專利名稱:藥用劑量單位的制作方法
本發(fā)明是關(guān)于腸胃外給藥的配制，尤其是用于溶解血栓治療的藥用劑量單位。
人體組織纖維蛋白溶酶原活化劑(t PA)是一種糖蛋白，它約有70000道爾頓(質(zhì)量單位)及527個(gè)氨基酸。它是以人體組織的變化而分泌的及在血清中天然存在。t PA的功能在于凝結(jié)溶解使得纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白溶酶。t PA是親合性的及在纖維蛋白存在下表現(xiàn)是比較活波的。因而，t PA用于治療纖維蛋白酶聯(lián)合混亂，如血管極度的血栓形成、急性心肌梗塞和肺栓塞。這可以見Rijken等人在生物化學(xué)，生物物理學(xué)報(bào)580∶140(1979)，Vetterlein等人在生物化學(xué)雜志254∶575(1979)，Rijken等人在生物化學(xué)雜志256∶7035(1981)和Matsuo等自然學(xué)291∶590(1981)的文章。
t PA是某些細(xì)胞線包括Bowes黑色瘤細(xì)胞線過度產(chǎn)生的。見Wilson等人在癌癥研究40∶933(1980).Collen等人在EP-A-41，766上公開了Bowes黑色瘤衍生物t PA的純化方法;Wilson在EP-A-113，319公開了用獨(dú)立的血清Bowes黑色瘤細(xì)胞線制備和純化t PA的方法。
t PA也可以用再生DNA工藝來制備。Opdenakker等人在歐洲生物化學(xué)雜志121∶269(1982)公開用于t PA的mRNA分離方法;Edlund等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA80∶349(1983)公開了用于部分t PA的cDNA分離方法;Pennica等人在自然學(xué)301∶214(1983)公開了用于t PA在大腸桿菌中的t PA的cDNA凝結(jié)方法;Goeddel等人在EP-A-93，619及Levinson等人在EP-A-117，059公開了從在大腸桿菌中及在中國侖鼠卵巢細(xì)胞中的t PA的cDNA凝結(jié)方法。
Brouty-Boye在生物/工程1984年9月第1058頁報(bào)導(dǎo)了用人胚胎肺細(xì)胞制備t PA的方法。
Robinson在W084-01786上揭示了一種改進(jìn)的t PA，這改進(jìn)后的t PA缺少存在于天然t PA中的全部和部分的碳?xì)浠衔锊糠帧?br>t PA不能很好地溶于水，當(dāng)PH為7.0時(shí)它在水中的溶解度是0.1mg/ml，因而在純化時(shí)，通常溶解t PA要用特別的增溶劑，這些增溶劑包括離液序列高的變性劑，如脲素和硫氰酸;表面活性劑如凈化劑;碳?xì)浠衔锶绺事短谴技暗鞍踪|(zhì)如白蛋白和明膠雖然這些溶劑表現(xiàn)上看是改進(jìn)t PA在水中的溶解度，但是t PA溶液傾向于不穩(wěn)定，因而作為合適的腸胃外給藥還未得到公認(rèn)及不能大量使用。
Wilson在EP-A-113，319中提出了加入一個(gè)非離子性的凈化劑避免表面吸收來改進(jìn)溶解度。Wilson公開了一個(gè)藥物組成例子，在0.3摩爾氯化鈉和0.01%吐溫
80中含有0.075mg/ml的t PA。
Goeddel等人在EP-A-93，619公開了t PA可以用標(biāo)準(zhǔn)工藝配制并報(bào)導(dǎo)了一個(gè)實(shí)例一種藥水內(nèi)含有25，000國際單位的t PA，25mg甘露醇與45mg氯化鈉的5ml水溶液及用0.9%氯化鈉混合。
Collen等人在EP-A-41，766闡明了t PA可以用標(biāo)準(zhǔn)工藝配制或不需要如氯化鈉、甘油、甘露醇和白蛋白等的添加物。一個(gè)可解釋的實(shí)例∶藥物組成含有t PA，0.001%吐溫
80和0.01-1%的白蛋白或存在于磷酸鹽緩沖的食鹽溶液中的甘露醇。
Yoshizaki等人在EP-A-112，940公開了白蛋白可以用作為t PA的穩(wěn)定劑。
Murakami等人在EP-A-123，304公開了加入明膠可以使t PA穩(wěn)定。
Kruithof等人在生物化學(xué)雜志226∶631-636(1985)公開了一個(gè)用于由獨(dú)立的Bowes黑色瘤細(xì)胞制備出t PA的純化方案培養(yǎng)基離心的步驟，將吐溫
80和Na N3加入到離心后的上層清液中，用6M鹽酸調(diào)節(jié)PH到4.5，溶液通過SP-Sephadex層析柱，用在醋酸鈉緩沖劑中的氯化鈉洗脫t PA，其PH值為4.5(0.1M醋酸鈉，0.25M氯化鈉，0.001%吐溫
80，0.05%Na N3)。收集部分洗脫液，濃縮到t PA濃度為0.93mg/ml(42，800國際單位/每毫升)，在醋酸鈉緩沖劑中通過Sephadex G-100層析柱(50mM醋酸鈉，0.5M氯化鈉，0.01%吐溫
80，0.05%Na N3，PH4.5)，將產(chǎn)品濃縮到t PA濃度為0.38mg/ml(35，000國際單位/每毫升)然后在-70℃保存。
美國診斷學(xué)公司有銷售凍干的t PA。用于再生的Vendor′s程序?yàn)椤坝?.1M醋酸/醋酸鈉緩沖劑先使其PH值為3.9來調(diào)節(jié)理想的PH值，并加入1mg/ml的白蛋白來避免測(cè)定”。
本發(fā)明的一個(gè)目的是配制一種適用于制備無菌的t PA藥用劑量單位的藥物配制，它不需要用典型的增溶劑/穩(wěn)定劑如離液序列高的試劑、表面活性劑、變性劑和碳?xì)浠衔飦慝@得高溶解度，也就是在水中的溶解度大于0.1mg/ml。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是制備一種在室溫相對(duì)穩(wěn)定的t PA藥物配制。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是制備一種能適用于腸胃外給藥的t PA藥物配制。
為達(dá)到本發(fā)明的這些和其它的目的，下文將充分?jǐn)⑹觥?br>一方面，本發(fā)明是一個(gè)用于腸胃外給藥的t PA無菌藥用劑量單位，其包括t PA在PH3.5-5.5下，在一個(gè)含有緩沖劑的藥物可接受的溶劑中。
另一方面，本發(fā)明是一整套包括一個(gè)或多個(gè)無菌內(nèi)含物的凍干形式t PA，及一個(gè)或多個(gè)用于重新構(gòu)成的無菌內(nèi)含物溶液，在這里緩沖劑是由一種或兩種容器和緩沖劑提供的。選擇使用用于重新組合的溶液和用于重新組合溶液量以及t PA的量，以便于根據(jù)混合容器里的物質(zhì)來提供，這個(gè)重新組合的產(chǎn)品是一種用于腸胃外給藥的藥用劑量單位，其包括在緩沖劑中含有0.1-15%mg/ml的t PA，藥物上可接受的溶劑，PH3.5-5.5。
附圖是t PA0.39mg/ml(除了其它另有指明以外)在脲素或醋酸/醋酸銨溶液中最初退化(失去活性)速率的圖示表。
現(xiàn)在敘述的是t PA在沒有增溶劑或穩(wěn)定劑存在下當(dāng)PH3.5-5.5時(shí)有很高的溶解度，如在PH4.0時(shí)(0.1M醋酸銨)t PA的溶解度約大于15mg/ml;在PH5.0時(shí)(0.1M醋酸銨)t PA的溶解度近似于3mg/ml。而前面的情況是在水中當(dāng)PH7.0時(shí)t PA的溶解度為0.1mg/ml。
在本發(fā)明的配制中，t PA在PH4.0的溶解度是可以同通過用2M脲素在PH7.5得到的溶解度相匹配。然而，在本發(fā)明的配方中，不需要一些增溶劑存在來得到高的溶解度，因?yàn)檫@些增溶劑滲透利尿的并且當(dāng)與t PA共同結(jié)合給藥時(shí)會(huì)引起不期望的付作用。
有關(guān)本發(fā)明已揭示的和在此所要求的再一表明，t PA在指定的PH范圍內(nèi)是高度穩(wěn)定的。在本發(fā)明的藥用劑量單位里，這種增加穩(wěn)定性在低的及高的t PA濃度里是明顯的。例如，在下列表中報(bào)導(dǎo)了t PA的活性百分?jǐn)?shù)，該t PA是在低濃度(0.39mg/ml另有規(guī)定除外)，40℃在脲素(2M脲素，0.3M氯化鈉，20mMtris-鹽酸和0.01%吐溫
80，PH7.5)或100mM醋酸銨中，其PH值用S-2251測(cè)定為3.5-5.5，此S-2251測(cè)定敘述于Weinderg等人在Immunol.Meth.75∶289(1984)。按照標(biāo)準(zhǔn)在標(biāo)準(zhǔn)情況下，高溫用來促使t PA失去活性。
脲素 醋酸銨天 pH7.5＊pH7.5 pH3.5 pH4.0 pH4.5 pH5.0 pH5.5 pH4.0＊0 100 100 100 100 100 100 100 1001 67 88 652 51 84 84 80 94 923 19 24 71 90 77 90 844 13 665 246 207 2 53 62 81 82 658 9 49 63 62 81 62 7210 411 37 37 56 82 69 69 521213 1814 34 40 70 62 6015 17 2316 22 16 53 58 2418 15 9 63 55＊1.3mg/ml＊＊9.8mg/ml
上述結(jié)果記錄列表于附圖中。這個(gè)結(jié)果與t PA在100mM醋酸溶液中的電泳分析是一致的。t PA在100mM醋酸溶液中40℃超過3星期也不退化，這是用聚丙烯酰胺膠電泳在PH4.0，4.5，5.0和5.5中測(cè)出的，在40℃PH3.5三星期后出現(xiàn)小波段，其相應(yīng)為12，16和21千道爾頓。
本發(fā)明另一方面是，雖然在PH約低于7時(shí)t PA是極大的不活波，但當(dāng)PH恢復(fù)到約為7時(shí)它的活性也恢復(fù)了。因此在對(duì)于病人需要治療血栓的用藥時(shí)，本發(fā)明的t PA劑量單位其環(huán)境PH變?yōu)?，t PA就具有活性了。本發(fā)明的藥用劑量單位在低溫時(shí)增加穩(wěn)定性，因此最好不要在大于室溫保存，即大約在20℃-25保存。雖然，在本發(fā)明的配制中的t PA低溫下如0-15℃是比較穩(wěn)定的，但本發(fā)明的藥用劑量單位其優(yōu)點(diǎn)是在較高的溫度如＞20℃時(shí)t PA仍是穩(wěn)定的，可以用前面報(bào)導(dǎo)的結(jié)果證明。在4℃時(shí)，不僅在2M脲素溶液(PH7.5)中的，而且是在100mM醋酸銨溶液(PH4.0)中的t PA在幾個(gè)星期之后，基本上保持了全部的活性。在室溫(約22℃)，t PA在本發(fā)明的配制中于幾個(gè)星期里也將穩(wěn)定的。如果希望長(zhǎng)期保存，t PA可以用適當(dāng)?shù)馁x形劑凍干保存，然后再組成本發(fā)明的藥用劑量單位以適于立即使用或比較短期保存。
參照上面所述可以獲得結(jié)果為，能使用由在血清存在下從中口大田鼠卵巢(CHO)細(xì)胞生長(zhǎng)的再組合來制得的t PA。然而，本發(fā)明包括從其它來源的t PA所組成的藥用劑量單位，包括血清、黑色瘤細(xì)胞、哺乳細(xì)胞血清、細(xì)菌、酵母菌、昆蟲細(xì)胞、植物細(xì)胞和其他哺乳細(xì)胞，可以是再生的或天然的。本發(fā)明還可以適用于t PA的其他形式，它包括單鏈t PA、異體t PA(即在沒有重大影響異體t PA活性、溶解度、穩(wěn)定性的情況下t PA中的氨基酸有一個(gè)或幾個(gè)發(fā)生變化)和改變了葡萄糖殘基結(jié)構(gòu)的t PA。
此外，對(duì)于醋酸銨，其他藥物上可接受的緩沖劑可以用于本發(fā)明的藥用劑量單位，其中有用的緩沖劑為下列酸和它的鹽的混合物醋酸、己二酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸、天門冬氨酸、谷氨酸、其它在期望范圍內(nèi)的緩沖劑并且是有用于本發(fā)明的酸包括谷氨酸、馬來酸、富馬酸、琥珀酸、庚＝酸、β-丙氨酸和烯醇羥基丙酮酸。最好陰離子是醋酸根，最好陽離子是鈉和銨。
本發(fā)明藥用劑量單位中緩沖劑的濃度可以選擇維持在PH3.5-5.5，最好是4.0-5.0，更好地選擇在4.0-4.8。典型的例子，緩沖劑濃度約為在適當(dāng)酸中的10-200mM，最好是20-100mM鈉或銨鹽。緩沖劑是用標(biāo)準(zhǔn)工藝制備的，即將氫氧化鈉加到100mM的醋酸水溶液中選擇一個(gè)有利于本發(fā)明的PH范圍，從而用來制備本發(fā)明的藥用劑量單位，其中緩沖劑是100mM醋酸鈉。
更好的是，本發(fā)明的藥物配制為一種水溶液。然而，有一定的極性、與水混溶和非水溶性溶劑也可適用于腸胃外的藥物配制，這些溶劑可以用于本發(fā)明，只要基本上不對(duì)t PA的活性及穩(wěn)定性產(chǎn)生有害的效果，這些溶劑是否有用可以用常規(guī)的實(shí)驗(yàn)鑒定。
除了t PA和緩沖劑以外，本發(fā)明的藥用劑量單位還可以含有少量的適用于腸胃外給藥的其它試劑，例如防腐劑，象乙基汞硫代水楊酸鈉、氯丁醇或?qū)妆郊皬?qiáng)度調(diào)節(jié)劑象氯化鈉、葡萄糖或甘露醇，本發(fā)明的藥用劑量單位最好是等滲的(250-310mOSM/kg)。Wang等人在腸胃外藥物學(xué)會(huì)雜志34∶452(1980)報(bào)導(dǎo)了在腸胃外藥物配制中使用賦形劑。此外，本發(fā)明的藥用劑量當(dāng)其住還能包括加入藥物活性劑如纖維蛋白、強(qiáng)心劑、antiarrythmic或降血壓劑。
t PA在本發(fā)明的藥用劑量單位中的藥物穩(wěn)定性可以用包括加入親水性聚合的冷凍保護(hù)劑進(jìn)一步增加，如羥烷基纖維、明膠、阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮(分子量10，000-60，000)及聚亞烷基二醇如1，2-亞乙基二醇(分子量4，000-40，000)。這些試劑的使用在凍干時(shí)或再生時(shí)增強(qiáng)在溶液中的穩(wěn)定性(使失活及蛋白質(zhì)退化減少到最低程度)，最好的這樣試劑是分子量為20，000-50，000的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
這些試劑可以以溶液或者粉末形式加到t PA的配制中。最好，在凍干前，把這些試劑加入到本發(fā)明的t PA配制中，使得在再生和試劑在最終時(shí)，再生劑量單位仍是一個(gè)安全和有效的量。就分子量為40，000的聚乙烯吡咯烷酮來說(Plasdone30)它的用量約是1-15mg，最好是4-10mg/每1mg的t PA。對(duì)于明膠來說，適用于用大的量來達(dá)到增加穩(wěn)定性，例如它的用量是10-1000mg/每1mgt PA。
本發(fā)明的藥用劑量單位含有t PA為0.1-15mg/ml，最好為0.5-10mg/ml，它是用藥物化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)工藝制備的。如凍干的t PA可以與一個(gè)適當(dāng)?shù)木彌_劑重新組合，在溶液中的t PA可以滲析交換適當(dāng)?shù)木彌_劑或t PA溶液的PH可以用酸、鹽或緩沖劑調(diào)節(jié)，這樣，本發(fā)明的藥用劑量單位包括那些已凍干的劑量單位，以便在于一個(gè)水溶性的溶劑重新組合時(shí)，得到本發(fā)明藥用劑量單位的溶液形式。按照慣例，t PA最后一步的純化是可以在PH3.5-5.5下，在適宜地，含緩沖劑水溶液情況下進(jìn)行。
本發(fā)明的藥用劑量單位的制備是為了用于患病者，尤其是人類患病者;t PA的腸胃外有效量滿足于溶解血栓的治療，特別是靜脈內(nèi)的、冠狀動(dòng)脈內(nèi)的及大部分是動(dòng)脈內(nèi)的。t PA在劑量單位中的確切濃度及給予的藥用劑量單位中的確切體積是取決于指定或各種條件。
最佳的給定劑量單位可以按標(biāo)準(zhǔn)的藥物和醫(yī)學(xué)實(shí)踐得到。對(duì)于一個(gè)典型的心肌梗塞(acute M I)在超過10-180分鐘(min)時(shí)間內(nèi)，最好約30-90分鐘給予的總劑量為25-125mg，例如Collen等人在《循環(huán)》第70卷第1012頁(1984)報(bào)導(dǎo)了急性心肌梗塞病人的治療是在超過30-120分鐘的時(shí)間內(nèi)給予靜脈注射0.5-0.75mg/kg(或35-53mg/70kg(每))。Collen等人報(bào)導(dǎo)的配方是每10ml藥水中含有0.5mg/mlt PA。Sobel等人在《循環(huán)》第69卷第983頁(1984)報(bào)導(dǎo)了對(duì)于急性心肌梗塞的病人給予注射200-400×103國際單位(IU)的t PA。Van de Werf等在新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志，第310卷第609頁(1984)報(bào)導(dǎo)了對(duì)急性心肌梗塞病人在靜脈注射(i.v.)和冠狀動(dòng)脈內(nèi)(i.c.)給藥t PA的劑量范圍，從約3×105IU/15min i.c.-約1.4×106IU/35min i.v.。Robinson在Wo84-01786報(bào)導(dǎo)了對(duì)于患有中度血栓病人給予0.10-1.0mg/kg改變的t PA注射到8個(gè)劑量，該t PA是天然分子中缺少部分碳?xì)浠衔锏摹?br>對(duì)于急性心肌梗塞的患者，藥物的劑量單位是藥團(tuán)或注射劑，如備用給藥的小藥囊、安瓿、藥水或含有直到10毫升的注射劑，t PA的濃度為1-15mg/ml。象藥團(tuán)型的注射可以用靜脈注射的方式進(jìn)行，內(nèi)含t PA0.1-15mg/ml。對(duì)于其它表現(xiàn)，如正在形成的心肌梗塞、深度血管的血栓形成(DVT)和肺栓塞(PE)，典型的藥物劑量單位是靜脈注射形式，如i.v.袋或瓶能按常規(guī)方法與靜脈套管結(jié)合。
因而，最好的藥用劑量單位是藥團(tuán)形式，可以保存在藥水中、小藥囊中、安瓿或注射劑中，可備用于急癥情況。
最好的藥用劑量單位含有t PA1-10mg/ml的1-10ml，最好為2-6mg/ml的2-6ml。這些藥團(tuán)形式的劑量單位用于簡(jiǎn)單注射時(shí)，被配制成含有2-50mg，最好是5-30mg和更好是10-20mg的t PA。另一個(gè)最好的藥用劑量單位是靜脈注射形式，它可以保存在大的容器中(100-1000毫升)。一個(gè)單位最好含有t PA0.1-10mg/ml，更好是0.5-5mg/ml，如在簡(jiǎn)單的注射器內(nèi)，含有t PA是10-1000mg，最好是50-500mg。本發(fā)明第三個(gè)最好的具體表現(xiàn)結(jié)合了兩個(gè)特性，如藥水、注射劑或其它藥團(tuán)類型結(jié)合成注射劑形式。
凍干的t PA可以含有以凍干的形式藥物上可接受的緩沖劑，它是用于在無緩沖劑的溶液中最后再組合，或當(dāng)凍干化的賦形劑是醋酸銨時(shí)，凍干產(chǎn)品可以在緩沖溶液中重新組合。不管怎樣，凍干產(chǎn)品可以保存在無菌的安瓿或其它容器中，為了與一個(gè)無菌容器中的溶液配制成重新組合溶液及用于以注射或注入方式進(jìn)行最后的或直接的靜脈給藥。因而，本發(fā)明第四個(gè)具體的優(yōu)點(diǎn)是，本發(fā)明是一整套包括用一個(gè)或多個(gè)凍干形式t PA的無菌容器與一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立的有溶液的無菌容器重新組合的用具。重新組合的溶液，t PA的用量與在簡(jiǎn)單的用具中，溶液的用量是有選擇的，以便提供一個(gè)最后的重新組合產(chǎn)品，此產(chǎn)品含量為0.1-15mg/ml，PH的選擇可以參照本發(fā)明，最好的重新組合溶液是一個(gè)5%的葡萄糖水溶液。t PA的量和用于重新組合的溶液量是有選擇的提供給一個(gè)最后的重新組合產(chǎn)品，或是前面所述的最好象液體注射或注入形式的劑量單位。于是一套制備一個(gè)最好的藥團(tuán)形式的用具包括在一個(gè)或多個(gè)無菌容器內(nèi)含有t PA2-50mg，最好是5-30mg，在一個(gè)或多個(gè)第二種容器內(nèi)有1-10ml溶液，最好是2-6ml，重新組合，以致于二個(gè)容器內(nèi)的成份結(jié)合，得到一個(gè)包括t PA濃度從1-10mg/ml，最好是2-6mg/ml的產(chǎn)品。一套有關(guān)制備最好的注入劑形式的用具是包括一個(gè)或多個(gè)無菌容器，內(nèi)含t PA10-1000mg，最好是50-500mg，和1個(gè)或多個(gè)其它無菌容器內(nèi)有100-1000ml溶液，重新組合，以致使容器內(nèi)的成份結(jié)合，得到一個(gè)包括t PA濃度在0.1-10mg/ml，最好是0.5-5mg/ml的產(chǎn)品。最好是對(duì)于一個(gè)劑量單位的全部t PA放在一個(gè)單一的容器中及用于作為這劑量單位的重新組合的全部溶液是放在第二個(gè)單一的容器內(nèi)。一套用于制備本發(fā)明的藥用劑量單位的用具可以包括一個(gè)多層的無菌容器，例如一個(gè)二層的容器，其中一層含有凍干的t PA，第二層含有用于重新組合溶液，二層之間用一個(gè)易碎的擋板隔開，以致可以通過敲碎擋板來無菌混合每一個(gè)組成。上述的一套方法已被Univial無菌的二層藥水(Abbot Laboratories，North Chicago，Illinois)及Hypak的液體/固體干燥物TM注射器所例證。指出t PA和用于重新組合的用量以及施藥方案的標(biāo)簽或插入說明也包括在內(nèi)。
下面的實(shí)例從表1-9是本發(fā)明藥用劑量單位的例證。
例1一個(gè)用無菌溶液注滿的無菌注射器，其中含有t PA 5mg100mM醋酸/醋酸銨 5ml氯化鈉 0.5%(調(diào)節(jié)到等滲)PH 4.0例2一個(gè)用無菌溶液注滿的無菌注射器，其中含有t PA 50mg60mM醋酸/醋酸銨 5ml葡萄糖 3%(調(diào)節(jié)到等滲)氯丁醇 0.5%PH 3.5例3一個(gè)用無菌溶液注滿的無菌注射器，其中含有t PA 5mg100mM檸檬酸/檸檬酸鈉 10ml氯化鈉 0.13%(調(diào)節(jié)到等滲)對(duì)甲苯 0.1%PH 5.5例4一個(gè)用無菌溶液注滿的無菌注射器，其中含有t PA 5mg
100mM檸檬酸/檸檬酸鈉 10ml甘露醇 0.8%(調(diào)節(jié)到等滲)對(duì)甲苯 0.1%PH 5.5例5一個(gè)用無菌溶液注滿的用于靜脈注入的無菌器，其中含有t PA 100mg50mM谷氨酸/谷氨酸鈉 1000ml氯化鈉 0.7%(調(diào)節(jié)到等滲)PH 4.5例6一個(gè)用無菌溶液注滿的用于靜脈注入的無菌器，其中含有t PA 500mg50mM脂肪酸/脂肪酸鈉 500ml乙汞硫代水楊酸鈉 0.005%氯化鈉 0.7%(調(diào)節(jié)到等滲)PH 4.0例7一個(gè)用無菌溶液注滿的用于靜脈注入的無菌器，其中含有t PA 1000mg100mM醋酸/醋酸銨 100ml葡萄糖 3%(調(diào)節(jié)到等滲)PH 4.0例8一個(gè)用具包，包括(1)一個(gè)內(nèi)含10mgt PA的無菌藥水，此t PA是一個(gè)包括t PA(10mg/ml)在100mM醋酸銨(PH4)和30%甘露醇的凍干賦形劑，(2)一用于重新組合的無菌藥水，內(nèi)含100mM醋酸銨10mlPH4.0。
例9一個(gè)用具包，包括(1)一個(gè)內(nèi)含1000mgt PA的無菌藥水，此t PA是一個(gè)包括t PA(15mg/ml)在100mM醋酸銨(PH4)和19%甘酸氨的凍干賦形劑，(2)一個(gè)無菌的藥瓶，內(nèi)含用于重新組合的100mM醋酸銨1000mlPH4.0。
例10取1ml內(nèi)含10mg/ml t PA的0.1M醋酸銨溶液加進(jìn)一個(gè)20ml凍干藥水，然后分別取出4ml按式A及B配制成兩個(gè)賦形劑，如下表示A B(毫克/藥水) (毫克/藥水)PVP(聚乙烯吡咯烷酮C-30) 64 64L-谷氨酸單鈉鹽 16 -脂肪酸 6.4 6.4t PA 10 10PH(本體溶液) 4.3 4.2＊＊PH是用氫氧化鈉調(diào)節(jié)的。
上述配制的溶液可以按下式凍干藥水在-50℃過夜擱架凍結(jié)。
循環(huán)干燥按下法進(jìn)行(1)-25℃，100um Hg(13巴)，84小時(shí);(2)O℃，100um Hg(13巴);8小時(shí)和(3)25℃，10-30um Hg(1.3-3.9MPa)，24小時(shí)。
t PA的調(diào)節(jié)溶液(t PA1.0mg/ml在0.1M醋酸銨中)可以在5℃保存。例1樣品(Ⅰ)凍干形式可以在-15℃保存23天，然后重新組合并在24小時(shí)后用S-2251分析儀分別在5℃，25℃和40℃進(jìn)行分析。-15℃時(shí)的凍干塞與重新組合溶液在5℃時(shí)幾乎不用保存，也就是說，重新組合與分析立即進(jìn)行凍干。例2樣品(Ⅱ)可以在40℃凍干形式保存23天，然后重新組合，在24小時(shí)以后，用S-2251分析儀分別在4℃和25℃進(jìn)行分析。例3樣品(Ⅲ)在40℃凍干形式保存3個(gè)月，然后重新組合，在24小時(shí)以后，用S-2251分析儀分別在4℃和25℃分析。所有的實(shí)例樣品均用5%葡萄糖重新組合到1.0mg/ml。重新組合的溶液第23天40℃時(shí)的PH是A式PH4.5;B式PH4.3。A式和B式溶液的滲透性是A為298mosm;B為274mosm。樣品的活性以百分比對(duì)照，如下表報(bào)導(dǎo)。
樣品Ⅰ 樣品Ⅱ 樣品Ⅲ24小時(shí) 24小時(shí) 0小時(shí) 24小時(shí)5℃ 25℃ 40℃ 4℃ 25℃ - 4℃ 25℃A 93 99 90 96 91 91 91 90B 99 90 93 90 95 91 93 91對(duì)照 10011001100210031 6.87×105IU/mg2 6.08×105IU/mg3 5.67×105IU/mg例11式A和式B兩個(gè)t PA試驗(yàn)實(shí)質(zhì)上是象前面所述方法制備的，裝進(jìn)5ml藥水，每份藥水內(nèi)含A BPVP(聚乙烯吡咯烷酮c-30) 6.4mg 6.4mgL-天冬氨酸 1.5mg -脂肪酸 0.7mg 0.2mgt PA 1.0mg 1.0mgPH(本體溶液) 4.4 4.1
每份藥水的總體積 0.5ml 0.5ml＊PH是用氫氧化鈉調(diào)節(jié)的這藥水實(shí)質(zhì)上是按前面所述方法凍干的。一批在-15℃保存到第7天，在凍干后重新組合并分析，立即進(jìn)行凍干，接著重新組合，在重新組合于室溫(20-25℃)24小時(shí)后進(jìn)行分析。另一部分藥水保存在40℃，然后與上述相似的方法重新組合并分別在凍干后七天、三周、一個(gè)月進(jìn)行分析。所有的凍干塞用水再生，其PH約為4.2-4.6。每一點(diǎn)的活性可以與一個(gè)含有t PA1mg/ml在醋酸銨緩沖劑內(nèi)的，PH4.0保存于5℃的對(duì)照配液相比較，結(jié)果以百分比對(duì)照?qǐng)?bào)導(dǎo)如下0天 7天 3周 1個(gè)月0小時(shí) 24小時(shí) 0小時(shí) 24小時(shí) 0小時(shí) 24小時(shí) 0小時(shí) 24A 107 93 100 97 98 97 91 97B 104 97 107 92 103 100 92 94例12實(shí)質(zhì)上是按上述例10與例11的描述方法，10ml的藥水制備含有明膠 5mg谷氨酸單鈉鹽 5mg甘露醇 15mg氯化鈉 1.7mgt PA 0.1mg每份藥水總體積 1.2ml藥水進(jìn)行凍干，用0.1ml的0.1M醋酸銨(PH4)再生并立即分析。該藥水保存于40℃，分別在第10天、第16天和一個(gè)月時(shí)進(jìn)行分析，與一個(gè)對(duì)照關(guān)配液(0.1mg/mlt PA在0.1M醋酸銨緩沖劑中PH4，5℃)比較活性，其中對(duì)照的活性百分比報(bào)導(dǎo)如下0天 10天 16天 1個(gè)月
0小時(shí) 24小時(shí) 0小時(shí) 24小時(shí) 0小時(shí) 24小時(shí) 0小時(shí) 24小時(shí)89 82 105 83 91 83 99 78例13實(shí)質(zhì)上是按上述例10和例11所描述的方法，5ml的藥水配制內(nèi)含PVP(聚乙烯吡咯烷酮C-30) 6.4mgL-谷氨酸單鈉鹽 1.6mg脂肪酸 0.4mgt PA 1.0mgPH(本體溶液) 4.4每份藥水總體積 0.5ml藥水進(jìn)行凍干，然后用1.0ml0.1M的醋酸銨(PH4)再生并立即分析，將藥水保存在40℃，然后在第8天和1個(gè)月時(shí)分析，與一個(gè)對(duì)照配液(1mg/ml t PA在0.1M醋酸銨緩沖劑中，PH4.0，5℃)進(jìn)行活性比較，結(jié)果以百分比報(bào)導(dǎo)如下0天 8天 1個(gè)月0小時(shí) 24小時(shí) 0小時(shí) 24小時(shí) 0小時(shí) 24小時(shí)106 112 101 109 100 100從上述例10、11、12、13證明了t PA的配制中含有聚合的低溫防護(hù)劑，尤其是聚乙烯吡咯烷酮和明膠，經(jīng)過凍干和隨即再生增加了穩(wěn)定性。
上面的敘述和實(shí)例充分地公開了本發(fā)明，最好由其具體化。但本發(fā)明并不受其限制，特別是這里的附圖，更確切地應(yīng)是包括所有的改進(jìn)及下述權(quán)利要求
的范圍。〉
權(quán)利要求
1.一種用于腸胃外給藥的tPA無菌的藥用劑量單位，包括藥物可接受的0.1-15mg/mltPA的PH為3.5-5.5的緩沖劑水溶液。
2.按權(quán)利要求
1所述的藥用劑量單位是一種藥團(tuán)形式，其中含有1-10ml濃度為1-10mg/ml的t PA，并且t PA為2-50mg。
3.按權(quán)利要求
1所述的藥用劑量單位是在一個(gè)容器里一種藥團(tuán)形式，其中含有2-6ml濃度為2-6mg/ml的t PA并且t PA量為5-30mg。
4.按權(quán)利要求
1所述的藥用劑量單位是在一個(gè)容器里一種藥團(tuán)形式，其中含有100-1000ml濃度為0.1-10mg/ml的t PA，并且t PA量為10-1000mg。
5.按權(quán)利要求
1所述的藥用劑量單位是在一個(gè)容器里一種藥團(tuán)形式，其中含有100-1000ml濃度為0.5-5mg/ml的t PA，并且t PA量為50-500mg。
6.按權(quán)利要求
1所述的藥用劑量單位，其進(jìn)一步包括一個(gè)一定量的低溫防護(hù)劑，它在穩(wěn)定t PA中是安全而有效的。
7.按權(quán)利要求
6所述的藥用劑量單位，其低溫防護(hù)劑是明膠或聚乙烯吡咯烷酮。
8.按權(quán)利要求
7所述的藥用劑量單位，其低溫防護(hù)劑是分子量為40，000的聚乙烯吡咯烷酮，其用量為每毫升t PA為1-15毫克。
9.按權(quán)利要求
1，2，4，6，7或8，所述的藥用劑量單位，其PH為4.0-5.0。
10.按權(quán)利要求
1，2，4，6，7或8，所述的藥用劑量單位，其同一個(gè)藥物上能接受的醋酸鹽、脂肪酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、天門冬氨酸鹽或谷氨酸鹽)緩沖到PH為4.0-5.0。
11.按權(quán)利要求
10所述的藥用劑量單位，其中鹽的陽離子是鈉或銨。
12.按權(quán)利要求
10所述的藥用劑量單位，其中是同醋酸鈉或醋酸銨緩沖的。
13.按權(quán)利要求
1，2或4所述的藥用劑量單位，包括每毫克t PA使用4-10毫克分子量為40.000的聚乙烯吡咯烷酮，并且用脂肪酸緩沖到PH為4.4-4.8。
14.一套用具，其中包括一個(gè)或多個(gè)凍干形式t PA的無菌容器和一個(gè)或多個(gè)用于重新組合的無菌容器，其中提供給一個(gè)或二個(gè)容器緩沖劑，在這里緩沖劑用于重新組合的溶液，t PA的量和用于重新組合溶液量是根據(jù)容器中的各種成份結(jié)合選擇的以便提供給重新組合的產(chǎn)品，該重新組合的產(chǎn)品是一個(gè)用于腸胃外給藥的藥物劑量單位，包括0.1-15mg/ml的t PA，a該t PA是在一個(gè)緩沖的藥物上可接受的溶劑里，PH為3.5-5.5。
15.一套按權(quán)利要求
11所述的用具包括在一個(gè)或多個(gè)無菌容器中有2-50mg的t PA和在一個(gè)或多個(gè)無菌容器中有用于重新組合的溶液1-10ml。
16.一套按權(quán)利要求
11所述的用具，包括在一個(gè)或多個(gè)無菌容器中有5-3mg t PA和在一個(gè)或多個(gè)第二個(gè)無菌容器中有用于重新組合的溶液2-10ml。
17.一套按權(quán)利要求
11所述的用具，包括在一個(gè)或多個(gè)無菌容器中有10-1000mg t PA和在一個(gè)或多個(gè)第二個(gè)無菌容器中有用于重新組合的溶液100-1000ml。
18.一套按權(quán)利要求
11所述的用具，包括在一個(gè)或多個(gè)無菌容器中有50-500mgt PA和在一個(gè)或多個(gè)第二個(gè)無菌容器中有用于重新組合的溶液100-1000ml。
19.一套按權(quán)利要求
14所述的用具，其中包括在一個(gè)或多個(gè)t PA的容器中，或者在一個(gè)或多個(gè)用于重新組合的溶液容器中，或者在雙方這些中含有一個(gè)低溫防護(hù)劑，在再生產(chǎn)品中含有一定的低溫防護(hù)劑，這低溫防護(hù)劑在穩(wěn)定t PA里，它是安全和有效的。
20.一套按權(quán)利要求
19所述的用具，其中低溫防護(hù)劑是明膠或聚乙烯吡咯烷酮。
21.一套按權(quán)利要求
20所述的用具，其中低溫防護(hù)劑是分子量為40，000的聚乙烯吡咯烷酮，它的用量是每毫克t PA為1-15毫克。
22.一套按權(quán)利要求
14、15、17、19、20或21所述的用具，其中重新組合產(chǎn)品具有PH4.0-5.0。
23.一套按權(quán)利要求
14、15、17、19、20或21所述的用具，其中緩沖劑是藥物上可接受的醋酸鹽、脂肪酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、天門冬氨酸鹽或谷氨酸鹽，緩沖重新組合的產(chǎn)品到PH為4.0-5.0。
24.一套權(quán)利要求
23所述的用具，其中緩沖劑中的陽離子是鈉或銨。
25.一套權(quán)利要求
23所述的用具，其中緩沖劑是醋酸鈉或醋酸銨。
26.一套權(quán)利要求
14、15或17所述的用具，其中一個(gè)或多個(gè)t PA的容器包括分子量為40，000的聚乙烯吡咯烷酮，它的用量是每毫克t PA和脂肪酸為4-10毫克，這樣，重新組合時(shí)，重新組合的產(chǎn)品的PH是4.4-4.8。
27.一種用于病人溶解血栓治療的治療方法，其中包括腸胃外給于病人按上述權(quán)利要求
1到13中的任何一項(xiàng)的藥用劑量單位。
28.一種用于腸胃外給藥的t PA的無菌藥用劑量單位的制備方法，其中包括在PH3.5-5.5下將t PA溶于藥物上能接受的水溶性劑中，成為一個(gè)濃度為每ml溶液中含0.1-15mg的t PA。
29.按權(quán)利要求
28所述的方法，其中包括向t PA溶液中加進(jìn)一個(gè)低溫防護(hù)劑。
30.按權(quán)利要求
29所述的方法，其中包括凍干含有t PA0.1-15mg/ml的大量水溶液配液，同一個(gè)有機(jī)酸和它的鹽緩沖到PH為3.5-5.5，并含有一個(gè)低溫防護(hù)劑，然后將凍干的產(chǎn)品與一個(gè)被腸胃給藥所接受的水溶性溶劑重新組合，其PH保持在3.5-5.5。
31.按權(quán)利要求
28、29或30所述的方法，其中計(jì)量單位用一個(gè)或多個(gè)脂肪酸、谷氨酸、檸檬酸、醋酸、琥珀酸、乳酸、酒石酸、天門冬氨酸及它們的鹽緩沖到PH4.0-5.0，并且其中的低溫防護(hù)劑是聚乙烯吡咯烷酮或明膠。
32.按權(quán)利要求
31所述的方法，其中藥用劑量單位用脂肪酸、琥珀酸或醋酸及它們的鹽作緩沖劑。
33.一種用于腸胃外給藥的t PA藥用劑量單位的制備可以按權(quán)利要求
28、29、30、31或32中任一項(xiàng)方法。
專利摘要
一種人體組織纖維蛋白溶酶原活化劑(t PA)的藥用劑量單位，包括t PA在pH為3.5-5.5的緩沖溶液中。
文檔編號(hào)A61K38/49GK86105526SQ86105526
公開日1987年2月4日 申請(qǐng)日期1987年7月28日
發(fā)明者托馬斯·羅伯特·馬萊菲特, 切斯特·艾倫·邁耶斯 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩貝克曼公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan