專利名稱：含有生物活性甾體的藥物乳劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的水包油乳劑，它特別適合于經(jīng)非胃腸道施用生物活性甾體，不然生物活性甾體難于溶解。該乳劑包括含有蓖麻油的脂質(zhì)相，該脂質(zhì)相可含有附加的脂質(zhì)，例如至少一種植物油和/或中等長(zhǎng)度鏈的甘油三脂。
人們注意到許多治療用甾體在常用藥物載體或溶劑中的溶解性很差，因而都試圖增加其溶解性，例如通過引入溶解性改性基團(tuán)或改善所施用載體的性質(zhì)。
英國(guó)專利說明書GB1317184和GB1379730公開了釋放3α-羥基-5α-孕甾烷-11，20-三酮的麻醉組合物。然而，這些將甾體與一種非離子表面活性的聚氧乙烯化蓖麻油(Cremophor-EL)一起制成的非胃腸道制劑組合物，具有嚴(yán)重的副作用。
歐洲專利EP0233849公開了可經(jīng)非胃腸道施用的3α-羥基-5β-孕烷-20-酮(孕烷醇酮)的脂質(zhì)乳劑，其中的活性甾體溶于脂質(zhì)相，該脂質(zhì)相選自可可油，琉璃苣油，紅花油，棉籽油，豆油和合成甘油酯，該合成甘油酯分子中帶有長(zhǎng)鏈和中等鏈脂肪酸的混合物。
先前認(rèn)為蓖麻油與有機(jī)共溶劑如芐醇和苯甲酸芐酯一起作為經(jīng)非胃腸道施用的甾體激素的載體，正如CRiffkin等在J.ofPharm.Sci.，Vol.53(8)，1964的第891-5頁所公開的那樣，或者據(jù)美國(guó)專利說明書US4048310，蓖麻油與共溶劑作為一種局部用制劑的載體。然而在今天，將Riffkin等提示的共溶劑作為非胃腸道藥物制劑中的組份是很難接受的。
歐洲專利申請(qǐng)EP 0418004公開了作為具有前列腺素E1活性化合物的載體的脂肪乳劑，它具有含有油的脂質(zhì)相，該油選自豆油，芝麻油，蓖麻油，棉籽油或橄欖油。然而這些乳劑除含有磷脂乳化劑外，還含有一種乳化輔助劑，它優(yōu)選游離形式的脂肪酸和一種穩(wěn)定劑。為避免如The Lancet，April 18 1970，第813到815頁(V.A.Kurien等)和EP 0241553中公開的副作用，通常將非胃腸道中的游離脂肪酸量保持在盡可能低的水平。
雖公開了蓖麻油作為難溶藥物的溶劑的用途，但在實(shí)際中它并不用于非胃腸道乳劑，這是因?yàn)樗母哒承猿韺?shí)際問題，還因?yàn)樗c包括蓖麻油衍生物的Cremophor-EL的副作用有關(guān)，還可能與極強(qiáng)的毒素蓖麻毒有關(guān)，蓖麻毒天然存在于蓖麻植物中。
這樣就需要一種適合于生物活性甾體的乳劑載體，在該載體中該甾體化合物的溶解性(在常用植物油中是有限的)及高滅菌和保存期間的穩(wěn)定性都得到改善。尤其需要提供這樣一種僅含乳化劑、增溶劑和其它附加劑的藥物乳劑，這些物質(zhì)已公知是臨床上可接受的并可適量使用的。因此免避用常用的合成增溶劑來改善乳劑的性質(zhì)是有益的，因?yàn)樗鼈兂．a(chǎn)生人們不希望的副作用。PluronicF-68對(duì)狗顯示有明顯的心血管作用，并引起大鼠肺和腎的改變。吐溫-80對(duì)大鼠和小鼠產(chǎn)生廣泛的CNS作用，并引起狗的組胺釋放和低血壓，還能抑制豚鼠心臟標(biāo)本的心肌收縮力。另外，當(dāng)上述的Cremophor E1用作麻醉藥的溶劑時(shí)，它對(duì)狗是一種強(qiáng)組胺釋放劑，因而推測(cè)它誘導(dǎo)人的過敏性樣反應(yīng)。
依據(jù)本發(fā)明，提供了一種適于施用生物活性甾體的水包油乳劑，該乳劑具有包含蓖麻油和一種蛋黃磷脂乳化劑的脂質(zhì)相，上述生物活性甾體在常用溶劑中具有有限的溶解度。
本發(fā)明的目的是提供一種水包油乳劑形式的組合物，它在具有改善的物理和化學(xué)穩(wěn)定性的脂質(zhì)相中可含有較高量的溶解的甾體，因而減少了施用于患者的總脂質(zhì)載量和增溶劑或穩(wěn)定劑的量。
本發(fā)明的目的還有就是提供一種含有蓖麻油，且含或不含另一種脂質(zhì)的乳劑，該乳劑具有極好的穩(wěn)定性并長(zhǎng)期存放后能保持經(jīng)非胃腸道施用甾體的適宜特性，且它僅包含已公知的生物可接受的常用組份。
本發(fā)明的目的旨在克服先前的經(jīng)蓖麻油而產(chǎn)生的乳化和穩(wěn)定性問題，提供一種改進(jìn)的生物活性甾體的脂質(zhì)乳劑載體，它包括臨床上已公知和安全的組份。
本發(fā)明涉及一種新的適于施用生物活性甾體的水包油乳劑，該乳劑具有含有蓖麻油和蛋黃磷脂作為乳化劑的脂質(zhì)相，該生物活性甾體在常用溶劑中具有有限的溶解度。該脂質(zhì)相還可含有至少一種附加的脂質(zhì)，該脂質(zhì)選自植物油和/或合成或精煉的中等長(zhǎng)度鏈甘油三酯。本發(fā)明還指示了一種制備上述乳劑的方法及其在制備具有麻醉作用的藥劑中的用途。
本發(fā)明乳劑的脂質(zhì)含有具有藥學(xué)上可接受純度的蓖麻油，該蓖麻油可與至少一種附加的脂質(zhì)結(jié)合，該附加的脂質(zhì)選自植物油，例如豆油、紅花油(Saffloroil)、芝麻油、棉籽油或橄欖油和合成或精煉的中等長(zhǎng)度鏈的分子中帶有6-12個(gè)碳原子的脂肪酸殘基的甘油三酯，例如衍生于可可油的MCT餾份。上述脂質(zhì)的混合物也適于作為蓖麻油的附加劑。根據(jù)已建立好的方法，該乳化劑選自臨床可接受的蛋黃磷脂。
蓖麻油相對(duì)于其它脂質(zhì)的量?jī)?yōu)選為蓖麻油附加脂質(zhì)在90∶10%(w/w)到10∶90%((w/w)范圍內(nèi)。
適宜的脂質(zhì)組合物僅含有蓖麻油，或是70%(w/w)蓖麻油和30%(w/w)豆油的混合物。加入附加脂質(zhì)的量應(yīng)基本保證蓖麻油的溶解能力。脂質(zhì)的相對(duì)量可因加入的脂質(zhì)組份的極性(鏈長(zhǎng)度)而變化。運(yùn)用熟悉該類技術(shù)的人員的實(shí)驗(yàn)技能可發(fā)現(xiàn)各種脂質(zhì)混合物的蓖麻油和附加脂質(zhì)的適宜相對(duì)量，得到一種具有理想增溶特性的穩(wěn)定乳劑。甾體在蓖麻油中的高溶解度可通過羥基化脂肪酸(蓖麻油酸)的存在得到解釋，羥基化的脂肪酸具有高極性的特點(diǎn)，因而增加了溶解能力。
以本發(fā)明的乳劑或組合物施用的生物活性甾體在常用親水和疏水性溶劑中的溶解度有限，并將優(yōu)先作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)。尤其優(yōu)選的是那些具有麻醉活性的CNS活性甾體。本發(fā)明最優(yōu)選的甾體選自5β-孕烷-3α-醇-20-酮(eltanolone或孕烷醇酮)，5β-孕烷-3β-醇-20-酮(表孕烷醇酮)，5α-孕烷-3α-醇-20-酮(別孕烷-3α-醇-20-酮)，5α-孕烷-3β-醇-20-酮(別孕烷醇酮)，5α-孕烷-3α-醇-11，20-二酮(阿法沙龍)，5β-孕烷-3α，21-二醇-20-酮((四氫脫氧皮質(zhì)甾酮或THDOC)，5α-孕烷-3α，21-二醇-20-酮(別四氧脫氧皮質(zhì)甾酮或別THDOC)，5α-雄烷-3α-醇-17-酮(雄甾酮；或順雄甾酮)，5-孕烯-3β-醇-20-酮-硫酸酯(孕烯醇酮硫酸酯)，11β-11，17，21-三羥基孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮(強(qiáng)的松龍)和11β，17α，21-三羥基孕甾-4-烯-3，20-二酮(二氫可的松)。在本發(fā)明提供的乳劑和組合物中含有該甾體的量為0.1-15mg/ml。
一種本發(fā)明的適宜的乳劑包括a)一種生物活性甾體，含量為5mg/ml，b)含有蓖麻油和占總脂質(zhì)乳劑量10%(w/w)的附加脂質(zhì)的脂質(zhì)，c)一種乳化劑，每100ml最終組合物中的含量為1-5g的蛋黃磷脂，
d)注射用水，e)等滲調(diào)節(jié)劑，f)用于pH調(diào)節(jié)的氫氧化鈉。
該乳劑的脂質(zhì)優(yōu)選含有10-90%(w/w)的蓖麻油。
適宜的等滲調(diào)節(jié)劑是甘油。如果需要，該乳劑也可含有常用的，但是臨床上可接受的抗氧劑和防腐劑。
為制備該新的水包油乳劑，第一步將生物活性甾體物質(zhì)溶于脂質(zhì)是適宜的。然后將所得溶液通過常用的高壓均化器，在水性介質(zhì)中進(jìn)行乳化，該水性介質(zhì)含有注射用水，上述的乳化劑和等滲調(diào)節(jié)劑，如果需要，還可含有任何指定的附加成份。所得乳劑中的油滴的顆粒小于5μ，其中大部份小于1μ，優(yōu)選在0.2-0.3μ。該新的水包油乳劑主要包括一種生物活性甾體在脂質(zhì)相中的溶液，該脂質(zhì)相被乳化在一親水相中。這些乳劑特別適于經(jīng)非胃腸道給患者施用麻醉活性的甾體。
本發(fā)明的乳劑具有極好的減少氧化的化學(xué)和物理穩(wěn)定性，這應(yīng)歸于蓖麻油本身的內(nèi)在特性，其中小油滴凝集然后分層的趨勢(shì)減小，以及游離脂肪酸形成水平低。該乳劑也能經(jīng)受住高壓滅菌過程。由于甾體的度溶解性將減少在各種表面上沉淀的問題，這樣就使制造商能更靈活地選擇適宜的包裝。本發(fā)明的乳劑與醫(yī)藥應(yīng)用中使用的常規(guī)塑料和橡膠制品也更相容。
該乳劑的高溶解力和改善了的穩(wěn)定性也使得可以排除幾種常用的、但在一定程度上有爭(zhēng)議的溶劑，例如Cremophor-EL，聚乙二醇，丙二醇，芐醇，苯甲酸芐酯和乙醇。
該新乳劑的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是脂質(zhì)減少，這將使患者在施用期間攝入較低的脂質(zhì)量。
其它的優(yōu)點(diǎn)可從下面的實(shí)施例中清楚地看到，它們將包括使用本發(fā)明的乳劑施用麻醉活性甾體(孕烷醇酮)而心血管作用較小這一重要的特性。
這些實(shí)施例并不旨在限制本發(fā)明的范圍，而是描述了本發(fā)明的一些切實(shí)可行的乳劑及其在體內(nèi)施用后的生物學(xué)功效。
實(shí)施例1顯示了依據(jù)本發(fā)明制備一些乳劑。
實(shí)施例2顯示了依據(jù)本發(fā)明的乳劑組合物，它們?cè)趯?shí)施例3-5中進(jìn)行了生物學(xué)測(cè)試。
實(shí)施例3顯示了孕烷醇酮以本發(fā)明的乳劑施用與以描述的現(xiàn)有技術(shù)的乳劑施用進(jìn)行比較的麻醉效果。
實(shí)施例4顯示了對(duì)心血管作用的比較結(jié)果。
實(shí)施例5顯示了急性毒性的觀察結(jié)果。
實(shí)施例1為測(cè)定含有蓖麻油與不同甾體的乳劑的質(zhì)量，制備下列組合物甾體0.10g油相20.0g
磷脂2.40g甘油4.50gNaOH(1M)0.70g注射用水172.3g在50ml玻璃燒杯中稱取甾體。將蓖麻油(CO)或蓖麻油和豆油的70∶30的混合物(CO+SBO)加到該燒杯中，加熱熔解甾體。將磷脂加到該油相中并繼續(xù)攪拌5分鐘。然后將該混合物加到加熱了的含有水和甘油的水相中，攪拌5分鐘。之后，在一高壓實(shí)驗(yàn)室型均化器中在技術(shù)允許的最高壓力下將該混合物均化成乳劑。將所得乳劑分配并封入加熱滅菌的20ml玻璃水瓶中。分析該乳劑的外觀、振蕩穩(wěn)定性、pH和容積分布。用MalvernMastersizer分析該范圍(span)。用顯微鏡觀察大于1μ的小液滴的外觀、在相關(guān)圖上的平均面積和沉淀的存在。并研究了在5℃和40℃下的存放穩(wěn)定性。

該結(jié)果表明油相中包含蓖麻油的乳劑是許多難溶性甾體的適宜載體。通常，該乳劑在長(zhǎng)期存放期間具有良好的穩(wěn)定性，并具有適于經(jīng)非胃腸道施用的特點(diǎn)。
實(shí)施例2為進(jìn)行生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，制備下列組成的水包油乳劑藥劑1藥劑2藥劑3(mg)(mg)(mg)孕烷醇酮(INN)444蓖麻油7070-豆油30-200MCT30單甘油二乙酯--70(Diacetyl.Monoglyc.
磷脂121218甘油22.522.517用NaOH調(diào)pH8.5并在所有的藥劑中都加入注射用水至1ml。
藥劑1和2是依據(jù)本發(fā)明的乳劑，而藥劑3是依據(jù)歐洲專利EP233，849描述的現(xiàn)有技術(shù)的乳劑。藥劑2中中等鏈的甘油三酯是從可可油衍生來的，它含有具有6-12個(gè)碳原子的脂肪酸殘基的甘油三酯餾份。
依據(jù)本發(fā)明，孕烷醇酮首先與蓖麻油或者蓖麻油和豆油和/或MCT混合物混合。這樣使孕烷醇酮基本上溶解。然后將所得的油-孕烷醇酮混合物與其它指定的組份一起制備乳劑。所得乳劑是穩(wěn)定的且具有平均顆粒大小為約0.2-0.3μ，并且可經(jīng)過高壓滅菌法消毒而不破壞其穩(wěn)定性。
值得一提的是，依據(jù)本發(fā)明的藥劑1和2中與藥劑3相比僅半量的脂質(zhì)足以使孕烷醇酮基本溶解。例如孕烷醇酮在藥劑1中的溶解度要比在藥劑3中高約5倍。
之后，在4mg/ml5β-孕烷-3β-醇-20-酮(表孕烷醇酮)來代替孕烷醇酮制備如藥劑1的相同乳劑，在甾體溶解度及乳劑穩(wěn)定性方面也得到了相似的結(jié)果。
實(shí)施例3麻醉效果的測(cè)定比較實(shí)施例2的藥劑1和3的麻醉效果。在該實(shí)驗(yàn)中，使用體重在343-391克范圍之內(nèi)的30只Sprague-Dawley雄性大鼠。將由四折復(fù)式不銹鋼絲(0.2mm)組成的EEG電極皮下固定在大鼠的每只耳前，將鼠準(zhǔn)備好。
經(jīng)尾靜脈注入該乳劑，劑量輸注速率為2mg/kg/分鐘。連續(xù)監(jiān)視EEG，一旦觀察到EEG波(burst)至少一秒鐘(一“靜止秒”)的抑制，結(jié)束輸注。然后將該動(dòng)物平放在其籠中并觀察直至其恢復(fù)翻正反射。
測(cè)試的參數(shù)為-誘導(dǎo)該靜止秒所需的孕烷醇酮的劑量。
-睡眠時(shí)間，即從該靜止秒出現(xiàn)至恢復(fù)翻正反射的時(shí)間。
結(jié)果(組平均值±SE)誘導(dǎo)該靜止秒乳劑睡眠時(shí)間(分鐘)所需劑量(mg/kg)藥劑18.75±0.3843±2藥劑38.73±0.5528±1該結(jié)果表明，在所用的劑量輸注速率下，在誘導(dǎo)皮層EEG靜止(一靜止秒)上兩種乳劑間沒有區(qū)別，但施用藥劑1后的睡眠時(shí)間長(zhǎng)些。
實(shí)施例4心血管作用研究該研究的目的是比較實(shí)施例2的藥劑1和3對(duì)心血管的作用。在該研究中使用五只長(zhǎng)期帶有儀器的狗。這種模式?jīng)]有手術(shù)緊迫性和附加藥物例如預(yù)先用藥和基礎(chǔ)麻醉劑，便可記錄心血管參數(shù)。從清醒狀態(tài)到麻醉再到清醒狀態(tài)的過渡便可在沒有干擾的條件下進(jìn)行。在不同的時(shí)間下用相同的動(dòng)物測(cè)試兩種乳劑。按大丸劑(bolus)靜脈注射的孕烷醇酮的劑量為5mg/kg。該劑量約是誘導(dǎo)狗麻醉所需正常劑量的2倍。
最顯著的結(jié)果是自清醒狀態(tài)的大約量大變化(%)自清醒狀態(tài)的大約量大變化(%)參數(shù)藥劑1藥劑3心率+20+100平均動(dòng)脈壓+10-20心搏量-20-65左心室dp/dtmax-10-50(收縮力)藥劑1誘導(dǎo)的麻醉比藥劑3發(fā)誘導(dǎo)的麻醉對(duì)心血管的影響明顯要小。
實(shí)施例5急性毒性的研究對(duì)大鼠靜脈高劑量(對(duì)大鼠有效麻醉劑量的10-16倍)單次施用藥劑1后，測(cè)試急性毒性。使用40只體重范圍在198-261g之間的Sprague-Dawley雄性大鼠。測(cè)量睡眠時(shí)間，即翻正反射的喪失與恢復(fù)之間的時(shí)間。在動(dòng)物麻醉期間和清醒后，觀察其臨床癥狀，例如呼吸類型、心率和皮膚顏色。
在接下來的兩周里，觀察這些動(dòng)物的一般狀況。在施用藥物前片刻稱量大鼠的體重，然后于第7和14天再稱量之。
在該實(shí)驗(yàn)中，全部動(dòng)物存活下來。下表顯示了這些劑量、輸注速率和結(jié)果。
在麻醉較淺，但平穩(wěn)期間觀察呼吸速率。然而未注射到任何跡象的發(fā)紺。雖然心率有些減慢，但仍是節(jié)律而有力的搏動(dòng)。在睡眠期尾注意到某些動(dòng)物有呼吸啰音，但僅有一只動(dòng)物需人工呼吸幫助。在所有動(dòng)物中都觀察到暫時(shí)性外周心血管收縮。動(dòng)物清醒后即刻顯得相當(dāng)倦怠，但其它狀況一切良好。在接下來的一個(gè)時(shí)期里，大鼠的行為、其總的健康狀況以及其體重的增加都正常。

該劑量、輸注速率和大鼠的大小均與先前進(jìn)行的靜脈麻醉急性毒性試驗(yàn)一致。該結(jié)果是令人滿意的，說明依據(jù)本發(fā)明的乳劑未顯示出毒性作用。
權(quán)利要求
1.一種水包油乳劑，它適于施用在常用溶劑中具有有限溶解度的生物活性甾體，其特征在于它具有含有蓖麻油和蛋黃磷脂作為乳化劑的脂質(zhì)相。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的水包油乳劑，其特征在于該脂質(zhì)相還含有至少一種附加的脂質(zhì)，該脂質(zhì)選自植物油和/或合成或精煉的中等長(zhǎng)度鏈的甘油三酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的乳劑，其特征在于每毫升該最終組合含有a)0.1-15mg量的甾體b)50-200mg量的脂質(zhì)c)5-50mg量的選自純化蛋黃磷脂的乳化劑d)注射用水e)加入以使該最終組合物等滲的等滲調(diào)節(jié)劑f)加入以達(dá)到適宜pH的氫氧化鈉溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一的乳劑，其特征在于該甾體選自5β-孕烷-3α-醇-20-酮(eltanolone或孕烷醇酮)，5β-孕烷-3β-醇-20-酮(表孕烷醇酮)，5α-孕烷-3α-醇-20-酮(別孕烷-3α-醇-20-酮)，5α-孕烷-3β-醇-20-酮(別孕烷醇酮)，5α-孕烷-3α-醇-11，20-二酮(阿法沙龍)，5β-孕烷-3α，21-二醇-20-酮((四氫脫氧皮質(zhì)甾酮或THDOC)，5α-孕烷-3α，21-二醇-20-酮(別四氧脫氧皮質(zhì)甾酮或別THDOC)，5α-雄烷-3α-醇-17-酮(雄甾酮；或順雄甾酮)，5-孕烯-3β-醇-20-酮-硫酸酯(孕烯醇酮硫酸酯)，11β-11，17，21-三羥基孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮(強(qiáng)的松龍)和11β，17α，21-三羥基孕甾-4-烯-3，20-二酮(二氫可的松)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2-4之一的乳劑，其特征在于該脂質(zhì)含有10-90%(w/w)蓖麻油。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的乳劑，其特征在于該脂質(zhì)含有約70%(w/w)蓖麻油和約30%(w/w)豆油。
7.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1-7的任一種乳劑或組合物的方法，其特征在于將甾體溶于一種含有蓖麻油或與另一種附加脂質(zhì)混合的蓖麻油的脂質(zhì)組合物中，然后將所得甾體－脂質(zhì)組合物與一種水相乳化成一種穩(wěn)定乳劑，所述附加脂質(zhì)選自植物油和合成或精煉的中等長(zhǎng)度鏈甘油三酯，所述水相含有水和蛋黃磷脂乳化劑，并且可選擇性地含或不含等滲調(diào)節(jié)劑。
8.一種含有蓖麻油或者與至少一種附加脂質(zhì)混合的蓖麻油的脂質(zhì)乳劑用于制備具有麻醉作用的藥劑的用途，所述附加脂質(zhì)選自植物油和合成或精煉的中等長(zhǎng)度鏈甘油三酯。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的用途，其中的藥劑是一種作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的甾體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新的水包油乳劑，它特別適合于經(jīng)非胃腸道施用生物活性甾體，否則，該生物活性甾體很難溶于常用溶劑。該乳劑包括一種含有蓖麻油的脂質(zhì)相。
文檔編號(hào)A61K31/57GK1111445SQ94190450
公開日1995年11月8日 申請(qǐng)日期1994年7月1日 優(yōu)先權(quán)日1993年7月2日
發(fā)明者H·約納森, P·李, T·斯坦斯特羅姆, K·羅森克維斯特, A·馬利尼亞克 申請(qǐng)人:法馬西雅公司