本發(fā)明涉及一種半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的載藥醇質(zhì)體的制備方法，屬于載藥醇質(zhì)體的制備工藝技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

肝癌在各腫瘤致死原因中列第3位。全球范圍內(nèi)，超過35％的肝癌病例發(fā)生于我國(guó)。所以，找到一個(gè)有效的治療方法是迫切需要的。半乳糖配體可與肝癌細(xì)胞特異性表達(dá)的去唾液酸糖蛋白受體結(jié)合，主動(dòng)靶向肝癌，同時(shí)增加腫瘤細(xì)胞的攝取。

聚乙烯亞胺(pei)是非病毒基因載體之一。因具有良好的基因結(jié)合能力和轉(zhuǎn)染能力，已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于核酸類藥物的細(xì)胞傳遞和轉(zhuǎn)染。一直被認(rèn)為是基因轉(zhuǎn)染試劑的黃金標(biāo)志。但其較高的細(xì)胞毒性限制了其在基因治療中的應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)，半乳糖化的聚乙烯亞胺(gal-pei)比pei對(duì)細(xì)胞的毒副作用小，還具有主動(dòng)靶向肝癌的作用。

醇質(zhì)體是一種可包裹和傳遞大分子類藥物的給藥系統(tǒng)。其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、包封率高、具有低毒性、低免疫性和良好的細(xì)胞相容性，在藥物遞送研究領(lǐng)域中受到廣泛關(guān)注。溶解在醇質(zhì)體磷脂層中的低分子量醇增強(qiáng)膜的柔性和流動(dòng)性，使其與細(xì)胞膜更好地融合，將藥物直接釋放到細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。

綜上所述，基于醇質(zhì)體制備技術(shù)和層層自組裝技術(shù)，可通過靜電吸附先后在載藥醇質(zhì)體外組裝半乳糖化聚乙烯亞胺和核酸類藥物，有效負(fù)載并遞送多種藥物(含基因藥物)，并其提高藥物靶向肝腫瘤細(xì)胞的治療。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的載藥醇質(zhì)體的制備方法，所得到的載藥醇質(zhì)體不僅能有效負(fù)載并遞送多種藥物(含基因藥物)，而且能提高藥物靶向肝腫瘤細(xì)胞的治療。

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的載藥醇質(zhì)體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1)：將卵磷脂、膽固醇、十八胺混合后溶于乙醇中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到脂質(zhì)體膜，然后加入含有藥物的溶液攪拌，得到載藥醇質(zhì)體；

步驟2)：利用層層自組裝技術(shù)，將載藥醇質(zhì)體滴加到半乳糖化聚乙烯亞胺溶液中，邊攪拌邊超聲分散，再加入核酸類藥物，得到半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的載藥醇質(zhì)體。

優(yōu)選地，所述步驟1)中卵磷脂、膽固醇、十八胺的質(zhì)量比為25∶2.5∶1。

優(yōu)選地，所述步驟1)中藥物為蛋白類、多肽類、激素類、抗生素類和生物堿類藥物中的任意一種或幾種的組合。

優(yōu)選地，所述步驟2)中半乳糖化聚乙烯亞胺溶液的濃度為0.01g/ml。

優(yōu)選地，所述步驟2)中載藥醇質(zhì)體和半乳糖化聚乙烯亞胺溶液的體積比為9∶1。

優(yōu)選地，所述步驟2)中核酸類藥物中磷酸基團(tuán)與半乳糖化聚乙烯亞胺修飾載藥醇質(zhì)體中氨基的n/p比值為1∶5-1∶25。

優(yōu)選地，所述步驟2)中總攪拌時(shí)間為2-4h。

優(yōu)選地，所述步驟1)、2)中所使用的溶劑均為乙醇水溶液，其中乙醇與水的體積比為3∶7。

優(yōu)選地，所述步驟2)中半乳糖化聚乙烯亞胺的制備方法具體為：將乳糖酸和聚乙烯亞胺在去離子水溶液里進(jìn)行反應(yīng)，然后透析、冷凍干燥，得到半乳糖化的殼聚糖聚乙烯亞胺；其中，乳糖酸與聚乙烯亞胺的摩爾比為1∶1。

更優(yōu)選地，所述半乳糖化的聚乙烯亞胺的制備過程中加入edc/nhs引發(fā)反應(yīng)。

更優(yōu)選地，所述反應(yīng)的時(shí)間為14-72h；透析時(shí)間為2-3天。

本發(fā)明主要采用基于醇質(zhì)體制備技術(shù)和層層自組裝技術(shù)，通過靜電吸附先后在載藥醇質(zhì)體外組裝半乳糖化聚乙烯亞胺和核酸類藥物，有效負(fù)載并遞送多種藥物(含基因藥物)，并其提高藥物靶向肝腫瘤細(xì)胞的治療。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

(1)本發(fā)明操作方便，實(shí)驗(yàn)裝置簡(jiǎn)易，制備時(shí)間短且條件溫和，利于大批量生產(chǎn)；

(2)本發(fā)明制備的半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的載藥醇質(zhì)體穩(wěn)定性好，可長(zhǎng)時(shí)間保存；

(3)本發(fā)明制備的半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的載藥醇質(zhì)體可有效負(fù)載并遞送多種藥物(含基因藥物)，并其提高藥物靶向肝腫瘤細(xì)胞的治療。

附圖說明

圖1為實(shí)施例中所得不同修飾層數(shù)半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體材料形貌tem圖的比較圖；其中，a是醇質(zhì)體，b是半糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體；

圖2為實(shí)施例所得不同修飾層數(shù)半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體的l929細(xì)胞毒性圖；

圖3為實(shí)施例所得不同修飾層數(shù)半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體負(fù)載羅丹明b靶向hepg2肝癌細(xì)胞吞噬圖的比較圖；其中，a是醇質(zhì)體負(fù)載羅丹明b，b是半糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體負(fù)載羅丹明b，c是半糖化聚乙烯亞胺混合羅丹明b。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明更明顯易懂，茲以優(yōu)選實(shí)施例，并配合附圖作詳細(xì)說明如下。

實(shí)施例

一種半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的載藥醇質(zhì)體的制備方法：

將卵磷脂、膽固醇和十八胺以質(zhì)量比為25∶2.5∶1的比例混合溶于乙醇中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到一層脂質(zhì)體膜，將羅丹明b(模型藥物)以0.5mg/ml加入30％(v/v)乙醇水溶液，攪拌即得到負(fù)載羅丹明b的醇質(zhì)體；

將2.0g乳糖酸(la)溶解于50mltemed/hclbuffer(ph4.7)，再由nhs(0.14g)和edc(0.6g)的混合物激活。最后將1.0g聚乙烯亞胺(pei)以la的當(dāng)量摩爾比加入到溶解液中。室溫反應(yīng)72h，將產(chǎn)物置于1.4kd的透析袋中透析2-3天，冷凍干燥后得到半乳糖化的聚乙烯亞胺(gal-pei)。

將半乳糖化的聚乙烯亞胺溶解于去離子水中，濃度為10mg/ml，利用層層自組裝技術(shù)將9ml負(fù)載羅丹明b的醇質(zhì)體先緩慢滴加到1ml半乳糖化的聚乙烯亞胺溶液中，劇烈攪拌2h，超聲分散，再將該混合溶液緩慢滴加到pgfp質(zhì)粒(模型基因藥物)溶液中靜置1h，pgfp質(zhì)粒的磷酸基團(tuán)和半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的載羅丹明b醇質(zhì)體的氨基的比值為1∶5-1∶25。既得半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的載藥醇質(zhì)體。

圖1為實(shí)施例中所得不同修飾層數(shù)半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體材料形貌tem圖的比較圖；其中，a是醇質(zhì)體，b是半糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體；外層材料的修飾增加了醇脂體的粒徑，但是仍然小于100nm。

圖2為實(shí)施例所得不同修飾層數(shù)半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體的l929細(xì)胞毒性圖；分別是醇質(zhì)體；半糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體；半糖化聚乙烯亞胺。從圖中可以看出，隨著濃度的增大，由于醇質(zhì)體的存在，半糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體對(duì)細(xì)胞的毒性比半乳糖化聚乙烯亞胺明顯降低。

圖3為實(shí)施例所得不同修飾層數(shù)半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體負(fù)載羅丹明b靶向hepg2肝癌細(xì)胞吞噬圖的比較圖；依次是半糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體負(fù)載羅丹明b，醇質(zhì)體負(fù)載羅丹明b，半糖化聚乙烯亞胺混合羅丹明b。從圖中可以看出，半糖化聚乙烯亞胺修飾的醇質(zhì)體負(fù)載羅丹明b靶向hepg2肝癌細(xì)胞吞噬的熒光高于其他兩組。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的載藥醇質(zhì)體的制備方法，其特征在于，將卵磷脂、膽固醇、十八胺混合后溶于乙醇中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到脂質(zhì)體膜，然后加入含有藥物的溶液攪拌，得到載藥醇質(zhì)體；利用層層自組裝技術(shù)，將載藥醇質(zhì)體滴加到半乳糖化聚乙烯亞胺溶液中，邊攪拌邊超聲分散，再加入核酸類藥物，得到半乳糖化聚乙烯亞胺修飾的載藥醇質(zhì)體。本發(fā)明主要采用基于醇質(zhì)體制備技術(shù)和層層自組裝技術(shù)，通過靜電吸附先后在載藥醇質(zhì)體外組裝半乳糖化聚乙烯亞胺和核酸類藥物，有效負(fù)載并遞送多種藥物(含基因藥物)，并其提高藥物靶向肝腫瘤細(xì)胞的治療。

技術(shù)研發(fā)人員：王紅聲;馬琳琳;楊興興;張東東;余凡;潘瀟涵;駱格杰
受保護(hù)的技術(shù)使用者：東華大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：2017.06.07
技術(shù)公布日：2017.09.22