本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取
技術領域：
，具體涉及一種從菜豆中提取香豆素類化合物的方法。
背景技術：
：蕓豆學名菜豆（俗稱二季豆或四季豆），豆科科菜豆屬。蕓豆原產(chǎn)美洲的墨西哥和阿根廷。莢果長10～20厘米，形狀直或稍彎曲，橫斷面圓形或扁圓形，表皮密被絨毛；嫩莢呈深淺不一的綠、黃、紫紅（或有斑紋）等顏色，成熟時黃白至黃褐色。隨著豆莢的發(fā)育，其背、腹面縫線處的維管束逐漸發(fā)達，中、內(nèi)果皮的厚壁組織層數(shù)逐漸增多，鮮食品質因而降低。故嫩莢采收要力求適時。每莢含種子4～8粒，種子腎形，有紅、白、黃、黑及斑紋等顏色；千粒重0.3～0.7千克。1820年，vogel從圭亞那零陵香豆（黃香草木犀）中獲得第一種香豆素。從此，香豆素類化合物引起了研究者們極大的興趣，多種香豆素相繼被發(fā)現(xiàn)。香豆素是由順式鄰羥基桂皮酸脫水而形成的內(nèi)酯，具有抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、抗微生物、抗凝血等生物活性。隨著現(xiàn)代分離提取技術的快速發(fā)展，香豆素類物質在染料、熒光探針及殺蟲劑等方面也有廣泛應用。目前，國內(nèi)外對香豆素類化合物的研究主要集中在香豆素類化合物的分離鑒定與提純、藥理作用以及人工合成方法的改進等方面。盡管我國擁有十分豐富的植物資源，但由于這方面的研究起步較晚，對植物中香豆素類化合物資源的鑒定和影響香豆素形成的生理生態(tài)條件的研究尚不系統(tǒng)、深入，香豆素提取和分離純化技術體系尚不成熟，尚未大規(guī)模開發(fā)利用。香豆素的提取工藝，比較常用的主要有有機溶劑提取法，超臨界二氧化碳萃取法等，其中有機溶劑的提取法由于工藝簡單，操作方便，反應條件較易控制等有點，目前仍是最廣泛的一種提取方法，但是有機溶解提取通常需要較高的溫度和大量的有機溶劑，從而在一定程度上影響了目標產(chǎn)物的活性，且香豆素的純度也會受到影響，二氧化碳超臨界提取方法對設備的要求比較高。技術實現(xiàn)要素：解決的技術問題：為了解決現(xiàn)有提取方法香豆素純度低的技術問題，本發(fā)明采用硫酸鎂、檸檬酸鈉和煙酰胺加熱提取有效物質的方法，不僅可以極大的提高香豆素類化合物純度，還可以增加得率。技術方案：一種從菜豆中提取香豆素類化合物的方法，包括以下步驟：步驟1，取菜豆，去皮后將種子加至70-120倍重量份的水中，打漿，得到漿液；步驟2，以重量份計，在所得漿液100份中加入硫酸鎂4-9份、檸檬酸鈉1-4份和煙酰胺0.5-1.2份，加熱至70-90℃提取2-4h，冷卻后經(jīng)微濾膜過濾得到提取液；步驟3，將步驟2所得提取液導入離子交換樹脂進行吸附，再用3-5wt.%的氯化鈉溶液洗脫，得到洗脫液；步驟4，將步驟3所得洗脫液用納濾膜進行濃縮，得到濃縮液；步驟5，將步驟4的濃縮液蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的10-15%，加入乙醇水溶液，攪拌后靜置，得上清；步驟6，將步驟5的上清蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的15-25%，然后冷卻結晶，將結晶濾出后，烘干，即得。進一步地，步驟2中提取過程的壓力為0.08-0.1mpa。進一步地，步驟2中微濾膜的平均孔徑在300-500nm。進一步地，步驟3中離子交換樹脂為d113陽離子交換樹脂。進一步地，步驟3中吸附步驟的料液的流速是1-3bv/h，洗脫步驟的料液的流速是0.8-1.5bv/h。進一步地，步驟4中乙醇水溶液的濃度為85-95v/v%。進一步地，步驟6中烘干溫度為80-100℃，烘干時間為2-4h。進一步地，步驟2中在漿液中還需要加入纖維素酶0.2-0.6份。有益效果：本發(fā)明先將菜豆種子打成漿液再加入硫酸鎂、檸檬酸鈉和煙酰胺加熱提取，使其中的有效物質更多地析出，提取液經(jīng)過離子交換樹脂吸附洗脫除去雜質后，再經(jīng)過乙醇水溶液提取，可以極大的提高香豆素類化合物純度。在提取過程中加入纖維素酶，可以進一步促進有效物質的析出，從而提高香豆素類化合物的產(chǎn)量。具體實施方式實施例1一種從菜豆中提取香豆素類化合物的方法，包括以下步驟：步驟1，取菜豆，去皮后將種子加至70倍重量份的水中，打漿，得到漿液；步驟2，以重量份計，在所得漿液100份中加入硫酸鎂4份、檸檬酸鈉1份和煙酰胺0.5份，加熱至70℃提取4h，冷卻后經(jīng)微濾膜過濾得到提取液；步驟3，將步驟2所得提取液導入離子交換樹脂進行吸附，再用3wt.%的氯化鈉溶液洗脫，得到洗脫液；步驟4，將步驟3所得洗脫液用納濾膜進行濃縮，得到濃縮液；步驟5，將步驟4的濃縮液蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的10%，加入乙醇水溶液，攪拌后靜置，得上清；步驟6，將步驟5的上清蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的25%，然后冷卻結晶，將結晶濾出后，烘干，即得。其中，步驟2中提取過程的壓力為0.08mpa，微濾膜的平均孔徑在300-500nm；步驟3中離子交換樹脂為d113陽離子交換樹脂，吸附步驟的料液的流速是1bv/h，洗脫步驟的料液的流速是0.8bv/h；步驟4中乙醇水溶液的濃度為85v/v%；步驟6中烘干溫度為80℃，烘干時間為4h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素類化合物85mg，純度為82.4%。實施例2一種從菜豆中提取香豆素類化合物的方法，包括以下步驟：步驟1，取菜豆，去皮后將種子加至75倍重量份的水中，打漿，得到漿液；步驟2，以重量份計，在所得漿液100份中加入硫酸鎂6份、檸檬酸鈉2份和煙酰胺0.7份，加熱至75℃提取4h，冷卻后經(jīng)微濾膜過濾得到提取液；步驟3，將步驟2所得提取液導入離子交換樹脂進行吸附，再用4wt.%的氯化鈉溶液洗脫，得到洗脫液；步驟4，將步驟3所得洗脫液用納濾膜進行濃縮，得到濃縮液；步驟5，將步驟4的濃縮液蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的15%，加入乙醇水溶液，攪拌后靜置，得上清；步驟6，將步驟5的上清蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的20%，然后冷卻結晶，將結晶濾出后，烘干，即得。其中，步驟2中提取過程的壓力為0.1mpa，微濾膜的平均孔徑在300-500nm；步驟3中離子交換樹脂為d113陽離子交換樹脂，吸附步驟的料液的流速是2bv/h，洗脫步驟的料液的流速是1.2bv/h；步驟4中乙醇水溶液的濃度為90v/v%；步驟6中烘干溫度為90℃，烘干時間為3h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素類化合物88mg，純度為80.3%。實施例3一種從菜豆中提取香豆素類化合物的方法，包括以下步驟：步驟1，取菜豆，去皮后將種子加至90倍重量份的水中，打漿，得到漿液；步驟2，以重量份計，在所得漿液100份中加入硫酸鎂8份、檸檬酸鈉3份和煙酰胺0.9份，加熱至80℃提取4h，冷卻后經(jīng)微濾膜過濾得到提取液；步驟3，將步驟2所得提取液導入離子交換樹脂進行吸附，再用3wt.%的氯化鈉溶液洗脫，得到洗脫液；步驟4，將步驟3所得洗脫液用納濾膜進行濃縮，得到濃縮液；步驟5，將步驟4的濃縮液蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的15%，加入乙醇水溶液，攪拌后靜置，得上清；步驟6，將步驟5的上清蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的15%，然后冷卻結晶，將結晶濾出后，烘干，即得。其中，步驟2中提取過程的壓力為0.1mpa，微濾膜的平均孔徑在300-500nm；步驟3中離子交換樹脂為d113陽離子交換樹脂，吸附步驟的料液的流速是3bv/h，洗脫步驟的料液的流速是1.5bv/h；步驟4中乙醇水溶液的濃度為95v/v%；步驟6中烘干溫度為100℃，烘干時間為4h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素類化合物94mg，純度為82.6%。實施例4一種從菜豆中提取香豆素類化合物的方法，包括以下步驟：步驟1，取菜豆，去皮后將種子加至120倍重量份的水中，打漿，得到漿液；步驟2，以重量份計，在所得漿液100份中加入硫酸鎂9份、檸檬酸鈉4份和煙酰胺1.2份，加熱至90℃提取2h，冷卻后經(jīng)微濾膜過濾得到提取液；步驟3，將步驟2所得提取液導入離子交換樹脂進行吸附，再用5wt.%的氯化鈉溶液洗脫，得到洗脫液；步驟4，將步驟3所得洗脫液用納濾膜進行濃縮，得到濃縮液；步驟5，將步驟4的濃縮液蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的10%，加入乙醇水溶液，攪拌后靜置，得上清；步驟6，將步驟5的上清蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的25%，然后冷卻結晶，將結晶濾出后，烘干，即得。其中，步驟2中提取過程的壓力為0.08mpa，微濾膜的平均孔徑在300-500nm；步驟3中離子交換樹脂為d113陽離子交換樹脂，吸附步驟的料液的流速是1bv/h，洗脫步驟的料液的流速是0.8bv/h；步驟4中乙醇水溶液的濃度為95v/v%；步驟6中烘干溫度為100℃，烘干時間為2h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素類化合物79mg，純度為80.4%。實施例5本實施例與實施例3的區(qū)別在于：步驟2中在漿液中還需要加入纖維素酶0.2-0.6份。一種從菜豆中提取香豆素類化合物的方法，包括以下步驟：步驟1，取菜豆，去皮后將種子加至90倍重量份的水中，打漿，得到漿液；步驟2，以重量份計，在所得漿液100份中加入硫酸鎂8份、檸檬酸鈉3份、煙酰胺0.9份和纖維素酶0.2份，加熱至80℃提取4h，冷卻后經(jīng)微濾膜過濾得到提取液；步驟3，將步驟2所得提取液導入離子交換樹脂進行吸附，再用3wt.%的氯化鈉溶液洗脫，得到洗脫液；步驟4，將步驟3所得洗脫液用納濾膜進行濃縮，得到濃縮液；步驟5，將步驟4的濃縮液蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的15%，加入乙醇水溶液，攪拌后靜置，得上清；步驟6，將步驟5的上清蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的15%，然后冷卻結晶，將結晶濾出后，烘干，即得。其中，步驟2中提取過程的壓力為0.1mpa，微濾膜的平均孔徑在300-500nm；步驟3中離子交換樹脂為d113陽離子交換樹脂，吸附步驟的料液的流速是3bv/h，洗脫步驟的料液的流速是1.5bv/h；步驟4中乙醇水溶液的濃度為95v/v%；步驟6中烘干溫度為100℃，烘干時間為4h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素類化合物106mg，純度為83.6%。實施例6本實施例中步驟5所采用的乙醇水溶液的濃度為80v/v%、85v/v%、90v/v%、95v/v%和100v/v%。一種從菜豆中提取香豆素類化合物的方法，包括以下步驟：步驟1，取菜豆，去皮后將種子加至90倍重量份的水中，打漿，得到漿液；步驟2，以重量份計，在所得漿液100份中加入硫酸鎂8份、檸檬酸鈉3份和煙酰胺0.9份，加熱至80℃提取4h，冷卻后經(jīng)微濾膜過濾得到提取液；步驟3，將步驟2所得提取液導入離子交換樹脂進行吸附，再用3wt.%的氯化鈉溶液洗脫，得到洗脫液；步驟4，將步驟3所得洗脫液用納濾膜進行濃縮，得到濃縮液；步驟5，將步驟4的濃縮液蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的15%，加入乙醇水溶液，攪拌后靜置，得上清；步驟6，將步驟5的上清蒸發(fā)濃縮至體積縮小為原體積的15%，然后冷卻結晶，將結晶濾出后，烘干，即得。其中，步驟2中提取過程的壓力為0.1mpa，微濾膜的平均孔徑在300-500nm；步驟3中離子交換樹脂為d113陽離子交換樹脂，吸附步驟的料液的流速是3bv/h，洗脫步驟的料液的流速是1.5bv/h；步驟4中乙醇水溶液的濃度為80v/v%、85v/v%、90v/v%、95v/v%和100v/v%；步驟6中烘干溫度為100℃，烘干時間為4h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素類化合物重量和純度如下所示：乙醇濃度80v/v%85v/v%90v/v%95v/v%100v/v%重量/mg6585889462純度/%74.282.480.382.670.7當前第1頁12