專利名稱：抗真菌劑及其化合物和它們的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗真菌劑、使用該抗真菌劑預(yù)防或治療真菌病的方法、它們的新的旋光活性衍生物和鹽以及制備該衍生物的方法。
背景技術(shù)：
已知各種唑類化合物具有抗真菌活性。例如JP-A-60-218387公開了下式(a)表示的咪唑類化合物(本文采用的術(shù)語(yǔ)“JP-A”是指“未審查的
公開日本專利申請(qǐng)”)
另外，JP-A-62-93227公開了用作抗真菌劑的化合物。再有，JP-A-2-275877公開了上述咪唑類化合物中有旋光活性的特定化合物對(duì)須發(fā)癬菌的抗真菌活性是其外消旋化合物的約1.4倍。
發(fā)明描述本發(fā)明的目的是提供包含與其外消旋化合物相比具有更卓越抗真菌活性的旋光活性化合物的抗真菌劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供旋光活性化合物、制備它們的方法和使用它們的方法。
本發(fā)明的這些和其它目的可通過(guò)含有作為活性成分的以下式(I)表示的R-(+)-(E)-[4-(2-氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈(下文稱為“化合物(A)”)或R-(-)-(E)-[4-(2，4-二氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈(下文稱為“化合物(B)”)或它們的可藥用的鹽，以及可藥用的載體或稀釋劑的藥用組合物來(lái)實(shí)現(xiàn)
其中R表示氫原子或氯原子。
另外，本發(fā)明的這些和其它目的可通過(guò)化合物(B)或其鹽來(lái)實(shí)現(xiàn)。
再有，本發(fā)明的這些和其它目的可通過(guò)制備化合物(B)的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)，該方法包括將下式(II)表示的具有旋光活性的甘醇衍生物或其等同物與下式(III)表示的化合物反應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)，
式II中X1和X2相同或不同，各自表示甲磺酰氧基、苯磺酰氧基、對(duì)甲苯磺酰氧基或鹵原子，
式III中M表示堿金屬原子。
此外，本發(fā)明的這些和其它目的可通過(guò)預(yù)防或治療真菌病的方法實(shí)現(xiàn)，該方法包括給需此預(yù)防或治療的人或動(dòng)物服用藥學(xué)上有效量的化合物(A)或化合物(B)，或者它們的可藥用鹽；以及可藥用載體或稀釋劑。
此外，本發(fā)明的這些和其它目的可通過(guò)應(yīng)用化合物(A)或化合物(B)，或者它們的可藥用鹽制備藥用組合物來(lái)實(shí)現(xiàn)。
實(shí)現(xiàn)發(fā)明的最佳方案具體的化合物(A)和化合物(B)如下所示。化合物(A)
化合物(B)
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，式(I)表示的化合物(A)或(B)和它們的可藥用鹽，即(R)-對(duì)映體對(duì)皮膚真菌，尤其是高敏感菌株的抗真菌活性比它們的外消旋混合物要高數(shù)倍，并且在任何文獻(xiàn)中未曾記載過(guò)的化合物(B)是新化合物，與其外消旋混合物相比具有卓越的未曾預(yù)料到的抗真菌活性。因而，完成了本發(fā)明。
化合物(A)和(B)尤其對(duì)紅色發(fā)癬菌是高度敏感的。它們的抗真菌活性是其外消旋混合物的2-4倍。
化合物(A)可通過(guò)例如JP-A-2-275877中所述方法制備?；衔?B)可采用下述方法制備。
式中X1和X2相同或不同，各自表示甲磺酰氧基、苯磺酰氧基、對(duì)甲苯磺酰氧基或鹵原子；M表示堿金屬原子。X1和X2表示的鹵原子的實(shí)例包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。M表示的堿金屬原子的實(shí)例包括鋰、鈉和鉀。
即，化合物(B)可以按JP-A-2-275877所述的相同方法，通過(guò)將式(II)表示的(S)構(gòu)型的旋光活性的甘醇衍生物或其等同物與式(III)表示的二硫醇鹽反應(yīng)來(lái)制備。
式(III)表示的二硫醇鹽可通過(guò)下面所示的1-氰甲基咪唑與二硫化碳在堿存在下于惰性溶劑中反應(yīng)來(lái)制備。
式中M如上述所定義。
任何惰性溶劑均可用于上述反應(yīng)，只要它們不抑制反應(yīng)的進(jìn)行。它們的實(shí)例包括醇類(如甲醇、乙醇、異丙醇)，極性溶劑(如二甲亞砜(DMSO)、二甲基甲酰胺、乙腈)，水和它們的混合溶劑。
堿的實(shí)例包括碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鈉和氫氧化鉀。它們可以固體或在惰性溶劑中的溶液形式使用。堿的量(mol)是1-氰甲基咪唑的量(mol)的2-8倍，優(yōu)選為4-6倍。
可使用與1-氰甲基咪唑等摩爾或過(guò)量的式(II)化合物。
反應(yīng)溫度在0-100℃，優(yōu)選為約室溫。反應(yīng)時(shí)間在0.5-24小時(shí)。
所得的化合物是幾何異構(gòu)體E和Z的混合物，所需的式(I)的E-異構(gòu)體可通過(guò)例如硅膠柱色譜、分級(jí)結(jié)晶進(jìn)行分離和純化。采用分級(jí)結(jié)晶和重結(jié)晶進(jìn)行純化的溶劑包括乙醇、乙酸乙酯、乙醚、己烷、丙酮和它們的混合溶劑，但不限于此。
式(II)表示的具有旋光活性的原料化合物可通過(guò)已知的下述方法1-3制備。方法1
式中X1和X2如上述所定義。
即，它們可通過(guò)(S)-1-(2，4-二氯苯基)乙烷-1，2-二醇(由2，4-二氯苯乙烯通過(guò)已知方法獲得[J.Org.Chem.Soc.，572768(1992)])與適宜的鹵化試劑(如亞硫酰氯、三溴化磷、四氯化碳/三苯基膦)或活化試劑(如甲磺酰氯、甲苯磺酰氯、苯磺酰氯)反應(yīng)制備。方法2
式中X表示氯原子或溴原子；并且X2如上述所定義。
如上所示，其中X1是氯原子或溴原子的式(II)化合物(即式(IIa)化合物)可通過(guò)下述方法制備使(R)-1-(2，4-二氯苯基)苯乙烯氧化物(由2，4-二氯苯乙烯通過(guò)已知方法獲得[J.Am.Chem.Soc，1137063(1991)])與鹵化氫試劑反應(yīng)制備式(IV)鹵代醇，然后該鹵代醇與適宜的鹵化試劑(如亞硫酰氯、三溴化磷、四氯化碳/三苯基膦)或活化試劑(如甲磺酰氯、甲苯磺酰氯、苯磺酰氯)反應(yīng)。方法3其中X2是氯原子或溴原子的式(II)化合物(即式(IIb)化合物)可通過(guò)下述方法3制備。
式中X表示氯原子或溴原子；并且X1如上述所定義。
即，所需化合物可通過(guò)式(V)鹵代醇(可由2，4-二氯苯甲酰甲基鹵通過(guò)已知方法合成[Modern Synthetic Methods，5115(1989)])與適宜的鹵化試劑(如亞硫酰氯、三溴化磷、四氯化碳/三苯基膦)或活化試劑(如甲磺酰氯、甲苯磺酰氯、苯磺酰氯)反應(yīng)制備。
本發(fā)明的組合物是抗真菌劑，可用于治療人或動(dòng)物的真菌感染。例如可使用它們治療由如發(fā)癬菌屬、念珠菌屬和曲霉屬真菌引起的局部真菌感染、粘膜真菌感染和全身性真菌感染。
化合物(A)、化合物(B)和它們的可藥用鹽各自可單獨(dú)使用或以包含化合物和可藥用載體或稀釋劑的組合物形式使用。可將它們配制成適于口服或非口服的制劑，例如液體制劑、片劑、乳劑、軟膏劑、霜?jiǎng)?、洗劑和泥敷劑?br> 給藥量可以是按照年齡、體重和給藥形式確定的任一常用劑量，但對(duì)成人的普通治療劑量為每日每公斤體重一般至少為0.05mg，優(yōu)選為0.5-50mg；可每日給藥一次或分?jǐn)?shù)次給藥。
例如以局部給藥形式的局部治療，則活性成分的濃度優(yōu)選為至少0 001％，更優(yōu)選為0.1-2％。治療量?jī)?yōu)選為30-100mg/cm2。
本發(fā)明的抗真菌劑可與其它抗真菌藥物或抗菌藥物，例如兩性霉素B、曲古霉素、宛氏菌素(varitotin)和克霉唑混合使用。
實(shí)施例本發(fā)明現(xiàn)通過(guò)下面的實(shí)施例、參考實(shí)施例、制劑實(shí)施例和試驗(yàn)實(shí)施例得以更詳細(xì)地說(shuō)明，但應(yīng)該清楚，它們并不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限制。除非另外說(shuō)明，所有的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)。
實(shí)施例1通過(guò)方法3制備化合物(B)1-(a).(S)-1-(2，4-二氯苯基)-2-溴乙醇的制備
向5ml無(wú)水四氫呋喃(THF)中加入300mg(S)-3，3-二苯基-1-甲基四氫-1H，3H-吡咯并[1，2-c][1，3，2]氧氮硼雜環(huán)戊烯，然后在-20℃下滴加8ml1.0M硼烷-THF溶液。在同樣溫度下，再滴加2.7g 2，4-二氯苯甲酰甲基溴的8ml THF溶液。將所得混合物加熱到室溫，然后攪拌3小時(shí)。之后，加入10ml甲醇以分解過(guò)量硼烷，然后將反應(yīng)混合物傾入水中，用乙醚萃取。有機(jī)層用水洗滌并經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥。減壓蒸除溶劑，殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純化(乙酸乙酯/正己烷＝1/3)得到2.5g所需產(chǎn)物，旋光純度為80％對(duì)映體過(guò)量。1-(b).(S)-[1-(2，4-二氯苯基)-2-溴乙基]甲磺酸酯的制備
在30ml二氯甲烷中溶解1.6g(S)-1-(2，4-二氯苯基)-2-溴乙醇，然后往該溶液中加入660mg三乙胺。再在冰冷卻下，往其中滴加750mg甲磺酰氯。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，該反應(yīng)混合物用水洗滌并經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥。減壓蒸除溶劑，獲得1.9g所需化合物的粗品。所得產(chǎn)物無(wú)需純化即可用于下步反應(yīng)。1-(c).(R)-(-)-(E)-[4-(2，4-二氯苯基)-1，3-二硫戊環(huán)-2-亞基]-1-咪唑基乙腈(化合物(B))的制備
向10ml DMSO中加入440mg氫氧化鉀，并在水浴冷卻下往其中滴加由300mg 1-氰甲基咪唑和210mg二硫化碳溶于5ml DMSO中制備的溶液，然后在室溫?cái)嚢?小時(shí)制備二硫醇鹽溶液。之后在水浴冷卻下，將所得二硫醇鹽溶液滴加到由950mg(S)-1-[(2，4-二氯苯基)-2-溴乙基]甲磺酸酯溶于10ml DMSO制備的溶液中。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，將反應(yīng)混合物傾入冰水中，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥。減壓蒸除溶劑。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜(乙酸乙酯(AcOEt)/正己烷＝2/1)純化。所得結(jié)晶在乙酸乙酯-正己烷的混合溶劑中重結(jié)晶，得到350mg所需產(chǎn)物，旋光純度為95％對(duì)映體過(guò)量。
實(shí)施例2采用方法1制備化合物(B)2-(a).(S)-1-(2，4-二氯苯基)-乙烷-1，2-二甲磺酸酯的制備
將通過(guò)已知方法[J.Org.Chem.，572766(1992)]合成的(S)-1-(2，4-二氯苯基)-1，2-乙二醇(1.5g；旋光純度為98％對(duì)映體過(guò)量)和3.1g三乙胺溶于50ml二氯甲烷并在冰冷卻下往該溶液中滴加3.3g甲磺酰氯。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，該反應(yīng)混合物用水洗滌，有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥。減壓蒸除溶劑得到2.6g所需化合物的粗產(chǎn)物。所得粗產(chǎn)物無(wú)需純化即可用于下步反應(yīng)。2-(b).(R)-(-)-(E)-[4-(2，4-二氯苯基)-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈(化合物(B))的制備
向20ml DMSO中加入1.09g氫氧化鉀，并在水浴冷卻下往其中滴加由750mg 1-氰甲基咪唑和520mg二硫化碳溶于10ml DMSO中制備的溶液，然后在室溫?cái)嚢?小時(shí)制備二硫醇鹽溶液。之后在水浴冷卻下，將所得二硫醇鹽溶液滴加到由2.61g(S)-1-[(2，4-二氯苯基)乙烷-1，2-二甲磺酸酯粗產(chǎn)物溶于20ml DMSO制備的溶液中。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，將反應(yīng)混合物傾入冰水中，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥。減壓蒸除溶劑。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜(AcOEt/正己烷＝2/1)純化。所得結(jié)晶在乙酸乙酯-正己烷的混合溶劑中重結(jié)晶，得到1.2g所需產(chǎn)物，旋光純度為99％對(duì)映體過(guò)量。在上面的實(shí)施例中，旋光純度用旋光活性HPLC柱(Chiralcel OD(注冊(cè)商標(biāo)，Daicel Chemical Industry Ltd.))通過(guò)HPLC的面積百分?jǐn)?shù)計(jì)算。
參考實(shí)施例1(±)-(E)-[4-(2-氯苯基)-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈的制備采用JP-A-62-93227的實(shí)施例1所述的方法合成，獲得熔點(diǎn)為143.4℃和純度為99.4％的外消旋化合物。
參考實(shí)施例2R-(+)-(E)-[4-(2-氯苯基)-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈(化合物(A))的制備將參考實(shí)施例1獲得的外消旋化合物(100g)加熱溶于700-800ml丙酮中制備過(guò)飽和溶液。往該溶液中加入采用JP-A-2-275877公開的方法得到的10mg旋光活性物質(zhì)晶種隨后冷至25℃，并放置4-15小時(shí)，在該期間用旋光活性柱通過(guò)HPLC分析結(jié)晶溶液的組成并測(cè)定濾點(diǎn)(filtrationpoint)。過(guò)濾收集析出的結(jié)晶并重復(fù)該過(guò)程，獲得25g旋光純度為99.0％對(duì)映體過(guò)量的R-對(duì)映體。在上面的實(shí)施例中，旋光純度用旋光活性HPLC柱(Chiralcel ODR(注冊(cè)商標(biāo)，Daicel Chemical Industry Ltd.))通過(guò)HPLC的面積百分?jǐn)?shù)計(jì)算。
制劑實(shí)施例1化合物(A)或(B) 10份硬脂酸鎂 10份乳糖 80份將上述成分均勻混合并將混合物制成細(xì)粉或細(xì)顆粒，得到粉末制劑。
制劑實(shí)施例2化合物(A)或(B)50份淀粉 10份乳糖 15份乙基纖維素20份聚乙烯醇 5份水30份將上述成分均勻混合并捏和，然后將混合物磨碎。將所得顆粒過(guò)篩，得到顆粒制劑。
制劑實(shí)施例3化合物(A)或(B)0.5份非離子表面活性劑 2.5份生理鹽水溶液 97份將上述成分加熱并混合，然后滅菌制得注射液。
制劑實(shí)施例4化合物(A)或(B)0.01份0.5％羧甲基纖維素 99.99份將前者懸浮在后者中，得到懸浮液。
制劑實(shí)施例5化合物(A)或(B)1份聚乙二醇400 99份將上述成分混合以溶解化合物(A)或(B)，得到涂覆用的液體制劑。
制劑實(shí)施例6化合物(A)或(B) 2份聚乙二醇400 49份聚乙二醇400049份將上述成分加熱混合以溶解化合物(A)或(B)，將得到的混合物冷卻獲得軟膏。
制劑實(shí)施例7化合物(A)或(B) 3份1，2-丙二醇 5份硬脂酸甘油酯5份鯨蠟5份肉豆蔻酸異丙酯 10份吐溫4份將上述成分的混合物加熱，然后冷卻，在攪拌下加入68份水，得到霜?jiǎng)?br> 制劑實(shí)施例8將1份化合物(A)或(B)、5份芐醇、30份乙醇和47份丙二醇混合以溶解化合物(A)或(B)。然后往該溶液中加入含有1份Hiviswako 104(注冊(cè)商標(biāo)，Wako Junyaku Co.，Ltd.)和15份純水的水溶液，得到均勻溶液。之后，攪拌下加入1份二異丙醇胺，獲得凝膠制劑。
制劑實(shí)施例9將1份化合物(A)或(B)溶于5份芐醇和5份癸二酸二乙酯中，往其中加入5份鯨蠟醇、6份硬脂醇、1份山梨醇單硬脂酸酯和8份聚氧乙烯單硬脂酸酯，然后加熱到70℃使其溶解。向保持于70℃的所得均勻溶液中加入70℃的純水，然后攪拌下冷卻，得到霜?jiǎng)┙M合物。
試驗(yàn)實(shí)施例1體外抗發(fā)癬菌屬的活性使用由1％bactopeptone和4％葡萄糖的Sabouraud’s葡萄糖液體培養(yǎng)基，通過(guò)兩倍大液體培養(yǎng)基稀釋法測(cè)定最低抑制濃度(MIC)。向盛有9.8ml液體培養(yǎng)基的每只試管中加入0.1ml溶于DMSO的試驗(yàn)化合物和0.1ml分生孢子懸浮液(1×106分生孢子/ml)。在27℃培養(yǎng)7天后，觀察真菌的生長(zhǎng)。測(cè)定作為防止可見真菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度MIC。結(jié)果如表1所示。
表1MIC(μg)/ml菌株 化合物 化合物 外消旋化合物 外消旋化合物 TBF(A) (B)(A) (B)AIFO 54660.02 0.02 0.040.04 0.02IFO 58090.005 0.0050.010.02 0.01IFO 58100.005 0.0050.010.01 0.005IFO 58110.02 0.01 0.040.04 0.01IFO 59290.01 0.01 0.020.02 0.01TIMM 11890.01 0.01 0.040.02 0.01TIMM 18140.02 0.02 0.040.04 0.01TIMM 18150.02 0.02 0.040.04 0.02TIMM 18170.02 0.01 0.040.02 0.01TIMM 27890.005 0.0025 0.010.01 0.0025BIFO 54670.00130.0025 0.005 0.005 0.005IFO 58070.00250.0025 0.010.01 0.005IFO 58080.00250.0025 0.010.01 0.005IFO 62030.00250.0013 0.005 0.005 0.0025IFO 62040.00250.0025 0.010.01 0.005IFO 91850.00130.0013 0.0025 0.0025 0.0025TIMM 18220.00130.00063 0.005 0.0025 0.0025TIMM 18230.00250.0013 0.010.05 0.0025TIMM 18240.00130.0013 0.005 0.005 0.0013TIMM 18300.00063 0.00063 0.0013 0.0013 0.00063
(注)A須發(fā)癬菌B紅色發(fā)癬菌TBF(E)-N-(6，6-二甲基-2-庚-4-炔基)-N-甲基-1-萘甲胺鹽酸鹽(通用名特比萘芬)外消旋化合物(A)和(B)分別是化合物(A)和(B)的外消旋混合物。
試驗(yàn)實(shí)施例2化合物(A)對(duì)豚鼠實(shí)驗(yàn)性足癬菌病的療效用重量為400-620g的雄性Hartley豚鼠(Japan SLC Inc.)進(jìn)行感染研究。園紙片(1.5mm厚度×8mm直徑)的一面用一片鋁箔覆蓋，另一面隨意地吸附接種懸浮液。紙片用50μl接種懸浮液(須發(fā)癬菌TIMM 2789，1×108分生孢子/ml)浸漬，然后用彈性膠帶固定于動(dòng)物足底部。感染后第7天取下紙片。從感染后第10天開始，將溶于PEG 400的藥物(0.1ml/孔)局部施用于豚鼠的整個(gè)足底部，每天一次，連續(xù)施用3天。最后一次治療5天后，從每只豚鼠足底部的皮膚組織和所有動(dòng)物的相應(yīng)跗骨取下一小塊(2×2mm)。將從每只足部取下的10塊皮膚放入含抗生素的Sabouraud’s葡萄糖瓊脂培養(yǎng)板中并在27℃培養(yǎng)14天。有真菌生長(zhǎng)的皮膚塊被認(rèn)為是培養(yǎng)陽(yáng)性，有多于一塊培養(yǎng)陽(yáng)性皮膚塊的足部(足底部和跗骨)被認(rèn)為是真菌陽(yáng)性。另外，根據(jù)培養(yǎng)陽(yáng)性皮膚塊的數(shù)量記分評(píng)估感染強(qiáng)度。即相應(yīng)于所取的10塊皮膚中培養(yǎng)陽(yáng)性的數(shù)目分別記為+10，+9，+8，+7，+6，+5，+4，+3，+2，+1或0。通過(guò)費(fèi)希爾恰當(dāng)概率試驗(yàn)和Mann-Whitney’s U-檢驗(yàn)分別進(jìn)行真菌陽(yáng)性足比率和平均感染強(qiáng)度的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果如表2所示。
表2真菌陽(yáng)性率 平均感染強(qiáng)度試驗(yàn)組 陽(yáng)性足數(shù)/總足數(shù) 足底部 跗骨0.5％化合物(A)2/10(20)A，B)+0.3A，B)0A，B)1％化合物(A) 0/10(0)A，B，C)0A，B)0A，B)1％外消旋化合物(A)4/10(40)A，B)+0.6A，B)+0.2A，B)未處理組 10/10(100) +7.7 +5.4PEG 400 10/10(100) +7.9 +4.8(注)A未處理的對(duì)照組p＜0.01BPEG 400處理的對(duì)照組P＜0.01C1％外消旋化合物(A)處理的對(duì)照組p＜0.05。
未處理組的真菌陽(yáng)性率為100％，在所有感染的足部均檢測(cè)到真菌。足底部的平均感染強(qiáng)度較高，為+7.7；跗骨為+5.4。因此，表明跗骨的感染程度較足底部低。在PEG 400處理組也獲得的幾乎相同的結(jié)果，未觀察到溶劑有治療效果。與未處理組和PEG400處理組相比，1％外消旋化合物(A)處理組顯示出明顯療效，但真菌陽(yáng)性率仍為40％，足底部和跗骨的平均感染強(qiáng)度分別為+0.6和+0.2，在接種的10只足中有4只檢測(cè)到了真菌。在0.5％化合物(A)處理組中，真菌陽(yáng)性率為20％，表明化合物(A)的療效是1％外消旋化合物(A)的兩倍；在1％化合物(A)處理組中，產(chǎn)生了顯著的療效，所有的感染足均為真菌陰性，即獲得了真菌學(xué)上認(rèn)為的徹底治愈。
由化合物(A)和外消旋化合物(A)的比較結(jié)果可清楚地看出化合物(A)的療效顯著高于相同濃度外消旋化合物(A)的療效，即當(dāng)0.5％化合物(A)和1％外消旋化合物(A)(就活性成分(A.I.)而言，它們的濃度是相同的)相比時(shí)，化合物(A)的療效比1％外消旋化合物(A)高兩倍多。由對(duì)試驗(yàn)用的須發(fā)癬菌TIMM 2789的MIC可清楚地看出，化合物(A)的體外抗真菌活性是外消旋化合物(A)的4倍，它們對(duì)真菌的不同作用還反映在體內(nèi)感染模型的治療試驗(yàn)中。
試驗(yàn)實(shí)施例3體外抗白假絲酵母的真菌活性用嗎啉代丙磺酸緩沖至總濃度為0.165M(pH 7.0)的RPMI 1640，通過(guò)兩倍大液體培養(yǎng)基稀釋法測(cè)定MIC。往平底微滴定板的每孔中吸移100μl酵母細(xì)胞混懸液(1-5×103細(xì)胞/ml)和100μl含化合物的培養(yǎng)基。在35℃培養(yǎng)48小時(shí)后，在630nm測(cè)定每孔的濁度。測(cè)定抑制對(duì)照真菌生長(zhǎng)達(dá)80％(如測(cè)量濁度增加)的最低藥物濃度為MIC。結(jié)果如表3所示。
表3MIC(μg/ml)菌株 化合物 化合物 外消旋化合 外消旋化TBFFCZ(A)(B)合物(A) 合物(B)IFO 0197 0.0625 0.0625 0.25 0.125＞32.0 0.25IFO 0579 0.0313 0.0313 0.0625 0.0625 ＞32.0 0.125IFO 1269 0.0625 0.0625 0.1250.0625 4.0 0.25IFO 1270 0.250.251.0 0.25 ＞32.0 0.25IFO 1385 0.0625 0.0625 0.25 0.125＞32.0 0.25IFO 1386 0.125 0.125 0.25 0.25 ＞32.0 0.5TIMM 3163 4.0 16.016.0 ＞32.0 ＞32.0 16.0TIMM 3164 0.250.5 0.5 0.5 ＞32.0 2.0TIMM 3165 2.0 2.0 4.0 4.0 ＞32.0 ＞32.0TIMM 3166 1.0 1.0 2.0 4.0 ＞32.0 8.0(注)FCZ2-(2，4-二氟苯基)-1，3-雙-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙醇(通用名氟康唑)試驗(yàn)實(shí)施例4化合物(B)抗煙曲霉的體外真菌活性使用cacitone瓊脂通過(guò)兩倍瓊脂稀釋法測(cè)定MIC，所示casitone瓊脂組成為0.9％bacto-casitone、1％bacto-酵母提取物、2％葡萄糖、0.1％KH2PO4、0.1％Na2HPO4、1％Na3C6H5O7和1.6％瓊脂。將每份接種物菌環(huán)量劃線接種到含有化合物的瓊脂平板上，在35℃培養(yǎng)48小時(shí)后觀察真菌的生長(zhǎng)。測(cè)定防止可見真菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度MIC。結(jié)果如表4所示。
表4MIC(μg/ml)菌株化合物 化合物 外消旋化 外消旋化 TBZITZ(A) (B) 合物(A) 合物(B)TIMM 0063 0.00063 0.00063 0.0013 0.00131.28 0.04TIMM 0078 0.00063 0.00063 0.0013 0.00131.28 0.04TIMM 1728 0.0013 ≤0.00031 0.0013 0.00063 1.28 0.08TIMM 1767 0.0013 0.00063 0.0025 0.00131.28 0.08(注)ITZ(±)-1-仲丁基-4-[對(duì)-[4-[對(duì)-[[2R”，4S”]-2-(2，4-二氯苯基)-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基甲基)-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基-Δ2-1，2，4-三唑啉-5-酮(通用名依曲康唑)
權(quán)利要求
1.藥用組合物，它含有下式(I)表示的R-(+)-(E)-[4-(2-氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或R-(-)-(E)-[4-(2，4-二氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或它們的可藥用鹽作為活性成分，以及可藥用載體或稀釋劑，
其中R表示氫原子或氯原子。
2.權(quán)利要求1的藥用組合物，其中活性成分是R-(+)-(E)-[4-(2-氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或其可藥用鹽。
3.權(quán)利要求1的藥用組合物，其中活性成分是R-(-)-(E)-[4-(2，4-二氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或其可藥用鹽。
4.R-(-)-(E)-[4-(2，4-二氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或其鹽。
5.制備下式(B)表示的R-(-)-(E)-[4-(2，4-二氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈的方法
該方法包括將下式(II)表示的具有旋光活性的甘醇衍生物或其等同物與下式(III)表示的二硫醇鹽反應(yīng)
式II中X1和X2相同或不同，各自表示甲磺酰氧基、苯磺酰氧基、對(duì)甲苯磺酰氧基或鹵原子，
式III中M表示堿金屬原子。
6.預(yù)防或治療真菌病的方法，該方法包括給需此預(yù)防或治療的人或動(dòng)物施用藥學(xué)上有效量的下式(I)表示的R-(+)-(E)-[4-(2-氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或R-(-)-(E)-[4-(2，4-二氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或它們的可藥用鹽；和任選的可藥用載體或稀釋劑，
其中R表示氫原子或氯原子。
7.權(quán)利要求6的方法，其中給患者施用的是R-(+)-(E)-[4-(2-二氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或其可藥用鹽。
8.權(quán)利要求6的方法，其中給患者施用的是R-(-)-(E)-[4-(2，4-二氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或其可藥用鹽。
9.下式(I)表示的R-(+)-(E)-[4-(2-氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或R-(-)-(E)-[4-(2，4-二氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或它們的可藥用鹽在制備藥用組合物中的應(yīng)用，
其中R表示氫原子或氯原子。
10.R-(+)-(E)-[4-(2-氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或其可藥用鹽在制備藥用組合物中的應(yīng)用。
11.R-(-)-(E)-[4-(2，4-二氯苯基-1，3-二硫雜環(huán)戊烷-2-亞基]-1-咪唑基乙腈或其可藥用鹽在制備藥用組合物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了可用作藥物的R－(+)－(E)－[4－(2－氯苯基－1,3－二硫雜環(huán)戊烷－2－亞基]－1咪唑基乙腈、R－(－)－(E)－[4－(2,4－二氯苯基－1,3－二硫雜環(huán)戊烷－2－亞基]－1－咪唑基乙腈和它們的可藥用鹽。還公開了制備它們的方法和使用它們治療真菌病的方法。
文檔編號(hào)A61P31/10GK1194582SQ96196659
公開日1998年9月30日 申請(qǐng)日期1996年7月5日 優(yōu)先權(quán)日1995年7月8日
發(fā)明者児玉浩宜, 庭野吉己, 金井和夫, 吉田正德 申請(qǐng)人:日本農(nóng)藥株式會(huì)社