本發(fā)明屬于疫苗的
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑。
背景技術(shù)：
：新城疫（newcastledisease,nd）是由新城疫病毒引起禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病，具有很高的發(fā)病率和病死率，是危害養(yǎng)禽業(yè)的一種主要傳染病。oie將其列為a類疫病。新城疫無特效的治療手段，主要依賴疫苗免疫預(yù)防，雞新城疫活疫苗(lasota株)是最常用的疫苗之一，具有良好的安全性和防治效果。該疫苗的制備通常是把疫苗用毒株接種于9-11日齡spf雞胚，37攝氏度孵化3-5天，收獲尿囊液，與一定比例的凍干保護(hù)劑混合，分裝凍干制成。凍干保護(hù)劑對新城疫活疫苗(lasota株)的效價、儲存、運(yùn)輸和使用過程均有至關(guān)重要的影響，目前國內(nèi)使用的凍干保護(hù)劑主要是蔗糖、脫脂奶粉、明膠、白蛋白等不同組合，保護(hù)效果一般，且一般要求保存條件為-15℃冷凍保存，而在實(shí)際的臨床使用中，運(yùn)輸和正規(guī)供應(yīng)站可較好執(zhí)行保存條件，養(yǎng)殖戶或養(yǎng)殖企業(yè)多存在室溫操作，飲水用苗時間過長等問題，在此過程易造成少部分失效，同時為降低生產(chǎn)和使用成本，耐熱保護(hù)劑應(yīng)考慮低成本組合，對此，有必要篩選開發(fā)一種耐熱凍干保護(hù)劑，能夠適當(dāng)提高疫苗保存溫度，減少使用過程的損失，且成本低廉，降低養(yǎng)殖成本。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足而提供的一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：2%～6%棉籽糖、1%～2%肌醇、1%～3%麥芽糊精、0.5%～2%脯氨酸、0.5～1.5%吐溫80，余量為蒸餾水。一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：3%～5%棉籽糖、1.2%～1.8%肌醇、1.6%～2.5%麥芽糊精、1%～1.7%脯氨酸、0.8～1.2%吐溫80，余量為蒸餾水。一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：4%棉籽糖、1.5%肌醇、2%麥芽糊精、1.4%脯氨酸、1%吐溫80，余量為蒸餾水。本發(fā)明中棉籽糖是低分子量糖類，由半乳糖、葡萄糖及果糖3個單糖縮合而成的非還原糖，易溶于水，在熱、酸環(huán)境中都很穩(wěn)定，無吸濕性。其可以通過水合作用使溶液粘性增大，弱化水的結(jié)晶過程，起到保護(hù)作用。此外還具有整腸及提高機(jī)體免疫力等多種功能，非常適合應(yīng)用于新城疫等腸道疫病的防治。肌醇為多羥基化合物，當(dāng)凍干過程中脫水后，多羥基化合物的羥基能替代蛋白質(zhì)表面的水分子的輕基，與蛋白質(zhì)表面形成一層假定的水化膜，從而保護(hù)氫鍵的連接位點(diǎn)不直接暴露在周圍環(huán)境中，穩(wěn)定蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)，防止蛋白質(zhì)因凍干而變性，從而起到保護(hù)作用。麥芽糊精屬糖類，糖是最常見、使用最廣的一類凍干保護(hù)劑，為蛋白質(zhì)的非特異性穩(wěn)定劑，在凍干及保存各階段均能對生物制品起到一定的保護(hù)作用。糖對阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的改變有顯著作用。麥芽糊精屬低聚糖類，不能透過細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，可是溶液呈過冷狀態(tài)，即可在特定溫度下降低溶質(zhì)濃度，從而起到保護(hù)作用。脯氨酸是氨基酸類保護(hù)劑中的常用品種，在冷凍過程中的主要作用是能升高成品的塌陷溫度，阻止因塌陷而引起蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的破壞。吐溫80為表面活性劑，在冷凍干燥過程中輔助保護(hù)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)免受破壞。微生物活疫苗的最佳凍干保護(hù)劑不同，可采用不同濃度的幾種凍干保護(hù)劑協(xié)同保護(hù)，以獲得個體化的最佳組合。經(jīng)驗(yàn)證，用本發(fā)明制備雞新城疫活疫苗(lasota株)外觀合格，效價穩(wěn)定，符合國家獸藥典相關(guān)規(guī)定，價格低廉，可在2-8℃保存24個月，且在37℃可至少保存1周，可有效減少運(yùn)輸、使用過程中的損失。具體實(shí)施方式實(shí)施例1、篩選試驗(yàn)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，選擇多種預(yù)選凍干保護(hù)劑，分別為蔗糖、棉籽糖、聚乙二醇、脫脂奶粉、麥芽糊精、明膠、吐溫80、谷氨酸鈉、甘油、葡聚糖、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮、海藻糖、脯氨酸、肌醇，按尿囊液∶保護(hù)劑=1∶1體積比添加凍干保護(hù)劑，以外觀、及凍干后病毒的雞胚半數(shù)感染量（eid50/0.1ml）為評價指標(biāo)，同時考慮成本和類別因素，預(yù)選出肌醇、麥芽糊精、脯氨酸、吐溫80為組合物，進(jìn)一步組合篩選，篩選出2-6%棉籽糖、1-2%肌醇、1-3%麥芽糊精、0.5-2%脯氨酸、0.5-1.5%吐溫80作為凍干保護(hù)劑組合。優(yōu)選組合根據(jù)單因素預(yù)選出棉籽糖、肌醇、麥芽糊精、脯氨酸、吐溫80為試驗(yàn)因素，以外觀、及其對應(yīng)的半成品的雞胚半數(shù)感染量（eid50/0.1ml）為評價指標(biāo)，每個因素取3個濃度水平，進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計l18（35），正交試驗(yàn)因素與水平見表1。表1正交試驗(yàn)的因素與水平根據(jù)正交試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，優(yōu)選出凍干保護(hù)劑組合：4%棉籽糖、1%肌醇、3%麥芽糊精、1%脯氨酸、0.5%吐溫80，其余成分為蒸餾水。實(shí)施例2、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：將40g棉籽糖、10g肌醇、30g麥芽糊精、10g脯氨酸、5ml吐溫80，溶于蒸餾水1000ml中，然后100℃高壓滅菌30分鐘，冷卻即為所述的雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑。將尿囊液與雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑按1:1進(jìn)行配置，分裝，凍干，獲得凍干疫苗。疫苗檢驗(yàn)：按照中國獸藥典2015版第三部相關(guān)項(xiàng)目檢驗(yàn)，對上述凍干疫苗進(jìn)行檢驗(yàn)，經(jīng)檢驗(yàn)，本發(fā)明制備的新城疫活疫苗(lasota株)符合規(guī)定，見表2。表2：疫苗檢驗(yàn)結(jié)果項(xiàng)目物理性狀無菌檢驗(yàn)支原體檢驗(yàn)外源病毒檢驗(yàn)特異性檢驗(yàn)安全性檢驗(yàn)剩余水分病毒含量（eid50/0.1ml）結(jié)果海綿狀疏松團(tuán)塊合格合格合格合格合格1.87.5對比檢驗(yàn)：購買市售新城疫活疫苗(lasota株)，與本發(fā)明凍干疫苗分別保存于37℃，于保存后3天，7天,取出檢驗(yàn)其病毒含量（eid50/0.1ml）；保存于-15℃，2-8℃，于保存后6個月，12個月，18個月，24個月,取出檢驗(yàn)其病毒含量（eid50/0.1ml）。結(jié)果見表3，表4。表3：疫苗在37℃保存對比實(shí)驗(yàn)結(jié)果0天3天7天本發(fā)明7.57.16.8市售產(chǎn)品7.66.425.7表4：疫苗在-15℃，2-8℃保存對比實(shí)驗(yàn)結(jié)果從結(jié)果可以看出，本發(fā)明可在37℃高溫至少維持一周，仍可以夠達(dá)到免疫所需病毒含量，優(yōu)于市售產(chǎn)品，可以在臨床實(shí)際使用中滿足動物機(jī)體免疫需求。在-15℃，2-8℃條件下保存24個月保持較高的病毒含量，尤其在2-8℃條件下，更加符合生產(chǎn)時間對疫苗保存的新要求。本發(fā)明可有效減少保存不當(dāng)，使用時間過長造成的損失。實(shí)施例3、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：20g棉籽糖、10g肌醇、10g麥芽糊精、5g脯氨酸、5ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例4、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、10g麥芽糊精、5g脯氨酸、5ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例5、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：20g棉籽糖、10g肌醇、30g麥芽糊精、5g脯氨酸、5ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例6、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：20g棉籽糖、10g肌醇、10g麥芽糊精、20g脯氨酸、5ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例7、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：20g棉籽糖、10g肌醇、10g麥芽糊精、5g脯氨酸、15ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例8、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、30g麥芽糊精、5g脯氨酸、5ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例9、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：40g棉籽糖、10g肌醇、30g麥芽糊精、20g脯氨酸、5ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例10、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：40g棉籽糖、10g肌醇、10g麥芽糊精、20g脯氨酸、15ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例11、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、30g麥芽糊精、20g脯氨酸、15ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例12、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：40g棉籽糖、10g肌醇、30g麥芽糊精、20g脯氨酸、15ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例13、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、10g麥芽糊精、20g脯氨酸、15ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例14、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：20g棉籽糖、20g肌醇、30g麥芽糊精、5g脯氨酸、15ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例15、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、30g麥芽糊精、20g脯氨酸、5ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例16、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：40g棉籽糖、10g肌醇、10g麥芽糊精、20g脯氨酸、15ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例17、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、10g麥芽糊精、5g脯氨酸、15ml吐溫80，蒸餾水1000ml。實(shí)施例18、一種雞新城疫活疫苗(lasota株)的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，它是由下述重量份數(shù)的原料配制而成：40g棉籽糖、15g肌醇、20g麥芽糊精、14g脯氨酸、10ml吐溫80，蒸餾水1000ml。當(dāng)前第1頁12