專利名稱：腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物及其藥物組合物和用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及中藥領域，具體而言，本發(fā)明涉及中藥材腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物及其藥物組合物和用途。
腫節(jié)風為金粟蘭科植物Sarcandra elabra(Thunb.)Nabal，民間稱為草珊瑚、九節(jié)荼、接骨木、駁骨茶、骨風消等，為多年生常綠草本或亞灌木，分布于中國江酉、安微、浙江、湖北、湖南、四川、廣東、廣西等省，是一味常用中藥，在臨床上應用于治病歷史二千多年，中醫(yī)藥中有重要地位，全草能祛風清熱、活血、止痛、通經(jīng)、接骨。用于治療常見炎癥性疾病，也用于治療絳蟲病、類風濕性關(guān)節(jié)炎及預防感冒等。亦用于治療多種惡性腫瘤如胰腺瘤、胃癌、直腸癌、肝癌和食道癌等。腫節(jié)風含延胡索酸、琥珀酸、愈瘡木基木脂體(guaiacyl lignin)、香豆精類成分異白蠟樹定(isofraxidin7-hydroxy-6，8-dimethoxycoumarin)、酚類、鞣質(zhì)、黃酮類苷(落新婦苷)、香豆精、揮發(fā)油等。
中國江西省是腫節(jié)風藥材的主產(chǎn)地，資源非常豐富，全省各地有野生及栽培品，并在贛州、吉安、萍鄉(xiāng)等市縣建立了生產(chǎn)基地，栽種面積達50余萬畝，年產(chǎn)500萬公斤左右，已形成大宗商品藥材。有鑒于此，我們對中藥腫節(jié)風進行了長期深入研究，研制出高效、安全、質(zhì)量可控的腫節(jié)風有效部位制劑，得到了腫節(jié)風黃酮類、香豆素類總提物及其藥物組合物，填補了腫節(jié)風研究中的空白。由于中醫(yī)臨床用藥以口服最為常用，其次為中藥注射液，因此，我們考慮這種腫節(jié)風黃酮類、香豆素類總提物藥物組合物制成口服、注射液劑型，并由此完成本發(fā)明。
因此，本發(fā)明的目的是提供了中藥腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物；本發(fā)明的另一目的是提供了制備腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物的方法；本發(fā)明的另一目的是提供了含有腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物的藥物組合物；
本發(fā)明的另一目的是提供了將腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物用于制備治療血熱妄行、皮膚紫斑、原發(fā)性及繼發(fā)性血小板減少性紫癜疾病的藥物的用途；本發(fā)明的另一目的是提供了將腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物用于制備抗肺炎、闌尾炎、蜂窩組織炎藥物的用途；本發(fā)明的另一目的是提供了將腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物用于制備抗菌藥物的用途；本發(fā)明的另一目的是提供了將腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物用于制備升白細胞、癌癥輔助治療藥物的用途。
本發(fā)明的藥物組合物可以使用制藥領域中的常規(guī)方法制備，其可以是片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、滴丸劑、泡騰片、軟膏劑、糖漿劑、注射劑、口服液、合劑、緩釋劑、控釋制劑或靶向制劑等形式。
本發(fā)明的腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物可以提供下列方法制備得到。
工藝研究及含量測定本發(fā)明的中藥腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物可以通過將腫節(jié)風進行醇回流提取、醇滲漉提取或水煎煮提取得到，其中醇回流提取方法是取腫節(jié)風藥材粗粉，用40％-95％乙醇3-10倍量作溶劑，浸漬1小時后，加熱回流提取2-4次，每次1-4小時，回收乙醇，濃縮液經(jīng)吸附處理，干燥，即得總提物；醇滲漉提取方法是取腫節(jié)風粗粉，用30-90％乙醇作溶劑，浸漬后，以1-6ml/分鐘的速度進行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇；濃縮液經(jīng)吸附處理，干燥，即得總提物；煎煮提取方法是取腫節(jié)風藥材加水煎煮，每次1-3小時，濾過，濾液合并，濃縮，濃縮液經(jīng)吸附處理，干燥即得總提物。
本發(fā)明制備方法的操作步驟及其特點描述如下一.提取1.回流提取取腫節(jié)風粗粉——加3-10倍量的40-95％乙醇，浸漬1小時后，加熱回流提取2-4次，每次1-4小時，回收乙醇濃縮至每毫升溶液含生藥量不得少于0.5克。
2.滲漉提取取腫節(jié)風粗粉，照流浸膏及浸膏劑項下的滲漉法(《中國藥典》2000版一部附錄IO)，用30-90％乙醇作溶劑，浸漬后，以1-6ml/分鐘的速度進行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇；濃縮至每毫升溶液含生藥量不得少于0.5克。
3.煎煮提取取腫節(jié)風藥材加水煎煮，每次1-3小時，濾過，濾液合并，濃縮，濃縮至相對密度約1.01以上(55-60℃)。
含量測定對照品溶液制備精密稱120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品100mg，置100ml容量瓶中，加60％乙醇70ml，置水浴上微熱溶解，放冷，加60％乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10ml，置50ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
標準曲線制備精密吸取對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，與6.0ml分別置25ml量瓶中，各加水5ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，用6ml水同法作空白，照分光光度法在500nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
提取濃縮液的供試品溶液制備供試品溶液制備精密稱取總提物約20mg，置25ml容量瓶中，加70％乙醇10ml溶解，加水稀釋定容至刻度，搖勻，即得。精密吸取1ml，置25ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“各加水5ml”起依法操作，以供試品溶液1ml加水稀釋至25ml作空白，過濾，取濾液依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的重量，計算，即得。
經(jīng)測定，其地上部分回流提取每克生藥含總黃酮類以蘆丁計算含18.04毫克，滲漉提取每克生藥含總黃酮類以蘆丁計算含15.28毫克，煎煮提取每克生藥含總黃酮類以蘆丁計算含12.12毫克。
二.分離精制本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明制備方法中得到的提取物經(jīng)過分離精制，可以有效地除去雜質(zhì)，明顯地提高總提物的活性和藥效，這也構(gòu)成了本發(fā)明明顯進步的技術(shù)特征。本發(fā)明分離精制的方法包括酸沉法、聚酰胺吸附法和大孔樹脂吸附法。下面對分離精制方法及其特點進行進一步說明。
1.酸沉法從提取濃縮液中取適量體積25ml，加適量乙醇至濃度為75％，然后加鹽酸進行酸沉實驗，調(diào)pH為2，發(fā)現(xiàn)沉淀極少。
從提取濃縮液中取適量體積50ml，直接加鹽酸進行酸沉實驗，從滴加方式(慢慢滴加或快速傾倒)，攪拌方式及速度等方面考慮，分別進行不同的實驗比較最終調(diào)pH為2，至不再產(chǎn)生沉淀為止，發(fā)現(xiàn)均有沉淀，但沉淀呈細膩泥狀，難與上清液分離，較難獲得總提物。
另外從提取濃縮液中取適量體積50ml，加濃硫酸進行酸沉實驗，發(fā)現(xiàn)無沉淀出現(xiàn)，溶液成混懸狀態(tài)。
另外對原提取濃縮液進行稀釋至不同的濃度(每毫升溶液含0.5克生藥與0.4克生藥)或濃縮至每毫升溶液含1克生藥，取適量體積25ml，加鹽酸進行酸沉實驗，發(fā)現(xiàn)均有沉淀，但沉淀呈細膩泥狀，難與上清液分離，較難獲得總提物。刮取部分沉淀于蒸發(fā)皿中，烘干，成黑色固體，測其含總黃酮類為25.18％，得率很低。
因此，酸沉法分離精制效果比較差。
2.聚酰胺吸附法稱取已處理好的聚酰胺(30-60目)6克，濕法裝柱(12×25mm)，取提取濃縮液30ml(含生藥24克)上樣，先用水400ml除去雜質(zhì)，然后30％乙醇500ml洗脫，然后70％乙醇400ml洗脫，分別將3種溶液濃縮定容至100ml，作為供試品溶液，對其進行聚酰胺薄膜點樣，顯色，發(fā)現(xiàn)水洗液中有大量的黃酮類成分，30％乙醇洗脫液中含有少量黃酮類成分，70％乙醇洗脫液在36％醋酸的展開劑中沒有展開，集中在原點。
精密吸取1ml濃縮液，置25ml容量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“各加水5ml”起依法操作，以供試品溶液1ml加水稀釋至25ml作空白，依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的重量，計算，即得。測得水洗液中含總黃酮類為2.27％，30％乙醇洗脫液中含總黃酮類為0.197％，70％乙醇洗脫液中含總黃酮類為0.048％。
改進方法減少上樣量，水洗液體積為生藥量的1.5倍，30％乙醇洗脫液體積為生藥量的4倍。結(jié)果黃酮類主要集中在30％乙醇洗脫液中。
另外取2個25mm直徑的層析柱，各稱取以處理好的聚酰胺(30-60目)30克，濕法裝柱，上樣量各100ml(總含生藥160克)水洗除去雜質(zhì)，30％乙醇洗脫液回收乙醇濃縮至稠膏真空干燥得總提物，其得率3.09％，總提物含總黃酮類59.73％3.大孔吸附樹脂法取2個25mm直徑的層析柱，稱取已處理好的D101大孔吸附樹脂各200克，濕法裝柱，上樣量各100ml(總含生藥160克)先水洗除去雜質(zhì)，30％乙醇洗脫液回收乙醇濃縮至稠膏真空干燥得總提物，其得率6.17％，總提物含總黃酮類55.87％。
(1)各種大孔吸附樹脂的比較將從市場上購買的各種型號的大孔吸附樹脂如H103，NKA-II，NKA-9，S-8，D3520，D4006，D4020，AB-8，D101都預處理好，各稱取40克樹脂，濕法裝柱(12×25mm)上樣量各40ml(總含生藥32克)，先水洗除去雜質(zhì)，然后30％乙醇洗脫至總體積為生藥量的4倍。將30％乙醇洗脫液回收乙醇濃縮定容至100ml，作為供試品溶液，對其進行聚酰胺薄膜點樣，展開劑為36％醋酸，10％三氯化鋁乙醇顯色，發(fā)現(xiàn)AB-8型號的樹脂對所含黃酮類成分能比較好地富集。
(2)大孔吸附樹脂的上樣量的比較將上述各種樹脂的水洗液濃縮定容至100ml，作為供試品溶液，對其進行聚酰胺薄膜點樣顯色，發(fā)現(xiàn)均有黃色斑點出現(xiàn)，可能上樣量過量?，F(xiàn)對其不同上樣量進行比較。
稱取預處理好的D101樹脂40克(3份)，濕法裝柱(12×25mm)3個，上樣量分別取20ml，30ml，40ml，先水洗除去雜質(zhì)，然后以30％乙醇洗脫至總體積為生藥量的4倍。將水洗液，30％乙醇洗脫液回收乙醇濃縮至每毫升溶液含0.64克生藥，，作為供試品溶液，對其進行聚酰胺薄膜點樣，展開劑為36％醋酸，10％三氯化鋁乙醇溶液顯色，發(fā)現(xiàn)20ml的上樣量比較合適。
實驗結(jié)果見表1表1樹脂 30％醇洗部分A值 總黃酮類含量％NKA-90.6051.7108D40060.5651.6002
D4020 0.6601.8662NKA-II0.2180.1625D3520 0.8552.4125H103 0.6591.8635S-8 0.6250.8841AB-8 0.9971.413D101 0.6251.767因此，選擇AB-8型號的大孔吸附樹脂為好，每40克已處理好的樹脂吸附生藥量16克，水洗液體積為生藥量的15倍，30％乙醇洗脫液為生藥量的4倍，其洗脫液回收乙醇，蒸干，得總提物，測其總黃酮類含量.
三.干燥方法及干燥溫度的研究對精制后的腫節(jié)風黃酮類、香豆素類總提物藥的干燥方法和干燥溫度進行了研究。實驗設計如下采用烘干法、真空干燥法、噴霧干燥法三種干燥方法。烘干法、真空干燥法分別進行5種不同溫度(50℃、65℃、75℃、85℃、95℃)干燥的比較?？疾炷[節(jié)風黃酮類、香豆素類含量(以干品計)。結(jié)果見下表。
烘干法不同溫度的測定結(jié)果見表2表2總腫節(jié)風黃酮類、香豆素烘干溫度(℃) 烘干時間(小時)類提物藥含量(％)5060 52.266552 53.007542 52.238538 56.039536 57.89真空干燥法不同溫度的測定結(jié)果見表3
真空干燥總腫節(jié)風黃酮類、香豆干燥時間(小時)溫度(℃)素類含量(％)50 46 53.2865 38 52.8975 30 52.1085 26 51.5995 26 55.28噴霧干燥法不同溫度的測定結(jié)果見表4表4藥材投 進樣口 出風口 干燥時 總腫節(jié)風黃酮類、香樣號 料kg 溫度溫度℃ 間(h) 豆素類含量(℃)1 40 215 133 6 55.0 5％2 32 175 125 6.5 54.94％3 25 220 130 5 54.44％4 30 160 115 7 52.03％從上面的表可知，烘干法、真空干燥所需時間長，真空干燥前須在水浴上進行充分的干燥，將水分控制在15-20％，真空干燥時易拉干成蜂窩狀，干燥可在2-3天內(nèi)完成，反之，含水量高，真空干燥時會溢出，而烘干法所需時間更長，無法適應工業(yè)化生產(chǎn)。而噴霧干燥時間短，提取液只需濃縮至相對密度約1.01，干燥可在數(shù)小時內(nèi)完成。由于烘干干燥、真空干燥與噴霧干燥所耗時間相差太大，烘干干燥、真空干燥時間是噴霧干燥的二十多倍，因此，選擇噴霧干燥。
四.穩(wěn)定性試驗本品在商品流通包裝條件下，通過連續(xù)三個月對不同批次的三個批號樣品進行室溫留樣、恒溫恒濕加速實驗檢測，并與0月比較，結(jié)果其外觀性狀、鑒別、水分、含量測定均符合本品質(zhì)量標準，衛(wèi)生學檢查也符合規(guī)定，說明腫節(jié)風黃酮類、香豆素類總提物原料藥在初步穩(wěn)定性試驗期間基本穩(wěn)定。
五.藥效學實驗給大鼠灌胃腫節(jié)風黃酮類、香豆素類總提物，能明顯縮短小鼠斷尾出血時間及凝血時間，加強血小板收縮功能，對抗兔血栓形成，對正常鼠、狗血小板數(shù)量無明顯影響，對用環(huán)磷西酰胺所致鼠、狗血小板、白細胞減少癥及對輻射所致鼠、狗血小板、白細胞減少癥有明顯的抑制作用，對苯、二甲苯所致鼠、狗血小板、白細胞減少也有明顯的抑制作用，并使之恢復正常。
能增加小鼠免疫器官重量指數(shù)，抗炎作用試驗表明梔子總提物高、中劑量組能抑制二甲苯引起鼠的耳腫脹；抑制角叉菜膠致鼠的足跖腫脹；對棉球肉芽腫僅呈抑制趨勢，與正常對照組比較無統(tǒng)計學差異性。體外抗菌試驗，采用金葡球菌，表皮葡萄球菌、甲鏈球菌、棒狀桿菌、類白喉桿菌、綠膿桿菌、肺炎桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、白色念珠菌及脆弱類桿菌等11種117株菌，經(jīng)MIC和MBC試驗表明梔子總提物有不同程度的抗菌作用。
權(quán)利要求
1.中藥腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物，其通過下列制備方法中的一種或多種制備得到a.醇回流提取方法該方法是將腫節(jié)風藥材粗粉，用40％-95％乙醇3-10倍量作溶劑，浸漬1小時后，加熱回流提取2-4次，每次1-4小時，回收乙醇，濃縮液經(jīng)分離精制處理，干燥，即得總提物；或b.醇滲漉提取方法該方法是將腫節(jié)風粗粉，用30-90％乙醇作溶劑，浸漬后，以1-6ml/分鐘的速度進行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，濃縮液經(jīng)分離精制處理，干燥，即得總提物；或c.煎煮提取方法該方法是將腫節(jié)風藥材加水煎煮，每次1-3小時，濾過，濾液合并，濃縮，濃縮液經(jīng)分離精制處理，干燥，即得總提物；其中，步驟a、b或c中的分離精制方法是酸沉法、聚酰胺吸附法或大孔樹脂吸附法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的總提物，其中步驟a、b或c中的分離精制方法是大孔樹脂吸附法。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的總提物，其中步驟a、b或c中的大孔樹脂吸附法中使用的大孔樹脂是AB-8型樹脂。
4.權(quán)利要求1-3之一的中藥腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物的制備方法，該方法包括下列制備方法中的一種或多種a.醇回流提取方法該方法是將腫節(jié)風藥材粗粉，用40％-95％乙醇3-10倍量作溶劑，浸漬1小時后，加熱回流提取2-4次，每次1-4小時，回收乙醇，濃縮液經(jīng)分離精制處理，干燥，即得總提物；或b.醇滲漉提取方法該方法是將腫節(jié)風粗粉，用30-90％乙醇作溶劑，浸漬后，以1-6ml/分鐘的速度進行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，濃縮液經(jīng)分離精制處理，干燥，即得總提物；或c.煎煮提取方法該方法是將腫節(jié)風藥材加水煎煮，每次1-3小時，濾過，濾液合并，濃縮，濃縮液經(jīng)分離精制處理，干燥，即得總提物；其中，步驟a、b或c中的分離精制方法是酸沉法、聚酰胺吸附法或大孔樹脂吸附法。
5.權(quán)利要求1-3之一的腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物用于制備治療原發(fā)性及繼發(fā)性血小板減少性紫癜疾病的藥物的用途。
6.權(quán)利要求1-3之一的腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物用于制備抗肺炎、闌尾炎、蜂窩組織炎藥物的用途。
7.權(quán)利要求1-3之一的腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物用于制備抗菌藥物的用途。
8.權(quán)利要求1-3之一的腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物用于制備升白細胞、癌癥輔助治療藥物的用途。
9.一種藥物組合物，其含有作為活性成分的權(quán)利要求1-3之一的腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物和可藥用載體。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的藥物組合物，其可以是片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、滴丸劑、泡騰片、軟膏劑、糖漿劑、注射劑、口服液、合劑、緩釋劑、控釋制劑或靶向制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥材腫節(jié)風中黃酮類香豆素類總提物及其制備方法和含有該總提物的藥物組合物，其中腫節(jié)風黃酮類香豆素類總提物可通過將腫節(jié)風進行醇回流提取、醇滲漉提取、水煎煮提取得到，該總提物及其藥物組合物可以用于治療原發(fā)性及繼發(fā)性血小板減少性紫癜，癌癥輔助治療，升白細胞，抗菌，抗肺炎、闌尾炎、蜂窩組織炎等疾病。本發(fā)明的腫節(jié)風黃酮類、香豆素類總提物的藥物組合物可以是片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、滴丸劑、泡騰片、軟膏劑、糖漿劑、注射劑、口服液、合劑、緩釋劑、控釋制劑或靶向制劑等形式。
文檔編號A61P11/00GK1515565SQ0310005
公開日2004年7月28日 申請日期2003年1月8日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月8日
發(fā)明者范崔生, 孫繼寅, 呂武清, 褚小蘭 申請人:范崔生, 孫繼寅, 呂武清, 褚小蘭, 江西青峰藥業(yè)有限公司