專利名稱:水產(chǎn)動(dòng)物的自由擴(kuò)散人工授精法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種水產(chǎn)動(dòng)物的人工授精，特別是涉及一種適用冷凍保存或者活力較差的水產(chǎn)動(dòng)物精子的自由擴(kuò)散人工授精法。
背景技術(shù)：
隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，人們?cè)絹碓蕉嗟厥褂镁永鋬霰４娴姆绞絹硎沟脮r(shí)間上或地點(diǎn)上隔離的精子和卵子能夠正常授精，這種方法在水產(chǎn)動(dòng)物的繁殖操作中尤其常用。但在實(shí)際操作時(shí)常出現(xiàn)卵子的授精率和孵化率普遍降低的現(xiàn)象。眾多科研人員從精子冷凍保存液的配方入手以期提高授精卵的授精率和孵化率，但改良精子冷凍保存液配方也只能小幅度地提高授精卵的授精率和孵化率。另一個(gè)值得關(guān)注的是人工授精的方法。目前常用的授精方法有以下幾種1、干法授精，將水浴解凍后的精液與卵子混合，當(dāng)精子與卵子混合充分后再加入海水(適用于海水生物，下同)或淡水(適用于淡水生物，下同)激活精子，同時(shí)完成授精；2、半干法授精，將水浴解凍后的精液直接用海水或淡水混勻、激活，再加入新鮮的卵子完成授精；3、濕法授精，將水浴解凍后的精液直接用海水或淡水混勻、激活，同時(shí)將新鮮的卵子用海水或淡水激活，最后將激活后的精子與卵子混合完成授精。以上3種方法中都忽略了經(jīng)過冷凍保存后精子的活力不同程度有所降低這一現(xiàn)象。根據(jù)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析我們認(rèn)為，解凍后的精液中存在大量受損或不健全的精子，這些精子若與正常的卵子相遇，可能導(dǎo)致卵子無法正常授精并且使卵子失去與正常精子再結(jié)合的能力，這是導(dǎo)致冷凍保存后的精子與卵子結(jié)合授精率孵化率降低的主要原因之一。在這種觀點(diǎn)的指導(dǎo)下，我們發(fā)明了自由擴(kuò)散的人工授精法。
王鑫在公開號(hào)為CN1415194的發(fā)明專利申請(qǐng)中提供一種雜交蛙人工繁殖的方法，首先選擇一種(含一種)以上的純種性成熟的雄蛙剖腹取出其睪丸，置于盛有生理鹽水的器皿中，用工具挑去其皮膜，夾破睪丸，釋放精子，制得精子混懸液；再選擇另外一種不同于上述任何一種蛙種的、性成熟的雌蛙剖腹取出其卵巢，置于盛有生理鹽水的器皿中，用工具挑去其外的皮膜，釋放卵團(tuán)，待卵團(tuán)分裂后，即滴入上述制得的精子混懸液，使卵受精；最后將受精卵移入孵化池或孵化箱中進(jìn)行胚胎發(fā)育和孵化。
中國科學(xué)院海洋研究所在公開號(hào)為CN1418542的發(fā)明專利申請(qǐng)中提供一種橘紅殼色皺紋盤鮑新品系的制種方法，利用皺紋盤鮑橘紅殼色突變體間的單交或群交，獲得殼色性狀一致的皺紋盤鮑新品系；可按如下步驟操作1)種鮑選擇取自然地理群體或人工繁育群體中的性成熟皺紋盤鮑橘紅殼色突變體作為種鮑；2)種鮑促熟取大小為中等偏上的性成熟個(gè)體，置于16～20℃的海水中，培育密度為25～80枚/m3，飼以天然餌料，每天全量換水一次，充天然空氣，有效積溫900～1400度·日，培育環(huán)境照度為20～100Lux，至性腺發(fā)育成熟；3)催產(chǎn)將性腺發(fā)育成熟的個(gè)體采用陰干、升溫和紫外線照射海水刺激方法進(jìn)行催產(chǎn)，具體為在18～20℃、空氣濕度為50～90％的條件下陰干60～120分鐘，然后將雌雄種鮑分別置于不同的容器內(nèi)，雌雄個(gè)體嚴(yán)格分離，注入升溫至22～23℃、照射強(qiáng)度為300～1000mwh/L的紫外線處理海水，40～90分鐘后可獲得雌雄配子；4)將分別獲得的雌雄配子以單交或群交方式進(jìn)行人工授精；5)按常規(guī)孵化及后期培育方法即可獲得橘紅殼色皺紋盤鮑新品系苗種。
董文治在公開號(hào)為CN1135834的發(fā)明專利申請(qǐng)中提供一種人工雜交和馴養(yǎng)家鯽魚的方法，選用健康無病、性成熟的父本魚和母本魚，然后對(duì)母本魚進(jìn)行人工催產(chǎn)，采用人工方法授精，脫粘流水孵化，待孵化的幼魚長出腰點(diǎn)時(shí)下塘，進(jìn)行顆粒餌料馴化培育，父本魚選用紅鯽魚，母本魚選用錦鯉魚。
湖南師范大學(xué)和湘陰縣東湖漁場在公開號(hào)為CN1263704的發(fā)明專利申請(qǐng)中提供一種四倍體魚的培育方法，以紅色鯽魚為母本，湘江野鯉為父本，用人工授精方法獲得雜交一代F1，選擇4.67％可育的F1代雄性個(gè)體的精子，用人工授精的方法，與F1代的卵子結(jié)合，獲得F2代，在F2代的雄性個(gè)體中，選擇二倍體的大頭精子，以及經(jīng)二倍體精子誘導(dǎo)雌核倍加的卵子，用人工授精的方法，使二倍體的精子與二倍體的卵子結(jié)合，從而獲得異源四倍體魚。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有的水產(chǎn)動(dòng)物人工授精方法忽略了經(jīng)過冷凍保存后精子的活力不同程度有所降低這一現(xiàn)象等問題，提供一種采用與其他3種人工授精法有本質(zhì)區(qū)別的自由擴(kuò)散人工授精法。
本發(fā)明的步驟如下1)將冷凍保存的水產(chǎn)動(dòng)物精液從液氮或冰箱中取出并解凍，謹(jǐn)防精液遇水激活；2)用柔軟物體將精液迅速、均勻涂抹在濕潤的容器底部，防止操作過程中精液受到機(jī)械損傷或干燥；3)在精液中加入淡水或海水將精子激活，操作過程要防止淡水或海水將精液沖起；4)健康的精子將迅速游到溶液中，將上層含有健康精子的溶液倒出與新鮮卵子混合，完成授精；
5)授精結(jié)束后，用海水漂洗授精卵，洗去多余精液。
所述的柔軟物體可采用羽毛等。在精液中加入淡水或海水的數(shù)量按體積比精液∶淡水或海水＝1∶(100～200)，在將精子激活的過程中最好靜置片刻，操作過程要防止淡水或海水將精液沖起，靜止放置的時(shí)間隨精子種類的不同而不同。
由于經(jīng)過冷凍保存的精子其活力有不同程度的降低，受損或不健全的精子若與正常的卵子相遇，可能導(dǎo)致卵子無法正常授精并失去與正常精子再結(jié)合的能力，因此快速有效地區(qū)別正常與不健全的精子是本發(fā)明的關(guān)鍵，正常與不健全精子的顯著區(qū)別在于兩者的運(yùn)動(dòng)能力不同。由于采用羽毛等柔軟物體將精液均勻涂抹在敞口的容器底部，加入水或海水將精子激活，靜置片刻，健康的精子將游到溶液中，因此再將上層精液倒出與卵子授精就可以顯著提高授精率和孵化率，特別是冷凍保存后活力較差的精液的授精率。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1將裝有1mL大黃魚精液的冷凍管從液氮中取出，放置在室溫海水中快速解凍。將解凍后的精液倒在潮濕的容器底部迅速用羽毛涂勻。緩慢向容器中倒入150mL室溫海水，靜置2min。將上清含有大量健康精子的海水緩慢倒入盛有新鮮卵子的容器中，輕輕攪拌完成授精。授精后10min，用大量海水漂洗授精卵，洗去多余精液。
實(shí)施例2與實(shí)施例1類似，其區(qū)別在于將裝有1mL大黃魚精液的冷凍管從冰箱中取出，放置在室溫海水中快速解凍。將解凍后的精液倒在潮濕的容器底部迅速用羽毛涂勻。緩慢向容器中倒入100mL室溫淡水，靜置3min。
實(shí)施例3與實(shí)施例1類似，其區(qū)別在于將裝有1mL大黃魚精液的冷凍管從液氮中取出，放置在室溫海水中快速解凍。將解凍后的精液倒在潮濕的容器底部迅速用羽毛涂勻。緩慢向容器中倒入200mL室溫海水，靜置3min。
實(shí)施例4與實(shí)施例1類似，其區(qū)別在于采用其它水產(chǎn)動(dòng)物，例如鯽魚等。
權(quán)利要求
1.水產(chǎn)動(dòng)物的自由擴(kuò)散人工授精法，其特征在于其步驟如下1)將冷凍保存的水產(chǎn)動(dòng)物精液從液氮或冰箱中取出并解凍，謹(jǐn)防精液遇水激活；2)用柔軟物體將精液迅速、均勻涂抹在濕潤的容器底部，防止操作過程中精液受到機(jī)械損傷或干燥；3)在精液中加入淡水或海水將精子激活，操作過程要防止淡水或海水將精液沖起；4)健康的精子將迅速游到溶液中，將上層含有健康精子的溶液倒出與新鮮卵子混合，完成授精；5)授精結(jié)束后，用海水漂洗授精卵，洗去多余精液。
2.如權(quán)利要求
1所述的水產(chǎn)動(dòng)物的自由擴(kuò)散人工授精法，其特征在于所述的柔軟物體采用羽毛。
3.如權(quán)利要求
1所述的水產(chǎn)動(dòng)物的自由擴(kuò)散人工授精法，其特征在于在精液中加入淡水或海水的數(shù)量按體積比精液∶淡水或海水＝1∶100～200。
專利摘要
水產(chǎn)動(dòng)物的自由擴(kuò)散人工授精法，涉及一種水產(chǎn)動(dòng)物的人工授精，特別是涉及一種適用冷凍保存或者活力較差的水產(chǎn)動(dòng)物精子的自由擴(kuò)散人工授精法。提供一種采用與其他3種人工授精法有本質(zhì)區(qū)別的自由擴(kuò)散人工授精法。將冷凍保存的水產(chǎn)動(dòng)物精液從液氮或冰箱中取出解凍，謹(jǐn)防精液遇水激活；用柔軟物體將精液涂抹在濕潤容器底部，防止操作過程中精液受到機(jī)械損傷或干燥；在精液中加入淡水或海水將精子激活，操作過程要防止淡水或海水將精液沖起；健康的精子將迅速游到溶液中，將上層含有健康精子的溶液倒出與新鮮卵子混合，完成授精；授精結(jié)束后，用海水漂洗授精卵，洗去多余精液?？梢燥@著提高授精率和孵化率，特別是冷凍保存后活力較差的精液的授精率。
文檔編號(hào)A61D19/00GKCN1957860SQ200610135264
公開日2007年5月9日 申請(qǐng)日期2006年11月28日
發(fā)明者王德祥, 蘇永全, 王軍 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan