本發(fā)明涉及脂質(zhì)體領(lǐng)域，具體涉及脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體是一種由排列有序的磷脂雙分子層組成的多層微囊結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)類(lèi)似生物膜。囊泡內(nèi)為內(nèi)水相，通常用于包裹水溶性藥物的場(chǎng)所；磷脂雙分子層為疏水層，通常用于包裹脂溶性藥物。脂質(zhì)體具有很多優(yōu)良的性質(zhì)，如降低藥物毒性、提高藥物的穩(wěn)定性、緩釋性、透皮吸收效率高、可以攜帶藥物進(jìn)入細(xì)胞等。最近，有關(guān)脂質(zhì)體用于化妝品行業(yè)和食品行業(yè)的文獻(xiàn)報(bào)道也越來(lái)越多。
大部分的活性藥物存在水溶性差，吸收率低，劑量低等缺點(diǎn)，較難普遍適用于化妝品領(lǐng)域。且由于人體皮膚具有天然的屏障功能，藥物的透皮滲透吸收及主動(dòng)吸收會(huì)受到明顯的影響和制約，從而大大降低或削弱藥物應(yīng)具有的生物學(xué)作用和療效。脂質(zhì)體與生物膜結(jié)構(gòu)類(lèi)似，利用脂質(zhì)體包裹技術(shù)能夠增加藥物進(jìn)入皮膚角質(zhì)層的透過(guò)量，避免藥物因透過(guò)皮膚量過(guò)少而失去功效。同時(shí)脂質(zhì)體能夠持續(xù)停留在皮膚角質(zhì)層，對(duì)表皮緩慢釋放藥物，提高藥物的持續(xù)性功效。且脂質(zhì)體本身無(wú)毒性，在體內(nèi)能自主完成生物降解，也不產(chǎn)生皮膚刺激性，是皮膚美容及化妝品應(yīng)用的理想載體。
然而，現(xiàn)有的脂質(zhì)體在體外存在易氧化、藥物滲漏，脂質(zhì)體顆粒間容易發(fā)生自發(fā)地聚集導(dǎo)致體系分層、產(chǎn)生沉淀等一系列熱力學(xué)不穩(wěn)定的問(wèn)題，導(dǎo)致脂質(zhì)體在實(shí)際應(yīng)用中存在困難。此外，脂質(zhì)體在儲(chǔ)存過(guò)程中還會(huì)存在粒徑增大的問(wèn)題，粒徑過(guò)大的脂質(zhì)體難以穿透皮膚，從而使藥物功效降低。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有的常規(guī)脂質(zhì)體存在的穩(wěn)定性較差的缺陷，提供了一種穩(wěn)定性較高的脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明一方面提供一種脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體由磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物形成，其中，所述脂肪酸類(lèi)化合物為c8-c20的脂肪酸及其鹽中的一種或多種，所述磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物的重量比為100：20-60：2-30。
本發(fā)明第二方面提供一種脂質(zhì)體的制備方法，該方法包括：
(1)在有機(jī)溶劑中，將磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物進(jìn)行混合；
(2)將步驟(1)所得混合物中的有機(jī)溶劑除去以得到薄膜狀剩余物；
(3)在含水溶劑存在下使得步驟(2)所得薄膜狀剩余物形成脂質(zhì)體；
其中，所述脂肪酸類(lèi)化合物為c8-c20的脂肪酸及其鹽中的一種或多種，所述磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物的用量的重量比為100：20-60：2-30。
本發(fā)明第三方面提供由上述方法制得的脂質(zhì)體。
本發(fā)明第四方面提供上述脂質(zhì)體作為藥物載體的應(yīng)用。
本發(fā)明所得的脂質(zhì)體，具有優(yōu)良的穩(wěn)定性，能夠長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存仍保持較小的粒徑。
具體實(shí)施方式
在本文中所披露的范圍的端點(diǎn)和任何值都不限于該精確的范圍或值，這些范圍或值應(yīng)當(dāng)理解為包含接近這些范圍或值的值。對(duì)于數(shù)值范圍來(lái)說(shuō)，各個(gè)范圍的端點(diǎn)值之間、各個(gè)范圍的端點(diǎn)值和單獨(dú)的點(diǎn)值之間，以及單獨(dú)的點(diǎn)值之間可以彼此組合而得到一個(gè)或多個(gè)新的數(shù)值范圍，這些數(shù)值范圍應(yīng)被視為在本文中具體公開(kāi)。
本發(fā)明一方面提供一種脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體由磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物形成，其中，所述脂肪酸類(lèi)化合物為c8-c20的脂肪酸及其鹽中的一種或多種，所述磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物的重量比為100：20-60：2-30。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)采用重量比為100：20-60：2-30的所述磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物來(lái)形成脂質(zhì)體時(shí)，能夠獲得穩(wěn)定性更為優(yōu)良的脂質(zhì)體。為了獲得穩(wěn)定性更高的脂質(zhì)體，優(yōu)選地，所述磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物的重量比為100：20-55：5-25，優(yōu)選為100：25-45：8-20，更優(yōu)選為100：30-45：8-15。
根據(jù)本發(fā)明，所述磷脂可以為本領(lǐng)域常規(guī)用于制備脂質(zhì)體的任何磷脂類(lèi)化合物，可以是天然磷脂(卵磷脂、腦磷脂、心磷脂等)，也可以是合成磷脂，例如所述磷脂為大豆卵磷脂、氫化卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰膽堿(dspc)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(dmpc)、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dppc)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰肌醇中的一種或多種?？紤]到所述磷脂與本發(fā)明的膽固醇、脂肪酸類(lèi)化合物之間的配合作用，優(yōu)選地，所述磷脂為大豆卵磷脂、氫化卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿和二硬脂酰磷脂酰膽堿中的一種或多種，更優(yōu)選為二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿和二硬脂酰磷脂酰膽堿中的一種或多種。
根據(jù)本發(fā)明，所述脂肪酸類(lèi)化合物對(duì)于脂質(zhì)體具有一定的改性作用，在以特定的用量與特定用量比例的本發(fā)明的磷脂和膽固醇配合下，能夠制得穩(wěn)定性提高的脂質(zhì)體，而且這樣的脂質(zhì)體可以以更高的藥物包封率包封藥物，也利于脂質(zhì)體在化妝品等方面的應(yīng)用。所述脂肪酸類(lèi)化合物為c8-c20的脂肪酸及其鹽中的一種或多種，其中，c8-c20的脂肪酸的鹽可以是其堿金屬鹽、堿土金屬鹽等。優(yōu)選地，所述脂肪酸類(lèi)化合物為辛酸、辛酸鈉、辛酸鉀、辛酸鈣、辛酸鎂、癸酸、癸酸鈉、癸酸鉀、癸酸鈣、癸酸鎂、月桂酸、月桂酸鈉、月桂酸鉀、月桂酸鈣、月桂酸鎂、十四烷酸、十四烷酸鈉、十四烷酸鉀、十四烷酸鈣、十四烷酸鎂、棕櫚酸、棕櫚酸鈉、棕櫚酸鉀、棕櫚酸鈣、棕櫚酸鎂、硬脂酸、硬脂酸鈉、硬脂酸鉀、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、油酸、油酸鈉、油酸鉀、油酸鈣、油酸鎂、亞油酸、亞油酸鈉、亞油酸鉀、亞油酸鈣、亞油酸鎂、花生酸、花生酸鈉、花生酸鉀、花生酸鈣和花生酸鎂中的一種或多種，更優(yōu)選為硬脂酸鈉、硬脂酸鉀、硬脂酸鎂、棕櫚酸鈉、棕櫚酸鉀、棕櫚酸鈣和棕櫚酸鎂中的一種或多種。
其中，所述脂質(zhì)體的粒徑為80-180nm，優(yōu)選為100-150nm，更優(yōu)選為100-130nm。
本發(fā)明第二方面提供一種脂質(zhì)體的制備方法，該方法包括：
(1)在有機(jī)溶劑中，將磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物進(jìn)行混合；
(2)將步驟(1)所得混合物中的有機(jī)溶劑除去以得到薄膜狀剩余物；
(3)在含水溶劑存在下使得步驟(2)所得薄膜狀剩余物形成脂質(zhì)體；
其中，所述脂肪酸類(lèi)化合物為c8-c20的脂肪酸及其鹽中的一種或多種，所述磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物的用量的重量比為100：20-60：2-30。
根據(jù)本發(fā)明，步驟(1)中，在有機(jī)溶劑中，將磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物進(jìn)行混合，可以使得磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物在有機(jī)溶劑中溶解，也可以使得它們彼此充分接觸。其中，磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物的種類(lèi)如上文中所介紹的，在此不再贅述。
優(yōu)選地，所述磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物的用量的重量比為100：20-55：5-25，優(yōu)選為100：25-45：8-20，更優(yōu)選為100：30-45：8-15。
根據(jù)本發(fā)明，盡管所述有機(jī)溶劑可以采用能夠基本溶解磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物的任何種類(lèi)的、且易于除去的有機(jī)溶劑，但是為了便于磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物能夠在更為適宜的溶劑氣氛中獲得更好的結(jié)合，以獲得穩(wěn)定性更高、粒徑更為適合的脂質(zhì)體，優(yōu)選地，步驟(1)中，所述有機(jī)溶劑為第一有機(jī)溶劑與第二有機(jī)溶劑的混合物。其中，所述第一溶劑為甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、異丙醇、正丁醇和乙酸乙酯中的一種或多種，優(yōu)選為甲醇、乙醇、異丙醇和乙酸乙酯中的一種或多種，優(yōu)選為甲醇和/或乙醇。所述第二溶劑為氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、乙醚和四氫呋喃中的一種或多種，優(yōu)選為氯仿、二氯甲烷、四氯化碳和乙醚中的一種或多種，優(yōu)選為氯仿和/或二氯甲烷。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選地，所述第一有機(jī)溶劑與第二有機(jī)溶劑的重量比為100：10-100，優(yōu)選為100：30-90，更優(yōu)選為100：40-85。
根據(jù)本發(fā)明，所述有機(jī)溶劑的用量可以在較寬范圍內(nèi)變動(dòng)，優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑的用量使得，所述磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物的總濃度為2-10重量％，優(yōu)選為2.5-6重量％，例如為2.9-4.7重量％。
根據(jù)本發(fā)明，步驟(2)中，通過(guò)將步驟(1)所得混合物中的有機(jī)溶劑除去，便可獲得薄膜狀剩余物，這樣在步驟(3)加入水后，就可促使脂質(zhì)體的形成。
其中，該有機(jī)溶劑的除去可以在減壓條件下進(jìn)行，優(yōu)選地，步驟(2)中，除去有機(jī)溶劑的溫度為50-100℃。這樣的過(guò)程例如可以將步驟(1)所得混合物置于反應(yīng)容器中，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在減壓條件下進(jìn)行，從而在反應(yīng)容器壁面上便可形成薄膜狀剩余物。
根據(jù)本發(fā)明，步驟(3)中，所述含水溶劑可以是水，也可以是含有少量其他不影響本發(fā)明的脂質(zhì)體的成形的其他溶劑的水溶液，優(yōu)選為水。優(yōu)選地，步驟(3)中，所述磷脂和含水溶劑的用量的重量比為1：20-100，優(yōu)選為1：30-80，更優(yōu)選為1：40-60。采用該用量下的含水溶劑，可以獲得粒徑更為適合的脂質(zhì)體。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選地，步驟(3)包括：將含水溶劑與步驟(2)所得薄膜狀剩余物進(jìn)行加熱處理，而后再進(jìn)行均質(zhì)處理。其中，所述加熱處理的條件優(yōu)選包括：溫度為40-80℃，時(shí)間為0.5-3h。所述均質(zhì)處理的條件優(yōu)選包括：先在5,000-20,000rpm的轉(zhuǎn)速下分散10-50min，而后在500-1500bar且20-60hz的頻率超聲下高壓勻質(zhì)2-6次。所述勻質(zhì)處理例如可以在ika均質(zhì)機(jī)、ika高壓均質(zhì)機(jī)中進(jìn)行。
本發(fā)明第三方面提供由上述方法制得的脂質(zhì)體。
本發(fā)明第四方面提供上述脂質(zhì)體作為藥物載體的應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明，該藥物載體的應(yīng)用中，本發(fā)明的脂質(zhì)體可以載帶本領(lǐng)域任何可用脂質(zhì)體載帶的藥物。
本發(fā)明所得的脂質(zhì)體，尤其本發(fā)明的方法所得的脂質(zhì)體，具有優(yōu)良的穩(wěn)定性，能夠長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存仍保持較小的粒徑。
以下將通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。
實(shí)施例1-24
本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的脂質(zhì)體及其制備方法。
(1)將100g總用量的磷脂、膽固醇和脂肪酸類(lèi)化合物溶解于溶劑中(它們的種類(lèi)和各自所占重量份見(jiàn)表1所示)；
(2)將所得溶液于茄型瓶中采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的條件包括：溫度為70℃，轉(zhuǎn)速為90rpm，時(shí)間約為30min；以除去溶劑，得到薄膜狀剩余物；
(3)將水(重量是磷脂的50倍)加入到上述茄型瓶以與薄膜狀剩余物接觸，并采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于65℃、90rpm下旋轉(zhuǎn)加熱1h；
(4)將所得混合物于ika均質(zhì)機(jī)中設(shè)置10,000rpm下均質(zhì)約10min，再經(jīng)過(guò)ika高壓均質(zhì)機(jī)于1000bar且50hz下循環(huán)均質(zhì)3次(總時(shí)長(zhǎng)約20min)，得到脂質(zhì)體；
其中，僅實(shí)施例2(其他的實(shí)施例都采用上面描述的操作參數(shù))中：步驟(2)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的條件包括：溫度為80℃，轉(zhuǎn)速為100rpm，表壓為50mpa，時(shí)間約為30min；步驟(3)水(重量是磷脂的60倍)加入到上述茄型瓶以與薄膜狀剩余物接觸，并采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于55℃、150rpm下旋轉(zhuǎn)加熱1.5h；步驟(4)ika均質(zhì)機(jī)中在15,000rpm下均質(zhì)5min，再經(jīng)過(guò)ika高壓均質(zhì)機(jī)于1000bar且50hz頻率下循環(huán)均質(zhì)3次(總時(shí)長(zhǎng)約15min)，得到脂質(zhì)體。
對(duì)比例1
根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，不同的是，不采用硬脂酸鈉，從而得到脂質(zhì)體。
對(duì)比例2
根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，不同的是，大豆卵磷脂的重量份為100重量份，膽固醇的重量份為70重量份，硬脂酸鈉的重量份為1重量份；從而得到脂質(zhì)體。
對(duì)比例3
根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，不同的是，大豆卵磷脂的重量份為100重量份，膽固醇的重量份為10重量份，硬脂酸鈉的重量份為40重量份；從而得到脂質(zhì)體。
表1
測(cè)試?yán)?/p>
測(cè)量上述脂質(zhì)體的起始粒徑，以及將上述脂質(zhì)體在室溫(約25℃)下放置兩周后測(cè)試其粒徑，其結(jié)果見(jiàn)表2所示。
其中，粒徑變化率為：(兩周后的粒徑-起始粒徑)/起始粒徑×100％。
表2
通過(guò)表2的結(jié)果可以看出，本發(fā)明的脂質(zhì)體具有更好的穩(wěn)定性，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間放置后，有的粒徑甚至具有降低的趨勢(shì)。
以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于此。在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡(jiǎn)單變型，包括各個(gè)技術(shù)特征以任何其它的合適方式進(jìn)行組合，這些簡(jiǎn)單變型和組合同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開(kāi)的內(nèi)容，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。