專利名稱:一種治療糖尿病的中藥組合物的制作方法
本發(fā)明涉及一種治療糖尿病的中藥藥物組合物，尤其涉及以中藥黃連中所含有的黃連總生物堿為其藥物有效成分的中藥制劑，該藥物對(duì)糖尿病的治療有效果，本發(fā)明還提供了該藥物的一種制備方法。
糖尿病是一種常見的內(nèi)分泌---代謝病，其分布遍于全世界，并呈逐漸增多的趨勢(shì)，我國(guó)糖尿病的患病率已達(dá)10.15％，與國(guó)外發(fā)達(dá)國(guó)家比雖然并不高，但由于人口眾多，已擁有世界上第二大糖尿病患者人群，僅次于美國(guó)，且正以每15年增加一倍的速度增長(zhǎng)，我國(guó)糖尿病患者以II型為主，但其發(fā)病多隱匿，并發(fā)癥往往較嚴(yán)重，在糖代謝紊亂的同時(shí)往往伴有脂肪代謝的紊亂及血液流變學(xué)的異常，故患者容易發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化及微血管病變，早期失治或治療效果不好，病變可累及身體多系統(tǒng)器官，嚴(yán)重影響患者的壽命及生存質(zhì)量，因此控制糖、脂肪代謝紊亂，防治并發(fā)癥的發(fā)生是糖尿病治療的重點(diǎn)。因此，尋找有效的降糖、降脂、改善血液流變學(xué)的藥物已成為當(dāng)今迫切的研究課題。
本品為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch的干燥根莖。秋季采挖，除去須根及泥沙，干燥，撞去殘留須根。中國(guó)藥典2000版收載的黃連有三個(gè)品種黃連(Coptis chinensis Franch)、三角葉連(Coptis deltoidea C.Y.cheng et Hsiao)和云連(Coptisteeta wall)。他們都具有清熱燥濕，瀉火解毒的作用。通過大量藥理試驗(yàn)，確定黃連為該糖尿病治療藥物的原料藥。
黃連為毛茛科黃連屬植物Coptis chinensis Franch的根莖。本種為多年生草本，主要形態(tài)特征為多分枝集聚成簇，形似雞爪，或單枝彎曲，單枝長(zhǎng)3～9cm，直徑3～8mm。表面黃褐色至灰黃色，粗糙，有不規(guī)則的結(jié)節(jié)狀隆起，可見須根或殘跡，形如連珠，部分節(jié)間平滑。上部有棕色鱗葉殘基。質(zhì)堅(jiān)硬，斷面不整齊，皮部暗棕色或橙紅色，有菊花狀紋理，中央可見紅褐色小形的髓有的中空[1]，氣微，味極苦。采制習(xí)用的本藥材為地下根莖，洗凈粉碎。
黃連味苦，性寒。歸心、脾、胃、肝、膽、大腸經(jīng)。功能清熱燥濕、瀉火解毒?？汕逦笩?、瀉心火。如《百藥效用奇觀》所說“黃連治消渴……能瀉上中下三焦之火，火去則津液無(wú)煎，消渴自止?！?。黃連始載于《神奴本草經(jīng)》“黃連味苦無(wú)毒，主治熱氣?！??！睹t(yī)別錄)》曰“主五臟冷熱，久下泄辟膿血，止消渴?！薄夺t(yī)學(xué)啟源·卷之下·用藥備旨》則明確指出“去中焦?jié)衽c痛，用黃連，瀉心火故也……”。《本草綱目》言“治消渴，用酒蒸黃連?！敝髦巍盁釟狻瓜蚀篌@”?！督?jīng)證證藥錄·卷十三》曰“黃連入胃，苦先走心，上瀉心而下固腎，中燥而旁清木，五臟濕熱之邪，非此不能內(nèi)泄也”據(jù)文獻(xiàn)記載，黃連藥材根莖中主含小檗堿(berberine)5％～8％，還含黃連堿(coptisine)、甲基黃連堿(worenine)、掌葉防己堿(palmatine)、藥根堿(jatrorrhizine)、表黃連堿(epiberberine)、groenlandicine和5-羥基小檗堿(berberastine)等；由于他們有相似結(jié)構(gòu)，常統(tǒng)稱黃連生物堿。此外，尚含木蘭堿(magnoflorine)及阿魏酸(ferulicacid)、綠原酸等。
其它，還含3-(3′，4′-二羥基苯基)-(2R)-乳酸、3-(3′，4′-二羥基苯基)-(2R)-乳酸-4′-O-葡萄糖甙、3′，4′-二羥基苯乙基醇-1-O-β-D-葡萄糖甙(3′，4′-dihydroxyphenethyl alcohol-1-O-β-D-glucopyranoside)、龍膽酸-5-O-β-D-葡萄糖甙(gentisic acide-5-O-β-D-glucpyranoside)、4-O-阿魏酰-D-奎寧酸(4-O-feruloyl-D-quinic acid)、5-O-阿魏酰-D-奎寧酸等[1]。
而用于糖尿病治療的有效部位為從黃連中提取精致而成的黃連總生物堿，通過對(duì)該有效部位中成分的分離鑒定，獲得了3個(gè)化合物。見下表表一黃連總生物堿中的化學(xué)成分
據(jù)藥典記載，黃連的提取物有清熱燥濕、瀉火解毒的作用，對(duì)高血壓、糖尿病、高血脂癥等疾病有一定的療效。在傳統(tǒng)的中醫(yī)療法中，只能是水煎后服用，這種傳統(tǒng)方法一是難以最大程度發(fā)揮藥效，從另一方面講，中藥的服用不方便已是公知的。通過對(duì)中藥中有效成分的藥效研究，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)該天然成分的提取和利用，制造出在藥效上等同甚至優(yōu)于合成藥，而在毒性上低于合成藥的純中藥制劑，這是對(duì)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的發(fā)展。
本發(fā)明的目的在于提供一種可治療糖尿病的中藥藥物組合物，其中的有效成分是來自中藥黃連的生物堿類化合物，亦稱黃連提取物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了以所述黃連生物堿提取物為活性成分，用于治療糖尿病的純中藥藥物制劑和相應(yīng)的藥物劑型。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供用于治療糖尿病的該純中藥藥物的制備方法，特別是黃連提取物的制備方法。
本發(fā)明提供的藥物組合物，其含有從黃連原料藥得到的乙醇提取物，該提取物的組成中包括了黃連總生物堿，其中的主要活性成分是黃連總生物堿，從藥效學(xué)角度出發(fā)，作為本發(fā)明用于治療糖尿病的藥物組合物，所述黃連提取物中的黃連總生物堿的含量在65％以上，最好不低于55％。
在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明還研究提出了一種治療糖尿病的純中藥藥物制劑，該中藥藥物以上述黃連提取物為有效活性成分，并包括了藥劑學(xué)上可接受的輔料組分。
本發(fā)明的藥物制劑包括針劑和口服劑，其中口服劑包括膠囊劑、口服液、片劑、顆粒劑等，針劑，特別是膠囊劑要求其有效成分中黃連總生物堿的含有量不低于65％，最好是不低于55％。
本發(fā)明還提供了該純中藥藥物制劑的一種制備方法，其包括以黃連為原料，用乙醇提取，并經(jīng)純化分離制取黃連提取物，使該提取物中黃連總生物堿的含量在65％以上；以該黃連提取物為有效成分，按照藥劑學(xué)方法制備成要求的藥物制劑。
黃連原料藥一般是秋季采挖，除去須根及泥沙，干燥，撞去殘留須根。在用于提取前應(yīng)先粉碎，通常要求通過20-40目篩，以利于其中有效成分被充分提取。從生產(chǎn)角度考慮，本發(fā)明選用的黃連藥材中，包括了上述各種黃連總生物堿化合物的總生物堿含量以鹽酸小檗堿(C20H18NO4.HCl)計(jì)，應(yīng)該不低于7％。
根據(jù)本發(fā)明的比較優(yōu)選的實(shí)施方案，提取黃連總生物堿提取物的方法包括如下步聚
(1)用80％濃度以上的乙醇加熱回流提取黃連原料藥3次；(2)60℃以下減壓濃縮該乙醇提取液至相對(duì)密度為1.05(25℃測(cè)定)的濃縮液；(3)將上述濃縮液過濾，將濾液用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH值為2～3之間，靜置6小時(shí)，過濾。
(4)將濾后沉淀減壓干燥(70℃)，粉碎成細(xì)粉得生物堿I。
(5)再將濾液過724型弱酸性陽(yáng)離子交換樹脂柱，水洗。
(6)以6％的氨醇溶液洗樹脂柱，洗脫液經(jīng)減壓濃縮，真空干燥得生物堿II。
(7)將生物堿I與生物堿II混合均勻得黃連總生物堿。
上述提取步驟中，乙醇的濃度不能小于80％，從提高提取率的角度考慮，乙醇的濃度越高越好，從生產(chǎn)和成本角度考慮，優(yōu)選使用約80％濃度的乙醇進(jìn)行原料的提取，提取方法為加熱回流，或其它可行的操作方式，乙醇與原料藥之間應(yīng)保持比較大的比例，以保證提取的完全，可以使用原料重量的約8-10倍的乙醇溶液加熱回流(一般回流提取3次)，可用滲漉法及回流法，優(yōu)選采用回流，取黃連藥材粉末，用10倍量80％乙醇加熱回流提取3次，每次1小時(shí)。過濾，將乙醇提取液減壓回收乙醇，將提取液濃縮至相對(duì)密度為1.05(25℃測(cè)定)，過濾，將濾液用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH值為2～3之間，靜置6小時(shí)，過濾，將沉淀減壓干燥(70℃)，粉碎成細(xì)粉得生物堿I。再將濾液過724型弱酸性陽(yáng)離子交換樹脂柱，水洗，除去中性及酸性雜質(zhì)，被吸附的生物堿陽(yáng)離子，以6％的氨醇溶液解吸，洗脫液經(jīng)減壓濃縮，真空干燥得生物堿II，將生物堿I與生物堿II混合均勻得黃連總生物堿。
為有利于有效成分的分離，濃縮后的提取液需要達(dá)到一定的體積和酸堿度，根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案，應(yīng)將提取液體積濃縮至藥材重量的1倍，PH值用鹽酸調(diào)至2～3之間，在此PH值下小檗堿的含量及轉(zhuǎn)移率較高，可以將乙醇提取液中的小檗堿充分沉淀出來；而上清液中的能溶于水的生物堿鹽酸鹽可以利用陽(yáng)離子交換樹脂的吸附特性得以分離。生物堿鹽酸鹽先吸附在724陽(yáng)離子交換樹脂上，與雜質(zhì)分離后，再以6％的氨醇解吸附，得到鹽酸藥根堿及巴馬丁。而724陽(yáng)離子交換樹脂的吸附容量是有一定限度的。以本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案中，我們選擇724陽(yáng)離子交換樹脂吸附黃連生物堿II的載量為2.20g黃連生物堿II/100g樹脂。液體的解吸附流速也對(duì)生物堿的得率有一定影響，我們選擇的液體的流速為0.6ml/cm2.min，以避免有效成分的流失，保證工藝的穩(wěn)定性；另外，從成本及效率方面考慮，我們還進(jìn)行了洗脫劑用量的考察，以本發(fā)明優(yōu)選的7倍體積的6％氨醇以0.6ml/cm2.min速度洗脫。
根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案，該中藥制劑劑型可以是注射針劑或口服制劑，其中口服制劑包括膠囊劑、口服液、片劑、顆粒劑等。在制備口服制劑時(shí)，選用的輔型劑可以是淀粉、糊精或環(huán)糊精、蔗糖、硬脂酸鹽等常規(guī)充填劑，制劑的后期制備工藝及設(shè)備均屬制藥領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，本發(fā)明對(duì)此不作限定，故在此不予詳述。
本發(fā)明優(yōu)選的劑型是膠囊劑按處方，稱取黃連總生物堿100g，碾磨粉碎，過80目篩。加過80目篩的藥用淀粉100g，混合均勻，用65％的乙醇適量制成軟材，過35目篩制顆粒，烘干，使水分小于5％，過40目篩整粒，過60目篩除去細(xì)顆粒，細(xì)顆粒用于下一批膠囊的制備，取40～60目顆粒，分裝于1號(hào)膠囊。每粒膠囊含黃連總生物堿0.1g，用鋁塑復(fù)合包裝，Co60照射滅菌，即得。
本發(fā)明的創(chuàng)造性在于通過科學(xué)可行的方法從黃連中藥中提取分離出了黃連提取物，并進(jìn)一步將該提取物作為有效成分制備成用于治療糖尿病的中藥制劑。如前面所述，本發(fā)明提供的藥物的有效成分是包括黃連總生物堿的黃連提取物，為達(dá)到發(fā)明目的，對(duì)原料藥中黃連總生物堿的提取率應(yīng)在65％以上，同時(shí)該提取物中黃連甙的含量也應(yīng)不低于35％。
為保證藥物的質(zhì)量，在生產(chǎn)過程中需要對(duì)最終提取物中的有效成分含量隨時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。用于檢測(cè)所述生物堿類化合物的方法可以借助任何可行的檢測(cè)手段和公知的方法，本發(fā)明在此提出了一套可行的檢測(cè)方法。
首先，通過高效液相色譜分析，與鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品譜圖對(duì)照，證明了在總生物堿提取物中含有以鹽酸小檗堿為主要成分的黃連生物堿混合物(從譜圖中計(jì)算主要成分的峰面積，鹽酸小檗堿約占到50％左右)。從紫外吸收光譜中可看到，鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品和黃連提取物在345nm均有最大吸收峰，所以應(yīng)該認(rèn)為黃連提取物同鹽酸小檗堿的紫外吸收?qǐng)D譜基本相一致，據(jù)此本發(fā)明采用了紫外—可見光分光光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線粗略檢測(cè)總生物堿的含量；同時(shí)，采用高效液相外標(biāo)法，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)和控制黃連提取物中的鹽酸小檗堿含量，經(jīng)實(shí)際生產(chǎn)中使用證明，檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性好。應(yīng)該說明的是，該方法僅作為本發(fā)明產(chǎn)品的質(zhì)量控制手段之一，不應(yīng)排除其它任何可滿足要求的方法和操作。特別是總生物堿混合物的提取率含量測(cè)定對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是很容易實(shí)現(xiàn)的，也可以如上述以鹽酸小檗堿為標(biāo)示通過對(duì)比提取物與原料藥在345nm的吸光值得到總提取物中有效成分的提取率，而其中鹽酸小檗堿的含量則可通過HPLC外標(biāo)法測(cè)得。
附
圖1是鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC譜圖。
附圖2是本發(fā)明制備的黃連提取物的HPLC譜圖。
提取物中鹽酸小檗堿的HPLC測(cè)定HPLC條件流動(dòng)相乙腈∶0.05mol/L磷酸二氫鈉＝30∶70檢測(cè)波長(zhǎng)277nm流速1ml/分鐘1、標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱取鹽酸小檗堿10.70mg，置10ml容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。精密吸取溶液0.2、0.6、1.0、1.4、1.8ml，移入10ml容量瓶中，甲醇稀釋至10ml，配制成濃度為0.02、0.06、0.10、0.14、0.18mg/ml的甲醇溶液，各取10ul注入高效液相色譜儀，以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
回歸方程Y＝3E+06X-47430線性范圍0.214～1.926ug決定系數(shù)r＝0.99992、黃連提取物中鹽酸小檗堿的測(cè)定對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿10mg，置10ml容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備精密稱取黃連總生物堿10mg，甲醇溶解并定容至50ml，即得。
測(cè)定法精密吸取供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品含鹽酸小檗堿(C20H18NO4.HCl)，不得少于35％為便于理解本發(fā)明組合物在治療和預(yù)防糖尿病方面的藥用價(jià)值，發(fā)明人使用以上所述方法或?qū)嵤├哪z囊藥劑及注射針劑完成了以下藥理和藥效試驗(yàn)一、急性毒性試驗(yàn)用Wistar健康小鼠，采用口服和腹腔注射兩種給藥方式，測(cè)定黃連膠囊的半致死量(LD65)口服為15.64±1.28g/kg，腹腔為8.35±0.98g/kg。口服半致死量為臨床用量的約165倍(臨床使用劑量為100-200mg/kg)。
二、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)1.Wistar種大鼠“黃連總生物堿”口服長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)用Wistar種大鼠180只，體重70-90克，雌雄各半，隨機(jī)分成4組(對(duì)照組及三個(gè)劑量組)，對(duì)照組和大劑量組65只，中劑量組和小劑量組40只，每組雌雄各半。試驗(yàn)用藥為實(shí)施例1的黃連膠囊。
Wistar大鼠以80mg/kg、160mg/kg、320mg/kg三種劑量給予灌胃，正常對(duì)照組灌等量的蒸餾水。每天1次，每周6次，連續(xù)給藥26周。三個(gè)劑量組動(dòng)物一般情況、攝食量、體重變化、尿常規(guī)分析、各項(xiàng)血液學(xué)及血液生化指標(biāo)、臟器重量、臟器系數(shù)、系統(tǒng)尸解及病理組織學(xué)檢查，與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(經(jīng)t檢驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)，p＞0.05)，且均在正常生理范圍內(nèi)。病理學(xué)檢查表明對(duì)照組及各給藥組動(dòng)物各臟器組織均為正常組織結(jié)構(gòu)，未見藥物中毒性病理形態(tài)改變。停藥后4周的恢復(fù)期，觀察各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均未見遲緩毒性。根據(jù)以上長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的結(jié)果，初步認(rèn)為大鼠“黃連總生物堿”320mg/kg/d灌胃是安全的。
2.Beagle犬“黃連總生物堿”口服長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)以“黃連總生物堿”三種劑量25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg給予Beagle犬灌胃，每天1次，每周6次，連續(xù)給藥6個(gè)月。三個(gè)劑量組動(dòng)物的一般表現(xiàn)、進(jìn)食量、體重增長(zhǎng)、心電圖檢測(cè)、各項(xiàng)血液學(xué)及血液生化指標(biāo)、尿常規(guī)分析、系統(tǒng)尸解、臟器系數(shù)、病理組織學(xué)檢查，與對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，未見明顯毒性反應(yīng)。停藥后1個(gè)月的恢復(fù)期，觀察以上所有檢測(cè)指標(biāo)均未見遲緩毒性。根據(jù)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的結(jié)果，初步認(rèn)為Beagle犬100mg/kg口服是安全的。
三、藥效學(xué)試驗(yàn)1.黃連總生物堿對(duì)高血脂大鼠模型的血脂的影響取Wistar大鼠72只，給藥0d先采血1次，根據(jù)血清T-CHO水平分為正常對(duì)照、模型對(duì)照、脂必妥(576mg/kg)、黃連小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)三個(gè)劑量6組，每組12只動(dòng)物。除正常對(duì)照組進(jìn)食普通飼料外，其余大鼠均喂飼高脂飼料6d，同時(shí)ig給藥，正常對(duì)照組模型對(duì)照組ig蒸餾水，每天1次，連續(xù)給藥14d。分別于7、10、14d灌胃給藥后1h眼眶取血測(cè)血脂。
結(jié)果表明黃連總生物堿能夠明顯降低高血脂大鼠模型的血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)，明顯提高其血清高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)。
2.黃連總生物堿對(duì)鏈脲佐菌素所致糖尿病大鼠血糖的影響取Wistar大鼠120只，禁食不禁水24h，ip鏈脲佐菌素80mg/kg(其中12只為正常對(duì)照組ip 0.05mol/L檸檬酸溶液，pH＝4.5)，72h后(禁食不禁水8h)，尾尖取血測(cè)血糖(0d)，將血糖＞180mg/dl的鏈脲佐菌素大鼠56只按血糖值分為模型對(duì)照、苯乙雙胍(100mg/kg)、黃連總堿小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)劑量5組，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組各12只動(dòng)物，其余各組11只。均ig給藥，正常對(duì)照組及模型對(duì)照組ig蒸餾水，每天1次，連續(xù)12d，給藥后3、7、12d尾尖取血測(cè)血糖。
結(jié)果表明給藥后3、7、12d黃連總堿三劑量能明顯降低鏈脲佐素所致糖尿病大鼠血糖，與模型對(duì)照組比較有顯著性差異，黃連總堿三劑量組能夠明顯降低鏈脲佐素所致糖尿病大鼠的血糖。
3.黃連總生物堿對(duì)鏈脲佐菌素所致糖尿病小鼠血糖的影響取昆明種小鼠120只，禁食不禁水24h，取12只為正常對(duì)照組，其余動(dòng)物灌胃鏈脲佐菌素100mg/kg(正常對(duì)照組灌胃0.05mol/L檸檬酸溶液，pH＝4.5)，72h后(禁食不禁水8h)，尾尖取血測(cè)血糖，將血糖＞200mg/dl的鏈脲佐菌素小鼠56只按血糖分為模型對(duì)照、苯乙雙胍(100mg/kg)、黃連總堿小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)劑量5組。均ig給藥，正常對(duì)照組及模型對(duì)照組ig蒸餾水，每天1次，連續(xù)12d，給藥后3、7、12d尾尖取血測(cè)血糖。
結(jié)果表明黃連總堿各劑量組能夠明顯降低鏈脲佐菌素所致糖尿病小鼠的血糖水平，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性差異。
4.黃連總生物堿對(duì)四氧嘧啶糖尿病大鼠血糖的影響取Wistar大鼠100只，雌雄各半，禁食不禁水24h，取10只為正常對(duì)照組，其余動(dòng)物尾靜脈注射60mg/kg四氧嘧啶NS溶液，(正常對(duì)照組尾靜脈注射NS 0.2ml/100g)。72h后(禁食不禁水8h)，尾尖取血測(cè)血糖(0d)，將血糖值低于180mg/dl者剔除，造模成功62只，按血糖分為模型對(duì)照、苯乙雙胍(100mg/kg)、黃連總堿小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)劑量5組。均ig給藥，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組ig蒸餾水，每天1次，連續(xù)12天，分別于給藥后3、7、12d尾尖取血測(cè)血糖。
結(jié)果表明黃連總堿各劑量組能夠明顯降低四氧嘧啶所致糖尿病大鼠的血糖水平。
5.黃連總生物堿對(duì)四氧嘧啶小鼠血糖和胰島素水平的影響取昆明種雄性小鼠100只，體重22±2g，禁食24h后，取12只為正常對(duì)照組灌胃NS外，其余動(dòng)物灌胃四氧嘧啶200mg/kg，72h后測(cè)血糖，血糖值大于180mg/dl為糖尿病動(dòng)物模型(60只)視為0d血糖，按血糖值分為模型對(duì)照、降糖靈(100mg/)、黃連總堿小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)劑量5組，每組12只動(dòng)物。各組均ig給藥，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組ig蒸餾水，每天1次，連續(xù)12天分別于給藥后3、7、12d尾尖取血測(cè)血糖(禁食8h)，12d眼眶取血，離心，提取血清測(cè)胰島素水平。
結(jié)果表明黃連總生物堿三劑量能明顯增加四氧嘧啶糖尿病小鼠血清胰島素水平，明顯降低小鼠血糖。
6.黃連總生物堿對(duì)小鼠糖耐量的影響取昆明種小鼠50只，禁食12h后尾尖取血測(cè)定小鼠血糖(為0h血糖)，按血糖值隨機(jī)分為模型對(duì)照、降糖靈(100mg/kg)、黃連總堿小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)劑量5組，每組10只動(dòng)物。均ig給藥1次模型對(duì)照組ig蒸餾水，給藥后1.0hig50％葡萄糖2.5g/kg，于給糖后0.5h、1.0h、2.0h分別測(cè)定各組血糖，結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)。
結(jié)果表明黃連總生物堿能明顯降低葡萄糖所致小鼠血糖升高，小鼠的糖耐量明顯增強(qiáng)。
本發(fā)明藥用組合物具有如下突出特點(diǎn)1.高效低毒2.有效成分明確，質(zhì)量可控3.工藝簡(jiǎn)便，易于產(chǎn)業(yè)化4.植物原料廉價(jià)易得5.適應(yīng)癥廣，市場(chǎng)容量大
權(quán)利要求
1.一種治療糖尿病的中藥組合物，它是以乙醇作溶劑，從黃連原料藥中采用滲漉、回流方法提取得到的黃連提取物，其特征在于該提取物可通過下列方法得到(1)用80％濃度以上的乙醇加熱回流提取黃連原料藥3次；(2)60℃以下減壓濃縮該乙醇提取液至相對(duì)密度為1.05的濃縮液；(3)將上述濃縮液過濾，將濾液用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH值為2-3之間，靜置6小時(shí)，過濾；(4)將濾后沉淀減壓干燥，粉碎成細(xì)粉得生物堿I；(5)再將濾液過724型弱酸性陽(yáng)離子交換樹脂，水洗；(6)以6％的氨醇溶液洗脫樹脂，洗脫液經(jīng)減壓濃縮，真空干燥得生物堿II；(7)將生物堿I與生物堿II混合均勻得黃連提取物。
2.權(quán)利要求
1所述的中藥組合物，其特征在于該提取物中黃連總生物堿的含量在65％以上，鹽酸小檗堿的含量在15％以上。
3.權(quán)利要求
1所述的中藥組合物，其特征在于724陽(yáng)離子交換樹脂吸附黃連生物堿II的載量為2.20g黃連生物堿II/100g樹脂。
4.權(quán)利要求
1所述的中藥組合物，其特征在于上樣時(shí)液體的流速為0.6ml/cm2.min。
5.權(quán)利要求
1所述的中藥組合物，其特征在于用7倍體積6％的氨醇以0.6ml/cm2.min速度洗脫。
6.一種治療糖尿病的中藥制劑，其特征在于它是由權(quán)利要求
1所述的組合物和藥劑學(xué)可接受的輔料制成的。
7.權(quán)利要求
6所述的中藥制劑，其劑型包括注射針劑和口服制劑。
8.權(quán)利要求
7所述的中藥制劑，其劑型為口服膠囊劑，且所述黃連提取物中黃連總生物堿的含量在65％以上，鹽酸小檗堿的含量在15％以上。
專利摘要
本發(fā)明屬于中藥新藥研究開發(fā)領(lǐng)域，涉及一種運(yùn)用現(xiàn)代科技對(duì)我國(guó)傳統(tǒng)中藥黃連進(jìn)行有效成分提取及精制的方法，本發(fā)明還提供了該中藥的制劑劑型，尤其是口服膠囊劑。提取的有效成分(黃連總生物堿，且其中的主要成分為鹽酸小檗堿)首次用于糖尿病的治療，尤其對(duì)于胃熱型糖尿病有良好的療效。
文檔編號(hào)A61P3/10GKCN1181836SQ01118320
公開日2004年12月29日 申請(qǐng)日期2001年5月23日
發(fā)明者周亞偉, 王莉潔, 解秀蘭, 趙祥, 周玲 申請(qǐng)人:周亞偉導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan