專利名稱:岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種大黃魚，尤其是涉及一種岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法。
背景技術(shù)：
我國沿海大黃魚存在3個地理種群，它們在壽命、性成熟年齡和種群年齡組成等方面存在明顯差異。以浙江北部岱衢洋為代表的岱衢族大黃魚具有壽命最長(雌魚最高29齡，雄魚27齡)、大量性成熟年齡較遲(雄魚為3齡，雌魚3齡和4齡)、種群組成最復(fù)雜，剩余種群占著穩(wěn)定優(yōu)勢等特點；以廣東西部硇洲為代表的硇洲族大黃魚具有壽命最短(雄魚最高8齡，雌魚9齡)、大量性成熟年齡較早(1齡就有少數(shù)個體開始性成熟，大量個體在2-3齡性成熟)、種群組成簡單和補(bǔ)充種群所占比例增大；以福建北部官井洋為代表的閩粵東族大黃魚的特點則介于岱衢族和硇洲族之間。顯著的種群差異預(yù)示著進(jìn)行大黃魚種內(nèi)雜交是一項十分有意義的工作，親本間的遺傳差異越顯著，子代的雜種優(yōu)勢也可能越具有經(jīng)濟(jì)價值和應(yīng)用價值。
大黃魚不僅所處的地理位置不同，性成熟的時間也不同步。由于大黃魚成魚的遠(yuǎn)程運輸十分困難，這些都嚴(yán)重阻礙大黃魚種群間雜交的順利進(jìn)行。
本申請人在公開號為CN1586430的發(fā)明專利申請中提供一種石首魚類精子激發(fā)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的誘導(dǎo)方法，該方法采用人工受精，將雜交組合中同科不同種父本的精子與大黃魚的卵混合；將精卵混合后，用海水激活將受精卵放入壓力容器，施壓；達(dá)到靶壓力38～55MPa時停止施壓；持續(xù)1～30min后降壓，完成壓力休克的誘導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對岱衢族與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚2個種群大黃魚在性腺成熟時間上不同步的問題，提供一種雜交后代具有生長快、抗逆性強(qiáng)、適于長途運輸?shù)葍?yōu)點的岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法。
本發(fā)明的具體操作如下1)選取閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚雄魚父本，輕壓腹部有乳白色精液流出者留用；2)配置精子稀釋液；3)擠壓雄魚腹部，吸取無血無尿的乳白色精液，經(jīng)鏡檢精子活力在90％以上者用于冷凍保存；4)將精子稀釋液與抗凍劑混勻再加入精子，混勻后貯存于凍存管中，分裝好的凍存管密封后置于4℃環(huán)境中，再置于液氮上方降溫后移入液氮保存?zhèn)溆茫?)選取岱衢族野生大黃魚雌魚母本，進(jìn)行催產(chǎn)；6)當(dāng)大黃魚母本卵子成熟時開始解凍精液，將裝有精子的凍存管從液氮中取出后立即投入室溫淡水中解凍，解凍后的精子用海水激活，同時進(jìn)行人工授精；7)人工授精后，用新鮮海水反復(fù)沖洗受精卵，及時去除下沉的壞卵，充氣孵化。
在步驟1)中，所述的閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚雄魚父本最好為體形完整，身體健康，腹部柔軟的閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚雄魚父本。
在步驟2)中所述的配置精子稀釋液以每100mL精子稀釋液含葡萄糖1.45g；檸檬酸鈉0.2g；KCl0.03g；BSA(小牛血清白蛋白)3g；調(diào)節(jié)pH為5.6～6.0。
在步驟3)中，精子∶精子稀釋液∶抗凍劑＝3∶6∶1，其中抗凍劑使用二甲亞砜(DMSO)。
在步驟4)中，按比例將稀釋液與抗凍劑混勻再加入精子，混勻后貯存于1.8mL的凍存管中，分裝好的凍存管密封后，置于4℃環(huán)境中降溫平衡40min，再置于液氮上方降溫平衡30min后移入液氮保存?zhèn)溆谩?br> 在步驟5)中，所述的岱衢族野生大黃魚雌魚母本選取體形完整、游動活潑，腹部柔軟，泄殖孔微紅的岱衢族野生大黃魚雌魚母本，按每Kg魚重注射1～3ug LHRH-A2進(jìn)行催產(chǎn)，水溫22～24℃，激素效應(yīng)期為36h。
在步驟7)中，最好人工授精5～10min后，用新鮮海水反復(fù)沖洗受精卵。
本發(fā)明首先對大黃魚4個群體的遺傳背景進(jìn)行分析，通過RAPD、ISSR等現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的檢測和確認(rèn)，通過進(jìn)一步實驗發(fā)現(xiàn)以岱衢族野生大黃魚為母本，閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚為父本的雜交組合所產(chǎn)生的后代雜種優(yōu)勢最顯著，不存在生殖隔離。確定了以岱衢族野生大黃魚為母本閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚為父本的雜交組合。
應(yīng)用精子冷凍保存的方法不僅能夠克服不同種群間個體性成熟的時間差異，也能夠克服不同種群所處的空間差異，從而可以有效解決大黃魚種內(nèi)雜交在時空上的隔離的困難。
本發(fā)明的優(yōu)點可歸納為1.雜交組合是以前期的實驗結(jié)果為依據(jù)，確保雜交組合的雜種優(yōu)勢最顯著；2.應(yīng)用精子冷凍保存的方法克服了岱衢族野生大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚在性成熟時間上差異，同時解決了兩者在地理上的隔離；3.雜交產(chǎn)生的后代具有生長快、抗逆性強(qiáng)、適于長途運輸?shù)葍?yōu)點。
具體實施方式
1.在福建選取個體體形完整、身體健康、腹部柔軟的閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚雄魚2尾，輕壓腹部有乳白色精液流出者留用。
2.配置精子稀釋液。每100mL精子稀釋液含葡萄糖1.45g；檸檬酸鈉0.2g；KCL0.03g；BSA(小牛血清白蛋白)3g；調(diào)節(jié)pH到5.6～6.0。
3.擠壓雄魚腹部，吸取無血無尿的乳白色精液，經(jīng)鏡檢精子活力在91％，留用。精子∶稀釋液∶抗凍劑的比例為3∶6∶1，其中抗凍劑使用二甲亞砜(DMSO)。
4.按比例將稀釋液與抗凍劑混勻再加入精子，徹底混勻后貯存于1.8mL的凍存管中。分裝好的凍存管密封后，置于4℃環(huán)境中降溫平衡40min，再置于液氮上方降溫平衡30min后移入液氮保存。將冷凍保存的精液運輸?shù)结丰樽逡吧簏S魚的產(chǎn)區(qū)——浙江。
4.選取體形完整、游動活潑，腹部柔軟，泄殖孔微紅的岱衢族野生大黃魚雌魚5尾。按每Kg魚重注射2ug LHRH-A2進(jìn)行催產(chǎn)。水溫23℃，激素效應(yīng)期約為36h。
5.當(dāng)大黃魚母本卵子成熟時開始解凍精液，將裝有精子的凍存管從液氮中取出后立即投入室溫淡水中解凍。解凍后的精子用海水激活，同時進(jìn)行于人工授精。
6.人工授精50min后，用新鮮海水反復(fù)沖洗受精卵，及時去除下沉的壞卵，充氣孵化。
權(quán)利要求
1.岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法，其特征在于其操作如下1)選取閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚雄魚父本，輕壓腹部有乳白色精液流出者留用；2)配置精子稀釋液；3)擠壓雄魚腹部，吸取乳白色精液，經(jīng)鏡檢精子活力在90％以上者用于冷凍保存；4)將精子稀釋液與抗凍劑混勻再加入精子，混勻后貯存于凍存管中，分裝好的凍存管密封后置于4℃環(huán)境中，再置于液氮上方降溫后移入液氮保存?zhèn)溆茫?)選取岱衢族野生大黃魚雌魚母本，進(jìn)行催產(chǎn)；6)當(dāng)大黃魚母本卵子成熟時開始解凍精液，將裝有精子的凍存管從液氮中取出后立即投入室溫淡水中解凍，解凍后的精子用海水激活，同時進(jìn)行人工授精；7)人工授精后，用新鮮海水反復(fù)沖洗受精卵，及時去除下沉的壞卵，充氣孵化。
2.如權(quán)利要求
1所述的岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法，其特征在于在步驟1)中，所述的閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚雄魚父本為體形完整，身體健康，腹部柔軟的閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚雄魚父本。
3.如權(quán)利要求
1所述的岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法，其特征在于在步驟2)中所述的配置精子稀釋液以每100mL精子稀釋液含葡萄糖1.45g；檸檬酸鈉0.2g；KCl0.03g；小牛血清白蛋白3g；調(diào)節(jié)pH為5.6～6.0。
4.如權(quán)利要求
1所述的岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法，其特征在于在步驟3)中，精子∶精子稀釋液∶抗凍劑＝3∶6∶1。
5.如權(quán)利要求
1或4所述的岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法，其特征在于抗凍劑為二甲亞砜。
6.如權(quán)利要求
1所述的岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法，其特征在于在步驟4)中，按比例將稀釋液與抗凍劑混勻再加入精子，混勻后貯存于1.8mL的凍存管中，分裝好的凍存管密封后，置于4℃環(huán)境中降溫平衡40min，再置于液氮上方降溫平衡30min后移入液氮保存?zhèn)溆谩?br>7.如權(quán)利要求
1所述的岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法，其特征在于在步驟5)中，所述的岱衢族野生大黃魚雌魚母本選取體形完整、游動活潑，腹部柔軟，泄殖孔微紅的岱衢族野生大黃魚雌魚母本，按每Kg魚重注射1～3ug LHRH-A2進(jìn)行催產(chǎn)，水溫22～24℃，激素效應(yīng)期為36h。
8.如權(quán)利要求
1所述的岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法，其特征在于在步驟7)中，最好人工授精5～10min后，用新鮮海水反復(fù)沖洗受精卵。
專利摘要
岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法，涉及一種大黃魚。提供一種雜交后代具有生長快、抗逆性強(qiáng)、適于長途運輸?shù)葍?yōu)點的岱衢族大黃魚與閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚的雜交方法。選取閩粵東族養(yǎng)殖大黃魚雄魚父本，輕壓腹部有乳白色精液流出者留用；配置稀釋液；擠壓雄魚腹部，吸取精液，經(jīng)鏡檢精子活力在90％以上者用于冷凍保存；將稀釋液與抗凍劑混勻再加入精子，貯存于凍存管中，密封后置于4℃中，再置于液氮上方降溫后移入液氮保存；選取岱衢族野生大黃魚雌魚母本催產(chǎn)；當(dāng)大黃魚母本卵子成熟時解凍精液，將裝有精子的凍存管從液氮中取出投入室溫淡水中解凍，用海水激活，人工授精后，用海水沖洗受精卵，去除下沉的壞卵，充氣孵化。
文檔編號A61D19/00GKCN1951183SQ200610135260
公開日2007年4月25日 申請日期2006年11月28日
發(fā)明者王德祥, 蘇永全, 王軍 申請人:廈門大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan