專(zhuān)利名稱：抑制癌轉(zhuǎn)移的抗癌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及顯著阻止癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的抗癌劑，提供通過(guò)阻止癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，更完善地治愈癌癥的藥劑。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，治療癌癥的方法可采用給予各種抗癌劑的化學(xué)療法、促進(jìn)抗癌細(xì)胞的抗體產(chǎn)生的免疫療法、摘除癌細(xì)胞的外科療法及通過(guò)照射殺死癌細(xì)胞的放射線療法等。可是，由于這些治療方法的發(fā)展，外科手術(shù)和放射線療法在手段上受到限制，不能有效地阻止癌的轉(zhuǎn)移。另外，使用抗癌劑的化學(xué)療法是直接與癌細(xì)胞作用，但此時(shí)，往往對(duì)宿主的正常細(xì)胞也產(chǎn)生了有害的副作用，對(duì)于防止癌轉(zhuǎn)移不一定有效。進(jìn)而，通過(guò)提高宿主的免疫能力治療癌癥的免疫療法，在防止癌轉(zhuǎn)移上，也未發(fā)現(xiàn)良好效果?，F(xiàn)在治療原發(fā)癌的效果大幅度地提高了，但即使完全治愈了原發(fā)癌，因癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移引起死亡的情況也不少。對(duì)于抑制癌轉(zhuǎn)移，強(qiáng)烈希望開(kāi)發(fā)能阻止癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的藥劑?？烧J(rèn)為癌細(xì)胞是通過(guò)與腸系膜等組織細(xì)胞膜粘著而廣泛轉(zhuǎn)移的。
作為抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的醫(yī)藥品，在將裂 菌素與化學(xué)療劑并用時(shí)，可看到有抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的效果，但單獨(dú)抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的醫(yī)藥品還沒(méi)有市售的。另外，在特開(kāi)昭60-190791、特開(kāi)昭61-83125及特開(kāi)昭62-223124中公開(kāi)了關(guān)于唾液酸衍生物抑制癌轉(zhuǎn)移的作用，但未敘述本發(fā)明中作為有效成分使用的唾液酸或其衍生物及它們的抑制癌轉(zhuǎn)移作用。
要解決的課題本發(fā)明鑒于上述問(wèn)題，其目的在于提供可單獨(dú)抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的抗癌劑。另外，本發(fā)明的目的在于提供即使長(zhǎng)時(shí)間服用，副作用也小且毒性非常小的抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的抗癌劑。
解決課題的手段本發(fā)明是通過(guò)從自然界篩選抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的藥劑而完成的，涉及以唾液酸和/或其鹽作為有效成分的、有抑制癌轉(zhuǎn)移作用的抗癌劑。
另外，本發(fā)明涉及以唾液酸的聚合物和／或該聚合物的鹽作為有效成分的、有抑制癌轉(zhuǎn)移作用的抗癌劑。
上述唾液酸的聚合物，優(yōu)選的是由2分子～13分子唾液酸構(gòu)成的聚合物。由于可有效地分離到13聚體餾分，所以將上限定為13聚體?？梢灶A(yù)期2-13聚體的唾液聚合物及其鹽具有與唾液酸及其鹽相同的藥理效果。另外，作為唾液酸或其聚合物的鹽，可使用藥學(xué)上容許的各種鹽，作為唾液酸單體的鹽，可使用鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽，另外，作為唾液酸聚合物的鹽，可使用鈉鹽。另外，在本申請(qǐng)說(shuō)明書(shū)中所說(shuō)的唾液酸是指〔N-乙?；窠?jīng)氨酸〕。
本發(fā)明的制劑，可舉出片劑、膠囊及粉劑等口服劑、栓劑及陰道栓劑等經(jīng)皮吸收劑、皮下給藥、腹腔內(nèi)給藥及靜脈內(nèi)給藥的注射劑。在疾病的預(yù)防時(shí)，優(yōu)選口服劑，但在緊急情況時(shí)，優(yōu)選的是注射劑。
口服劑、經(jīng)皮吸收劑及注射劑的配制方法可以用通常的配制方法進(jìn)行，以下是舉出口服劑及注射劑的配制例。
1)注射劑的配制例將唾液酸或其聚合物50g，溶解在1000ml的蒸餾水(無(wú)熱原的)中后，使用苛性鈉溶液，將pH調(diào)到7.0，用通常方法進(jìn)行過(guò)濾、滅菌，接著，在無(wú)菌條件下封入20ml安瓿中，作成注射劑。
2)口服劑的配制例將唾液酸或其聚合物的60目過(guò)篩物280mg，填入3號(hào)明膠囊中，作成膠囊。
給藥量根據(jù)患者的年齡、性別、患病程度等而變化，所以不能一概而論，但作為含在注射劑中的唾液酸或其聚合物的鈉鹽，成人每日是1～2000mg/kg、優(yōu)選的是10～500mg/kg，1日給藥次數(shù)以1～6次為宜，靜脈點(diǎn)滴注射給藥也是有效的方法。
由于唾液酸大多分布在構(gòu)成人體的細(xì)胞表面上的糖鏈末端及血液、體液中存在的糖蛋白的糖鏈末端，所以是對(duì)于人體的不利影響極少的藥劑。
本發(fā)明所使用的唾液酸及其聚合物，可以是化學(xué)合成品、使用唾液酸醛縮酶或胞嘧啶單磷酸酯-N-乙?；窠?jīng)氨酸(CMP-NANA)合成酶及CMP-NANA轉(zhuǎn)移酶獲得的酶合成品，以及酸分解膽定酸(コロシン)得到的膽定酸的加水分解品中的任何一種，但本發(fā)明不受這些限制。
附圖簡(jiǎn)述

圖1是表示唾液酸對(duì)于癌細(xì)胞大鼠M細(xì)胞的粘著抑制效果。
圖2是表示唾液酸的相互作用對(duì)LFA-1抗體對(duì)癌細(xì)胞-大鼠M細(xì)胞的粘著抑制效果的影響。
實(shí)施發(fā)明的最佳方案按照本發(fā)明，該抗癌劑中作為有效成分所含的唾液酸、唾液酸鹽、唾液酸的聚合物、唾液酸聚合物的鹽，可抑制癌細(xì)胞與腸系膜等外的細(xì)胞膜粘著，由此防止癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。另外，作為有效成分，唾液酸、唾液酸鹽、唾液酸聚合物以及唾液酸聚合物鹽可單獨(dú)使用，另外，也可將其2種以上組合使用。
通過(guò)本發(fā)明的抗癌劑，可有效地抑制癌轉(zhuǎn)移。
實(shí)施例本發(fā)明者們采用極惡性癌細(xì)胞-大鼠腹水性肝癌粘著在大鼠腸系膜的系統(tǒng)作為測(cè)定癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制作用的模型系統(tǒng)，使用更簡(jiǎn)便的手法的細(xì)胞系。前者的癌細(xì)胞使用AH66F-細(xì)胞，后者的腸系膜細(xì)胞使用M-細(xì)胞。
在使用上述測(cè)定系統(tǒng)篩選存在于自然界中的各種物質(zhì)時(shí)，可看到唾液酸及其聚合物抑制癌細(xì)胞粘著于腸系膜細(xì)胞的活性，進(jìn)而，使用患有AH66F腹水性肝癌的大鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，也可看到顯著延長(zhǎng)生命的效果。以下，用實(shí)施例詳細(xì)地加以說(shuō)明。
實(shí)施例1唾液酸及唾液酸聚合物抑制癌細(xì)胞粘著的效果用細(xì)胞培養(yǎng)板，在含有5％胎牛血清(FCS)的達(dá)耳貝克的改良的Eagle’s培養(yǎng)基(DMEM)中培養(yǎng)來(lái)自大鼠的腸系膜細(xì)胞(M-細(xì)胞)，在細(xì)胞鋪滿所有孔后，用不含F(xiàn)C3的DMEM洗滌，進(jìn)而，用含有唾液酸10μg/ml或100μg/ml的DMEM，在37度下進(jìn)行培養(yǎng)。45分鐘后，用DMEM洗滌孔，添加大鼠AH66F細(xì)胞(4×104個(gè)/孔)和唾液酸(圖1所示的濃度)后，加入DMEM，在37度下培養(yǎng)1小時(shí)。培養(yǎng)后，攪拌30秒鐘，將培養(yǎng)上清液移到取樣管中。在每個(gè)孔中加入200μl新的DMEM，同樣地?cái)嚢?5秒鐘、洗滌。再進(jìn)行2次該洗滌操作，將得到的洗滌液與培養(yǎng)上清液合并。將其以12,000rpm離心分離5分鐘，除去上清液后，加入100μl新的DMEM，懸浮細(xì)胞后，用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下，計(jì)算細(xì)胞數(shù)(非粘著性細(xì)胞數(shù))。
另外，只培養(yǎng)癌細(xì)胞作為對(duì)照，進(jìn)行相同的操作后，測(cè)定細(xì)胞數(shù)(對(duì)照細(xì)胞數(shù))。
通過(guò)下述計(jì)算式可求出癌細(xì)胞的粘著率。其結(jié)果如圖1所示，但它是4孔各唾液酸類(lèi)的濃度的平均值。
粘著率＝〔1-(非粘著性細(xì)胞數(shù))/(對(duì)照細(xì)胞數(shù))〕×100如實(shí)施例1所述，唾液酸濃度為10μg/ml和100μg/ml時(shí)，分別阻止27％及31％的癌細(xì)胞對(duì)腸系膜細(xì)胞的粘著。
實(shí)施例2在抗LFA-1的抗體共存下唾液酸類(lèi)抑制癌細(xì)胞粘著的效果在使M-細(xì)胞和AH66F細(xì)胞接觸的培養(yǎng)中，除了唾液酸的濃度為0及100μg/ml，同時(shí)與抗LFA-1抗體10μg/ml共存之外，其他與實(shí)施例1完全相同。
其結(jié)果如圖2所示。
在已知具有阻止癌細(xì)胞粘著能力的大鼠抗LFA-1抗體(抗白細(xì)胞功能相關(guān)性抗原β鏈的抗體)存在下，不添加唾液酸可抑制40％，而當(dāng)添加唾液酸100μg/ml，顯示出阻止70％的粘著。這表示抗LFA-1抗體阻止癌細(xì)胞粘著的機(jī)理與唾液酸不同，同時(shí)也顯示了兩種物質(zhì)有協(xié)同效應(yīng)。
實(shí)施例3在模型系統(tǒng)的試驗(yàn)中揭示唾液酸類(lèi)有抑制癌細(xì)胞粘著的效果，所以對(duì)唾液酸及其聚合物對(duì)患轉(zhuǎn)移癌(AH66F)的大鼠的效果進(jìn)行了研究。唾液酸類(lèi)對(duì)患癌大鼠的延命效果將AH66F癌細(xì)胞(1×106cells)，給予到東流(Donryu)系雄性大鼠(6周齡100-120g，每組6只)的腹腔內(nèi)后，立即向腹腔內(nèi)給予0.5ml唾液酸溶液(給予量10mg/kg及100mg/kg)或生理鹽水(對(duì)照組)。然后，在腹腔內(nèi)給予唾液酸或生理食鹽水2天后，觀察大鼠的生存天數(shù)。
用下式計(jì)算出延命率，其結(jié)果如表1所示。
延命率＝〔(治療組的生存天數(shù))-(對(duì)照組的生存天數(shù))/(對(duì)照組的生存天數(shù))〕×100
表1 AH66F癌細(xì)胞致癌大鼠中唾液酸的延命效果處理組 生存天數(shù) 延命率對(duì)照7.3±0.3 -唾液酸10mg/kg×3日 11.5±0.4 58％100mg/kg×3日13.4±0.4 84％結(jié)果證實(shí)，未給予唾液酸類(lèi)組的生存天數(shù)是7.3±0.3天、給予唾液酸10mg/kg組有1.6倍的延命效果、給予100mg/kg組有1.8倍的延命效果。
急性毒性試驗(yàn)求出使用Wister系大鼠(雄性)的靜脈內(nèi)給藥的LD50值，唾液酸及唾液酸的三聚體的鈉鹽(pH7.0)，都是2,000mg/kg以上。
權(quán)利要求
1.具有抑制癌轉(zhuǎn)移作用的抗癌劑，其特征是以唾液酸或其鹽作為有效成分。
2.具有抑制癌轉(zhuǎn)移作用的抗癌劑，其特征是以唾液酸的聚合物或其鹽作為有效成分。
3.權(quán)利要求2所述的抗癌劑，其中唾液酸的聚合物是由2分子～13分子的唾液酸構(gòu)成的聚合物。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供可單獨(dú)抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的抗癌劑,即使長(zhǎng)時(shí)期服用,其副作用也較小,且毒性非常小。本發(fā)明的抑制癌轉(zhuǎn)移的抗癌劑,其特征是含有唾液酸、唾液酸鹽、唾液酸的聚合物和/或唾液酸聚合物的鹽作為有效成分。
文檔編號(hào)A61K31/70GK1185738SQ96194213
公開(kāi)日1998年6月24日 申請(qǐng)日期1996年2月8日 優(yōu)先權(quán)日1996年2月8日
發(fā)明者長(zhǎng)谷川高明, 宮本謙一, 川瀨三雄, 吉田安子, 犬飼忠彥 申請(qǐng)人:日本礙子株式會(huì)社, 有限會(huì)社比歇根