一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及辣木總酚苷的新用途，具體來說是在制備抗抑郁、抗焦慮、抗老年癡呆癥、抗酒精性化學(xué)肝損傷、抗炎以及預(yù)防治療糖尿病以及頭痛藥物及保健品中的應(yīng)用。

二、背景資料

辣木籽為辣木科辣木屬植物辣木moringaoleiferalam.的干燥成熟種子(中國植物志，1984：34(1)：006)。原產(chǎn)于熱帶、南亞熱帶的干旱和半干旱地區(qū)，現(xiàn)廣泛分布于非洲、阿拉伯、東南亞、太平洋島嶼等熱帶海洋氣候區(qū)(anwarf，etal.phytotherres，2007，21(1)：17-25)。上世紀(jì)60年代初中國在云南景洪引種，1998年后在海南和云南大面積種植(董小英等.廣東飼料，2008，17(9)：39-41.)。辣木為多用途速生喬木，種植6個月后即可以開花結(jié)果，其根、莖、葉、花和種子均可藥用。辣木籽中的主要化學(xué)成分為酚類及其苷、黃酮及其苷、甾醇及其苷，以及多糖、氨基酸和維生素等。其中，酚類及其苷為其特征性化學(xué)成分，主要是1，4-二取代苯環(huán)的一側(cè)酚羥基與糖連接成酚苷，而糖主要為鼠李糖及其衍生物，還有少量化合物為葡萄糖苷；而苯環(huán)的另一側(cè)則主要為氨甲基以及氨甲基的取代產(chǎn)物(mangurolo，etal.natprodres，2007，21(1)：56-58；shaheenf，etal.jnatprod，1994，57(9)：1256-1261)。

現(xiàn)代藥理研究表明辣木籽具有降血壓、降血脂、調(diào)節(jié)血糖、抗腫瘤以及抗氧化等功能(rajanandhmg，etal.intjpharmtechres，2010，2(2)：1409-1414)。例如，辣木籽可顯著降低糖尿病大鼠血糖水平，并明顯改善其認(rèn)知功能障礙和神經(jīng)元損傷，提示辣木籽對大鼠糖尿病腦病具有保護(hù)作用(劉冰等.長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010(2)：179-180)。此外，辣木籽還可使血清酶(got，gpt，ggt及alp)和膽紅素水平顯著恢復(fù)正常，表明其對四氯化碳誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化和肝損傷具有保護(hù)作用(al-saidms，etal.jfoodsci，2012，77(7)：124-130)。辣木籽的醇提物和氯仿提取物對乙酸誘發(fā)的結(jié)腸炎大鼠有抗炎作用，兩者都可有效地減少結(jié)腸潰瘍的嚴(yán)重程度和面積以及緩解黏膜炎嚴(yán)重程度和范圍(minaiyanm，etal.avicennajphytomed.2014，4(2)：127-136)。辣木籽水提物可通過減少小鼠巨噬細(xì)胞中no、tnf-a和il-1β的釋放，從而發(fā)揮抗炎作用。此外，辣木籽水提物還可減少角叉菜膠誘導(dǎo)的小鼠胸膜炎的白細(xì)胞移動，降低白細(xì)胞數(shù)量，同時減少了過氧化物酶的活性，顯示出良好的抗炎活性(araújolc，etal.plosone，2013，8(12)：1-15)。然而，上述藥理活性均是針對辣木籽的水提物或醇提物的研究，目前，尚未見有關(guān)辣木籽總酚苷在制備抗抑郁、抗焦慮、抗老年癡呆癥、治療酒精性化學(xué)肝損傷、抗炎以及預(yù)防治療糖尿病和頭痛藥物及保健品中應(yīng)用的公開報道。

三、

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明涉及一種辣木籽總酚苷，其主要成分辣木酚苷a-辣木酚苷k的含量之和大于60％，以及在制備抗抑郁、抗焦慮、抗老年癡呆癥、治療酒精性化學(xué)肝損傷、抗炎以及預(yù)防治療糖尿病和頭痛藥物及保健品中的應(yīng)用。

本發(fā)明的辣木籽總酚苷，該總酚苷主要包含以下成分：

本發(fā)明的總酚苷還包含以下成分中的一種或多種：

優(yōu)選進(jìn)一步包含辣木酚苷b、c和d，或者優(yōu)選辣木酚苷e、f和j，或者優(yōu)選辣木酚苷b、c、f和j，或者優(yōu)選辣木酚苷b、c、d、e、f和j。

本發(fā)明的總酚苷含量大于50％，優(yōu)選大于60％，或者優(yōu)選60-90％，或者優(yōu)選60-80％。

本發(fā)明總酚苷主要包含辣木酚苷a、b、c、d、e、f、g、h、i、j和k共11種主要成分。

以辣木籽總酚苷總重量為基準(zhǔn)，其中辣木酚苷a-辣木酚苷k的含量之和大于50％，優(yōu)選大于60％，或者優(yōu)選50-90％，或者優(yōu)選60-80％，或者優(yōu)選60％-70％，或者優(yōu)選65％。

本發(fā)明的辣木籽總酚苷，以辣木總酚苷總重量為基準(zhǔn)，其中辣木酚苷k、辣木酚苷g、辣木酚苷h和辣木酚苷i的含量之和為40-70％，優(yōu)選45-60％，或者優(yōu)選50-55％。

本發(fā)明辣木籽總酚苷中辣木酚苷k含量為15-30％，優(yōu)選15-25％，更優(yōu)選18-22％；其中辣木酚苷g含量為5-15％，優(yōu)選6-10％；其中辣木酚苷h含量為10-20％，優(yōu)選12-18％；其中辣木酚苷i含量為7-15％，優(yōu)選8-12％；

本發(fā)明辣木籽總酚苷中辣木酚苷a含量為1-4％，優(yōu)選2-3％；其中辣木酚苷b含量為0.5-2％；其中辣木酚苷c含量為0.5-2％；其中辣木酚苷d含量為1-5％，優(yōu)選2-4％；其中辣木酚苷e含量為1-5％，優(yōu)選2-4％；其中辣木酚苷f含量為1-5％，優(yōu)選2-4％；其中辣木酚苷j含量為1-5％，優(yōu)選1-3％。

本發(fā)明還提供辣木籽總酚苷的制藥以及保健品用途，辣木籽總酚苷可用于在制備治療或預(yù)防抑郁癥藥物及保健品中的應(yīng)用。

本發(fā)明辣木籽總酚苷可用于在制備治療或預(yù)防焦慮癥藥物及保健品中的應(yīng)用。

本發(fā)明辣木籽總酚苷可用于在制備治療或預(yù)防老年癡呆癥藥物及保健品中的應(yīng)用。

本發(fā)明辣木籽總酚苷可用于在制備治療或預(yù)防酒精性化學(xué)肝損傷藥物及保健品中的應(yīng)用。

本發(fā)明辣木籽總酚苷可用于在制備抗炎藥物及保健品中的應(yīng)用。

本發(fā)明辣木籽總酚苷可用于在制備預(yù)防治療糖尿病藥物以及保健品中的應(yīng)用。

本發(fā)明辣木籽總酚苷可用于在制備預(yù)防治療頭痛藥物以及保健品中的應(yīng)用，所述頭痛優(yōu)選為偏頭痛，同時本發(fā)明能抑制降鈣素基因相關(guān)肽(cgrp)的產(chǎn)生，能夠抑制p物質(zhì)(sp)的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)(促進(jìn))5-羥色胺(5-ht)的產(chǎn)生。由此本發(fā)明能進(jìn)一步用于在制備改善腦或者血管(心血管或者腦血管)功能障礙藥物以及保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明辣木籽總酚苷還可以進(jìn)一步加入常規(guī)的輔料，制成常規(guī)的劑型如煎膏劑、硬膠囊劑、軟膏劑、片劑、顆粒劑、丸劑、口服液、糖漿劑、散劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射液、凍干粉針、大容量注射劑、栓劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑或貼劑。

本發(fā)明的辣木籽總酚苷可采用多種方法制備獲得，比如將辣木籽經(jīng)醇溶液提取后，再用乙醚、氯仿、丙酮、正丁醇、石油醚等有機溶劑中的一種或多種混合有機溶劑多次萃取制得；或者將辣木籽醇溶液提取后，提取液用大孔吸附樹脂吸附，再依次用水、低濃度乙醇溶液(10-30％乙醇溶液)洗脫后，再用高濃度乙醇溶液(60-90％乙醇溶液)洗脫，收集高濃度乙醇溶液濃縮干燥制得；或者將辣木籽醇溶液提取后，提取液用聚酰胺樹脂柱吸附，再依次用水、低濃度乙醇溶液(10-30％乙醇溶液)洗脫后，再用高濃度乙醇溶液(60-90％乙醇溶液)洗脫，收集高濃度乙醇溶液濃縮干燥制得；或者將辣木籽醇溶液提取后，提取液用mci柱層析吸附，再依次用水、低濃度乙醇溶液(10-30％乙醇溶液)洗脫后，再用高濃度乙醇溶液(60-90％乙醇溶液)洗脫，收集高濃度乙醇溶液濃縮干燥制得。所述醇溶液為乙醇、甲醇水溶液。

本發(fā)明的目的是由以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

1.辣木籽總酚苷成分鑒別

本發(fā)明的辣木籽總酚苷運用硅膠、sephadexlh-20、ods色譜以及制備型hplc等方法分離，并利用hr-esims、nmr等方法鑒定其結(jié)構(gòu)，辣木籽總酚苷內(nèi)含有的主要成分為辣木酚苷a(1-o-(4-hydroxymethylphenyl)-α-l-rhamnopyranoside)、辣木酚苷b(moringinthiourea)、辣木酚苷c(niazirin)、辣木酚苷d(p-hydroxybenzaldehyde-o-α-l-rhamnopyranoside)、辣木酚苷e(methyl-2-[4-(α-l-rhamnpyranosyl)phenyl]-acetate)、辣木酚苷f(pyrrolemarumine4″-o-α-l-rhamnopyranoside)、辣木酚苷g(ethyl-4-(α-l-rhamnosyloxy-benzyl)-carbamate)、辣木酚苷h(niazimicin)、辣木酚苷i(methyl-4-(α-l-rhamnosyloxy-benzyl)-carbamate)、辣木酚苷j(n-{4-[(α-l-rhamnosyloxy)benzyl]methyl}-carbamide)和辣木酚苷k(glucomoringin)以及其它少量的酚苷類化合物。經(jīng)hplc-dad檢測，分離出的辣木酚苷a～辣木酚苷k的純度均大于98％。

2.酚苷類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

(1)辣木酚苷a(n-{4-[(α-l-rhamnosyloxy)benzyl]methyl}-carbamide)：黃色無定型粉末，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

光譜數(shù)據(jù)如下：esi-msm/z：357[m+hcoo]^-。¹h-nmr(cd3od)δ：7.40(2h，d，j＝8.5hz，h-2，h-6)，7.12(1h，d，j＝8.5hz，h-3，h-5)，5.49(1h，d，j＝2.0hz，h-1)，4.70(2h，brs，h-7)，4.18(1h，m，h-2)，3.98(1h，dd，j＝9.5，3.0hz，h-3)，3.75(1h，m，h-5)，3.48(1h，t，j＝9.5hz，h-4)，1.21(3h，d，j＝6.5hz，h-6)。¹³c-nmr(cd3od)δ：160.9(c-8)，154.3(c-4)，133.3(c-1)，128.3(c-2和c-6)，117.3(c-3和c-5)，98.3(c-1)，72.0(c-4)，70.1(c-3)，70.0(c-2)，69.4(c-5)，42.2(c-7)，18.0(c-6)。

根據(jù)以上光譜數(shù)據(jù)鑒定辣木酚苷a為一新化合物并命名為n-{4-[(α-l-rhamnosyloxy)benzyl]methyl}-carbamide。

(2)辣木酚苷b(moringinthiourea)：黃色無定型粉末，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

光譜數(shù)據(jù)如下：esi-msm/z：373[m+hcoo]^-。¹h-nmr(dmso-d6)δ：7.32(2h，d，j＝8.5hz，h-2和h-6)，7.08(1h，d，j＝8.5hz，h-3和h-5)，5.50(1h，d，j＝1.5hz，h-1)，4.53(2h，s，h-7)，4.12(1h，m，h-2)，3.97(1h，dd，j＝9.5，3.5hz，h-3)，3.75(1h，m，h-5)，3.49(1h，t，j＝9.5hz，h-4)，1.19(3h，d，j＝6.5hz，h-6)。¹³c-nmr(dmso-d6)δ：183.3(c-8)，155.1(c-4)，132.6(c-1)，128.8(c-2和c-6)，116.4(c-3和c-5)，98.4(c-1)，71.8(c-4)，70.5(c-3)，70.2(c-2)，69.5(c-5)，46.9(c-7)，18.0(c-6)。

以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(nielsa，etal.phytochemistry，2015，118：109-115)報道一致且該化合物為新天然產(chǎn)物，故鑒定辣木酚苷b為moringinthiourea。

(3)辣木酚苷c(niazirin)：黃色無定型粉末，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

光譜數(shù)據(jù)如下：esi-msm/z：324[m+hcoo]^-。¹h-nmr(cd3od)δ：7.21(2h，d，j＝8.5hz，h-2和h-6)，7.00(1h，d，j＝8.5hz，h-3和h-5)，5.35(1h，d，j＝1.5hz，h-1)，3.92(1h，m，h-2)，3.77(1h，dd，j＝9.5，3.5hz，h-3)，3.75(2h，s，h-7)，3.54(1h，m，h-5)，3.38(1h，t，j＝9.5hz，h-4)，1.19(3h，d，j＝6.5hz，h-6)。¹³c-nmr(cd3od)δ：157.4(c-4)，130.3(c-1)，125.7(c-2和c-6)，119.8(c-8)，118.0(c-3和c-5)，99.8(c-1)，73.7(c-4)，72.2(c-3)，71.9(c-2)，70.7(c-5)，22.7(c-7)，18.0(c-6)。

以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(faizis，etal.jnatprod，1994，57(9)：1256-1261)報道一致，故鑒定辣木酚苷c為niazirin。

(4)辣木酚苷d(p-hydroxybenzaldehyde-o-α-l-rhamnopyranoside)：黃色無定型粉末，

化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

光譜數(shù)據(jù)如下：esi-msm/z：313[m+hcoo]^-。¹h-nmr(d2o)δ：9.78(1h，s，h-7)，7.92(2h，d，j＝8.5hz，h-2和h-6)，7.25(1h，d，j＝8.5hz，h-3和h-5)，5.69(1h，d，j＝1.5hz，h-1)，4.17(1h，m，h-2)，4.00(1h，dd，j＝9.5，3.5hz，h-3)，3.70(1h，m，h-5)，3.52(1h，t，j＝9.5hz，h-4)，1.21(3h，d，j＝6.5hz，h-6)。¹³c-nmr(d2o)δ：196.6(c-7)，162.6(c-4)，134.1(c-1)，132.0(c-2和c-6)，118.4(c-3和c-5)，99.0(c-1)，73.4(c-4)，71.6(c-3)，71.3(c-2)，71.2(c-5)，18.2(c-6)。

以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(michaell，etal.carbohydres，1998，312(1)：33-44)報道一致，故鑒定辣木酚苷d為p-hydroxybenzaldehyde-o-α-l-rhamnopyranoside。

(5)辣木酚苷e(methyl-2-[4-(α-l-rhamnpyranosyl)phenyl]-acetate)：棕色膏狀物，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

光譜數(shù)據(jù)如下：esi-msm/z：357[m+hcoo]^-。¹h-nmr(cd3od)δ：7.18(2h，d，j＝8.5hz，h-2和h-6)，6.99(1h，d，j＝8.5hz，h-3和h-5)，5.39(1h，d，j＝2.5hz，h-1)，3.98(1h，m，h-2)，3.82(1h，dd，j＝9.5，3.5hz，h-3)，3.69(3h，s，h-9)，3.62(1h，m，h-5)，3.58(2h，s，h-7)，3.44(1h，t，j＝9.5hz，h-4)，1.21(3h，d，j＝6.5hz，h-6)。¹³c-nmr(cd3od)δ：174.2(c-8)，156.9(c-4)，131.4(c-1)，129.3(c-2和c-6)，117.5(c-3和c-5)，99.8(c-1)，73.7(c-4)，72.2(c-3)，71.9(c-2)，70.7(c-5)，52.4(c-9)，40.8(c-7)，18.0(c-6)。

以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(francisja，etal.helvchimacta，2004，87(2)：317-326)報道一致，故鑒定辣木酚苷e為methyl-2-[4-(α-l-rhamnpyranosyl)phenyl]-acetate。

(6)辣木酚苷f(pyrrolemarumine4″-o-α-l-rhamnopyranoside)：白色無定型粉末，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

光譜數(shù)據(jù)如下：esi-msm/z：422[m+hcoo]^-。¹h-nmr(cd3od)δ：9.36(1h，s，h-13)，7.89(4h，m，h-2，h-3，h-5，h-6)，6.96(1h，d，j＝4.0hz，h-10)，6.24(1h，d，j＝4.0hz，h-11)，5.58(2h，s，h-7)，5.29(1h，d，j＝2.0hz，h-1)，4.44(2h，s，h-14)，3.87(1h，m，h-2)，3.73(1h，dd，j＝9.0，3.0hz，h-3)，3.51(1h，m，h-5)，3.32(1h，t，j＝9.0hz，h-4)，1.12(3h，d，j＝6.5hz，h-6)。¹³c-nmr(cd3od)δ：181.2(c-13)，157.1(c-4)，145.1(c-12)，133.7(c-9)，133.1(c-1)，128.6(c-2和c-6)，125.2(c-10)，117.6(c-3和c-5)，111.6(c-11)，99.9(c-1)，73.8(c-4)，72.2(c-3)，72.0(c-2)，70.6(c-5)，18.0(c-6)。

以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(sahakitpichanp，etal.phytochemistry，2011，72(8)：791-795)報道一致，故鑒定辣木酚苷f為pyrrolemarumine4″-o-α-l-rhamnopyranoside。

(7)辣木酚苷g(ethyl-4-(α-l-rhamnosyloxy-benzyl)-carbamate)：白色無定型粉末，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

光譜數(shù)據(jù)如下：esi-msm/z：386[m+hcoo]^-。¹h-nmr(dmso-d6)δ：7.18(2h，d，j＝8.5hz，h-2和h-6)，6.96(1h，d，j＝8.5hz，h-3和h-5)，5.31(1h，d，j＝2.0hz，h-1)，4.54(2h，s，h-7)，3.98(2h，q，j＝7.1hz，h-10)，3.89(1h，m，h-2)，3.74(1h，dd，j＝9.5，3.5hz，h-3)，3.58(2h，s，h-7)，3.52(1h，m，h-5)，3.35(1h，t，j＝9.5hz，h-4)，1.12(3h，d，j＝6.0hz，h-6)，1.15(3h，d，j＝7.1hz，h-11)。¹³c-nmr(dmso-d6)δ：156.5(c-9)，156.4(c-4)，133.3(c-1)，128.4(c-2和c-6)，116.4(c-3和c-5)，98.4(c-1)，71.8(c-4)，70.5(c-3)，70.3(c-2)，69.5(c-5)，59.8(c-10)，43.2(c-7)，18.0(c-6)，14.8(c-11)。

以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(ameliap，etal.mutationresearch，1999，440(2)：181-188)報道一致，故鑒定辣木酚苷g為ethyl-4-(α-l-rhamnosyloxy-benzyl)-carbamate。

(8)辣木酚苷h(niazimicin)：白色無定型粉末，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

光譜數(shù)據(jù)如下：esi-msm/z：356[m-h]^-。¹h-nmr(cd3od)δ：7.16(2h，d，j＝8.5hz，h-2和h-6)，6.92(1h，d，j＝8.5hz，h-3和h-5)，5.31(1h，d，j＝2.0hz，h-1)，4.54(2h，s，h-7)，4.37(2h，q，j＝7.0hz，h-10)，3.89(1h，m，h-2)，3.74(1h，dd，j＝9.5，3.5hz，h-3)，3.58(2h，s，h-7)，3.52(1h，m，h-5)，3.35(1h，t，j＝9.5hz，h-4)，1.20(3h，d，j＝7.0hz，h-11)，1.12(3h，d，j＝6.0hz，h-6)。¹³c-nmr(cd3od)δ：192.3(c-9)，157.1(c-4)，133.1(c-1)，130.1(c-2和c-6)，117.5(c-3和c-5)，99.9(c-1)，73.8(c-4)，72.2(c-3)，72.1(c-2)，70.6(c-5)，66.9(c-10)，43.2(c-7)，18.0(c-6)，14.6(c-11)。

以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(faizis，etal.phytochemistry，1995，38(4)：957-963)報道一致，故鑒定辣木酚苷h為niazimicin。

(9)辣木酚苷i(methyl-4-(α-l-rhamnosyloxy-benzyl)-carbamate)：黃色無定型粉末，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

光譜數(shù)據(jù)如下：esi-msm/z：372[m+hcoo]^-。¹h-nmr(d2o)δ：7.40(2h，d，j＝8.5hz，h-2和h-6)，7.12(1h，d，j＝8.5hz，h-3和h-5)，5.49(1h，d，j＝2.0hz，h-1)，4.34(2h，q，j＝7.1hz，h-10)，4.13(1h，m，h-2)，4.12(2h，s，h-7)，3.98(1h，dd，j＝9.5，3.5hz，h-3)，3.75(1h，m，h-5)，3.58(2h，s，h-7)，3.48(1h，t，j＝9.5hz，h-4)，1.21(3h，d，j＝6.0hz，h-6)。¹³c-nmr(d2o)δ：157.4(c-9)，156.2(c-4)，132.2(c-1)，130.9(c-2和c-6)，119.0(c-3和c-5)，99.5(c-1)，73.5(c-4)，71.2(c-3)，70.9(c-2)，70.0(c-5)，50.4(c-10)，44.1(c-7)，18.2(c-6)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(sahakitpichanp，etal.phytochemistry，2011，72(8)：791-795)報道一致，故鑒定辣木酚苷i為methyl-4-(α-l-rhamnosyloxy-benzyl)-carbamate。

(10)辣木酚苷j(1-o-(4-hydroxymethylphenyl)-α-l-rhamnopyranoside)：黃色無定型粉末，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

光譜數(shù)據(jù)如下：esi-msm/z：315[m+hcoo]^-。¹h-nmr(d2o)δ：7.32(2h，d，j＝8.5hz，h-2和h-6)，7.08(1h，d，j＝8.5hz，h-3和h-5)，5.50(1h，d，j＝1.5hz，h-1)，4.54(2h，s，h-7)，4.12(1h，m，h-2)，3.97(1h，dd，j＝9.5，3.5hz，h-3)，3.75(1h，m，h-5)，3.49(1h，t，j＝9.5hz，h-4)，1.19(3h，d，j＝6.5hz，h-6)。¹³c-nmr(d2o)δ：156.4(c-4)，136.4(c-1)，130.8(c-2和c-6)，118.8(c-3，和c-5)，99.7(c-1)，73.6(c-4)，71.7(c-3)，71.6(c-2)，71.0(c-5)，64.9(c-7)，18.2(c-6)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(faizis，etal.jnatprod，1994，57(9)：1256-1261)報道一致，故鑒定辣木酚苷j為1-o-(4-hydroxymethylphenyl)-α-l-rhamnopyranoside。

(11)辣木酚苷k(glucomoringin)：黃色無定型粉末，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

光譜數(shù)據(jù)如下：esi-msm/z：570[m-k]^-。¹h-nmr(d2o)δ：7.41(2h，d，j＝8.4hz，h-2和h-6)，7.20(1h，d，j＝8.4hz，h-3和h-5)，5.60(1h，brs，h-1)，4.74(1h，m，h-1)，4.20(1h，s，h-7)，4.12(1h，m，h-2)，3.97(1h，dd，j＝9.5，3.5hz，h-2)，3.75(1h，m，h-5)，3.64(2h，m，h-6)，3.49(1h，t，j＝9.5hz，h-4)，3.32-3.48(4h，m，h-2-h-5)，1.19(3h，d，j＝6.5hz，h-6)。¹³c-nmr(d2o)δ：164.3(c-8)，156.3(c-4)，130.9(c-1)，130.9(c-2和c-6)，119.1(c-3和c-5)，99.6(c-1)，82.9(c-1)，81.4(c-5)，78.5(c-2)，73.5(c-4)，73.3(c-2)，71.6(c-3)，71.5(c-2)，70.9(c-5)，70.3(c-4)，61.8(c-6)，39.1(c-7)，18.2(c-6)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(gueyrardd，etal.tetrahedronlett，2000，41(43)：8307-8309)報道一致，故鑒定辣木酚苷k為glucomoringin。根據(jù)附圖2中各物質(zhì)出峰，測定結(jié)果如下：

峰1：辣木酚苷k的保留時間為5.9分鐘，外標(biāo)法測得其含量為20.1％；

峰2：辣木酚苷a的保留時間為20.8分鐘，外標(biāo)法測得其含量為2.3％；

峰3：辣木酚苷b的保留時間為22.9分鐘，外標(biāo)法測得其含量為1.2％；

峰4：辣木酚苷c的保留時間為23.9分鐘，外標(biāo)法測得其含量為1.1％；

峰5：辣木酚苷d的保留時間為27.4分鐘，外標(biāo)法測得其含量為3.1％；

峰6：辣木酚苷f的保留時間為30.5分鐘，外標(biāo)法測得其含量為2.9％；

峰7：辣木酚苷e的保留時間為37.5分鐘，外標(biāo)法測得其含量為2.6％；

峰8：辣木酚苷g的保留時間為41.7分鐘，外標(biāo)法測得其含量為8.3％；

峰9：辣木酚苷h的保留時間為43.9分鐘，外標(biāo)法測得其含量為15.6％；

峰10辣木酚苷i的保留時間為55.0分鐘，外標(biāo)法測得其含量為9.7％；

峰11：辣木酚苷j的保留時間為62.8分鐘，外標(biāo)法測得其含量為1.8％。

以上總酚苷經(jīng)hplc-dad分析，以辣木酚苷a～辣木酚苷k為標(biāo)準(zhǔn)品，通過外標(biāo)法，測得總酚苷中辣木酚苷a、辣木酚苷b、辣木酚苷c、辣木酚苷d、辣木酚苷e、辣木酚苷f、辣木酚苷g、辣木酚苷h、辣木酚苷i、辣木酚苷j和辣木酚苷k的含量之和大于60％。

經(jīng)動物實驗表明，本發(fā)明的辣木籽總酚苷具有抗抑郁、抗焦慮、抗老年癡呆癥、預(yù)防或治療酒精性化學(xué)肝損傷以及抗炎活性，可應(yīng)用于抗抑郁、抗焦慮、抗老年癡呆癥、預(yù)防或治療酒精性化學(xué)肝損傷和抗炎藥物及保健品中。

辣木籽總酚苷可以直接使用或者以藥物組合物的形式使用。該藥物組合物中含有1％-99％本發(fā)明中的辣木籽總酚苷，其余為藥物學(xué)上可接受的對人體無毒的可藥用載體及賦形劑。所用的載體及賦形劑是一種或多種固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。辣木籽總酚苷采用制藥領(lǐng)域公認(rèn)的方法制備成各種劑型、如液體制劑(混懸劑、糖漿劑、口服液劑或注射劑等)、固體制劑(片劑、膠囊劑或顆粒劑等)、噴劑等。上述藥物可經(jīng)口服、舌下或注射(靜脈注射、肌肉注射或皮下注射等)給藥等途徑給藥。

(1)辣木籽總酚苷口服液制劑：5-20重量份的辣木籽總酚苷，加100-200重量份水混懸，加入輔料為0.3-0.8重量份矯味劑，如甜菊素、蔗糖、蜂蜜中的一種或多種，，0.2-0.5重量份的抑菌劑劑，如選自苯甲酸鈉、羥苯甲酯鈉、山梨酸鉀中的一種或多種。攪勻，灌裝，滅菌。

(2)辣木籽總酚苷膠囊劑：5-50重量份辣木籽總酚苷，膠囊殼為常規(guī)膠囊殼，或選擇以明膠、羥丙基甲基纖維素、海藻多糖、果膠等為主要成分制成的膠囊殼；稀釋劑，如選用淀粉、糊精、羧甲基淀粉、改良性預(yù)膠化淀粉、乳糖、磷酸鈣、碳酸鈣等或其組合，50-200重量份；潤滑劑，如選用硬脂酸鎂、硬脂酸、聚乙二醇、硬脂酸鈣等或其組合，0.5-5重量份；助流劑，如選用滑石粉、二氧化硅、微粉硅膠等或其組合，0.3-3重量份?；旌希屏?，干燥，整粒，加入潤滑劑，混合均勻，裝膠囊殼即得。

(3)辣木籽總酚苷顆粒劑：5-20重量份辣木籽總酚苷，填充劑，如選用淀粉、乳糖、糊精、蔗糖、微晶纖維素等或其組合，35-70重量份；粘合劑，如選用羥丙基甲基纖維素、淀粉漿、預(yù)膠化淀粉、羧甲基纖維素鈉等或其組合，1-5重量份；潤濕劑，如選用蒸餾水、乙醇等或其組合，1-10重量份；崩解劑，如選用淀粉、微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等或其組合，10-20重量份；潤滑劑，如選用硬脂酸、硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠等或其組合，2-10重量份。將上述混合后制軟材，制粒，干燥，整粒。

(4)辣木籽總酚苷片劑：5-10重量份辣木籽總酚苷；填充劑，如選用淀粉、乳糖、糊精、蔗糖、可壓性等或其組合，35-70重量份；粘合劑，如選用羥丙基甲基纖維素、淀粉漿、交聯(lián)聚維酮、羧甲基纖維素鈉等或其組合，1-15重量份；崩解劑，如選用淀粉、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯酮等或其組合，10-20重量份；潤滑劑，如選用硬脂酸、硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠等或其組合，0.5-10重量份?；旌?，干燥，壓片即得。

(5)辣木籽總酚苷注射液制劑：5-50重量份辣木籽總酚苷，加100-200重量份注射用水制成注射液，上述注射液還可以進(jìn)一步包括以下附加劑：8重量份的磷酸-磷酸氫二鈉緩沖劑，1-3重量份的碳酸氫鈉、碳酸鈉、醋酸鈉中的一種或多種作為ph調(diào)節(jié)劑，0.1-0.3重量份的枸櫞酸鈉，0.1-0.3重量份的丙二醇硬脂酸酯，0.1-0.3重量份的麥芽糖醇，1-3重量份的甲殼糖。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，121℃滅菌35分鐘，得注射劑。

本發(fā)明的優(yōu)點是：本發(fā)明的總酚苷類化合物具有抗抑郁、抗焦慮、抗老年癡呆、預(yù)防或治療酒精性化學(xué)肝損傷、抗炎等藥理活性；本發(fā)明的制備方法便捷、成本低廉，且易于實施，彌補了現(xiàn)有技術(shù)的不足，為辣木在醫(yī)藥和保健品方面的開發(fā)利用提供了廣闊的前景。

附圖說明：

圖1為辣木酚苷a～辣木酚苷k指紋圖譜

圖2為辣木酚苷a～辣木酚苷k指紋圖譜及含量測定

圖3為辣木籽總酚苷對抑郁大鼠腦內(nèi)皮質(zhì)酮水平的影響(x±s，n＝10)

圖4為辣木籽總酚苷對抑郁大鼠海馬中bdnf蛋白表達(dá)的影響(x±s，n＝10)

圖5辣木酚苷a的esi-ms圖

圖6辣木酚苷a的核磁共振氫譜

圖7辣木酚苷a的核磁共振碳譜

四、具體實施方式

以下實施例是為了更好的闡明本發(fā)明內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容不限定于此。

實施例1：辣木籽總酚苷的制備

取辣木籽5kg粉碎，加10倍重量30％乙醇滲濾提取兩次，合并提取液，濃縮，過濾，濾液上d101大孔樹脂柱吸附，依次用水及10％乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用85％乙醇80l洗脫，回收85％乙醇洗脫液，濃縮，減壓干燥，得辣木籽總酚苷303g。經(jīng)hplc-dad檢測，其中辣木籽總酚的含量為72.1％。

實施例2：辣木籽總酚苷的制備

取辣木籽5kg粉碎，加10倍重量30％乙醇滲濾提取兩次，合并提取液，濃縮，過濾，濾液上hp-20大孔樹脂柱吸附，依次用水及10％乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用85％乙醇80l洗脫，回收85％乙醇洗脫液，濃縮，減壓干燥，得辣木籽總酚苷312g。經(jīng)hplc-dad檢測，其中辣木籽總酚的含量為73.0％。

實施例3：辣木籽總酚苷的制備

取辣木籽10kg粉碎，加10倍重量50％乙醇回流提取兩次，合并提取液，濃縮，過濾，濾液上聚酰胺樹脂柱吸附，依次用水及15％乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再75％乙醇85l洗脫，回收75％乙醇洗脫液，濃縮，減壓干燥，得辣木籽總酚苷706g。經(jīng)hplc-dad檢測，其中辣木籽總酚苷的含量為66.3％。

實施例4：辣木籽總酚苷的制備

取辣木籽10kg粉碎，加10倍量乙醇浸漬提取兩次，合并提取液，濃縮，過濾，濾液上mci柱層析，依次用水及10％乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再85％乙醇85l洗脫，回收85％乙醇洗脫液，濃縮，減壓干燥，得辣木籽總酚苷623g。經(jīng)hplc-dad檢測，其中辣木籽總酚苷的含量為68.8％。

實施例5：辣木籽總酚苷口服液制劑

10重量份辣木籽總酚苷，加100重量份注射用水，攪拌均勻；加入輔料為0.5％的甜菊素，0.3％的苯甲酸鈉；攪勻，灌裝，滅菌。

實施例6：辣木籽總酚苷膠囊劑

10重量份辣木籽總酚苷；20重量份微晶纖維素；80重量份淀粉；40重量份改良性預(yù)膠化淀粉；混合，制粒，干燥，整粒，1.2重量份潤滑劑；1重量份助流劑滑石粉，混合均勻，裝膠囊殼，即得膠囊劑。

實施例7：辣木籽總酚苷顆粒劑

5重量份辣木籽總酚苷；70重量份填充劑淀粉；2重量份粘合劑羥丙基甲基纖維素；2重量份潤濕劑蒸餾水；10重量份崩解劑淀粉；3重量份潤滑劑硬脂酸混合后制軟材，制粒，干燥，整粒。

實施例8：辣木籽總酚苷片劑

10重量份辣木籽總酚苷，40重量份填充劑淀粉，3重量份粘合劑淀粉漿，15重量份崩解劑交聯(lián)聚乙烯吡咯酮，1重量份潤滑劑硬脂酸，混合，干燥，壓片即得。

實施例9：辣木籽總酚苷注射液制劑

5重量份辣木籽總酚苷，加100重量份注射用水，攪拌均勻；繼續(xù)加3重量份的磷酸-磷酸氫二鈉緩沖劑，0.1重量份的枸櫞酸鈉，0.1重量份的丙二醇硬脂酸酯，0.1重量份的麥芽糖醇，1重量份的甲殼糖。不斷攪拌，使完全溶解；加入碳酸氫鈉ph調(diào)節(jié)劑，攪拌20分鐘；經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，121℃滅菌35分鐘，得注射劑。

實施例10：辣木籽總酚苷抗抑郁活性

(1)動物給藥

適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，參考體重及open-field評分，將70只大鼠隨機分為7組：(1)空白組(10只)：按10ml/kg給予0.9％生理鹽水灌胃，1次/日，從第22天始，連續(xù)21天。(2)模型組(10只)：按10ml/kg給予0.9％生理鹽水灌胃，1次/日，從第22天開始，連續(xù)21天。(3)氟西汀組(10只)：給予1.8mg/kg(0.09mg/ml)氟西汀混懸液灌胃，1次/日，從第22天開始，連續(xù)21天。(4)辣木籽總酚苷低劑量組(10只)：給予濃度為250mg/kg的辣木籽總酚苷灌胃，1次/日，從第22天始，連續(xù)21天。(5)辣木籽總酚苷中劑量組(10只)：給予濃度為500mg/kg的辣木籽總酚苷灌胃，1次/日，從第22天始，連續(xù)21天。(6)辣木籽總酚苷高劑量組(10只)：給予濃度為1000mg/kg的辣木籽總酚苷灌胃，1次/日，從第22天始，連續(xù)21天。(7)辣木籽總提物制備方法：取辣木籽粉碎，加10倍重量95％乙醇滲濾提取兩次，合并提取液，濃縮，減壓干燥，得辣木籽總提物。(8)辣木籽總提物組(10只)：給予濃度為1000mg/kg的辣木籽總提物灌胃，1次/日，從第22天始，連續(xù)21天。

(2)動物造模

空白組每籠飼養(yǎng)10只，在實驗中不接受任何刺激。其余各組每籠一只，在實驗的21天內(nèi)，接受7種不同的刺激，每口安排一種且同種刺激不連續(xù)出現(xiàn)。7種刺激分別為：1.夾尾：將大鼠放入固定籠中，露出尾巴，用止血鉗夾住距尾根部1cm處，持續(xù)1min；2.冰水游泳：將大鼠放入盛有4℃冷水(冰水混合)的桶中，水深15cm，大鼠的足尖剛能觸及桶底，5min后將大鼠取出。3.傾斜鼠籠：早上8點，將鼠籠傾斜30度，至次日早8點將鼠籠恢復(fù)原位。4.潮濕飼養(yǎng)：早上8點，往鼠籠中加入200ml水，至次日早8點換掉。5.晝夜顛倒：晚上8點打開燈照明，持續(xù)照明36h，至第3日早8點將燈關(guān)閉。6.禁水：斷水24h。7.禁食：斷食24h。

(3)大鼠體重的測量

實驗過程中每周稱量一次大鼠體重，觀察各組大鼠體重變化情況。

(4)大鼠行為學(xué)觀察

自實驗開始的第0天、第21天和第42天，于大鼠測完體重后用open-field法(敞箱實驗)進(jìn)行檢測。其檢測箱為一個長1m、寬1m、高0.5m的木箱，底部有25個20cm×20cm的小方格。水平運動得分以大鼠四肢共同處于一個方格內(nèi)為標(biāo)準(zhǔn)，計1分；垂直運動得分以前肢抬起、后肢直立為標(biāo)準(zhǔn)，計1分。檢測時將大鼠放置于箱子中心，分別統(tǒng)計3min內(nèi)大鼠水平和垂直運動得分。

(5)液體消耗實驗

實驗前先訓(xùn)練動物適應(yīng)含糖飲水，每籠同時給予2個小瓶，第一個24小時，兩個瓶內(nèi)均裝有1％蔗糖水，隨后24小時，一個瓶裝1％蔗糖水，一個瓶裝純水。24小時禁食禁水后，進(jìn)行動物的基礎(chǔ)糖水/純水消耗實驗。同時給予每只大鼠稱重過的兩瓶水，一瓶為1％庶糖，一瓶為純水。60分種后，取走兩瓶并稱重。計算動物的總液體消耗、糖水消耗、純水消耗，糖水偏愛(糖水偏愛＝糖水消耗/總液體消耗×100％)。自實驗開始的第0天、第21天和第42天各進(jìn)行一次液體消耗實驗。

(6)大鼠腦內(nèi)crh含量的測定

在實驗第42天，將大鼠處死，迅速分離大鼠全腦，去除小腦及腦干后勻漿，43000rpm離心10min，放置-2℃冰箱保存，采用酶聯(lián)免疫法(elisa)測定大鼠腦內(nèi)促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropinreleasinghormone，crh，也叫皮質(zhì)酮)、bdnf的含量。

(7)westernblot法檢測bdnf蛋白表達(dá)

大鼠斷頭后在冰上取海馬組織，置-80℃保存?zhèn)溆?。大鼠海馬組織總蛋白提取按總蛋白提取試劑盒說明書操作，考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白的量。取總蛋白50μg，在sds-page凝膠上電泳分離2h，將凝膠濕轉(zhuǎn)至pvdf膜。取出pvdf膜，浸于封閉液中，室溫輕搖封閉1h，用tbst(100mmol/ltris-hcl、150mmol/lnacl、0.05％聚山梨酯20)緩沖液漂洗干凈，浸入tbst稀釋的一抗(兔抗人bdnf抗體1∶2000；山羊抗人β-actin抗體，1∶2000)，室溫下孵育1-2h，在tbst脫色搖床上室溫下洗2次，每次10min；再用tbs(100mmol/ltris-hcl、150mmol/lnacl)洗1次，10min。同法準(zhǔn)備二抗(兔抗山羊igg-hrp1∶1000)稀釋液并與膜接觸，室溫下孵育1-2h后用tbst在脫色搖床上室溫下洗2次，每次10min；再用tbs洗1次，10min。ecl檢測試劑盒顯色，曝光、顯影和定影，將膠片進(jìn)行掃描或拍照，用凝膠圖像處理系統(tǒng)分析目標(biāo)帶的相對分子質(zhì)量和凈光密度值。

(8)實驗結(jié)果

造模前，各組大鼠體重?zé)o明顯差異(p＞0.05)。造模21天后，各造模組與空白組比較，大鼠體重增長緩慢(p＜0.05)。給藥21天后，氟西汀組、辣木籽總酚苷高、中、低劑量組及辣木籽總提物組與模型組比較，大鼠體重增長加快(p＜0.05)，辣木籽總酚苷高劑量組增長最快；辣木籽總酚苷高劑量組與氟西汀組比較，差異顯著(p＜0.05)。實驗結(jié)果顯示，造模21天后，各造模組大鼠水平運動和垂直運動得分均低于空白組(p＜0.01)。給藥21天后，氟西汀組及辣木籽總酚苷高、中、低劑量組和辣木籽總提物組大鼠水平運動及垂直運動得分均高于模型組(p＜0.01)。如表1所示，造模21天后，各造模組大鼠糖水偏愛系數(shù)得分均低于空白組(p＜0.05)。給藥21天后，氟西汀組及辣木籽總酚苷高、中、低劑量組和辣木籽總提物組大鼠糖水偏愛系數(shù)得分均高于模型組(p＜0.01)，其中辣木籽總酚苷中劑量組最高。與對照組比較，模型組大鼠血清中皮質(zhì)酮水平顯著升高(p＜0.01)。如圖1所示，與模型組比較，氟西汀組、辣木籽總酚苷各劑量組和辣木籽總提物組大鼠血清中皮質(zhì)酮水平均顯著降(p＜0.05、0.01)。與對照組比較，模型組大鼠海馬bdnf蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(p＜0.01)。如圖2所示，與模型組比較，氟西汀組、辣木籽總酚苷組辣木籽總提物組大鼠海馬bdnf蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)(p＜0.05、0.01)。辣木籽總提物組與辣木籽總酚苷低劑量組實驗結(jié)果相當(dāng)。表明，本發(fā)明所制備的辣木籽總酚苷比辣木籽總提物具有良好的抗抑郁活性。

表1.辣木籽總酚苷對大鼠體重、運動行為學(xué)和糖水偏愛的影響(x±s，n＝10)

注：與空白組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與模型組比較^##p＜0.01，^#p＜0.05。

實施例11：辣木籽總酚苷抗焦慮活性

(1)實驗原理

焦慮癥發(fā)病機制主要有神經(jīng)遞質(zhì)假說和神經(jīng)內(nèi)分泌功能紊亂假說，前者主要與5-羥色胺(5-ht)、去甲腎上腺素(ne)、多巴胺(da)等系統(tǒng)功能的亢進(jìn)有關(guān)，降低5-ht、nf功能的藥物則有抗焦慮作用。

(2)實驗材料

wistar大鼠；辣木籽總酚苷；辣木籽總提物；地西泮；去甲腎上腺素(ne)、多巴胺(da)、5-羥色胺(5-ht)、酶聯(lián)免疫吸附(elisa)測試試劑盒；手套；鼠盒；去離子水；灌胃針。辣木籽總提物制備方法：取辣木籽粉碎，加10倍重量95％乙醇滲濾提取兩次，合并提取液，濃縮，減壓干燥，得辣木籽總提物。

(3)實驗分組

實驗組(辣木籽總酚苷、辣木籽總提物)；空白組(去離子水)；陽性對照組(地西泮)15mg/kg；模型組等體積給藥。

(4)給藥劑量與次數(shù)：

低劑量組250mg/kg、中劑量組500mg/kg、高劑量組1000mg/kg、辣木籽總提物1000mg/kg以灌胃方式給藥，每日1次，連續(xù)10天。

(5)大鼠高架十字迷宮模型

wistar大鼠經(jīng)1周適應(yīng)性喂養(yǎng)后，隨機分為正常對照組、模型組、地西泮組、辣木籽總提物組和辣木籽總酚苷高、中、低劑量組，每組10只。正常對照組可一籠多鼠，其余各組大鼠均單籠飼養(yǎng)，參照林文娟等的方法建立焦慮模型。具體方法如下：正常對照組不接受任何處理，自由飲水和攝食。其余各組定時喂水訓(xùn)練7天，即每天早上8：00-8：10和晚20：00-20：10給動物飲水10min，其余時間撤去水瓶不給水。定時喂水訓(xùn)練結(jié)束后，開始應(yīng)激試驗，在上述兩個時間段內(nèi)給予不確定空瓶刺激，維持1天1次或2次，持續(xù)2周。在不確定空瓶刺激期間，模型組每天給予等容積生理鹽水，地西洋組給予1mg/kg灌胃，辣木籽總提物組1000mg/kg，辣木籽總酚苷高、中、低劑量組每天劑量分別為：1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg。于第21天在辣木籽總酚苷組末次給藥2h、模型組及dzp組末次給藥0.5h后，進(jìn)行高架十字迷宮行為學(xué)測定，將大鼠提前2h進(jìn)入測試實驗室適應(yīng)環(huán)境。在epm試驗開始前，先將每只大鼠分別單獨放入一個60cm×60cm×35cm塑料盒中，任其自由探究5min后迅速置于epm的中央平臺上，使其頭部正對一個開放臂，釋放后即開始用digbehv動物行為分析系統(tǒng)2.0自動記錄5min內(nèi)大鼠的以下活動情況：①進(jìn)入開放臂的次數(shù)(openarmentry，oe)；②進(jìn)入封閉臂的次數(shù)(closearmentry，ce)；③進(jìn)入開放臂的時間(openarmtime，ot)，單位：秒；④進(jìn)入封閉臂的時間(closearmtime，ct)，單位：秒。之后利用以上數(shù)據(jù)分別計算出：①進(jìn)入開放臂和封閉臂的總次數(shù)(oe+ce)，以此表示大鼠的活動能力；②進(jìn)入開放臂的次數(shù)占總?cè)氡鄞螖?shù)的比例：oe％＝oe/(oe+ce)×100％；③進(jìn)入開放臂的時間占總?cè)氡蹠r間的比例：ot％＝ot/(ot+ct)×100％，以oe％和ot％作為抗焦慮作用的療效評定指標(biāo)。每只大鼠測試后用濕布擦拭迷宮，清除雜物并用干布擦凈后再進(jìn)行下一只的測試。

實驗結(jié)束以后，大鼠斷頭處死，迅速在冰盤上分離出全腦組織，稱重后保存于超低溫冰箱-80℃。按試劑盒操作方法檢測大鼠腦組織中5-ht、ne和da神經(jīng)遞質(zhì)的濃度。

(6)實驗結(jié)果

辣木籽總酚苷對高架十字迷宮模型(epm)大鼠行為學(xué)的影響如表2所示，與正常對照組比較，模型組大鼠進(jìn)入開臂的時間百分率、次數(shù)百分率明顯減少；地西洋組、辣木籽總提物組和辣木籽總酚苷高、中、低劑量組大鼠進(jìn)入開臂次數(shù)百分率、時間百分率較模型組顯著上升，辣木籽總提物組效果不明顯，以地西泮組和辣木籽總酚苷高劑量組上升最為明顯(p＜0.01)。

表2.辣木籽總酚苷對epm大鼠行為學(xué)(oe+ce，oe％，ot％)的影響(x±s，n＝10)

注：與空白組比較*p＜0.05；與模型組比較^##p＜0.01，^#p＜0.05。

如表3所示，辣木籽中劑量組明顯降低大鼠腦組織5-ht濃度，其高劑量組明顯降低大鼠腦組織ne濃度，而對da濃度無顯著影響，以上結(jié)果表明：辣木籽總酚苷具有改善焦慮的作用。

表3.辣木籽總酚苷對焦慮模型大鼠腦組織神經(jīng)遞質(zhì)的影響(x±s，n＝10)

與空白組比^#p＜0.05；與模型組比^*p＜0.05

實施例12：辣木籽總酚苷抗老年癡呆活性

(1)實驗原理

aβ沉積是老年癡呆癥最典型的病理特征之一，在老年癡呆癥的發(fā)生和發(fā)展過程中具有關(guān)鍵作用。根據(jù)aβ沉積情況診斷老年癡呆準(zhǔn)確率可達(dá)80％。研究表明，腦內(nèi)aβ40和aβ42的含量與老年癡呆癥患者認(rèn)知功能障礙的程度呈正相關(guān)。morris水迷宮實驗是用于評價空間學(xué)習(xí)記憶能力的經(jīng)典方法，是評價癡呆動物模型復(fù)制結(jié)果的客觀指標(biāo)。近年來，癡呆動物模型已成為研究老年性癡呆的重要手段。采用sd大鼠制備aβ1-42腦室注射致癡呆模型，分別給予試驗組和對照組辣木籽總酚苷和生理鹽水，通過morris水迷宮實驗，評價辣木籽總酚苷對老年癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善狀況。

(2)實驗材料

spf級sd雄性大鼠；辣木籽總酚苷；辣木籽總提物；淀粉樣蛋白片段(aβ1-42)；dw-5大鼠腦立體定位儀；wmt-100morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)；手套；鼠盒；去離子水；有機玻璃水缸；攝像機；灌胃針。辣木籽總提物制備方法：取辣木籽粉碎，加10倍重量95％乙醇滲濾提取兩次，合并提取液，濃縮，減壓干燥，得辣木籽總提物。

(3)實驗分組

實驗組(辣木籽總酚苷、辣木籽總提物)；模型組(去離子水)；對照組(去離子水)：等體積給藥。

(4)給藥劑量與次數(shù)

低劑量組250mg/kg、中劑量組500mg/kg、高劑量組1000mg/kg、辣木籽總提物組1000mg/kg，以灌胃方式給藥，每日1次，連續(xù)7天。

(5)具體實驗過程

①模型制備：將sd大鼠用10％烏拉坦麻醉后，平顱頭位固定，經(jīng)腦立體定位儀定位于前囟后3.4mm、腦正中線左右旁開2.0mm、深度為顱骨表面下2.7mm處分別緩慢勻速注射5μl凝聚態(tài)aβ1-42。aβ模型對照組注射等容積的等滲鹽水。造模1周后進(jìn)行morris水迷宮行為學(xué)測試。

②morris水迷宮行為學(xué)測試：選擇安靜、暗光、恒溫環(huán)境進(jìn)行測試，實驗室墻壁可適當(dāng)黏貼不同圖形，以幫助動物確定方位。實驗前將水桶灌以清水至預(yù)定高度(約40cm)，再加入適量白色素，使水成為不透明的乳白色液體，加熱器加熱水溫至25℃。站臺置于第四象限中央，位于水面以下約1.5cm，整個實驗過程中平臺位置保持不變。定位航行試驗：定位航行試驗持續(xù)四天。將平臺置于第二象限中心，大鼠依次從四個象限面向池壁入水，記錄大鼠在120s內(nèi)找到平臺所用的時間，即逃避潛伏期(el)。若大鼠在120s內(nèi)未找到平臺，其逃避潛伏期為120s，此時應(yīng)引導(dǎo)大鼠登上平臺。所有登上平臺的大鼠應(yīng)在平臺上停留15s，使其認(rèn)知水下平臺為逃生點，并記憶平臺的空間位置。計算每組大鼠每天在四個象限的逃避潛伏期平均值，即平均逃避潛伏期。平均逃避潛伏期(ael)的長短反映了大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，ael越短說明大鼠對水下平臺的空間位置學(xué)習(xí)認(rèn)知的越快。空間搜索試驗：定位航行試驗結(jié)束后24小時進(jìn)行空間搜索試驗。具體方法為撤除平臺，使大鼠在無平臺情況下憑記憶尋找平臺，記錄大鼠在120s內(nèi)的跨平臺次數(shù)、在每個象限游泳的路程和總路程。在整個測試過程中，水池周圍參照物包括實驗者的位置應(yīng)固定。

(6)實驗結(jié)果

如表4所示，在定位航行試驗中，與模型組比較，辣木籽總酚苷中劑量組和高劑量組的平均逃避潛伏期均顯著縮短(p＜0.05)，低劑量組和辣木籽提取物組則無顯著差異?？臻g搜索試驗中，與模型組比較，辣木籽總酚苷高劑量組的跨平臺次數(shù)和路程顯著提高(p＜0.05)，中劑量組的跨平臺次數(shù)和路程略有升高趨勢，但無顯著差異(表5)。辣木籽總提物組的的跨平臺次數(shù)和路程與辣木籽總酚苷低劑量組相當(dāng)。以上結(jié)果表明：辣木籽總酚苷具有改善老年癡呆大鼠記憶障礙的作用。

表4.辣木籽總酚苷對aβ1-42誘導(dǎo)的老年癡呆大鼠逃避潛伏期的影響(x±s，n＝10)

與對照組比^#p＜0.05；與模型組比*p＜0.05，**p＜0.01

表5.辣木籽總酚苷對aβ1-42誘導(dǎo)的老年癡呆大鼠空間搜索實驗的影響(x±s，n＝10)

與對照組比^#p＜0.05，^##p＜0.05；與模型組比*p＜0.05，**p＜0.01

實施例13：辣木籽總酚苷治療酒精性化學(xué)肝損傷活性

(1)實驗原理

建立小鼠急性酒精性肝損傷模型，通過給予實驗小鼠不同劑量辣木籽總酚苷。通過檢測急性肝損傷模型小鼠血漿中天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ast)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alt)、堿性磷酸酶(alp)、乳酸脫氫酶(ldh)含量及肝臟組織丙二醛(mda)、谷胱甘肽(gsh)的含量來判斷辣木籽總酚苷的保肝作用。

(2)實驗材料

昆明小鼠；辣木籽總酚苷；辣木籽總提物；56％的酒精；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)、堿性磷酸酶(alp)、乳酸脫氫酶(ldh)、丙二醛(mda)、谷胱甘肽(gsh)試劑盒；酶標(biāo)儀；甘草酸苷；手套；鼠盒；去離子水。辣木籽總提物制備方法：取辣木籽粉碎，加10倍重量95％乙醇滲濾提取兩次，合并提取液，濃縮，減壓干燥，得辣木籽總提物。

(3)實驗分組

空白對照組(去離子水)，實驗組(辣木籽總酚苷、辣木籽總提物)；模型組(去離子水)；對照組(甘草酸苷)。

(4)給藥劑量與次數(shù)

低劑量組5mg/kg、中劑量組20mg/kg、高劑量組80mg/kg、辣木籽總提物組80mg/kg、甘草酸苷組85mg/kg以灌胃方式給藥，每天1次，連續(xù)10天。

(5)具體實驗過程

模型對照組，小鼠隨機分為辣木籽總酚苷高、中、低劑量組、總提物組，聯(lián)苯雙酯組。其中，藥物組給予相應(yīng)劑量藥物(灌胃)，空白對照組和模型對照組予同體積生理鹽水(灌胃)，連續(xù)15天。最后一次給藥后1h，除正常對照組予生理鹽水外(灌胃)，其余各組一次性予56％乙醇灌胃(0.016ml/g)，酒后8小時乙醚麻醉，心臟采血，制備血漿液樣品和肝組織樣品，血清中天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ast)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alt)、堿性磷酸酶(alp)和乳酸脫氫酶(ldh)的含量及肝臟組織丙二醛(mda)、谷胱甘肽(gsh)的含量。

(6)實驗結(jié)果

辣木籽總酚苷保護(hù)肝臟實驗中，與正常對照組相比，急性酒精肝模型對照組的血清中的alt、ast、alp、ldh含量均明顯高(p＜0.05)，提示造模成功。如表6所示，與模型對照組相比，辣木籽總酚苷劑量組、辣木籽總提物組、陽性藥藥組alt、ast、alp、ldh含量均降低(p＜0.05)。肝臟組織指數(shù)實驗中：與正常對照組相比，急性酒精性肝損傷模型對照組肝臟mda含量顯著增高(p＜0.05)，肝臟gsh含量顯著降低(p＜0.05)，提示造模成功。如表7所示，與模型對照組相比，給藥組肝臟mda含量顯著降低(p＜0.05)。如表8所示，與模型對照組相比，甘草酸苷組、辣木總提物組和辣木籽總酚苷組肝臟gsh含量明顯升高(p＜0.05)。以上結(jié)果顯示，辣木籽總酚苷具有較好的防醉、解酒功能，其可能通過降低肝組織mda、升高gsh含量對急性酒精性肝損傷發(fā)揮保肝護(hù)肝作用。

表6.辣木籽總酚苷對酒精性肝損傷小鼠血漿alt和ast水平的影響(x±s，n＝10)

^##p＜0.01，模型組vs正常對照組；*p＜0.05，**p＜0.01，給藥組vs模型組。

表7.辣木籽總酚苷對酒精性肝損傷小鼠血漿alp和ldh水平的影響(x±s，n＝10)

^##p＜0.01，模型組vs正常對照組；*p＜0.05，**p＜0.01，給藥組vs模型組。

表8.辣木籽總酚苷對酒精性肝損傷小鼠gsh和mda水平的影響(x±s，n＝10)

^##p＜0.01，模型組vs正常對照組；*p＜0.05，**p＜0.01，給藥組vs模型組。

實施例14：辣木籽總酚苷抗炎活性

(1)實驗原理

建立采用內(nèi)毒素(lps)造成小鼠急性炎癥模型，觀察山豆根顆粒及其飲片對小鼠血清一氧化氮合酶(nos)、一氧化氮(no)、丙二醛(mda)、腫瘤壞死因子-α(tnf-α)、白介素-6(il-6)等含量的影響判斷辣木籽總酚苷的抗炎作用。

(2)實驗材料

昆明小鼠；辣木籽總酚苷；辣木籽總提物；地塞米松片；no試劑盒、nos試劑盒、tnf-α放免分析試劑盒、丙二醛(mda)、il-6放免分析試劑盒；fj-2008/g型γ免疫計數(shù)器；手套；鼠盒；去離子水。辣木籽總提物制備方法：取辣木籽粉碎，加10倍重量95％乙醇滲濾提取兩次，合并提取液，濃縮，減壓干燥，得辣木籽總提物。

(3)實驗分組

實驗組(辣木籽總酚苷、辣木籽總提物)；空白組(去離子水)；模型組(去離子水)；對照組(地塞米松)。

(4)給藥劑量與次數(shù)

低劑量組5mg/kg、中劑量組20mg/kg、高劑量組80mg/kg、地塞米松組5mg/kg以灌胃方式給藥，每日1次，連續(xù)7天。

(5)具體實驗過程

取小鼠隨機分組，每組10只，除正常對照組外，其余組灌胃給藥后0.5h均灌胃給予lps4.8mg/kg，造模2h后眼眶采血，制備血清，-20℃保存。按試劑盒說明，用紫外分光光度計測定no含量和nos的活性。用fj-2008/g型γ免疫計數(shù)器測定tnf-α、il-6的含量。

(6)實驗結(jié)果

如表9和表10中所示，與模型對照組比較，地塞米松組、辣木籽總酚苷高、中、低劑組和辣木籽總提物組均能明顯降低小鼠血清mda和no含量；降低血清中nos活性(p＜0.05或p＜0.01)，此外，能明顯降低小鼠血清中tnf-α、il-6的含量(p＜0.05或p＜0.01)。以上結(jié)果顯示，辣木籽總酚苷具有抗炎作用。

表9.辣木籽總酚苷對小鼠血清mda、no含量的影響(x±s，n＝10)

與模型組比較p＜0.05，^#p＜0.05；與模型組比較p＜0.01，*p＜0.01

表10.辣木籽總酚苷對小鼠血清nos活性及炎癥因子含量的影響(x±s，n＝10)

與模型組比較p＜0.05，^#p＜0.05；與模型組比較p＜0.01，*p＜0.01

實施例15：辣木籽總酚苷治療糖尿病作用

(1)實驗原理

采用高脂飲食加鏈脲佐菌素(streptozotocin，stz)誘導(dǎo)的小鼠糖尿病模型，分別用不同劑量辣木籽總酚苷灌胃，觀察高、中、低劑量的辣木籽總酚苷對糖尿病小鼠的血糖、體重和血脂的影響，評價辣木籽總酚苷治療糖尿病的作用。

(2)實驗材料

昆明小鼠；辣木籽總酚苷；辣木籽總提物；鏈脲佐菌素(stz)；豬油；血糖試紙及血糖儀；血清甘油三酯(tg)和總膽固醇(tc)測定試劑盒；檸檬酸鈉緩沖液(ph4.4)；手套；鼠盒；蒸餾水。辣木籽總提物制備方法：取辣木籽粉碎，加10倍重量95％乙醇滲濾提取兩次，合并提取液，濃縮，減壓干燥，得辣木籽總提物。

(3)實驗分組

實驗組(辣木籽總酚苷、辣木籽總提物)；正常組(蒸餾水)；模型組(hfd+stz)。

(4)模型的制備和處理

雄性昆明小鼠3只/籠，室溫(22±3)℃，相對濕度60％±10％，每日光照12h，攝食、飲水自由。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分組，每組10只：正常組給予普通飼料喂養(yǎng)，高脂飲食糖尿病(hfd+stz)組給予高脂飼料喂養(yǎng)，3周后，小鼠禁食不禁水12h，(hfd+stz)小鼠和給予stz溶液按100mg/kg腹腔注射，正常組組小鼠以同樣的劑量腹腔注射檸檬酸-檬酸鈉緩沖液。stz注射后繼續(xù)用同樣的飼料喂養(yǎng)，繼續(xù)用同樣飼料喂養(yǎng)，記錄小鼠的飲食和攝水情況。兩周后尾靜脈取血用血糖儀檢，隨即選取普通飼料的小鼠10只，造模成功的糖尿病小鼠50只，隨機分為5組。根據(jù)以下分組給藥：辣木籽總酚苷低劑量組5mg/kg、辣木籽總酚苷中劑量組20mg/kg、辣木籽總酚苷高劑量組80mg/kg、辣木籽總提取組80mg/kg、模型組蒸餾水0.3～0.4ml/天，正常組蒸餾水0.3～0.4ml/天，以灌胃方式給藥，每日1次。

(5)具體實驗過程

給藥2兩周后觀察采食、飲水、體質(zhì)量、精神狀態(tài)、毛色等狀況；測量：血糖值、體重、tg和tc。

(6)實驗結(jié)果

(1)一般情況觀察

造模后小鼠出現(xiàn)了多飲、多食、多尿、體重減輕，并有反應(yīng)遲鈍，被毛雜亂無光等癥狀，在給藥辣木籽總酚苷及辣木籽總提物后各組小鼠以上癥狀均有不同程度的改善，反應(yīng)較靈活，毛平伏且有光澤，以辣木籽總酚苷高、中劑量組最為明顯。

(2)不同劑量的辣木籽總酚苷對hfd+stz糖尿病小鼠血糖含量的影響

由結(jié)果(表11)可見：hfd+stz誘導(dǎo)的糖尿病小鼠平均血糖明顯升高，與正常組比較有顯著差異(p＜0.05)。低劑量的辣木籽總酚苷組與模型組小鼠相比，血糖無明顯變化(p＜0.05)；中、高劑量的辣木籽總酚苷組與模型組小鼠比較血糖顯著降低(p＜0.01)。結(jié)果表明，辣木籽總酚苷以時間和劑量依賴的方式降低糖尿病小鼠的血糖。

表11.辣木籽總酚苷對hfd+stz糖尿病小鼠血糖含量的影響(x±s，n＝10)

^#p＜0.05模型組vs空白組，**p＜0.01，給藥組vs模型組

(3)不同劑量的辣木籽總酚苷對hfd+stz糖尿病小鼠體重的影響由結(jié)果(表12)可見：給予普通飲食的正常組小鼠體重正常增加；未給予治療的糖尿病模型組小鼠體重在實驗中無明顯變化。糖尿病模型組小鼠體重較藥物治療組小鼠的體重顯著增加(p＜0.05)，中、高劑量的辣木籽總酚苷與模型組相比體重顯著下降(p＜0.05)。

表12.辣木籽總酚苷對糖尿病小鼠體重的影響(x±s，n＝10)

^#p＜0.01，給藥組vs正常組；*p＜0.05，給藥組vs模型組。

(4)不同劑量的辣木籽總酚苷對糖尿病小鼠甘油三酯(tg)與總膽固醇(tc)水平的影響由結(jié)果(表13)可見：模型組小鼠血清中tg水平較空白對照組小鼠血清tg水平顯著增高(p＜0.05)，經(jīng)過不同劑量的辣木籽總酚苷治療后，低劑量組隊tg水平?jīng)]有明顯改善，但中、高劑量組小鼠的血清tg水平明顯下降，與糖尿病模型組相比均有顯著性差異(p＜0.05)。結(jié)果表明辣木籽總酚苷可降低糖尿病小鼠血清tg水平，且隨劑量增加作用增強，而對糖尿病小鼠的tc水平無明顯影響。

表13.辣木籽總酚苷對糖尿病小鼠甘油三酯(tg)和總膽固醇(tc)水平的影響(x±s，n＝10)

^#p＜0.01，給藥組vs正常組；*p＜0.05，給藥組vs模型組。

實施例16：辣木籽總酚苷治療偏頭痛作用

(1)實驗原理

偏頭痛是一種反復(fù)發(fā)作性慢性頭痛，目前尚無理想的治療方法。偏頭痛的三叉神經(jīng)血管反射學(xué)說，認(rèn)為偏頭痛是三叉神經(jīng)傳入纖維末梢釋放p物質(zhì)(sp)及其他神經(jīng)遞質(zhì)，傳出神經(jīng)作用于顱內(nèi)外血管，引起頭痛和血管擴張。與三叉神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的最主要的神經(jīng)肽是降鈣素基因相關(guān)肽(cgrp)，其次是p物質(zhì)(sp)、神經(jīng)激肽a(nka)。p物質(zhì)是傳遞并降低痛閾的神經(jīng)遞質(zhì)，與神經(jīng)激肽a(nka)有協(xié)同作用，而降鈣素基因相關(guān)肽(cgrp)具有較強的擴血管作用，通過擴張血管而引起頭痛。神經(jīng)學(xué)說認(rèn)為偏頭痛發(fā)作時神經(jīng)功能的變化是首要的，血流量的變化是繼發(fā)的。5-羥色胺(5-ht)參與頭痛發(fā)生。頭痛發(fā)作開始時，5-ht從血小板中釋出，直接作用于顱內(nèi)小血管使之收縮，并附于血管壁上。本實驗通過給予偏頭痛大鼠模型不同劑量辣木籽總酚苷，通過測量血漿中cgrp、sp及5-ht含量來評價辣木籽總酚苷治療偏頭痛作用。

(2)實驗材料

wistar大鼠；辣木籽總酚苷；辣木籽總提物；地西泮；硝酸甘油注射液、琥珀酸舒馬普坦平片、sp放免試劑盒、cgrp放免試劑盒、兔抗大鼠5-ht抗體、；手套；鼠盒；去離子水；灌胃針。辣木籽總提物制備方法：取辣木籽粉碎，加10倍重量95％乙醇滲濾提取兩次，合并提取液，濃縮，減壓干燥，得辣木籽總提物。

(3)造模

健康wistar大鼠，皮下注射硝酸甘油注射劑10mg/kg，復(fù)制實驗性偏頭痛模型。以給藥造模30min后大鼠出現(xiàn)雙耳發(fā)紅，前肢頻繁搔頭，爬籠次數(shù)增多等煩躁不安的癥狀為模型復(fù)制成功的標(biāo)準(zhǔn)。

(4)實驗分組

實驗組(辣木籽總酚苷、辣木籽總提物)；正常組(去離子水)；陽性對照組(琥珀酸舒馬普坦)6mg/kg；模型組等體積給藥。

(5)給藥劑量與次數(shù)：

低劑量組100mg/kg、中劑量組150mg/kg、高劑量組200mg/kg、辣木籽總提物200mg/kg以灌胃方式給藥，于注射硝酸甘油30min后按組灌胃給藥。

(6)取材及處理

造模3h后腹主動脈采血約3ml，置于抗凝的真空采血管中，輕輕搖勻，迅速低溫(4℃)4000r/min離心20min，分離血漿用放射免疫法測定血漿cgrp、sp、5-ht含量，操作按放免藥盒說明書進(jìn)行。

(7)實驗結(jié)果

辣木籽總酚苷對對偏頭痛大鼠血漿cgrp、sp、5-ht的影響如表1所示，與正常對照組比較，偏頭痛模型組大鼠血漿中cgrp、p物質(zhì)濃度顯著增高(p＜0.5)，5-ht的含量顯著降低(p＜0.5)。；舒馬普坦組、辣木籽總提物組和辣木籽總酚苷高、中、低劑量組及辣木籽總酚苷組能顯著降低模型動物血漿cgrp、p物質(zhì)濃度(p＜0.5)，升高5-ht的含量(p＜0.5)。以舒馬普坦組和辣木籽總酚苷高劑量組的cgrp、p物質(zhì)濃度上升最為明顯(p＜0.01)。以上結(jié)果表明辣木籽總酚苷能治療偏頭痛可能與調(diào)節(jié)機體單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的釋放和代謝機制得以恢復(fù)，進(jìn)而改善腦及血管的功能障礙有關(guān)。

表14.辣木籽總酚苷對偏頭痛大鼠血漿cgrp、sp、5-ht的影響(x±s，n＝10)

與空白組比^#p＜0.05；與模型組比^*p＜0.05、^**p＜0.01。