3-甲基-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉將2-溴-4-(吡啶-4-基-甲基)-苯胺(6.0g，22.8mmol)、對(duì)-甲苯磺酸(4.3g，22.8mmol)和異丁烯醛(20.0ml，228mmol)于甲苯(200ml)中的溶液在迪安-斯達(dá)克裝置中加熱回流8小時(shí)。使該反應(yīng)混合物冷卻一夜，潷去甲苯。將樹(shù)脂狀殘余物與CH2Cl2(150ml)和飽和K2CO3水溶液(80ml)一起攪拌直至溶解。分離有機(jī)相，用鹽水(50ml)洗滌；水相用CH2Cl2(2×50ml)萃取。干燥(MgSO4)合并的有機(jī)萃取物，蒸發(fā)得棕色油狀物。用色譜法(硅膠，己烷-乙酸乙酯-乙醇65∶35∶10，Rf0.25)分離該產(chǎn)物得晶狀固體，熔點(diǎn)108-109℃。MS(CI，C2H5)313，315(100，MH+)。
b)3-甲基-6-(吡啶-4-基-甲基)-8-三丁基甲錫烷基-喹啉用類似于實(shí)施例1b)的方法從3-甲基-6-(吡啶-4-基-甲基)-8-溴-喹啉制備。黃色油狀物，Rf(硅膠，己烷-乙酸乙酯-乙醇65∶35∶10)0.5；MS(FAB)523(M+)。
c)8-(苯并[c]呋咱-4-基)-3-甲基-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉用類似于步驟1c)的方法從3-甲基-6-(吡啶-4-基-甲基)-8-三丁基甲錫烷基-喹啉和4-溴-苯并[c]呋咱制備。Rf(硅膠，己烷-乙酸乙酯-乙醇65∶35∶10)0.25；MS(EI)352(MH+)；熔點(diǎn)193-194℃。
實(shí)施例58-(苯并[c]噻二唑-4-基)-3-甲基-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉用類似于實(shí)施例4的方法制備，應(yīng)用4-溴-苯并[c]噻二唑。MS(EI)367(100，(M-H)+)，276。其馬來(lái)酸氫鹽的熔點(diǎn)為147-148℃。
實(shí)施例68-(2-甲基-2H-苯并[d]三唑-5-基)-6-(吡啶-4-基甲基)-喹啉a)5-溴-2-甲基-2H-苯并三唑(桑德邁爾(Sandmeyer)反應(yīng))在10℃下30ml濃硫酸中，用NaNO2(830mg，12mmol)處理5-氨基-2-甲基-2H-苯并[d]三唑(Eur.J.Med.Chem.1992，161)(1.64g，11mmol)。30分鐘后在5℃下將該溶液加到CuBr(1.66g，11.6mmol)于9ml 48％HBr和9ml水的溶液中，接著在90℃下加熱15分鐘。用乙酸乙酯萃取后使粗油狀物急速流過(guò)硅膠(己烷∶乙酸乙酯2∶1)。結(jié)晶的5-溴-2-甲基-2H-苯并[d]三唑?yàn)槊S色針狀物，熔點(diǎn)為51-54℃。H-NMR(d-DMSO)8.25(s，1H)，7.93(d，1H)，7.55(d，1H)，4.50(s，3H)。
b)2-甲基-2H-苯并[d]三唑-5-硼酸(boronic acid)在-78℃下將5-溴-2-甲基-2H-苯并[d]三唑(500mg，2.4mmol)和硼酸三異丙酯(500mg，2.6mmol)溶于THF(20ml)，加入n-BuLi(1.6ml于己烷中，2.6mmol)。在-78℃下攪拌該反應(yīng)混合物30分鐘，再在室溫下攪拌3小時(shí)。用水(20ml)猝滅反應(yīng)，用4N HCl酸化后用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，過(guò)濾，蒸發(fā)得白色固體標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)＞260℃，1H-NMR(d-DMSO)8.39(s，1H)，8.24(s，2H)，7.88-7.75(AB-系統(tǒng)，2H)，4.51(s，3H)。
c)8-(2-甲基-2H-苯并[d]三唑-5-基)-6-(吡啶-4-基甲基)-喹啉在Pd(OAc)2(12mg)，P(鄰-甲苯基)3(17mg)，2M Na2CO3溶液(1.8ml)和乙醇(0.5ml)存在下，將2-甲基-2H-苯并[d]三唑-5-硼酸(240mg，1.36mmol)和8-溴-6-(4-甲基吡啶基)喹啉(470mg，1.56mmol)保持于90℃的40ml甲苯中達(dá)20小時(shí)。過(guò)濾冷的反應(yīng)混合物，用鹽水(80ml)稀釋，再用乙酸乙酯(3×50ml)萃取，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾后蒸發(fā)。粗產(chǎn)物用硅膠(乙酸乙酯)純化得黃色油狀物。其草酸鹽的熔點(diǎn)為98-103℃。1H-NMR(CDCl3，游離堿)8.91(dd，1H)，8.55(d，2H)，8.18(dd，1H)，8.08(s，1H)，7.92(d，1H)，7.71(dd，1H)，7.62(s，2H)，7.42(dd，1H)，7.20(d，2H)，4.53(s，3H)，4.20(s，2H)；MS(EI)351(70，M+)，350(100)，259(64)；實(shí)測(cè)C，65.17；H，4.61；N，15.84。C24H19N5O4要求C，65.29；H，4.30；N，15.86。
呈游離態(tài)、N-氧化物或藥物上可接受的酸加合鹽或銨鹽形式，例如式I或Ia的8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-喹啉，特別是上述實(shí)施例的化合物，在下文中稱為“本發(fā)明的試劑”，表現(xiàn)出藥理活性和適用作藥物，例如用于治療下文例舉的疾病和病態(tài)。
本發(fā)明的試劑是IV型cAMP磷酸二酯酶同工酶族的選擇性抑制劑，而對(duì)于I、II、III和V型磷酸二酯酶同工酶具有較小效果。這樣，本發(fā)明的試劑可用于這種情況，即通過(guò)選擇性抑制IV型磷酸二酯酶同工酶而提高cAMP的含量有益時(shí)。因?yàn)樘岣呃缡人崃＜?xì)胞的炎性細(xì)胞中cAMP的含量可抑制它們的活化，所以本發(fā)明的試劑適用于嗜酸粒細(xì)胞活化起作用的炎性病中。
本發(fā)明的試劑由于對(duì)人嗜酸粒細(xì)胞中IV型磷酸二酯酶的抑制作用，所以適用于治療變應(yīng)性和非變應(yīng)性哮喘，下文所述PDE抑制模型、嗜酸粒細(xì)胞活化的抑制和支氣管擴(kuò)張藥模型支持了這一方面。
PDE同工酶抑制作用下述試驗(yàn)闡明了這些化合物選擇性抑制IV型cAMP磷酸二酯酶的效應(yīng)人磷酸二酯酶抑制分析所有同工酶制劑都得自人體。應(yīng)用下列技術(shù)、利用III型同工酶在血小板中和IV型同工酶在嗜中性白細(xì)胞中的優(yōu)勢(shì)而獲取III和IV型制劑采集含枸櫞酸鹽的人血并用葡聚糖沉降法分離嗜中性白細(xì)胞，在Histopaque1077和1119的混合物上進(jìn)行密度梯度離心，最終密度為1.089g/l，再低滲裂解紅細(xì)胞。將得自相同來(lái)源的人血小板用PBS(NaCl 140mM，KCl 2.7mM，KH2PO41.5mM，Na2HPO48.1mM，pH7.4)洗滌。將嗜中性白細(xì)胞和血小板懸浮于10ml緩沖液(0.24M蔗糖，1mM EDTA，1mM二硫蘇糖醇，10mM trisHCl，pH7.4)，該緩沖液中含有下列蛋白酶抑制溶液5μl/ml苯基甲基磺酰氟(7mg/ml于2-丙醇中)，1μl/ml亮抑酶肽和抑胃酶肽A(各1mg/ml，于乙醇中)。用探針超聲波發(fā)生器進(jìn)行超聲處理(4℃下15秒)后，離心(2200g)勻漿液。將粒狀沉淀重懸于10ml緩沖液并重復(fù)該超聲處理過(guò)程。合并的上清液在-20℃下存放。
其它同工酶應(yīng)用本領(lǐng)域所述的色譜法部分地純化(I型和V型得自人肺，II型得自人血小板)。當(dāng)存在和不存在試驗(yàn)物質(zhì)時(shí)在不同濃度下分析PDE活性，是應(yīng)用Thompson等在Nucleotide Res.，10，69-92(1979)中所述的離子交換柱法進(jìn)行分析的，其中以1μM[3H]-環(huán)狀A(yù)MP為底物(III型和IV型)或者0.50μM鈣，0.125μM鈣調(diào)蛋白和1.0μM[3H]-環(huán)狀A(yù)MP(I型)或者100μM[3H]-環(huán)狀A(yù)MP(II型)或者1.0μM[3H]-環(huán)狀GMP(V型)。
在該試驗(yàn)方法中，本發(fā)明的試劑主要抑制IV型PDE同工酶，而對(duì)于I、II、III和V型影響較小。在PDE IV同種型中，本發(fā)明的試劑進(jìn)一步表現(xiàn)的特征為選擇性地抗PDE IV D，例如實(shí)施例2的化合物可在亞毫微摩爾的水平上抑制PDE IV D。抗炎活性抑制嗜酸粒細(xì)胞活化血液樣本(50ml)采集自嗜酸粒細(xì)胞數(shù)在0.06-0.47×109L-1(Microcellcounter F300，Sysmex)范圍內(nèi)的非變應(yīng)性實(shí)驗(yàn)人員。將靜脈血樣采入含有5ml檸檬酸三鈉(3.8％，pH7.4，Sigma)的離心管。
用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，既不含鈣也不含鎂，Gibco)稀釋(1∶1，v∶v)抗凝血液，接著在50ml離心管(Falcon)內(nèi)的15ml等滲Percoll(密度為1.082-1.085g/ml，pH7.4，Pharmacia)上分層。離心(30分鐘，1000×g，20℃)后，小心地吸出和棄去血漿/Percoll界面的單核細(xì)胞。
將嗜中性白細(xì)胞/嗜酸粒細(xì)胞/紅細(xì)胞粒狀沉淀(體積約為5ml)輕輕地重懸浮于35ml等滲氯化銨溶液(NH4Cl，155mM；KHCO3，10mM；EDTA，0.1mM；0-4℃)。15分鐘后，用含有胎牛血清(2％FCS，Gibco)的PBS將細(xì)胞洗滌兩次(10分鐘，400xg，4℃)。
應(yīng)用磁性細(xì)胞分離系統(tǒng)(Miltenyi Biotec)來(lái)分離嗜酸粒細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞。開(kāi)發(fā)該系統(tǒng)是為了根據(jù)表面標(biāo)記物來(lái)分離懸浮液中細(xì)胞，該系統(tǒng)包括一塊永久磁鐵，其中放入一條包括可磁化的鋼基質(zhì)的柱。使用前，用PBS/FCS平衡該柱1小時(shí)，然后用20ml注射器逆向地用冰冷的PBS/FCS沖洗。一個(gè)21G皮下注射針頭與柱底部連接，通過(guò)該針頭放出1-2ml冰冷的緩沖液。
離心粒細(xì)胞后，吸出上清液并輕輕地將細(xì)胞與100μl磁性粒子(抗-CD16單克隆抗體，與超順磁性粒子偶聯(lián)，Miltenyi Biotec，Germany)重懸浮。將此嗜酸粒細(xì)胞/嗜中性白細(xì)胞/抗CD16磁性粒子混合物在冰上培養(yǎng)40分鐘，再用冰冷的PBS/FCS稀釋至5ml。將該細(xì)胞懸浮液緩慢地注入柱頂部，打開(kāi)塞子讓細(xì)胞緩慢地進(jìn)入鋼基質(zhì)。然后用PBS/FCS(35ml)洗柱，洗液小心加到柱頂部以便不致于干擾已截留于鋼基質(zhì)中的磁性標(biāo)記的嗜中性白細(xì)胞。將未標(biāo)記的嗜酸粒細(xì)胞采集于50ml離心管內(nèi)并洗滌(10分鐘，400xg，4℃)。將所得粒狀沉淀重懸浮于5ml Hank’s平衡鹽溶液(HBSS)中，這樣就可在應(yīng)用前估測(cè)細(xì)胞數(shù)和純度。從磁鐵上取下分離柱并洗脫嗜中性白細(xì)胞級(jí)分。再用PBS(50ml)和(絕對(duì))乙醇洗滌柱子，在4℃下貯存。
用微細(xì)胞計(jì)數(shù)器(Sysmex)計(jì)數(shù)全部細(xì)胞。將1滴裂解溶液(Sysmex)加入樣本，3Os后再計(jì)數(shù)以估測(cè)污染的紅細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞旋轉(zhuǎn)涂片是在Shandon Cytospin 2細(xì)胞旋涂器(100μl樣本，3分鐘，500rpm)上制備的。將這些制備物染色(Diff，Quick，Baxter)并用光學(xué)顯微術(shù)測(cè)定差示細(xì)胞數(shù)，至少檢查500個(gè)細(xì)胞。通過(guò)除去臺(tái)盼藍(lán)估測(cè)細(xì)胞活力。
用HBSS稀釋嗜酸粒細(xì)胞，再以1-10×103個(gè)細(xì)胞/孔的量將其吸移入96孔微量滴定板(MTP)。每孔所含的200μl樣本中包括100μl嗜酸粒細(xì)胞懸浮液50μl HBSS10μl光澤精20μl活化刺激物20μl測(cè)試化合物將樣本與測(cè)試化合物或載體一起培養(yǎng)10分鐘，再添加活化刺激物fMLP(10μM)溶于二甲亞砜的溶液，然后用緩沖液稀釋，這樣使應(yīng)用的最高溶劑濃度為1％(在100μM測(cè)試化合物時(shí))。攪拌MTPs(Titertek MTP混合器，F(xiàn)low)以便于細(xì)胞與培養(yǎng)基混合，再將MTP放入Hamamatsu發(fā)光計(jì)中。在20分鐘內(nèi)同時(shí)測(cè)定每孔的化學(xué)發(fā)光和時(shí)間曲線，結(jié)果以任意單位表示，或者以不存在測(cè)試化合物時(shí)fMLP引起的化學(xué)發(fā)光的百分?jǐn)?shù)表示。將結(jié)果代入Hill方程并自動(dòng)計(jì)算IC50值。
本發(fā)明的試劑在上述試驗(yàn)方法中具有活性的濃度約為0.0001-0.5μM，對(duì)于例舉的化合物一般約為1nM的數(shù)量級(jí)。例如，實(shí)施例2的化合物在該分析中的IC50為1.9nM，而實(shí)施例4的化合物IC50為0.71nM。支氣管擴(kuò)張藥活性人支氣管的舒張?jiān)诎┦中g(shù)期間解剖的人肺樣品是在摘除后3天內(nèi)獲得的。切除小的支氣管(內(nèi)徑≈2-5mm)，切成片段后置于2ml液氮貯存安瓿中，安瓿內(nèi)盛有胎牛血清(FCS)，該血清中含有作為低溫防護(hù)劑的1.8M二甲亞砜(DMSO)和0.1M蔗糖。將安瓿放入聚苯乙烯盒(11×11×22cm)內(nèi)，接著在-70℃的冷凍機(jī)中以約0.6℃/分鐘的平均冷凍速度緩慢地冷凍。3-15小時(shí)后將安瓿轉(zhuǎn)入液氮(-196℃)并貯存在液氮中備用。使用前，將組織置于-70℃下30-60分鐘，再將安瓿放入37℃水浴中使組織在2.5分鐘內(nèi)融化。然后將支氣管片段放入含有Krebs-Henseleit溶液(成分mMNaCl 118，KCl 4.7，MgSO41.2，CaCl21.2，KH2PO41.2，NaHCO325，葡萄糖11，EDTA 0.03)的37℃盤中漂洗，切成環(huán)狀后懸浮于10ml器官浴中供預(yù)加負(fù)荷約為1g下的等張力記錄(isometric tension recording)。通過(guò)累積加入法產(chǎn)生濃度-效應(yīng)曲線，每個(gè)濃度是在前一個(gè)濃度產(chǎn)生最大效應(yīng)時(shí)加入的。在濃度-效應(yīng)曲線終了時(shí)加入罌粟堿(300μM)以引起支氣管環(huán)完全舒張。該效果被認(rèn)為是100％舒張。
在上述試驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，本發(fā)明的試劑在0.001-1.0μM的濃度下使人支氣管環(huán)制品產(chǎn)生濃度相關(guān)的舒張。
對(duì)于韓蛙皮素引起的支氣管縮小的抑制將實(shí)驗(yàn)前自由進(jìn)食食物和水的雄性Dunkin-Hartley豚鼠(400-800g)用苯巴比妥鈉(100mg/kg i.p.)和戊巴比妥鈉(30mg/kg i.p.)麻醉，然后用加拉明(10mg/kg i.m.)麻痹。通過(guò)直腸溫度計(jì)控制，用加熱墊將動(dòng)物保持在37℃，利用氣管插管對(duì)動(dòng)物通入空氣和氧氣(45∶55 v/v)混合物進(jìn)行通氣(約8ml/kg，1Hz)。由呼吸速度描記器(Fleisch，0000型)在氣管上監(jiān)控通氣情況，呼吸速度描記器連接差動(dòng)壓力轉(zhuǎn)換器(MP4514871，Validyne，USA)，后者與呼吸泵相當(dāng)。胸廓內(nèi)的壓力變化直接由胸廓內(nèi)的插管、應(yīng)用差動(dòng)壓力轉(zhuǎn)換器(MP4524，Validyne)監(jiān)控，這樣可測(cè)定和顯示氣管和胸廓之間的壓力差。由這些空氣流和經(jīng)肺壓力測(cè)定結(jié)果，運(yùn)用數(shù)字式電子呼吸分析儀(PMS300，Mumed Ltd.UK)就可計(jì)算每次呼吸周期的氣道阻力(RL，cmH2O/l/s)和流動(dòng)慣量(Cdyn)。應(yīng)用壓力轉(zhuǎn)換器(P23Dd，Gould，USA)從頸動(dòng)脈記錄血壓和心搏率。
當(dāng)基本阻力和流動(dòng)慣量的值穩(wěn)定時(shí)，則通過(guò)連續(xù)靜脈注入韓蛙皮素(100/ng/kg/分鐘)可引起持續(xù)支氣管縮小。將韓蛙皮素溶于100％乙醇后用磷酸鹽緩沖鹽水稀釋。
當(dāng)對(duì)韓蛙皮素的響應(yīng)最強(qiáng)并穩(wěn)定時(shí)(約在開(kāi)始注入韓蛙皮素后2分鐘)，就可施用測(cè)試化合物。在氣管內(nèi)或十二指腸內(nèi)滴注或者靜脈快速濃注后，1小時(shí)期間估測(cè)支氣管縮小的逆轉(zhuǎn)。支氣管痙攣漸退活性(bronchospasmolytic activity)以注入韓蛙皮素后對(duì)初始最大阻力(RL)的抑制％數(shù)表示。給定的ED50值表示使由韓蛙皮素引起的阻力增大值減小50％所需的劑量。作用的持續(xù)時(shí)間定義為以分鐘表示的、引起支氣管縮小減少50％或以上的時(shí)間。以ED20值表征對(duì)血壓(BP)和心搏率(HR)的影響效果，即減小BP或HR20％(施藥后5分鐘)所需劑量。
施用的測(cè)試化合物，當(dāng)用于氣管內(nèi)或十二指腸內(nèi)滴注時(shí)可呈溶液形式，對(duì)于不溶性化合物也可呈其中含0.5％黃蓍膠的水性懸浮液形式。在施用前對(duì)于懸浮液超聲處理5分鐘使之變成小粒徑粒子。
每種藥物測(cè)試2到4個(gè)劑量(每個(gè)劑量n＝3～4)。應(yīng)用適當(dāng)數(shù)量的對(duì)照物(5～6)。
在上述實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，本發(fā)明的試劑在約為0.001～0.1mg/kg i.v.或0.1～5.0mg/kg i.d.的劑量下表現(xiàn)出明顯的支氣管擴(kuò)張藥活性。
根據(jù)前述說(shuō)明，本發(fā)明的試劑適用于治療炎癥性或阻塞性氣道疾病或者涉及氣道阻塞的其它病況。它們特別適于治療支氣管哮喘。
考慮到它們的抗炎活性，它們對(duì)于氣道反應(yīng)過(guò)度性的影響和它們與PDE同工酶抑制作用相關(guān)的作用方式，尤其是用作選擇性的IV型抑制劑，本發(fā)明的試劑適用于治療尤其是預(yù)防性治療阻塞性或炎癥性氣道疾病。所以通過(guò)長(zhǎng)期連續(xù)和定時(shí)施用，本發(fā)明的試劑適用于提供良好的保護(hù)作用以防支氣管縮小的復(fù)發(fā)或防止阻塞性或炎癥性氣道疾病的繼發(fā)性病癥侵襲或者適于控制、改善或逆轉(zhuǎn)這類疾病的基本狀況。
考慮到它們的支氣管擴(kuò)張活性，本發(fā)明的試劑適用作支氣管擴(kuò)張藥，例如用于治療慢性或急性支氣管縮小，例如根據(jù)癥狀治療阻塞性或炎癥性氣道疾病。
本發(fā)明的說(shuō)明書和權(quán)利要求中關(guān)于阻塞性或炎癥性氣道疾病而應(yīng)用的術(shù)語(yǔ)“治療”應(yīng)理解為包括預(yù)防性治療方式和根據(jù)癥狀的治療方式二者。
按前述說(shuō)明，本發(fā)明進(jìn)一步提供了A.用于下列方面的方法a)治療氣道反應(yīng)過(guò)度性b)實(shí)現(xiàn)支氣管擴(kuò)張或，特別是c)治療阻塞性或炎癥性氣道疾病，尤其是哮喘，在需要它的受治療者中，本方法包括對(duì)所述受治療者施用有效量本發(fā)明的試劑。
本發(fā)明涉及的“阻塞性或炎癥性氣道疾病”包括哮喘，塵肺，慢性阻塞性氣道病或慢性阻塞性肺病(COAD或COPD)和成人呼吸窘迫綜合癥(ARDS)，和由于其它藥物療法例如阿司匹林或β-興奮劑療法引起的氣道反應(yīng)過(guò)度性的惡化。
本發(fā)明適于治療任何類型或起源的哮喘，包括內(nèi)源性哮喘和尤其是外源性哮喘。它適合于治療變應(yīng)性(異位性/IgE介導(dǎo)的哮喘)。它還適于治療非變應(yīng)性哮喘，例如包括支氣管炎性氣喘，運(yùn)動(dòng)引起的哮喘和職業(yè)性哮喘，細(xì)菌感染后引起的哮喘和其它非變應(yīng)性哮喘。它還適于治療喘息性嬰兒綜合征(嬰兒初發(fā)性氣喘)。
本發(fā)明適于治療任何類別或起源的塵肺，例如包括鋁塵肺、炭肺、石棉肺、石末肺、駝鳥(niǎo)毛塵肺、鐵塵肺、硅肺、煙草肺和棉屑肺。
本發(fā)明適于治療COPD或COAD，包括慢性支氣管炎、肺氣腫或與之相關(guān)的呼吸困難。
本發(fā)明還適于治療任何類別或起源的支氣管炎，例如急性的、花生仁吸入性的、卡他性的、慢性的、格魯布性的或結(jié)核性支氣管炎等等。
考慮到它們作為TNF-α釋放的選擇性抑制劑的活性，本發(fā)明的試劑還適用于下調(diào)或抑制TNF-α釋放，例如用于治療其中TNF-α釋放被涉及到或起介導(dǎo)作用的疾病或病態(tài)，例如病因包括例如不希望的、過(guò)量的或未調(diào)節(jié)的TNF-α釋放等病理的疾病或病態(tài)。特別是用于治療惡病質(zhì)或內(nèi)毒素休克和治療艾滋病。
本發(fā)明的方法適于治療同病理性TNF-α釋放或任何原由的TNF-α血清含量相關(guān)的惡病質(zhì)，包括例如下列因素引起的惡病質(zhì)細(xì)菌的、病毒的或寄生物的感染，或者體液的或其它器官性如腎功能缺乏或惡化。例如它適于治療癌性惡病質(zhì)、瘧疾惡病質(zhì)和害蟲(chóng)性(vermal)惡病質(zhì)，由于垂體、甲狀腺或胸腺機(jī)能障礙而引起的惡病質(zhì)和尿毒癥性惡病質(zhì)。它特別適于治療與艾滋病相關(guān)的惡病質(zhì)，即由HIV感染引起或與之相關(guān)的惡病質(zhì)。
本發(fā)明的方法還適于治療膿毒性休克，例如由細(xì)菌感染引起的休克病態(tài)。應(yīng)注意在這方面本發(fā)明提供治療膿毒性休克以及由膿毒性休克引起的病態(tài)或癥狀例如ARDS(成人呼吸窘迫綜合征)的方法。
本發(fā)明的方法還適于治療HIV感染引起的疾病，如艾滋病，例如使這類疾病轉(zhuǎn)好或控制它發(fā)展。
考慮到它們對(duì)于PDE同工酶的抑制作用方式和/或?qū)τ赥NFα釋放的抑制，以及它們的免疫抑制活性，本發(fā)明的試劑還適用作免疫抑制劑，例如用于治療自身免疫病，特別是用于治療其中涉及炎性過(guò)程或具有炎性成分或病因的自身免疫病，或者作為消炎劑用于治療炎癥，特別是用于治療其中涉及自身免疫反應(yīng)或具有自身免疫成分或病因的炎癥。
本發(fā)明可適用的這類疾病實(shí)例包括自身免疫血液病(例如溶血性貧血、再生障礙性貧血、純紅細(xì)胞性貧血和自發(fā)性血小板減少癥)，全身性紅斑狼瘡，多軟骨炎，硬皮病，Wegener肉芽腫病，皮膚肌炎，慢性活性肝炎，重癥肌無(wú)力，Steven-Johnson綜合征，自發(fā)性口炎性腹瀉，自身免疫炎性腸病(例如潰瘍性結(jié)腸炎和節(jié)段性回腸炎)，內(nèi)分泌性眼病，格雷夫斯病，肉樣瘤病，牙槽炎，慢性過(guò)敏性肺炎，多發(fā)性硬化，肥大性肝硬變，青少年糖尿病(I型糖尿病)，眼色素層炎(前面的和后面的)，干性角膜結(jié)膜炎和青春期角結(jié)膜炎，間質(zhì)性肺纖維化，牛皮癬性關(guān)節(jié)炎和腎小球性腎炎(具有或沒(méi)有腎變病綜合征，例如包括自發(fā)性腎變病綜合征或變化極小的腎病)，以及炎癥和/或過(guò)度增生性皮膚病，例如牛皮癬變應(yīng)性皮炎、天皰瘡以及尤其是接觸性皮炎如變應(yīng)性接觸性皮炎。
本發(fā)明的試劑特別適合于治療關(guān)節(jié)炎，和其它風(fēng)濕病或炎癥，尤其是治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
作為免疫抑制劑，本發(fā)明的試劑還可用于防止移植物排異反應(yīng)，例如用于保養(yǎng)同種器官移植物等等，如有關(guān)腎、肝、肺、心、心-肺、腸、骨髓、皮膚或角膜移植。
考慮到它們的抗炎活性，特別是抑制嗜酸粒細(xì)胞活化的活性，本發(fā)明的試劑還適用于治療與嗜酸粒細(xì)胞相關(guān)的病，例如嗜酸粒細(xì)胞增多，特別是氣道的嗜酸粒細(xì)胞相關(guān)病(例如包括肺組織的病理性嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn))，包括嗜酸粒細(xì)胞過(guò)多，因?yàn)樗绊憵獾篮?或肺，以及例如呂弗勒綜合征引起或伴發(fā)的嗜酸粒細(xì)胞相關(guān)性氣道病，嗜酸粒細(xì)胞肺炎，寄生物的(特別是后生動(dòng)物的)感染(包括熱帶嗜酸粒細(xì)胞增多)，支氣管肺曲霉病，多動(dòng)脈炎(包括Churg-Strauss綜合征)，嗜酸粒細(xì)胞肉芽腫和由藥物反應(yīng)引起的、影響氣道的嗜酸粒細(xì)胞相關(guān)病。
考慮到它們與免疫抑制性和/或抗炎性藥物的相互協(xié)同作用的能力，本發(fā)明的試劑還適用作輔助治療劑用于同這類藥物結(jié)合，例如作為這類藥物治療活性的增效劑或者作為減少這類藥物的所需劑量或潛在的副作用的工具。適用于同本發(fā)明的試劑一起施用的藥物例如包括環(huán)肽，環(huán)縮肽或大環(huán)內(nèi)酯免疫抑制性或抗炎性藥物，例如屬于環(huán)孢菌素類的藥物如環(huán)孢菌素A或G，藥物tacrolimus(還稱為FK506)，子囊霉素和雷怕霉素及其各種已知的同種物和衍生物，和糖皮質(zhì)類固醇藥物。這種輔助療法適合的疾病例如包括需要免疫抑制性或抗炎性藥物治療的任何疾病或病態(tài)，例如前面例舉的那些。本發(fā)明的試劑特別適用于前述輔助療法，例如用于免疫抑制性、抗炎性或抗哮喘性治療，例如達(dá)到環(huán)孢菌素，如環(huán)孢菌素A-、大環(huán)內(nèi)酯-或類固醇-節(jié)制的(sparing)效果。
考慮到它們關(guān)于抑制PDE同工酶的作用方式，特別是它們作為選擇性IV型抑制劑的作用方式，本發(fā)明的試劑還適用作IV型PDE抑制劑，例如用于治療包括組織鈣耗損的疾病，特別是包括鈣耗損的骨和關(guān)節(jié)的變性病，尤其是骨質(zhì)疏松癥。在這方面，它們還適用于治療變應(yīng)性炎癥，例如鼻炎，結(jié)膜炎，特應(yīng)性皮炎，蕁麻疹和胃腸道過(guò)敏反應(yīng)；作為血管舒張藥，例如用于治療咽峽炎，高血壓，充血性心衰竭和多梗塞性(multi-infarct)癡呆；和用于治療其中需要抑制PDE IV的其它病態(tài)，例如表現(xiàn)為識(shí)別功能受損的抑郁癥、病態(tài)和疾病，包括早老性癡呆、帕金森病和中風(fēng)。CNS活性帕金森病的神經(jīng)病理學(xué)特征為黑質(zhì)中的多巴胺能神經(jīng)元變性。提高多巴胺能神經(jīng)元中的cAMP含量可提高它們?cè)谂囵B(yǎng)中的存活力和保護(hù)它們以防神經(jīng)毒性劑的影響。在活體內(nèi)，本發(fā)明的IV型磷酸二酯酶抑制劑能減少C57BL/6小鼠紋狀體中MPTP引起的多巴胺缺失。此外，該抑制劑可部分地防止由毒素引起的酪氨酸-羥化酶-陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目的減少。
細(xì)胞培養(yǎng)，多巴胺或MPP+攝取和多巴胺能神經(jīng)元的存活性含有多巴胺能神經(jīng)元的原代培養(yǎng)物是從E14胎大鼠前側(cè)中腦制得的，多巴胺或MPP+攝取量按Hartikka等在J.Neurosci.Res.，32，190-201，1992中描述的方法測(cè)定。一個(gè)15mm培養(yǎng)孔通常含有6×105個(gè)神經(jīng)元。多巴胺或MPP+攝取量是應(yīng)用氚化多巴胺或MPP+分別在50nM(比活度45Cj/mmol，New England Nuclear)或1μM(比活度80Ci/mmol，New Enland Nuclear)的濃度下測(cè)定的。培養(yǎng)物中多巴胺能神經(jīng)元的存活性是通過(guò)計(jì)數(shù)預(yù)先用小鼠抗TH抗體(Boehringer Mannheim)染色的酪氨酸羥化酶陽(yáng)性(TH+)神經(jīng)元而分析的。
MPTP-注射的小鼠用MPTP或鹽水對(duì)C57BL/6小鼠進(jìn)行皮下注射。在2小時(shí)和4小時(shí)后進(jìn)行第二次和在某些實(shí)驗(yàn)中第三次注射MPTP。在第0，2和4小時(shí)，經(jīng)口服用溶于鹽水的測(cè)試化合物或只服用相同體積的鹽水。7天后采用斷頭術(shù)殺死動(dòng)物，用HPLC法[Schneider等，Science 256，843-846(1992)]測(cè)定單胺或者對(duì)腦處理供酪氨酸羥化酶(TH)免疫細(xì)胞化學(xué)檢驗(yàn)。為此，對(duì)小鼠心內(nèi)灌注4％多聚甲醛，并將整個(gè)腦進(jìn)一步固定在冷的4％多聚甲醛中一夜。在中腦區(qū)進(jìn)行低溫切片(40μm)，用0.3％過(guò)氧化物的甲醇溶液進(jìn)行內(nèi)源性過(guò)氧化物酶封閉達(dá)15分鐘，再用0.1％胰蛋白酶的PBS溶液消化10分鐘。
接著在4℃下與抗TH(Eugene Tech.International Inc.，New Jersey)的多克隆兔抗血清培養(yǎng)48小時(shí)，其中的抗血清用2％山羊血清和0.2％Tritan-X在PBS中稀釋至1∶50。將切片進(jìn)一步用Vectastain Elite ABC Kit(Vector Laboratories，CA)展開(kāi)和用二氨基聯(lián)苯胺(DAB)鎳增強(qiáng)。在DAB反應(yīng)之前，先將切片置于2％NiSO4的0.1M Tris-HCl(pH7.4)溶液中培養(yǎng)10分鐘。然后倒掉該溶液，并代之以0.05％DAB、0.2％NiSO4、0.3％H2O2的0.1MTris溶液。
本發(fā)明的試劑在該分析中有活性。例如，在第0、2和4小時(shí)接受劑量為4mg/kg p.o.的實(shí)施例2的化合物的MPTP注射的小鼠表現(xiàn)出多巴胺含量比未處理的對(duì)照組高25％。因此本發(fā)明的試劑適用于抑制多巴胺缺失并可提高多巴胺含量，而適用于治療例如帕金森病。
本發(fā)明的試劑還能促進(jìn)去甲腎上腺素能性神經(jīng)元和血清素能性神經(jīng)元在培養(yǎng)時(shí)存活。因此本發(fā)明的試劑適于治療神經(jīng)變性病。
這類神經(jīng)變性病包括原發(fā)性變性癡呆，例如老年性癡呆，特別是阿爾茨海默型老年性癡呆，和老年性腦力衰退，例如老年性識(shí)別力下降，和老年精神錯(cuò)亂病。
此外，本發(fā)明的試劑能增進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和感覺(jué)神經(jīng)元在培養(yǎng)時(shí)存活和抑制腫瘤壞死因子的表達(dá)。
因此，本發(fā)明的試劑適于治療多發(fā)性硬化，肌萎縮性側(cè)索硬化和其它運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病或自身免疫病。
此外，小鼠內(nèi)注射本發(fā)明的試劑之后，紋狀體中DOPAC/多巴胺和5-HIAA/5-羥色胺的比率分別提高到2和1.5倍。所以本發(fā)明的試劑適于治療抑郁癥。
根據(jù)前述闡釋，本發(fā)明還提供了B.用于下述方面的方法a)下調(diào)或抑制TNF-α釋放，b)抑制PDE IV同工酶活性，c)實(shí)現(xiàn)免疫抑制，d)實(shí)現(xiàn)炎癥或自身免疫病，
e)治療抑郁癥或表現(xiàn)為識(shí)別功能受損傷的病態(tài)和疾病，它包括早老性癡呆、帕金森病和休克，或者f)治療如上文列舉的任何特定病態(tài)或疾病，在需要它的受治療者中，本方法包括對(duì)所述受治療者施用有效量本發(fā)明的試劑。
本發(fā)明還提供了C.本發(fā)明的試劑作為藥物的應(yīng)用，例如用于如上文列舉的任何方法中或任何疾病或病態(tài)的治療中，如前面A或B規(guī)定的那些，和D.藥物組合物，它包括本發(fā)明的試劑，該試劑任選地和藥物上可接受的稀釋劑或載體組合，例如用于前面列出的任何方法中，如上文A或B規(guī)定的那些，例如呈吸入劑或口服形式的藥物組合物。
實(shí)施本發(fā)明時(shí)采用的劑量當(dāng)然是可變的，這取決于例如下述因素待治療的具體疾病或病態(tài)，所用本發(fā)明的具體試劑，施藥方式和所要求的療法。不過(guò)大體說(shuō)來(lái)，要達(dá)到滿意的治療結(jié)果，例如用于治療阻塞性或炎癥性疾病，如哮喘療法中的劑量約為0.01～2.0mg/kg/p.o.。對(duì)于例如人的較大哺乳動(dòng)物，治療阻塞性或炎癥性氣道病中的氣道反應(yīng)過(guò)度性或炎癥時(shí)，口服必要的日劑量在約0.75～150mg范圍內(nèi)，日服1次或分成2～4次的均分劑量或呈持續(xù)釋放形式較為合適。所以，口服合適的單位劑量形式包括從約0.2至75或150，例如約0.2或2.0至50、75或100mg本發(fā)明的試劑，以及藥物上可接受的稀釋劑或載體。
用于治療例如哮喘的慢性或阻塞性氣道病時(shí)，本發(fā)明的試劑也可由吸入方式施藥。采用的劑量也取決于例如下述因素具體疾病或病態(tài)，所用本發(fā)明的具體試劑，施藥的具體方式(例如是以干粉吸入法還是別的方法)和所要求的療效。不過(guò)大體上必須吸入的日劑量為約2.5～約130.0μg/kg/天，例如約13.0～約60.0μg/kg/天。對(duì)于例如人的較大哺乳動(dòng)物，例如治療哮喘時(shí)必須吸入的日劑量在約0.2～約10.0mg范圍內(nèi)，例如約1～約5mg，全天1次或分成2或3次施藥較為合適。所以日施藥達(dá)3次的話，每次合適的劑量是約200μg～約3.3mg，每次施藥時(shí)從干粉吸入傳送裝置連續(xù)吹2～8下較為合適。
為治療帕金森病和其它神經(jīng)變性病，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元或自身免疫病(如上文指出的那些)和抑郁癥，要達(dá)到滿意的類似治療結(jié)果所需劑量為約0.5～5.0mg/kg p.o.。對(duì)于例如人的較大哺乳動(dòng)物，為治療所述神經(jīng)變性病和抑郁癥，口服所需的日劑量應(yīng)在約40～400mg范圍內(nèi)，日服1次或分成2～4次的均分劑量或呈持續(xù)釋放形式較為合適。所以，口服合適的單位劑量形式包括從約10至200或400mg本發(fā)明的試劑，以及藥物上可接受的稀釋劑或載體。
本發(fā)明的試劑還可以任何其它合適的途徑施藥，例如通過(guò)輸注，治療如膿毒性休克；經(jīng)鼻，例如治療鼻炎；經(jīng)眼，例如治療眼的自身免疫病；經(jīng)皮，即對(duì)皮膚局部用藥，例如治療皮膚病或牛皮癬；或經(jīng)直腸，例如通過(guò)灌腸劑或栓劑，治療例如炎性腸病。這類途徑的應(yīng)用中合適的劑量一般應(yīng)更低，例如比口服所需劑量大約小10～100倍。
包括本發(fā)明的試劑的藥物組合物可應(yīng)用本領(lǐng)域已知的慣常稀釋劑或賦形劑運(yùn)用蓋侖派醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中已知的任何技術(shù)制備。這樣，口服劑量形式可包括片劑、膠囊等等。用于吸入療法的組合物包括氣霧劑或其它可霧化的制劑和可吸入的干粉制劑，具有或沒(méi)有稀釋劑，通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何合適的干粉吸入系統(tǒng)施藥。皮膚施用的制劑可呈乳膏、軟膏、凝膠或經(jīng)皮遞送系統(tǒng)的形式，例如藥膏，除了惰性稀釋劑或載體之外，可適當(dāng)?shù)匕彩潜绢I(lǐng)域已知的皮膚滲入增強(qiáng)劑。
權(quán)利要求
1.呈游離態(tài)或N-氧化物或藥物上可接受的酸加合鹽或銨鹽形式的8-(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基、或2-甲基-2H-苯并[d]三唑基)-喹啉。
2.權(quán)利要求1的式I化合物
其中X是-O-、-S-或-N(CH3)-，R1是氫或(C1-4)烷基，和R2是(C1-4)烷基或吡啶基，呈游離態(tài)或N-氧化物或者藥物上可接受的酸加合鹽或銨鹽形式。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，它選自i)8-(苯并[c]呋咱-4-基)-6-(吡啶-4-基)-喹林ii)8-(苯并[c]呋咱-4-基)-3-甲基-6-(吡啶-4-基)-喹啉iii)8-(苯并[c]呋咱-3-基)-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉iv)8-(苯并[c]噻二唑-4-基)-6-(吡啶-4-基)-喹啉v)8-(苯并[c]噻二唑-4-基)-3-甲基-6-(吡啶-4-基)-喹啉vi)8-(2-甲基-2H-苯并[d]三唑-5-基)-6-(吡啶-4-基-甲基)-喹啉呈游離態(tài)或N-氧化物或藥物上可接受的酸加合鹽或銨鹽形式。
4.用作藥物的權(quán)利要求1、2或3的化合物。
5.藥物組合物，它包括權(quán)利要求1、2或3的化合物，該化合物任選地與藥物上可接受的載體或稀釋劑組合。
6.權(quán)利要求1、2或3任一項(xiàng)的化合物在制備治療下列疾病的藥劑中的應(yīng)用a)阻塞性或炎癥性氣道疾病，b)炎癥性疾病或自身免疫病或病態(tài)，c)抑郁癥、早老性癡呆、帕金森病或中風(fēng)。
7.治療下列疾病的方法a)阻塞性或炎癥性氣道疾病，b)炎癥性疾病或自身免疫病或病態(tài)，c)抑郁癥、早老性癡呆、帕金森病或中風(fēng)，該方法包括對(duì)需要這類治療的病人施用有效量的權(quán)利要求1、2或3的化合物。
8.生產(chǎn)權(quán)利要求1、2或3的化合物的方法，它包括如下步驟(i)使3-Q-或4-Q--苯并[c]噻二唑、-苯并[c]呋咱或-2-甲基-2H-苯并[d]三唑與8-Q’-喹啉反應(yīng)，其中Q和Q’是能參與交叉偶合反應(yīng)的離去基團(tuán)，(ii)任選地對(duì)該產(chǎn)物進(jìn)行N-烷基化或N-氧化，并且回收所得到的呈游離態(tài)、N-氧化物或藥物上可接受的酸加合鹽或銨鹽形式的化合物。
全文摘要
已發(fā)現(xiàn)呈游離態(tài)或N－氧化物或酸加合鹽或銨鹽形式的新型化合物:8－(苯并[c]噻二唑基、苯并[c]呋咱基、或2－甲基－2H－苯并[d]三唑基)－喹啉適用作藥物,例如作為PDEIV抑制劑用于治療如哮喘。還提供了應(yīng)用這些化合物的新療法,制備這些化合物的方法和包括這些化合物的藥物組合物。例如,式(1)的化合物,其中X是－O－、－S－或－N(CH
文檔編號(hào)A61P25/16GK1202170SQ96198305
公開(kāi)日1998年12月16日 申請(qǐng)日期1996年11月13日 優(yōu)先權(quán)日1995年11月14日
發(fā)明者R·倫德, E·伯姆博維拉 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司