本發(fā)明屬藥物領(lǐng)域，涉及馬錢(qián)苷的藥物新用途，具體涉及馬錢(qián)苷在制備預(yù)防和治療抑郁癥、焦慮癥等精神障礙類(lèi)疾病的藥物或保健品中的用途。

技術(shù)背景

精神障礙又稱為精神疾病，是指在生物、社會(huì)、心理因素的作用下，造成大腦功能失調(diào)，而出現(xiàn)感知、思維、情感、行為、意志以及智力等精神運(yùn)動(dòng)方面的異常。隨著社會(huì)的發(fā)展，精神障礙越來(lái)越受到人們的重視。

焦慮癥、抑郁癥等是精神障礙類(lèi)疾病的常見(jiàn)類(lèi)型，其發(fā)病率非常高，目前已成為給人類(lèi)造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān)的第二位重要疾病，對(duì)患者及其家屬造成的痛苦，對(duì)社會(huì)造成的損失是其它疾病所無(wú)法比擬的。在我國(guó)，焦慮癥、抑郁癥等精神障礙類(lèi)疾病發(fā)病率約為3％～5％，隨著生活節(jié)奏的日益加快，焦慮癥、抑郁癥等精神障礙類(lèi)疾病的發(fā)病率日益增加。

治療焦慮癥、抑郁癥等精神障礙類(lèi)疾病藥物主要有苯二氮卓類(lèi)、5-ht受體激動(dòng)劑、三環(huán)類(lèi)、四環(huán)類(lèi)、ssris等。這些抗精神失常類(lèi)藥物長(zhǎng)期服用容易產(chǎn)生失眠、過(guò)敏、肌肉疼痛、惡心、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、疲倦等不良反應(yīng)。因此，尋找一種可以長(zhǎng)期服用且安全性高的用于預(yù)防、緩解或治療焦慮癥、抑郁癥等精神障礙類(lèi)疾病成為了人們研究的熱點(diǎn)。

許多中藥在預(yù)防、緩解或治療抑郁癥、焦慮癥等精神障礙類(lèi)疾病方面有長(zhǎng)期的臨床應(yīng)用歷史，這些中藥療效確切，而且不良反應(yīng)小，日益成為人們研究的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，金絲桃、連翹、刺五加、積雪草等中藥及其提取物具有明顯的緩解或治療抑郁癥、焦慮癥等精神障礙類(lèi)疾病的作用。因此，從中藥中尋找研制預(yù)防、緩解或治療抑郁癥、焦慮癥等精神障礙類(lèi)疾病的新藥具有重要的意義。

馬錢(qián)苷(loganin)屬于環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物，是山茱萸科(cornaceae)植物山茱萸(cornusofficinalis)的化學(xué)成分之一。研究表明，馬錢(qián)苷具有降血糖(toxicology，2011，290(1)：14-21)、抗氧化、抗炎(現(xiàn)代藥物與臨床，2009，24(5)：272-275)等功效，可用以改善肝臟等器官的代謝紊亂，有助于抑制代謝性疾病(如高血糖、高血脂)，氧化應(yīng)激和炎癥的形成(drugdiscovther，2010，4(4)：223-234.)。然而，馬錢(qián)苷預(yù)防、緩解或治療抑郁癥、焦慮癥等精神障礙類(lèi)疾病等方面的藥理作用及臨床應(yīng)用，迄今尚未見(jiàn)任何研究。

目前有關(guān)馬錢(qián)苷的中國(guó)發(fā)明專利僅可見(jiàn)制備方法(cn104447910a)、含量測(cè)定方法(cn103808811a)和制備治療糖尿病藥物方面(cn103110651a)，未見(jiàn)在抑郁癥、焦慮癥等精神障礙類(lèi)疾病的任何報(bào)道。

公開(kāi)報(bào)道的中國(guó)專利(cn103505491a)中涉及山茱萸混懸液、提取物在制備治療抑郁癥藥物的應(yīng)用。該專利經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，山茱萸水提液、山茱萸乙醇提取液、山茱萸丙酮提取液、山茱萸乙酸乙酯提取液、山茱萸汽油或石油醚提取液均具有一定的抗抑郁作用。本專利申請(qǐng)人通過(guò)化學(xué)分析試驗(yàn)研究表明，該專利所報(bào)道的山茱萸全粉混懸液、山茱萸水提液、山茱萸50％乙醇提取液、山茱萸70％乙醇提取液、山茱萸95％乙醇提取液、山茱萸乙酸乙酯提取液、山茱萸丙酮提取液和山茱萸120#汽油提取液主要含有黃酮類(lèi)(如槲皮素、山萘酚、蘆丁、楊梅素、柚皮素和飛燕草素-3-o-β-吡喃半乳糖苷等)、三萜類(lèi)(如熊果酸、齊墩果酸、阿江欖仁樹(shù)葡萄糖苷ii、白樺脂酸等)、苯丙素類(lèi)(對(duì)羥基桂皮酸、(1′s，2′r)-guaiacylglycerol3′-o-β-d-glucopyranoside等)、環(huán)烯醚萜類(lèi)(莫羅苷、獐牙菜苷、金吉苷、山茱萸新苷、馬錢(qián)子酸、馬錢(qián)苷、山茱萸新苷ii等)、鞣質(zhì)類(lèi)(梾木鞣質(zhì)a、梾木鞣質(zhì)b、馬桑素、2，3-二-o-沒(méi)食子酰-β-d-葡萄糖苷和1，7-二-o-沒(méi)食子酰-d-景天庚酮糖等)、有機(jī)酸脂類(lèi)(酒石酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、沒(méi)食子酸和綠原酸等)、糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、揮發(fā)性成分和礦物元素等化學(xué)成分，各提取物中馬錢(qián)苷的最高含量為0.02％。該結(jié)果表明山茱萸全粉混懸液和山茱萸各提取物所含化學(xué)成分復(fù)雜，且主要成分并不是馬錢(qián)苷，由此可見(jiàn)，中國(guó)專利(cn103505491a)所述的山茱萸混懸液、提取物發(fā)揮藥理作用的有多種化學(xué)成分，多種化學(xué)成分之間也相互作用；現(xiàn)有技術(shù)的提取物效果不佳，且不利于直接作為原料藥加工成相應(yīng)的藥物或保健品。

為了對(duì)比本專利申請(qǐng)中馬錢(qián)苷和中國(guó)專利(cn103505491a)中涉及山茱萸混懸液、提取物防治抑郁癥的優(yōu)效性，我們進(jìn)行了馬錢(qián)苷與山茱萸混懸液、山茱萸提取物對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的比較試驗(yàn)、對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的比較實(shí)驗(yàn)和對(duì)小鼠開(kāi)野實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的比較實(shí)驗(yàn)。比對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，馬錢(qián)苷抗抑郁作用大大超過(guò)上述山茱萸混懸液或山茱萸提取物，可直接作為原料藥并進(jìn)一步加工為預(yù)防和治療抑郁癥、焦慮癥等精神障礙類(lèi)疾病藥物或保健品中的應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種馬錢(qián)苷的新的藥用用途，發(fā)現(xiàn)馬錢(qián)苷在預(yù)防和治療抑郁癥、焦慮癥精神障礙類(lèi)疾病中具有良好的作用。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種馬錢(qián)苷在制備預(yù)防和治療抑郁癥、焦慮癥精神障礙類(lèi)疾病藥物或保健品的應(yīng)用，其特征在于，所述馬錢(qián)苷為如下式化合物：

所述馬錢(qián)苷的英文名：loganin；分子量：390.38；分子式：c17h26o10。

本發(fā)明所述的馬錢(qián)苷可以從山茱萸中提取得到，也可以由合成或其他方法制得。馬錢(qián)苷可以通過(guò)商業(yè)購(gòu)買(mǎi)獲得，其提取或合成方法也有大量的現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道。

具體的應(yīng)用中，馬錢(qián)苷的用量為5-80mg/kg，優(yōu)選45-65mg/kg，更優(yōu)選為50mg/kg。

與山茱萸混懸液及提取液相比較，馬錢(qián)苷可更顯著的增加小鼠前肢撥動(dòng)滑輪旋轉(zhuǎn)的圈數(shù)和縮短小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間，表現(xiàn)出更高效的抗抑郁作用。

進(jìn)一步地，上述藥物或保健品中，可根據(jù)需要加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。

進(jìn)一步地，上述藥物或保健品可以制備成片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、沖劑、滴丸或微丸。

所述藥物制備成片劑，所述片劑包含如下組分：馬錢(qián)苷、羥丙基甲基纖維素、滑石粉、乳糖、硬脂酸鎂、無(wú)水乙醇，各組分用量按照該制劑的一般用量即可。

所述藥物制備成膠囊劑，所述膠囊劑包含如下組分：馬錢(qián)苷、淀粉、焦亞硫酸氫納、硬脂酸鎂、無(wú)水乙醇，各組分用量按照該制劑的一般用量即可。

所述藥物制備成顆粒劑，所述顆粒劑包含如下組分：馬錢(qián)苷、淀粉、亞硫酸氫鈉、硬脂酸鎂、無(wú)水乙醇，各組分用量按照該制劑的一般用量即可。

優(yōu)選地，所述藥物或保健品制備成片劑，其特征在于，每1000片中包含如下組分：

在制備上述片劑時(shí)，取馬錢(qián)苷與羥丙基甲基纖維素、滑石粉、乳糖、硬脂酸鎂混合均勻，加無(wú)水乙醇制成軟材，過(guò)24目篩，制成顆粒，干燥，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片。

優(yōu)選地，所述羥丙基甲基纖維素為12-30g。

關(guān)于原理：本發(fā)明首次從山茱萸混懸液或山茱萸提取液中發(fā)現(xiàn)單體化合物馬錢(qián)苷在治療抑郁癥、焦慮癥方面相比現(xiàn)有的混合物具有顯著高效的作用，特別是通過(guò)對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的比較試驗(yàn)、對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的比較實(shí)驗(yàn)和對(duì)小鼠開(kāi)野實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的比較實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了其顯著效果；此外，在將該單體化合物制備成片劑時(shí)，經(jīng)過(guò)多次篩選試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用羥丙基甲基纖維素作為制作片劑的崩解劑時(shí)，其相較目前常用的崩解劑如微晶纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羥甲基纖維素鈉、聚維酮k30等與馬錢(qián)苷單體相容性好，能實(shí)現(xiàn)迅速崩解、分散的作用，溶出時(shí)間短，溶出度優(yōu)良。

關(guān)于本發(fā)明的技術(shù)效果：通過(guò)小鼠自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)、小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)、小鼠高價(jià)十字迷宮實(shí)驗(yàn)、小鼠明暗箱穿梭實(shí)驗(yàn)等證明中藥山茱萸中單體成分馬錢(qián)苷具有顯著的抗抑郁、抗焦慮等功效且較山茱萸混懸液及提取液相比較具有更有效的抗抑郁作用。本發(fā)明為預(yù)防和治療抑郁癥、焦慮癥等精神障礙疾病提供一種中藥單體成分新藥，拓寬了馬錢(qián)苷防治疾病的范圍。加之馬錢(qián)苷具有來(lái)源廣泛，低毒性等優(yōu)點(diǎn)，因此其在制備預(yù)防、緩解或治療抑郁癥、焦慮癥等精神障礙類(lèi)疾病藥物方面具有很好的應(yīng)用開(kāi)發(fā)前景。

附圖說(shuō)明

圖1馬錢(qián)苷對(duì)正常小鼠自主活動(dòng)的影響

具體實(shí)施方式

為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但這并不意味著對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍的任何限制。

一、生物活性實(shí)施例

實(shí)施例1馬錢(qián)苷對(duì)正常小鼠自主活動(dòng)的影響

本實(shí)驗(yàn)采用20-24g雄性icr種小白鼠，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司購(gòu)入(動(dòng)物合格證號(hào)：scxk(京)2012-0001)。飼養(yǎng)溫度23±2℃，照明時(shí)間12小鼠/日(7：00～19：00開(kāi)燈)。經(jīng)飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將小鼠按體重隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為空白對(duì)照組(蒸餾水)、馬錢(qián)苷低劑量組(5mg/kg)、馬錢(qián)苷中劑量組(20mg/kg)和馬錢(qián)苷高劑量組(50mg/kg)。受試藥物均于實(shí)驗(yàn)前按10ml/kg體重溶于蒸餾水中，灌胃給藥。小鼠給藥后立即放入小鼠自主活動(dòng)記錄儀中，記錄給藥后5min，30min，60min，120min，180min，240min時(shí)小鼠自主水平活動(dòng)次數(shù)(locomotorcounts)。實(shí)驗(yàn)在安靜，室溫25℃房間內(nèi)，于9：00至17：00之間進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如附圖1所示，馬錢(qián)苷各劑量組可明顯降低小鼠自發(fā)運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的作用，而且高劑量組對(duì)小鼠自主運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的降低作用具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明馬錢(qián)苷具有較明顯的鎮(zhèn)靜安神作用。

實(shí)施例2馬錢(qián)苷對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)行為學(xué)的影響

應(yīng)激負(fù)荷試驗(yàn)采用體重為20-24g的雄性icr小鼠，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司購(gòu)入(動(dòng)物合格證號(hào)：scxk(京)2012-0001)。飼養(yǎng)溫度23±2℃，照明時(shí)間12小時(shí)/日(7：00～19：00開(kāi)燈)。經(jīng)飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)分三天進(jìn)行，第一、二天為訓(xùn)練日。即將游泳箱中水加至滑輪中央，約18cm高度處，此水位能保證小鼠游泳時(shí)不會(huì)借助滑輪爬出箱外，也不會(huì)因夠不到滑輪而過(guò)分疲勞。水溫保持在22～23℃。訓(xùn)練時(shí)將小鼠面向滑輪輕輕放入水中，使其游泳10min，取出擦干放回飼養(yǎng)籠中，連續(xù)訓(xùn)練兩天。訓(xùn)練過(guò)程中剔除掉過(guò)度興奮或抑制的小鼠。實(shí)驗(yàn)日將小鼠按體重隨機(jī)分為4組，分別為空白對(duì)照組(蒸餾水)、馬錢(qián)苷低劑量組(5mg/kg)、馬錢(qián)苷中劑量組(20mg/kg)和馬錢(qián)苷高劑量組(50mg/kg)，每組12只。受試藥物均于實(shí)驗(yàn)前按10ml/kg體重溶于蒸餾水中，灌胃給藥。小鼠給藥20min后面向滑輪輕輕放入游泳箱中，使其游泳6min，采用計(jì)算機(jī)記錄后5min小鼠用前肢撥動(dòng)滑輪的圈數(shù)。實(shí)驗(yàn)在安靜，室溫25℃房間內(nèi)，于9：00至17：00之間進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，在強(qiáng)迫游泳引起小鼠絕望行為試驗(yàn)中，灌胃給予馬錢(qián)苷20、50mg/kg時(shí)，可明顯增加小鼠前肢撥動(dòng)轉(zhuǎn)輪旋轉(zhuǎn)的圈數(shù)，且兩個(gè)劑量下對(duì)旋轉(zhuǎn)圈數(shù)的增加作用與空白對(duì)照組均具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。

表1馬錢(qián)苷對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的影響

注：*表示與對(duì)照組比較p＜0.05

實(shí)施例3馬錢(qián)苷對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)行為學(xué)的影響

小鼠隨機(jī)分為4組，分組同上，灌胃給藥1h后，將小鼠尾部距末端2cm處用膠布粘在線上，并連接于肌肉張力換能器上，使其成倒掛狀態(tài)，換能器連接到臺(tái)式平衡記錄儀，放置于一箱內(nèi)，其頭距箱底約5cm。懸掛時(shí)間為6cm，累計(jì)后4min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示，在懸尾實(shí)驗(yàn)中，灌胃給藥20mg/kg和50mg/kg馬錢(qián)苷時(shí)，均能夠顯著減少小鼠不動(dòng)時(shí)間，且在兩個(gè)劑量下對(duì)不動(dòng)時(shí)間的降低作用與空白對(duì)照組比均具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。

表2馬錢(qián)苷對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)行為學(xué)的影響

注：*表示與對(duì)照組比較p＜0.05

實(shí)施例4馬錢(qián)苷對(duì)拘束應(yīng)激大鼠高架十字迷宮行為學(xué)的影響

應(yīng)激負(fù)荷實(shí)驗(yàn)使用動(dòng)物為約250g雄性sd大鼠，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司購(gòu)入。飼養(yǎng)溫度23±2℃，照明時(shí)間12小時(shí)/日(7：00～19：00開(kāi)燈)。經(jīng)飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將大鼠分為5組，分別為正常組、應(yīng)激對(duì)照組、應(yīng)激+馬錢(qián)苷低劑量組(5mg/kg)、應(yīng)激+馬錢(qián)苷中劑量組(20mg/kg)、應(yīng)激+馬錢(qián)苷高劑量組(50mg/kg)，每組7只大鼠。每天18時(shí)將除正常組大鼠之外的各組大鼠強(qiáng)制放入拘束裝置2h，正常組同時(shí)禁食2h，連續(xù)7天。在每天束縛應(yīng)激結(jié)束中，按劑量經(jīng)口給藥方式給予馬錢(qián)苷。正常組及應(yīng)激對(duì)照組給予等體積蒸餾水。

高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)使用由有壁的通道和無(wú)壁的通道構(gòu)成的大鼠用高架十字迷宮。實(shí)驗(yàn)是在最后一次口服給予馬錢(qián)苷30min后，將大鼠放在面向開(kāi)臂之一的十字迷宮中心處。為了確定焦慮效應(yīng)，在5min的實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，測(cè)定在開(kāi)臂的進(jìn)入次數(shù)和開(kāi)臂中滯留的時(shí)間。另外，將大鼠四肢均進(jìn)入通道時(shí)視為進(jìn)入通道。通過(guò)下式分別求出開(kāi)臂滯留時(shí)間的比例和進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)的比例。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)比(％)＝(進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)/進(jìn)入各臂次數(shù))×100％

開(kāi)臂滯留時(shí)間比(％)＝(開(kāi)臂滯留時(shí)間/各臂滯留時(shí)間)×100％

表3馬錢(qián)苷對(duì)大鼠高架十字迷宮行為學(xué)的影響

注：*表示與應(yīng)激組比較p＜0.05

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，應(yīng)激對(duì)照組大鼠較正常組大鼠具有更短的開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)比和開(kāi)臂滯留時(shí)間比，說(shuō)明連續(xù)7天，每天2h的拘束應(yīng)激能夠明顯增加大鼠的焦慮行為。各劑量給藥組大鼠，比應(yīng)激對(duì)照組大鼠，在迷宮開(kāi)臂處逗留的時(shí)間百分比均有明顯增加，探求開(kāi)臂次數(shù)也有不同程度增加。說(shuō)明馬錢(qián)苷具有較明顯的抗焦慮作用。

實(shí)施例5馬錢(qián)苷對(duì)小鼠明暗箱穿梭行為學(xué)的影響

本試驗(yàn)采用體重為20-24g的雄性icr小鼠，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司購(gòu)入(動(dòng)物合格證號(hào)：scxk(京)2012-0001)。飼養(yǎng)溫度23±2℃，照明時(shí)間12小時(shí)/日(7：00～19：00開(kāi)燈)。經(jīng)飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。飼養(yǎng)溫度23±2℃，照明時(shí)間12小鼠/日(7：00～19：00開(kāi)燈)。經(jīng)飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將小鼠按體重隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為空白對(duì)照組(蒸餾水)、馬錢(qián)苷低劑量組(5mg/kg)、馬錢(qián)苷中劑量組(20mg/kg)和馬錢(qián)苷高劑量組(50mg/kg)。受試藥物均于實(shí)驗(yàn)前按10ml/kg體重溶于蒸餾水中，灌胃給藥。小鼠連續(xù)灌胃給藥7天，最后1天給藥后30min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將小鼠放入明暗穿梭箱中，記錄10min實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，小鼠的明箱跨越到暗箱的次數(shù)、在明箱和暗箱停留的時(shí)間以及首次離開(kāi)明箱以前的潛伏期。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4所示，給予馬錢(qián)苷20mg/kg與50mg/kg時(shí)，均能顯著減少小鼠初次進(jìn)入暗箱的時(shí)間，并可以顯著增加小鼠在明暗兩箱間的穿梭次數(shù)，提高小鼠在明箱中的滯留時(shí)間。結(jié)果提示馬錢(qián)苷具有顯著的抗抑郁作用。

表4馬錢(qián)苷對(duì)小鼠明暗箱穿梭行為學(xué)的影響

注：*表示與對(duì)照組比較p＜0.05

實(shí)施例6馬錢(qián)苷與山茱萸混懸液、山茱萸提取物對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的比較試驗(yàn)

應(yīng)激負(fù)荷試驗(yàn)采用體重為20-24g的雄性icr小鼠，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司購(gòu)入(動(dòng)物合格證號(hào)：scxk(京)2012-0001)。飼養(yǎng)溫度23±2℃，照明時(shí)間12小時(shí)/日(7：00～19：00開(kāi)燈)。經(jīng)飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)分三天進(jìn)行，第一、二天為訓(xùn)練日。即將游泳箱中水加至滑輪中央，約18cm高度處，此水位能保證小鼠游泳時(shí)不會(huì)借助滑輪爬出箱外，也不會(huì)因夠不到滑輪而過(guò)分疲勞。水溫保持在22～23℃。訓(xùn)練時(shí)將小鼠面向滑輪輕輕放入水中，使其游泳10min，取出擦干放回飼養(yǎng)籠中，連續(xù)訓(xùn)練兩天。訓(xùn)練過(guò)程中剔除掉過(guò)度興奮或抑制的小鼠。實(shí)驗(yàn)日將小鼠按體重隨機(jī)分為10組，分別為空白對(duì)照組(蒸餾水)、馬錢(qián)苷高劑量組(50mg/kg)，山茱萸全粉混懸液、山茱萸水提液、山茱萸乙醇提取液、山茱萸乙酸乙酯提取液、山茱萸丙酮提取液以及山茱萸120#汽油提取液，每組12只。其中，山茱萸全粉混懸液、山茱萸水提液、山茱萸50％乙醇提取液、山茱萸70％乙醇提取液、山茱萸95％乙醇提取液、山茱萸乙酸乙酯提取液、山茱萸丙酮提取液以及山茱萸120#汽油提取液均按照專利(cn103505491a)中所涉及的提取分離方法獲得。受試藥物均于實(shí)驗(yàn)前按10ml/kg體重溶于蒸餾水中，灌胃給藥。小鼠給藥20min后面向滑輪輕輕放入游泳箱中，使其游泳6min，采用計(jì)算機(jī)記錄后5min小鼠用前肢撥動(dòng)滑輪的圈數(shù)。實(shí)驗(yàn)在安靜，室溫25℃房間內(nèi)，于9：00至17：00之間進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5所示，在強(qiáng)迫游泳引起小鼠絕望行為試驗(yàn)中，灌胃給予馬錢(qián)苷50mg/kg時(shí)，可明顯增加小鼠前肢撥動(dòng)轉(zhuǎn)輪旋轉(zhuǎn)的圈數(shù)(p＜0.05)。相比較灌胃給予山茱萸混懸液及各提取液時(shí)，馬錢(qián)苷50mg/kg可更顯著增加小鼠前肢撥動(dòng)轉(zhuǎn)輪的圈數(shù)(p＜0.05)，表現(xiàn)出更有效的抗抑郁作用。

表5馬錢(qián)苷與山茱萸混懸液、山茱萸提取液對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)影響的比較

注：*表示與對(duì)照組比較p＜0.05，^#表示與馬錢(qián)苷比較p＜0.05

實(shí)施例7馬錢(qián)苷與山茱萸混懸液、山茱萸提取物對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的比較實(shí)驗(yàn)

雄性icr小鼠隨機(jī)分為10組，分組同實(shí)施例6，灌胃給藥1h后，將小鼠尾部距末端2cm處用膠布粘在線上，并連接于肌肉張力換能器上，使其成倒掛狀態(tài)，換能器連接到臺(tái)式平衡記錄儀，放置于一箱內(nèi)，其頭距箱底約5cm。懸掛時(shí)間為6cm，累計(jì)后4min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表6所示，在懸尾實(shí)驗(yàn)中，灌胃給藥50mg/kg馬錢(qián)苷時(shí)，能夠顯著減少小鼠不動(dòng)時(shí)間(p＜0.05)。相比較灌胃給予山茱萸混懸液及各提取液時(shí)，馬錢(qián)苷50mg/kg可更顯著減少小鼠不動(dòng)時(shí)間(p＜0.05)，表現(xiàn)出更明顯的抗抑郁作用。

表6馬錢(qián)苷與山茱萸混懸液、山茱萸提取液對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的比較

注：*表示與對(duì)照組比較p＜0.05，^#表示與馬錢(qián)苷比較p＜0.05

實(shí)施例8馬錢(qián)苷與山茱萸混懸液、山茱萸提取物對(duì)小鼠開(kāi)野實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的比較實(shí)驗(yàn)

由于具有中樞興奮作用的藥物在強(qiáng)迫游泳及懸尾實(shí)驗(yàn)中也可具有陽(yáng)性結(jié)果，因此我們進(jìn)行開(kāi)野實(shí)驗(yàn)從而排除假陽(yáng)性的情況。實(shí)驗(yàn)采用雄性icr小鼠，按體重隨機(jī)分為10組，分組同實(shí)施例6，灌胃給藥1h后，將小鼠放入敞箱裝置為長(zhǎng)寬各50cm，高25cm，且底面劃分為25個(gè)等邊方格的木箱內(nèi)，且置于木箱的中心方格內(nèi)，觀察記錄小鼠在3min內(nèi)穿格次數(shù)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表7所示，在開(kāi)野實(shí)驗(yàn)中，灌胃給予各個(gè)被試藥物后，小鼠的穿格次數(shù)與正常組小鼠均不具有顯著性差異(p＞0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，各藥物對(duì)小鼠開(kāi)野實(shí)驗(yàn)中的穿格次數(shù)均沒(méi)有顯著影響，因此各藥物在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)與懸尾實(shí)驗(yàn)中不存在假陽(yáng)性結(jié)果。

表7馬錢(qián)苷與山茱萸混懸液、山茱萸提取液對(duì)小鼠開(kāi)野實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的比較

二、制備實(shí)施例

實(shí)施例1以馬錢(qián)苷為原料藥的片劑

取馬錢(qián)苷與羥丙基甲基纖維素、滑石粉、乳糖、硬脂酸鎂混合均勻，加無(wú)水乙醇制成軟材，過(guò)24目篩，制成顆粒，干燥，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片。

實(shí)施例2除羥丙基甲基纖維素為12g外，其余同實(shí)施例1。

實(shí)施例3除羥丙基甲基纖維素為30g外，其余同實(shí)施例1。

實(shí)施例4以馬錢(qián)苷為原料藥的膠囊劑

取馬錢(qián)苷與淀粉、微晶纖維素、焦亞硫酸氫鈉混合均勻，加無(wú)水乙醇制成軟材，過(guò)24目篩，制成顆粒，干燥，加入硬脂酸鎂，混勻，裝入膠囊。

實(shí)施例5以馬錢(qián)苷為原料藥的顆粒劑

取馬錢(qián)苷與淀粉、亞硫酸氫鈉混合均勻，加無(wú)水乙醇制成軟材，過(guò)24目篩，制成顆粒，干燥，加入硬脂酸鎂，混勻，裝袋。

實(shí)施例6以馬錢(qián)苷為原料藥的口服液劑

上述組分混勻后，采用口服液常規(guī)制備方法，分裝即可。

對(duì)比實(shí)施例1：除采用微晶纖維素代替羥丙基甲基纖維素外，其余同實(shí)施例1；

對(duì)比實(shí)施例2：除采用交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮代替羥丙基甲基纖維素外，其余同實(shí)施例1；

對(duì)比實(shí)施例3：除采用交聯(lián)羧甲基纖維素鈉代替羥丙基甲基纖維素外，其余同實(shí)施例1；

對(duì)比實(shí)施例4：除采用羥甲基纖維素鈉代替羥丙基甲基纖維素外，其余同實(shí)施例1；

對(duì)比實(shí)施例5：除采用聚維酮k30代替羥丙基甲基纖維素外，其余同實(shí)施例1；

對(duì)比實(shí)施例6：除羥丙基甲基纖維素為10g外，其余同實(shí)施例1；

對(duì)比實(shí)施例7：除羥丙基甲基纖維素為32g外，其余同實(shí)施例1。

三、馬錢(qián)苷不同制劑溶出度測(cè)定實(shí)驗(yàn)研究

按照溶出度測(cè)定法(中國(guó)藥典2005年版二部附錄xc第二法)以水1000ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘75轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)15、45分鐘時(shí)，取出溶液濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2ml，置50ml容量瓶中，用0.1mol/l鹽酸溶液定溶，作為供試品溶液。精密量取32mg，置50ml容量瓶中，精密量取2ml置50ml容量瓶中，用0.1mol/l鹽酸溶液定溶，作為對(duì)照品溶液。分別取供試品和對(duì)照品溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法在345nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算每個(gè)劑量的溶出量，限度為標(biāo)示量的70％，應(yīng)符合規(guī)定。

表8馬錢(qián)苷片劑的溶出度測(cè)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表8所示，本發(fā)明采用特定崩解劑制備的馬錢(qián)苷片劑在45min藥物基本溶出完全，15min的溶出度也在95％以上，其中當(dāng)羥丙基甲基纖維素為18g時(shí)，即其與馬錢(qián)苷的比例為3∶1時(shí)的實(shí)施例1效果最佳；當(dāng)羥丙基甲基纖維素的用量范圍在本發(fā)明范圍之外時(shí)，如對(duì)比實(shí)施例6-7所示，其效果遠(yuǎn)低于本發(fā)明實(shí)施例；當(dāng)崩解劑采用本領(lǐng)域其它的崩解劑，如對(duì)比實(shí)施例1-5所示的崩解劑時(shí)，其與馬錢(qián)苷的相容性查，溶出度均較差。

四、馬錢(qián)苷不同制劑對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究

按照生物活性實(shí)施例中實(shí)施例2方法。雄性icr小鼠隨機(jī)分為15組，分別為空白組、氟西汀組、制備實(shí)施例中實(shí)施例1-6、對(duì)比實(shí)施例1-7，每組12只。受試藥物均于實(shí)驗(yàn)前按10ml/kg體重溶于蒸餾水中，灌胃給藥(50mg/kg)。小鼠給藥20min后面向滑輪輕輕放入游泳箱中，使其游泳6min，采用計(jì)算機(jī)記錄后5min小鼠用前肢撥動(dòng)滑輪的圈數(shù)。實(shí)驗(yàn)在安靜，室溫25℃房間內(nèi)，于9：00至17：00之間進(jìn)行。

表9馬錢(qián)苷不同制劑對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)行為學(xué)影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表9所示，在強(qiáng)迫游泳引起小鼠絕望行為試驗(yàn)中，灌胃給予馬錢(qián)苷片劑、膠囊、顆粒劑和口服液時(shí)，均可明顯增加小鼠前肢撥動(dòng)轉(zhuǎn)輪旋轉(zhuǎn)的圈數(shù)(p＜0.05)。特別是，采用特定崩解劑制備的馬錢(qián)苷片劑時(shí)，其中當(dāng)羥丙基甲基纖維素為18g(即其與馬錢(qián)苷的比例為3∶1)時(shí)的實(shí)施例1效果最好，優(yōu)于羥丙基甲基纖維素的用量范圍在本發(fā)明范圍之外(如對(duì)比實(shí)施例6-7)，更優(yōu)于以馬錢(qián)苷為原料藥制備的膠囊、顆粒劑和口服液(實(shí)施例4-6)。