專利名稱：噻吩并[1，5]苯并二氨雜的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜治療某些胃腸病癥的新方法。
化合物2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并-[2，3-b][1.5]苯并二氮雜可用于治療某些胃腸病癥。一種所述的胃腸病癥是過敏性大腸綜合癥，其特征是腹痛，排便習(xí)慣改變或者這兩種癥狀兼有。過敏性大腸綜合癥廣泛存在，患此病的人占人口的14％-22％(Gastroenterology，591-595，100(1991))。
本發(fā)明提供治療患有或易感功能性腸紊亂(Functional BowelDisorder)的哺乳動物包括人的方法，它包括使用有效量的2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并-[2，3-b][1，5]苯并二氮雜或其酸加成鹽。
本申請人已發(fā)現(xiàn)2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并-[2，3-b][1，5]苯并二氮雜可用于治療功能性腸紊亂和相關(guān)的腸運動過度疾病。該化合物具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)
2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜在美國專利5229382中有述，本文整體上參考引用了此文獻。
本文所用的術(shù)語“治療”包括一旦實施本發(fā)明能預(yù)防所述病癥或者能改善或消除所述病癥。
本文所用的術(shù)語“功能性腸紊亂”是指功能性胃腸紊亂，表現(xiàn)為(1)腹痛和/或(2)排便失調(diào)的癥狀(急迫、用力、排泄不完全感、糞便型(稠度)改變和排便頻率/時間改變)和/或(3)胃氣脹(膨脹)。木語“功能性腸紊亂”包括但不限于過敏性大腸縮合癥，包括運動過強，ichlasia，hypertonic lower esophogeal sphinctor，胃竇電活動亢進，便秘，與過敏性大腸綜合癥有關(guān)的運動過強。
功能性腸紊亂的特征是腸功能異常但檢測不到結(jié)構(gòu)異常。腸功能異常包括腹瀉、便秘、粘液外流和乙狀結(jié)腸部疼痛或不適。這樣的紊亂受精神因素和緊張的生活情境影響。
功能性腸紊亂，過敏性大腸綜合癥(IBS)是最常見的胃腸疾病之一。胃腸門診病人中20％-50％患IBS。IB8的癥狀出現(xiàn)在約14％的其他顯然是健康的人身上。IBS是種復(fù)雜的病癥，部分是因為它不是一種疾病，但是由數(shù)個具有類似表現(xiàn)的癥狀構(gòu)成的綜合癥。
化合物2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并-[2，3-b][1，5]苯并二氮雜具有抗毒蕈堿活性、5-HT2B受體活性，并被認(rèn)為可用于治療某些胃腸病癥。因此該化合物可用于治療功能性腸紊亂，包括但不限于過敏性大腸綜合癥、胃運動過強和相關(guān)的癥狀。
2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并-[2，3-b][1，5]苯并二氮雜更優(yōu)選用于治療過敏性大腸綜合癥或胃運動過強疾病。最優(yōu)選的是將2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并-[2，3-b][1，5]苯并二氮雜用于治療過敏性大腸綜合癥。
2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并-[2，3-b][1，5]苯并二氮雜的制備見前述參考引用的美國專利5229382。
2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并-[2，3-b][1，5]苯并二氮雜可以游離堿和酸加成鹽兩種形式用于治療胃腸癥病。所述酸加成鹽最好是與適宜的酸形成的藥學(xué)上可接受的無毒加成鹽，所述酸為例如無機酸，如鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸或磷酸，或有機酸例如有機羧酸，例如乙醇酸、馬來酸、羥基馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸或乳酸，或有機磺酸，例如甲磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、對甲苯磺酸或萘-2-磺酸。
如上所述，2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并-[2，3-b][1，5]苯并二氮雜具有有用的中樞神經(jīng)系統(tǒng)活性。此活性已在動物模型上用非常確實的方法予以證實。此外，2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并-[2，3-b][1，5]苯并二氮雜在數(shù)個用來測定與神經(jīng)受體結(jié)合的程度的體外結(jié)合測定中已表現(xiàn)出令人滿意的活性曲線。
該化合物在3H—QNB結(jié)合測定中IC50小于1μm(見Yamamura，HI和Snyder，SH，Proc.Nat.Acad.Sci.USA 71，1725-(1974))，表明它具有抗毒蕈堿-抗膽堿能活性。此外，該化合物由于在低納摩爾濃度時能從大鼠額皮質(zhì)的結(jié)合部位置換H-螺環(huán)哌丁苯，因而顯示出其對5-HT-2受體的最大活性(Peroutka，SJ和Snyder SH Mol.Phar-macol.16，687(1979))。該化合物對5-HT-1C受體也具有活性。放射性配體結(jié)合研究由轉(zhuǎn)化細(xì)胞制備膜。將表達無性繁殖的人5-HT2B受體的懸浮細(xì)胞如前述用于無性繁殖的大鼠5-TH2B受體的方法處理。Kursar，J.D.，D.L.Nelson，D.B.Wainscott，M.L.Cohen，和M.Baez，Mol.Pharmacol.42549-557(1992)。通過于4℃在2200×g離心15分鐘收集所述細(xì)胞。結(jié)合測定用膜通過將該片狀沉淀物在50mMTris-HCl(pH7.4)中渦旋來制備(0.5×109細(xì)胞/30ml)。然后將該組織懸浮液于4℃在39800×g離心10分鐘。重復(fù)比操作，使總的洗滌次數(shù)為3，在第一次和第二次洗滌之間于37℃培養(yǎng)10分鐘。將最終的片狀沉淀物在67mM Tris-HCl(pH7.4)中均化(在20-40和12.5×106個細(xì)胞/ml，原始細(xì)胞數(shù)，使用Tissumizer(Tekmar，Cincinnati，OH)，置于65，用時15秒)。5-HT結(jié)合研究。結(jié)合測定用Biomek 1000(BeckmanInstruments，F(xiàn)ullerton，CA)自動進行，一式三份，每份總體積0.8ml。將200μl膜懸浮液(0.04-0.27mg蛋白質(zhì))和200μl藥物的水稀釋液加至400μl含[3H]5-HT、優(yōu)降寧、CaCl2和L-抗壞血酸的67mM Tris-HCl(pH7.4)中。優(yōu)降寧、CaCl2和L-抗壞血酸的終濃度分別為10μM、3mM和0.1％。將試管于37℃培養(yǎng)15分鐘(用這兩個條件檢驗結(jié)合平衡)，然后使用Brandel細(xì)胞收集器(MB-48R型，Brandel，Gaithersburg，MD)用預(yù)浸漬在0.5％聚乙烯亞胺中并用冰冷的50mM Tris-HCl(pH7.4)預(yù)冷卻的Whatman GF/B濾紙快速過濾。然后將濾紙用1ml冰冷的50mM Tris-HCl(pH7.4)快速洗滌4次。捕集在濾紙上的[3H]5-HT的量用液體閃爍光譜測定法測定(ReadyProtein and Beckman LS-6000 IC，BeckmanInstruments)。就最適于單位點或雙位點結(jié)合模型，用部分F-試驗來測定[3H]5-HT結(jié)合的飽和曲線。De Lean，A.，A.A.Hancock，和R.J.Lefkowitz，Mol.Pharmacol.215-16(1981)。下面的等式用于單位點結(jié)合模型，Bound=Bmax×[L]Kd+[L]]]>其中Bound＝特異性結(jié)合的[3H]5-HT的量，Bmax＝結(jié)合位點的最大數(shù)，Kd＝平衡解離常數(shù)和[L]＝[3H]5-HT的游離濃度，或者用于雙位點結(jié)合模型，Bound=Bmax1×[L]Kd1+[L]+Bmax2×[L]Kd2+[L]]]>其中Bound＝特異性結(jié)合的[3H]5-HT的量，Bmax1＝高親和性結(jié)合位點的最大數(shù)，Bmax2＝低親和性結(jié)合位點的最大數(shù)，Kd1＝高親和性位點的平衡解離常數(shù)，Kd2＝低親和性位點的平衡解離常數(shù)及[L]＝[3H]5-HT的游離濃度。自競爭性測定的IC50值、IP3標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)合參數(shù)以及自IP3測定的EC50和Emax值用四參數(shù)邏輯計算方程的非線性回歸分析(Systat，Systat Inc，Evanston，IL)來測定。D2 Lean，A.，A.A.Hancock，和R.J.Lefkowitz，Mol.Pharmacol.215-16(1981)。用Cheng-Prusoff方程式將IC50值轉(zhuǎn)化成Ki值，Cheng，Y.，和W.H.Prusoff，Biochem.Pharmacol.223099-3108(1973)。組織中的5-HT2B受體的體外測定方法將雄性Wistar大鼠(150-375g；Laboratory Supply，Indiana-polis，IN)采用使頸脫位處死，并制備胃底的縱切片用于體外檢測。從一個大鼠胃底獲取4個標(biāo)本。Cohen，M.L.和J.Pharmacol.Exp.Ther.23375-79(1985)。將組織固定在含10ml組成如下的改良的Kreb氏溶液(毫摩爾濃度)中NaCl，118.2，KCl，4，6；CaCl2·H2O，1.6；KH2PO3，1.2；MgSO4，1.2；葡萄糖，10.0；和NaHCO3，24.8。將組織浴溶液保持在37℃并用95％O2和5％CO2平衡。將組織置于最佳靜力(4g)下并使其平衡約1小時，然后與試驗化合物接觸。等體積濃度在帶有Statham UC-3換能器的Beckman Dynograph上被記錄為力的克數(shù)方面的變化。表觀拮抗劑解離常數(shù)的測定血清素和其它的激動劑在胃底中的非積累收縮濃度一反應(yīng)曲線通過在洗滌出前一濃度每15-20分鐘后逐步增加濃度的方法獲得。每一激動劑濃度保持與組織接觸約2分鐘并測定每一化合物濃度的最大反應(yīng)。取產(chǎn)生最大收縮的一半時的激動劑的濃度作為ED50值。在獲得對照的反應(yīng)后，將組織用適宜濃度的緩沖劑或拮抗劑培養(yǎng)1小時。然后在拮抗劑存在下重復(fù)對血清素的反應(yīng)。每個組織的濃度反應(yīng)使用一個激動劑和一個拮抗劑濃度。一般來講，在用緩沖劑處理的情況下的連續(xù)的激動劑反應(yīng)是不變的(平均劑量比為1.28+/-0.21)。
按照下式測定各拮抗劑濃度的表觀拮抗劑解離常數(shù)(KB)KB＝[B]/(劑量比－1)其中[B]是拮抗劑的濃度，而劑量比是在拮抗劑存在下激動劑的ED50除以對照ED50。一般來講，濃度—反應(yīng)曲線中的平移在拮抗劑存在下出現(xiàn)。結(jié)果用KB的負(fù)對數(shù)(即-logKB)來表示，用公知方法完成計算。體外功能測定將Sprague-Dawley大鼠(200-250g，Laboratory Supply，Indi-anapolis，IN)采用使頸脫位處死并取出一節(jié)8cm長的遠側(cè)結(jié)腸，在組成如下的冰冷的改良Kreb氏溶液(毫摩爾)中洗滌NaCl，118.2；KCl，4.6；CaCl2·H2O，1.6；KH2PO4，1.2；MgSO4，1.2；葡葡糖，10.0；和NaHCO3，24.8。將結(jié)腸固定在玻璃棒上，將與腸肌叢相連的縱肌層取出并固定在器官浴中，該浴含上述保持在37℃的Kreb氏溶液并用95％O2和5％CO2平衡。將組織置于2g張力下并將其穩(wěn)定1小時。用玻璃FTO3換能器和MI2-計算機化dynograph系統(tǒng)以力的克數(shù)的變化記錄等長收縮。血清素的累積濃度—反應(yīng)曲線通過在洗滌前一濃度10-15分鐘逐步增加濃度獲得。每一激動劑濃度保持與組織接觸5分鐘。對每一濃度的最大反應(yīng)能被測定并被數(shù)字化。EC50值為產(chǎn)生最大收縮之一半時的激動劑的濃度。在得到對照的反應(yīng)后，將組織用適當(dāng)濃度的拮抗劑培養(yǎng)15分鐘。然后在拮抗劑存在下重復(fù)對血清素的反應(yīng)。濃度—反應(yīng)對每個組織僅使用一個拮抗劑濃度。按照下面的等式對每一拮抗劑濃度測定表觀拮抗劑解離常數(shù)(KB)KB＝[B]/(劑量比－1)其中[B]是拮抗劑的濃度，而劑量比是在拮抗劑存在下激動劑的ED50除以對照ED50。結(jié)果用KB的負(fù)對數(shù)(即-logKB)來表示(Br.J.Pharmacol Methods 44165，(1980))。
研究表明，是5-HT2B受體拮抗劑的化合物是血清素誘導(dǎo)的結(jié)腸收縮的強有力的競爭性抑制劑。這樣的化合物能夠使胃腸運動正?；?，可用于治療功能性腸紊亂。
在體外受體結(jié)合側(cè)定中觀察的活性情況表明，該化合物治療功能性腸紊亂有效。
2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并[2，3-6][1，5]苯并二氮雜化合物在寬劑量范圍內(nèi)有效，實際使用劑量取決于欲治療的病癥。例如，在治療成人時，每日可用劑量為0.25-30mg，優(yōu)選1-20mg。通常每日一劑足可以，但也可以分劑使用。對于胃腸疾病的治療，每日劑量范圍在1-20mg是適宜的，優(yōu)選2.5-15mg。在使用放射性標(biāo)記的2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜的研究中，已在唾液中檢測出殘留，因此該化合物可在病人中監(jiān)測以評價符合的程度。
2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并[2，3-6][1，5]苯并二氮雜化合物一般應(yīng)口服或經(jīng)注射給藥。為此，它通常以藥用組合物的形式來使用。
因此，可以制備含有2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜或其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽作活性成分和藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物。在制備本發(fā)明的藥用組合物時，可以使用制備藥用組合物的常規(guī)技術(shù)。例如，通常將該活性成分與載體混合，或用載體稀釋，或裝入可以是膠囊、小囊、紙或其它容器形式的載體中。當(dāng)載體作稀釋劑時，它可以是固體、半固體或液體物質(zhì)，對活性物質(zhì)起溶媒、賦形劑或介質(zhì)的作用。活性物質(zhì)可以被吸收在顆粒狀固態(tài)容器例如小囊中。適宜的載體的一些實例是乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、藻酸鹽、西黃蓍膠、明膠、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯和羥基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸鎂或礦物油。若期望，本發(fā)明的組合物可以被配制成在給病人服用后能提供活性成分的快釋、緩釋即遲釋的制劑。
根據(jù)使用方法，用于治療胃腸病癥的組合物可以配制成片劑、膠囊劑、胃腸外用注射液、用于經(jīng)皮膚釋放的凝膠或懸浮劑、口服用懸浮劑或酏劑或者栓劑。最好將組合物制成單位劑型，每劑含0.25-30mg、更常常是1-20mg活性成分。當(dāng)需要緩釋制劑時，該單位劑型可以含0.25-200mg的活性成分。本發(fā)明的優(yōu)選制劑是包含0.25-30mg或1-20mg活性成分和藥學(xué)上可接受的載體的膠囊劑或片劑。優(yōu)選的制劑還有單位劑型中包含0.25-30mg或1-20mg活性成分和藥學(xué)上可接受的稀釋劑的注射劑。
實施例1粉末制劑(pulvule formulation)通過將活性成分與硅氧烷淀粉混合并將其裝入硬明膠膠囊中來制備。
每300mg膠囊
2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪 5.0mg基)-4H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜硅氧烷 2.9mg可流動性淀粉 292.1mg實施例2片劑通過將活性成分與適宜的稀釋劑、潤滑劑、崩解劑或粘合劑一同制粒并壓制來制備。
2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪 5.0mg基)-4H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜硬脂酸鎂 0.9mg微晶纖維素 75.0mg聚乙烯吡咯烷酮 15.0mg淀粉(可直接壓制的) 204.1mg實施例3活性化合物的水性注射劑以凍干填料(freeze-dried plug)的形式在使用時用稀釋劑在適當(dāng)?shù)臏缇?5ml小瓶中再制(成總體積為10ml)來制備。
2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜、甘露醇，N鹽酸和/或N氫氧化鈉以調(diào)節(jié)pH至5-5.5。
2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-20.0mg噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜
甘露醇200mgN鹽酸和/或N氫氧化鈉以調(diào)節(jié)pH至5-5.5實施例4肌肉注射用控釋注射劑由微粉化的活性成分在油性溶媒中的滅菌懸浮液構(gòu)成。
2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H- 65.0mg噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜硬脂酸鋁 0.04mg芝麻油2ml實施例5膠囊劑通過將活性成分與硅氧烷淀粉和淀粉混合并將其裝入硬明膠膠囊中來制備。
每290mg膠囊2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基) 2.5mg-4H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜含有0.96％硅氧烷220的可 217.5mg流動性淀粉可流動性淀粉 70.0mg
權(quán)利要求
1.用于治療患有或易感功能性腸紊亂的哺乳動物包括人的2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜化合物或其酸加成鹽。
2.用于治療哺乳動物包括人的功能性腸紊亂的權(quán)利要求1的化合物，所述功能性腸紊亂選自過敏性大腸綜合癥、運動過強、ichlasia、hypertonic lower esophogeal sphinctor、胃竇電活動亢進、便秘和與過敏性大腸綜合癥有關(guān)的運動過強。
3.用于治療哺乳物包括人的功能性腸紊亂的權(quán)利要求2的化合物，所述功能性腸紊亂選自過敏性大腸綜合癥和與過敏性大腸綜合癥有關(guān)的運動過強。
全文摘要
化合物2-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-4H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜或其酸加成鹽具有藥理特性，尤其可用于治療某些胃腸疾病。
文檔編號A61K31/551GK1119101SQ9510614
公開日1996年3月27日 申請日期1995年6月1日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月3日
發(fā)明者B·格林伍德, D·L·G·納爾遜 申請人:伊萊利利公司