一種馬屬動物凍精的人工授精方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種馬屬動物凍精的人工授精方法，人工授精方法包括以下步驟：發(fā)情調(diào)控步驟；排卵調(diào)控步驟；精液采集步驟；精液檢測步驟；精液處理步驟；精液冷凍步驟；人工授精步驟。本發(fā)明實施例提供的技術(shù)方案帶來的有益效果是：本發(fā)明實施時選擇進(jìn)口優(yōu)良公馬作為父本，選擇進(jìn)口優(yōu)良母馬作為母本，選擇國產(chǎn)母馬作為代孕母馬，根據(jù)母馬生理特點、排卵規(guī)律，采用人工授精方法使進(jìn)口母馬孕育其與進(jìn)口公馬的后代，然后經(jīng)胚胎移植使國產(chǎn)母馬代孕。本發(fā)明可使每匹供體母馬年產(chǎn)有效胚胎6~12枚，鮮胚人工授精成功率可達(dá)85%，本發(fā)明不需要麻醉和手術(shù)，極大地提高了進(jìn)口優(yōu)良母馬的利用率。
【專利說明】一種馬屬動物凍精的人工授精方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及馬屬動物人工授精【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種馬屬動物凍精的人工授精方法。
【背景技術(shù)】
[0002]人工授精技術(shù)是一項應(yīng)用于哺乳動物的繁育高新技術(shù)。利用人工授精，結(jié)合胚胎移植技術(shù)，可以開發(fā)遺傳特性優(yōu)良的母畜繁殖潛力，較快地擴(kuò)大良種畜群，在自然情況下，牛、馬等母畜通常一年產(chǎn)I胎，一生繁殖后代僅僅16只左右；豬也不過百頭。采用人工授精技術(shù)，結(jié)合胚胎移植技術(shù)則使優(yōu)良母畜免去了冗長的妊娠期，胚胎取出后不久即可再次發(fā)情、配種和授精，從而能在一定時間內(nèi)產(chǎn)生較多的后代。精液的冷凍處理可實現(xiàn)一次采精多次使用，進(jìn)一步節(jié)省精液使用量，同時提高種公馬利用率。目前在許多畜牧業(yè)發(fā)達(dá)國家人工授精和胚胎移植均已進(jìn)入產(chǎn)業(yè)化發(fā)展階段。在我國，這一技術(shù)起步較晚，我國從七十年代開始對胚胎生物工程技術(shù)進(jìn)行研究，八十年代后發(fā)展迅速。先后采用胚胎人工授精技術(shù)成功對奶牛、波爾山羊進(jìn)行擴(kuò)繁。由于各種原因，建國以來我國養(yǎng)馬業(yè)日漸消退，因此國內(nèi)馬的胚胎人工授精技術(shù)也鮮有研究。但是隨著現(xiàn)代馬術(shù)運動的興起，我國養(yǎng)馬業(yè)開始復(fù)蘇，應(yīng)用胚胎人工授精技術(shù)進(jìn)行良種馬匹的擴(kuò)繁成為改良我國馬匹品種以適應(yīng)現(xiàn)代馬術(shù)運動的一條捷徑。
[0003]由于馬屬動物的卵巢結(jié)構(gòu)有其獨特性，因此導(dǎo)致了馬屬動物的生理特點及排卵規(guī)律有別于其他動物。雖然牛羊等人工授精和胚胎移植技術(shù)已經(jīng)成熟化，但并不適用于馬屬動物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了提高進(jìn)口良種馬匹的繁育能力，本發(fā)明實施例提供了一種馬屬動物凍精的人工授精方法。
[0005]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種馬屬動物凍精的人工授精方法，其中，所述人工授精方法包括以下步驟:
精液采集步驟:利用假臺馬模擬母馬，采精桶模擬陰道的方法進(jìn)行人工精液采集； 精液檢測步驟:通過顯微鏡檢測鏡子活率、畸形率及運動方式等指標(biāo)；
精液處理步驟:用精液稀釋液稀釋精液，延長精子在體外存活時間，便于人工授精操作和提高成功率。
[0006]精液冷凍步驟:將用精液稀釋液稀釋后的精液經(jīng)22°C、4°C、_196°C降溫冷凍密封保存。
[0007]所述精液采集步驟之前還可以進(jìn)一步包括排卵調(diào)控步驟，所述排卵調(diào)控步驟為:于供體母馬和/或受體母馬發(fā)情期、卵泡直徑> 35mm時靜脈注射hCG，使用劑量為1200-1800 單位 / 匹。
[0008]所述精液采集步驟之前還可以進(jìn)一步包括發(fā)情調(diào)控步驟，所述發(fā)情調(diào)控步驟為:于供體母馬和/或受體母馬黃體生成的第5~14天肌肉注射PGF2 α，使用劑量為
0.15-0.3mg/ 匹。
[0009]所述精液處理步驟之后還可以進(jìn)一步包括人工授精步驟，所述人工授精步驟為:將經(jīng)過處理的精液裝入人工授精管內(nèi)，清洗并擦干供體母馬外陰后，將人工授精管送入母馬子宮內(nèi)，將精液送入供體母馬子宮。
[0010]所述精液處理步驟之后還可以進(jìn)一步包括胚胎收集步驟，所述胚胎收集步驟為:將胚胎收集用Y型管一端插入供體馬子宮，一端接胚胎營養(yǎng)液，另一端接胚胎收集杯，開啟開關(guān)使胚胎營養(yǎng)液流入子宮至子宮充盈，用手經(jīng)肛門輕輕按摩子宮后使胚胎營養(yǎng)液流出子宮經(jīng)集卵杯。
[0011]所述精液處理步驟中的所述精液稀釋液為脫脂奶粉、蛋黃和甘油的混合物。
[0012]所述胚胎收集步驟中的所述胚胎營養(yǎng)液包含以下成分:氯化鈉6~10g/L，氯化鉀
0.1-0.3 g/L，磷酸氫二鈉 f 1.5 g/L，磷酸二氫鉀 0.1-0.3 g/L，氯化鈣 0.05、.15 g/L，氯化鎂0.05、.15 g/L，體積百分比為0.3、.6%的牛血清白蛋白或體積百分比為1%~10%的犢牛血清，青霉素90-110萬單位/升，鏈霉素50-100萬單位/升。
[0013]本發(fā)明實施例提供的技術(shù)方案帶來的有益效果是:本發(fā)明實施時選擇進(jìn)口優(yōu)良公馬作為父本，選擇進(jìn)口優(yōu)良母馬作為母本，選擇國產(chǎn)母馬作為代孕母馬，根據(jù)母馬生理特點、排卵規(guī)律，采用人工授精方法使進(jìn)口母馬孕育其與進(jìn)口公馬的后代，然后經(jīng)胚胎移植使國產(chǎn)母馬代孕。本發(fā)明可使每匹供體母馬年產(chǎn)有效胚胎6~12枚，鮮胚人工授精成功率可達(dá)85%，本發(fā)明不需要麻醉和手術(shù)，極大地提高了進(jìn)口優(yōu)良母馬的利用率。同時因精液冷凍可實現(xiàn)一次采精多次使用，節(jié)省了精液，也提高了種公馬的利用率。
【具體實施方式】
[0014]為了提高進(jìn)口良種馬匹的繁育能力，使進(jìn)口良種馬匹可年產(chǎn)胚胎6-12枚，從而達(dá)到快速繁育進(jìn)口優(yōu)良馬種以適應(yīng)現(xiàn)代馬術(shù)運動的需要的目的，本發(fā)明提供了一種馬屬動物凍精的人工授精方法。
[0015]實施例1:
一種馬屬動物凍精的人工授精方法，人工授精方法包括以下步驟:
精液采集步驟:利用假臺馬模擬母馬，采精桶模擬陰道的方法進(jìn)行人工精液采集； 精液檢測步驟:通過顯微鏡檢測鏡子活率、畸形率及運動方式等指標(biāo)；
精液處理步驟:用精液稀釋液稀釋精液，延長精子在體外存活時間，便于人工授精操作和提高成功率。
[0016]精液冷凍步驟:將用精液稀釋液稀釋后的精液經(jīng)22°C、4°C、_196°C降溫冷凍密封保存。
[0017]其中，處理精液用精液稀釋液為脫脂奶粉、蛋黃和甘油的混合物。
[0018]人工授精試驗:
種公馬:歐洲進(jìn)口良種溫血馬4匹。
[0019]供體母馬:歐洲進(jìn)口良種溫血馬10匹。
[0020]受體母馬:國產(chǎn)母馬120匹。
[0021]試驗時間及人工授精方法:采用本發(fā)明實施例1的人工授精方法進(jìn)行人工授精試驗。人工授精數(shù)量按月統(tǒng)計。
[0022]實驗地點:青島即墨鰲山衛(wèi)馬匹繁育基地。
[0023]試驗數(shù)據(jù)見表1。
[0024]表1每月人工授精數(shù)量和懷孕數(shù)量統(tǒng)計表
【權(quán)利要求】
1.一種馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述人工授精方法包括以下步驟: 精液采集步驟:利用假臺馬模擬母馬，采精桶模擬陰道的方法進(jìn)行人工精液采集； 精液檢測步驟:通過顯微鏡檢測鏡子活率、畸形率及運動方式等指標(biāo)； 精液處理步驟:用精液稀釋液稀釋精液，延長精子在體外存活時間，便于人工授精操作和提高成功率。
2.精液冷凍步驟:將用精液稀釋液稀釋后的精液經(jīng)22°C、4°C、_196°C降溫冷凍密封保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述精液采集步驟之前還可以進(jìn)一步包括排卵調(diào)控步驟，所述排卵調(diào)控步驟為:于供體母馬和/或受體母馬發(fā)情期、卵泡直徑> 35mm時靜脈注射hCG，使用劑量為1200-1800單位/匹。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述精液采集步驟之前還可以進(jìn)一步包括發(fā)情調(diào)控步驟，所述發(fā)情調(diào)控步驟為:于供體母馬和/或受體母馬黃體生成的第5~14天肌肉注射PGF2 α，使用劑量為0.15-0.3mg/匹。
5.根據(jù)權(quán)利要求1一3任一所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述精液處理步驟之后還可以進(jìn)一步包括人工授精步驟，所述人工授精步驟為:將經(jīng)過處理的精液裝入人工授精管內(nèi)，清洗并擦干供體母馬外陰后，將人工授精管送入母馬子宮內(nèi)，將精液送入供體母馬子宮。
6.根據(jù)權(quán)利要求1一3任一所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述精液處理步驟之后還可以進(jìn)一步包括胚胎收集步驟，所述胚胎收集步驟為:將胚胎收集用Y型管一端插入供體馬子宮，一端接胚胎營養(yǎng)液，另一端接胚胎收集杯，開啟開關(guān)使胚胎營養(yǎng)液流入子宮至子宮充盈，用手經(jīng)肛門輕輕按摩子宮后使胚胎營養(yǎng)液流出子宮經(jīng)集卵杯。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述精液處理步驟中的所述精液稀釋液為脫脂奶粉、蛋黃和甘油的混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1一5任一所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述胚胎收集步驟中的所述胚胎營養(yǎng)液包含以下成分:氯化鈉6~10g/L，氯化鉀0.1-0.3 g/L，磷酸氫二鈉廣1.5 g/L，磷酸二氫鉀0.1-0.3 g/L，氯化鈣0.05、.15 g/L，氯化鎂0.05、.15g/L，體積百分比為0.3、.6%的牛血清白蛋白或體積百分比為1%~10%的犢牛血清，青霉素90-110萬單位/升，鏈霉素50-100萬單位/升。
【文檔編號】A61D19/02GK103784217SQ201310678166
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2013年12月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月13日
【發(fā)明者】叢龍曉, 孫吉勝, 張建軍 申請人:青島德瑞駿發(fā)生物科技有限公司, 伊犁德瑞駿發(fā)生物科技有限公司, 青島德瑞鰲瀾馬術(shù)有限公司