專利名稱：抑制黑素瘤的方法
背景技術(shù)：
黑素瘤是一種主要位于皮膚表層的黑素細(xì)胞惡性瘤。黑素瘤主要發(fā)生在成人身上，一般由良性帶顏色的痣惡化而成。任何面積增大，顏色變化或發(fā)癢等癥狀都預(yù)示著可能發(fā)生了惡性變化。黑素瘤引起的死亡一般約占所有癌癥死亡中的1％。除在婦女中的肺癌外，黑素瘤的發(fā)病速度較其它瘤快。
黑素瘤的最大危險是其病毒通過淋巴管和血液循環(huán)轉(zhuǎn)移到人體深層部位。人體的任何器官都可能被轉(zhuǎn)移上，主要是轉(zhuǎn)移到肺和肝上。盡管采用深切技術(shù)有時能令患者存活一段時間，但已轉(zhuǎn)移到深層部位的黑素瘤很難用一般的治療方法治愈。長期以來，黑素瘤病人成了探索新的化學(xué)療法或改進(jìn)生物技術(shù)療法的臨床試驗(yàn)者。
目前，經(jīng)過近20年的試驗(yàn)，Dacarbazine(DTIC)被FDA認(rèn)證為治療黑素瘤的唯一制劑，組合使用化療制劑，療效并不比單獨(dú)使用Dacarbazine療效好。但只有15～25％的患者用Dacarbazine后有反應(yīng)，且僅有5％的人治愈。因此有必要尋找更有效的治療方式及另外的黑素瘤抑制劑。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了抑制黑素瘤的方法，該方法包括給病人單獨(dú)服用有效量的通式(I)的化合物，
或其藥用鹽或其溶劑化物，或與一種或多種黑素瘤抑制劑一起服用。式(I)中R1和R2為獨(dú)立H，-CH3，
或
其中Ar為任選取代的苯基；R2選自吡咯烷、六亞甲基氨和哌啶子基。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及發(fā)現(xiàn)了有抑制黑素瘤作用的2-苯基-3-芳酰基苯并噻吩(苯并噻吩類)，其通式為(I)。
本發(fā)明提供了有效抑制黑素瘤的方法給病人單獨(dú)服用有效量的通式I的化合物，或其藥用鹽或其溶劑化物，或與一種或多種黑素瘤抑制劑一起服用。
“抑制”一詞本意包含阻止、預(yù)防、限制、減慢、停止或逆轉(zhuǎn)等，本發(fā)明中其意既包含藥物治療，又包含適當(dāng)?shù)念A(yù)防作用。
本發(fā)明中raloxifene是化合物I的鹽酸鹽，R1和R3均為H，R2為1-哌啶基，它是一個核調(diào)節(jié)分子。已證明raloxifene結(jié)合在雌激素受體上，其作用是抗雌激素，因?yàn)樗茏璧K雌激素激活子宮，誘發(fā)乳腺癌。事實(shí)上，在某些細(xì)胞中raloxifene確實(shí)阻礙了雌激素發(fā)揮作用，但在其它細(xì)胞中，雌激素能激活的基因，它也能激活，顯示出與雌激素相同的藥學(xué)特性，如治療骨質(zhì)疏松、高血脂等。因此，raloxifene既有抗雌激素的性質(zhì)，又有主動劑-拮抗劑的性質(zhì)。raloxifene表現(xiàn)出與雌激素不同的特性，現(xiàn)在被認(rèn)為是raloxifene-雌激素受體絡(luò)合物激活和/或抑制的基因，與雌激素-雌激素受體激活和/或抑制的基因不同。所以，盡管raloxifene與雌激素利用和競爭相同的受體，但二者對基因控制的藥學(xué)結(jié)果卻是難以預(yù)測，彼此也不相同。
一般該化合物加入賦形劑、稀釋劑或載體，壓縮成片劑，或酏劑或配制成溶液，以便患者口服，或肌肉或靜脈注射。該化合物可穿透皮膚，因而可制成緩釋劑等形式。
合成本發(fā)明中的化合物可參閱下列美國專利，專利號為4133814，4418068，4380635。一般以具有一個6-羥基和一個2-(4-羥基苯基)的苯并[b]噻吩為原料，經(jīng)保護(hù)性?；?，去保護(hù)得到通式1的化合物。上面提到的美國專利提供了合成這些化合物的實(shí)例。選擇性取代的苯基包括苯基和一重或雙重取代的苯基，取代基分別為C1-C6烷基，C1-C4烷氧基，羥基、硝基、氯、氟或三(氯或氟)甲基。
本發(fā)明方法中的化合物與大量的有機(jī)和無機(jī)酸及堿反應(yīng)，形成適合藥用的酸和堿加成鹽，及生理上可用的鹽，它們常用在藥物化學(xué)中。典型使用的無機(jī)酸包括鹽酸、氫溴酸、碘化氫、硝酸、硫酸、磷酸、連二磷酸等、所用有機(jī)酸有脂肪族單羧酸、二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基烷酸和羥基鏈烷雙酸、芳香酸、脂肪族磺酸及芳香族磺酸。適合藥用的鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、O-乙?；郊姿猁}、2-萘苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、β-羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，4-二酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、氯化物、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、延胡索酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、脲酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽，苯酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、四鄰苯二甲酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯丙酸鹽、水揚(yáng)酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對溴苯磺酸鹽、氯代苯磺酸鹽、乙基磺酸鹽、2-羥乙基磺酸鹽、甲基磺酸鹽、1-萘磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。最好是用鹽酸鹽。
適合藥用的酸及鹽主要由通式I的化合物與等量或過量的酸反應(yīng)而得。反應(yīng)物一般置于共溶溶劑，如乙醚或苯中混合。約1小時至10天內(nèi)產(chǎn)物鹽從溶液中沉淀出來，過濾分離之或用常規(guī)方法除去溶劑，將鹽分離出來。
合成鹽常用的堿有氫氧化銨、堿金屬及堿土金屬的氫氧化物、碳酸鹽及伯、仲、叔脂肪族胺類、脂肪族二胺類。主要用的堿有氫氧化銨、碳酸鉀、甲胺、二乙胺、乙二胺及環(huán)己胺。
適于藥用的鹽的溶解性比其母體化合物的溶解性好，因而更適合于配制成液體或乳劑。
配制藥方已有成熟的技術(shù)。例如化合物與普通的賦形劑、稀釋劑或載體可制成片劑、膠囊、懸浮液、粉末等。適合于這類制劑的賦形劑、稀釋劑及載體包括填料和增容劑，如淀粉、糖、甘露糖醇及硅衍生物；粘合劑如羧甲基纖維素及其它纖維素衍生物，如藻酸鹽、明膠及聚乙烯吡咯烷酮；潤濕劑如甘油；粉碎劑如碳酸鈣和碳酸氫鈉；溶解抑制劑如石蠟；加速吸收劑如季銨鹽化合物；表面活性劑如十六烷醇、硬脂酸甘油單酯；吸附載體如高嶺土和膨潤土；潤滑劑如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂和固態(tài)聚乙烯醇。
這些化合物也可配制成酏劑，或方便的口服液，或適于非腸道使用的溶液，如肌肉，皮下或靜脈途徑。另外，化合物也適合配成緩釋片劑等。配制的制劑能在一段時間內(nèi)僅在或優(yōu)先在腸道的特定部位釋放活性組分。包膜、外殼、保護(hù)基質(zhì)可用聚合物材料或蠟做成。
本發(fā)明介紹了利用通式I的化合物抑制黑素瘤，抑制方式和特殊劑量由醫(yī)生根據(jù)病人病情的嚴(yán)重程度，服用方式和其它因素來決定。一般來說，適用而有效的日劑量約為0.1至1000毫克，常用量為50至200毫克。病人每天服用一至三次，若需要可增加次數(shù)，這樣可在一段時間內(nèi)充分有效地抑制黑素瘤。本發(fā)明還包括通式I的化合物與一種或多種黑素瘤抑制劑一起服用。這類抑制劑包括Cisplatin、Dacarbazine和亞硝基脲氮芥。
通式I的化合物常以酸加成鹽的形式服用，如同慣常服用帶堿性基團(tuán)如哌啶環(huán)的藥。那樣口服也有好處。為此口服劑量如下制劑下列制劑中的“活性組分”指通式I的化合物。制劑1膠囊利用下面的制劑制成硬膠囊組分 量(毫克/囊)活性組分 0.1-1000淀粉NF 0-650淀粉流動性粉末 0-650硅酮流體350厘沲0-15將各組分混合，過45目美國篩，填充進(jìn)硬膠囊。含raloxifene的制劑實(shí)例如下制劑2raloxifene膠囊組分量(毫克/囊)raloxifene 1淀粉NF 112淀粉流動性粉末 225.3硅酮流體350厘沲 1.7制劑3raloxifene膠囊組分量(毫克/囊)raloxifene 5淀粉NF 108淀粉流動性粉末 225.3硅酮流體350厘沲 1.7制劑4raloxifene膠囊組分量(毫克/囊)raloxifene 10淀粉NF 103淀粉流動性粉末 225.3硅酮流體350厘沲 1.7制劑5raloxifene膠囊組分量(毫克/囊)raloxifene 50淀粉NF 150淀粉流動性粉末 397硅酮流體350厘沲 3.0上面的制劑可根據(jù)合理的變化作調(diào)整。用下列組分配制的片劑制劑如下制劑6片劑組分 量(毫克/片)活性組分 0.1-1000纖維素微晶 0-650二氧化硅 0-650硬脂酸 0-15各組分混合后壓縮成片劑。另一含0.1至1000毫克活性組分的片劑制劑如下制劑7片劑組分 量(毫克/片)活性組分 0.1-1000淀粉 45纖維素微晶 35聚乙烯吡咯烷酮(10％的水溶液) 4羧甲基纖維素鈉 4.5硬脂酸鎂 0.5滑石 1活性組分、淀粉和纖維素過45目美國篩，混合均勻。聚乙烯吡咯烷酮溶液與上述粉末混合，過14目美國篩，得到的粒劑在50～60℃烘干后過18目美國篩。羧甲基纖維素鈉、淀粉、硬脂酸鎂和滑石混合，過60目美國篩后與粒劑混合，在片劑機(jī)上被壓制成片劑。
每5毫升含0.1至1000毫克藥劑的懸浮液制劑如下制劑8懸浮液組分 量(毫克/5毫升)活性組分 0.1-1000毫克羧甲基纖維素鈉50毫克糖漿 1.25毫克苯甲酸溶液0.10毫升香料 適量顏料 適量純凈水5毫升活性組分過45目美國篩，與羧甲基纖維素鈉及糖漿混合成糊狀.苯甲酸溶液、香料及顏料用少許水稀釋，加入到上述糊狀物中，邊加邊攪加入足量的水定容。
試驗(yàn)用細(xì)胞群繁殖法試驗(yàn)通式I的化合物的活性。在試驗(yàn)通式I的化合物短時間曝露在黑素瘤細(xì)胞上產(chǎn)生的作用時，將黑素瘤細(xì)胞的單細(xì)胞懸浮液，以每培養(yǎng)皿20000個細(xì)胞，培育到60毫米組織培養(yǎng)皿中(Corning，Corning NY)，允許它們接觸2至4小時。將化合物加入培養(yǎng)皿中，孵育1小時，然后用磷酸鹽緩沖鹽水(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)清洗三次，通過受胰蛋白作用收集細(xì)胞，再洗一次以除去藥物，重新懸浮到5毫升含0.3％瓊脂液的全培養(yǎng)液中(Difco，Detroit，MI)。懸浮液混合均勻，等分成三份，以每培養(yǎng)皿1毫升取樣到預(yù)制的培養(yǎng)皿中，底層有固化的1％瓊脂糖。室溫下固化，并在37℃、增濕5％二氧化碳的條件下孵育。5天以后對連續(xù)細(xì)胞線，或7至14天以后對初級細(xì)胞，計數(shù)出大于125微摩爾/升的細(xì)胞群。
在試驗(yàn)通式I的化合物持續(xù)曝露在黑素瘤細(xì)胞上產(chǎn)生的作用時，以每毫升4000個細(xì)胞，將黑素瘤細(xì)胞懸浮于0.3％瓊脂液中(Difco，Detroit，MI)，從中取樣加入到含通式I的化合物和全培養(yǎng)液的試管里，如RPMI1640培養(yǎng)液(Irving Scientific，Santa Ana，CA)含10％胎牛血清(Hyclone，Logan，UT)、50微克/毫升慶大霉素(Gemini Bio-Products，Calabasas，CA)、2毫摩爾/升L-谷氨酰胺、10納摩爾/升氫化可的松、5微克/毫升胰島素、5微克/毫升轉(zhuǎn)鐵球蛋白、10納摩爾/升雌甾二醇和5納克/毫升硒(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)，懸浮液混合均勻，等分成三份，以每培養(yǎng)皿1毫升取樣至預(yù)制的培養(yǎng)皿中，底層含固化的1％瓊脂糖。室溫下固化，在37℃、增濕5％二氧化碳的條件下孵育。5天以后對連續(xù)細(xì)胞線，或7至14天以后對初級細(xì)胞，計數(shù)出大于125微摩爾/升的細(xì)胞群。
上述試驗(yàn)中至少有一個試驗(yàn)表明化合物的活性可用于抑制黑素瘤。
權(quán)利要求
1.一種抑制黑素瘤的方法，包括給需要的病人單獨(dú)服用有效量的通式I的化合物，
或其藥用鹽或其溶劑化物，或與一種或多種黑素瘤抑制劑一起服用，式(I)中R1和R3為獨(dú)立H，-CH3，
或
其中Ar為任選取代的苯基，R2選自吡咯烷、六亞甲基氨和哌啶子基。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所說的化合物為其鹽酸鹽。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所說的化合物是
或其鹽酸鹽。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所說的化合物與一種或多種cisplatin、dacarbazine或亞硝基脲氮芥一起服用。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所說的黑素瘤是轉(zhuǎn)移性的。
全文摘要
一種抑制黑素瘤的方法,包括給病人單獨(dú)服用有效量的通式(Ⅰ)的化合物,或單獨(dú)服用適合藥物的(Ⅰ)的鹽或其溶劑化合物,或與一種或多種黑素瘤抑制劑一起服用。(Ⅰ)中R
文檔編號A61K31/381GK1192141SQ96195876
公開日1998年9月2日 申請日期1996年6月6日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月6日
發(fā)明者R·A·斯維夫特 申請人:伊萊利利公司